CC BY
30
УДК 612.017.11+593.9 Вестник СПбГУ. Сер. 3, 2005, вып. 3
И. В. Кудрявцев, И. С. Дьячков, А. Д. Харазова, А. В. Помещиков
ПОИСК ПРИЗНАКОВ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ПАМЯТИ В ЗАЩИТНЫХ РЕАКЦИЯХ МОРСКОЙ ЗВЕЗДЫ ASTERIAS RUBENS*
Введение. Систему защитных реакций иглокожих традиционно рассматривают в качестве предковой по отношению к защитным реакциям хордовых и позвоночных животных. Иглокожие обладают полностью сформированными и эффективно функционирующими механизмами врожденного иммунитета и некоторыми признаками реакций приобретенного иммунитета, план организации которых будет единым для всех вторичноротых животных. Противоинфекционная защита позвоночных животных строится на кооперации врожденного и приобретенного иммунитета. Для реакций приобретенного иммунитета характерно наличие механизмов соматической рекомбинации, обеспечивающих специфическое распознавание большого спектра антигенов, и способности к формированию иммунологической памяти, значительно увеличивающей эффективность ответа при повторной встрече с антигеном. Беспозвоночные животные обладают только реакциями врожденного иммунитета, к основным характеристикам которых относятся наличие паттерн-распознающих рецепторов, антимикробных пептидов и фагоцитов, синтезирующих токсичные для микроорганизмов метаболиты кислорода и азота. Поиски признаков иммунологической памяти и специфичности у беспозвоночных до последнего времени оставались безрезультатными [14].
Исследования последних лет, проведенные на представителях различных таксонов, показали, что членистоногие способны различать не только грамм-отрицательных и грамм-положительных бактерий [11], но и дифференцировать различные штаммы бактерий одного вида [17]. Набор синтезируемых антимикробных пептидов дрозофилы зависит от природы введенного микроорганизма [16]. Введение креветкам рекомбинантных белков вирусных калсидов значительно снижало смертность животных при заражении живыми вирусами [21]. В ответ на контакт циклопов с низкоинавазивными це сто да ми резко снижался уровень заражения рачков близкородственными высокоинвазивными лентецами [15]. Для иглокожих, в свою очередь, характерно наличие аллотрансплантационной несовместимости и кратковременной памяти [1], которую трактуют либо как иммунологическую, либо квазииммунную. Так, морской еж Lytechinus pictus способен к аллоиммунному распознаванию: если отторжение первичного трансплантата происходило в среднем за 35 дней, то вторичных и третичных - менее чем за 12 дней [9]. Вместе с тем повторное введение иглокожим растворимых и корпускулярных антигенов не приводило к ускорению их элиминации из целомической жидкости [8, 22]. Целью данного исследования стало изучение влияния повторного введения эритроцитов человека на клеточные и гуморальные факторы врожденного иммунитета морской звезды Asterias riibens.
Материалы и методы исследования. Объект исследования - Asterias rubens (тип Echinoder-mata, Asteroidea, Forcipulata). Сбор животных производили в районе ББС им. акад. О. А. Скарлато ЗИН РАН. Всего было использовано около 700 неповрежденных особей с длиной луча не более 60 мм. Первичную иммунизацию проводили в конце июня (иммунизация 1), вторичную - в конце июля (иммунизация 2), а третичную - в конце августа 2004 г. (иммунизация 3). Животные опытных групп получали путем инъекции в конец одного из лучей 1 мл 2%-ной суспензии ЭЧ, а животные контрольных групп - 1 мл 0,85%-ного раствора NaCl (физиологический раствор, ФР). При проведении иммунизации 2 и 3 для учета климатических влияний вводили дополнительные группы сравнения, в которых
* Работа выполнена при поддержке РФФИ (гранты № 04-04-49069 и 04-04-49342). © И. В. Кудрявцев, И. С. Дьячков, А. Д. Харазова, А. В. Полевщиков, 2005
половина животных первично была иммунизирована ЭЧ, а другая половина получала ФР. В промежутках между иммунизаци'ями всех животных содержали в садках на глубине 3-4 м. Животных кормили мидиями ad libitum. Нулевые точки составили интактные животные, которым не производили введения ЭЧ или повреждения покровов перед началом эксперимента. Забор целомической жидкости (ЦЖ) осуществляли через 1,3,6, 9, 12, 24, 48, 72, 96, 120 ч после иммунизации. Число наблюдений по каждой из точек - не менее 6.
При исследовании клеточных реакций для предотвращения коагуляции к 0,95 мл ЦЖ немедленно после забора добавляли 0,05 мл 0,3 M раствора ЭДТА по методу из работы [6]. Для всех полученных образцов определяли объем полученной ЦЖ, отбирали аликвоту объемом 20 мкл для подсчета числа целомоцитов, а остаток мягко центрифугировали при 100 g в течение 5 мин. Клеточный осадок использовали для других тестов, методики которых изложены ниже. При изучении динамики гуморальных факторов раствор ЭДТА не добавляли, образцы сразу же центрифугировали 5 мин при 100 g, и надосадок использовали для определения титра гемагтлютининов (ГА) и гемолизинов (ГЛ).
Все использованные методики подробно описаны ранее [2, 3]. Итак, число клеток в 1 мл ЦЖ определяли с помощью гемоцитометра Горяева после подкрашивания 0,1%-ным раствором кристалл-виолета. Для оценки способности целомоцитов к продукции активных форм кислорода использовали автоматизированную модификацию НСТ-теста. При определении спонтанной продукции О^ к суспензии клеток добавляли фильтрованную морскую воду (ФМВ), а при стимулированной - суспензию зимозана в ФМВ. Результат выражали в единицах оптической плотности (ОГТ) на 1 млн целомоцитов. Метаболическую активность циркулирующих клеток определяли в МТТ-тесте. В лунки плоскодонного планшета вносили по 100 мкл суспензии целомоцитов и добавляли по 10 мкл 0,25%-ного раствора МТТ. После 12 ч инкубации надосадок с красителем удаляли, а планшеты высушивали и до проведения спектрофотометрии хранили при -20 °С. Гранулы МТТ растворяли внесением 100 мкл лизирую-щего раствора (50 мл НгО, 50 мл диметилформамида, 20 г додецилсульфата натрия и по 2,5 мл 1 M НС1 и 80%-ной уксусной кислоты). Результат спектрометрии при X = 570 нм выражали в единицах ОП на 1 млн клеток. Титры ГА определяли в реакции гемагтлютинации, а титр ГЛ - в реакции гемолиза ЭЧ. Реакции оценивали визуально и результат выражали в виде титра, равного -log2X, где X - последнее разведение ЦЖ, при котором наблюдали формирование типичного агглютината или выход гемоглобина из ЭЧ. Статистическую обработку данных проводили путем вычисления средних, квадратичного отклонения, доверительных интервалов, а сравнение выборок - с помощью t критерия и 2-к'ритерия.
Результаты исследований и их обсуждение. Предварительные исследования показали, что в ответ на иммунизацию в целомической жидкости морских звезд наблюдается увеличение числа циркулирующих клеток [2]. Через месяц после первичной иммунизации концентрация целомоцитов в опытной группе животных достоверно превышала этот показатель группы интактных животных на i55%, а через месяц после вторичной иммунизации - на 95% (табл. 1). При сравнении динамики численности клеток после первичной и повторных иммунизации показано, что повторные введения ЭЧ приводили к снижению концентрации целомоцитов на ранних сроках после иммунизации. Аналогичные результаты получены при сравнении динамики численности клеток между опытными группами 2 и 3 и группами сравнения. Повторные введения антигена приводили к увеличению числа целомоцитов в точке 48 ч. На сроках свыше 72 ч показатели групп сравнения и опыта оставались сходными. Клеточное звено врожденного иммунитета иглокожих способно оперативно реагировать на малейшие изменения в составе целомической жидкости [18], поэтому введение ФР также приводило к изменению концентрации целомоцитов, хотя динамика их численности при первичных и повторных введениях ФР достоверно не различалась (см. табл. 1).
Одним из основных защитных факторов врожденного иммунитета беспозвоночных является способность к генерации токсичных для микроорганизмов форм кислорода [5]. Собственные исследования и данные литературы [10] свидетельствуют о том, что целомо-циты иглокожих также способны к синтезу 0'г. Результаты спонтанного НСТ-теста показали, что для групп сравнения на сроках 1-3 ч характерно снижение продукции активных форм
Таблица 1. Динамика численности циркулирующих клеток целомической жидкости А.гиЬею при ответе на первичное и повторное введение ЭЧ; Х±з, млн кл. в 1 ил ЦЖ, п £ б
Время, ч Иммунизация 2 Иммунизация 3
Иммунизация 1 группа сравнения 2 иммунизация 2 группа сравнения 3 иммунизация 3
0 5,36±1,24 3,9110,59 9.9812.33* 5,70+0,88 3,1310,57 6,1111,31* 4,58Ю,77
1 14.625±4,57 9.25+4,03 4,54+1,68 5.27+2,29 5,8111,86
11,1512,28 5,4011,30 3,27+0,87* 2,6910,53 3,5810,75*
з 12,2713.21 9,1411,73 6.2912.32 10,0811.33 6.6311.27
7,2110,96 4,6311,48 2,33+0,54* 2,31Ю,39 2,5010,90*
10.6013,05 7.3112,20 6.67Ю.64 7.6712.58 5.3810.61
11,1912,69 3,1911,24 2,8810,46 1,4810,32 2,23Ю,66
9 8,0211.67 13,413.01 6,63+2,78 5.48+2.32 4.1911.09
12,412,14 6,1311,02 6,00+3,47 2,7310,69 2,9410,46*
12 12.54Ю.77 8.912,57 4.83+1.75" 3.60Ю.38 5.5611,40*
6,4211,55 5,7912,29 4,6711,57 3,6012,05 2,85+0,60*
24 12.5612.49 14,0613.61 9.6711.30 2.77Ю.60 2,7510,96*
3,8811,23 6,6911,85 4,48+0,83 3,0211,45 1,2310,30
48 6,4411,75 3.04Ю.64 5.17Ю.72* ' 2.04+0,52 6,0012,64
2,38Ю,72 2,9411,54 2,5410,58 1,0810,15 1,73Ю,62
72 8.25+3,19 4,98+1.26 3.48+0,74 1.9611,00 1,6010,46
9,8512,06 2,90Ю,78 3,6510,77* 1,02Ю,46 1,1010,21*
96 7.6013.25 6,2712,19 5.5813.41 0.8110,24 0,8110.13
6,4011,74 2,5610,75 1,5210,31* 0,3810,06 0,6310,10*
120 4.4011,53 5.2711.22 4,1911.59 2,15Ю,68 1,6510.33
3,0811,14 1,9210,42 2,4011,09 0,81+0,28 1,3310,46
Примечание. В таблицах 1-3 результаты по всем группам представлены в виде дроби, в которой числитель соответствует опытным группам (введение ЭЧ), а знаменатель -контрольным (введение ФР). * - различия между группой сравнения и иммунизацией достоверны при р < 0,05 по /-критерию; * - различия между иммунизацией 1 и иммунизациями 2 и 3 достоверны при р < 0,05 по /-критерию.
кислорода, в то время как при повторном введении ЭЧ данный показатель превышал значения групп сравнения (табл. 2). На сроках 72-96 ч значения, полученные для иммунизаций 2 и 3, также превышали значения групп сравнения, а к 120 ч их показатели выравнивались. Коэффициент корреляции между динамикой спонтанной продукции О" в ходе иммунизации 2 и группы сравнения 2 составил г = 0,663±0,250 (р < 0,05), а для иммунизации 3 и группы сравнения 3 он был равен 0,647±0,241 (р < 0,05).
Исследование стимулированной продукции С^ показало, что при первичном введение ЭЧ (иммунизация 1, группы сравнения 2 и 3) усиление синтеза супероксиданиона происходит через 1 ч, а при первичном введении ФР (те же группы) аналогичные значения достигаются на сроках 3-6 ч (табл. 3). Первичное введение ЭЧ приводило к увеличению продукции О; на 38-86%, тогда как для вторичной иммунизации это значение составило 292%,
Таблица 2. Динамика спонтанной продукции активных форм кислорода целомоцитами А. гиЬеп5 при ответе на первичное и повторное введение ЭЧ; Х±з, ед. ОП/1 млн клеток, п £ 12
Время, ч Иммунизация 2 Иммунизация 3
Иммунизация 1 группа сравнения 2 иммунизация 2 группа сравнения 3 иммунизация 3
0 0,387±0,035 0,136Ю,013 0.091Ю.018** 0,119+0,009* 0,46910,098 0.26110.039"* 0,277+0,038*
1 0.434±0.070 0.08410.008 0.210Ю.046** 0.230Ю.022 0.285Ю.056
0,37510,094 0,14310,016 0,247+0,064 0,435Ю,077 0,21710,037*
Ч 0.328+0.093 0.112Ю.013 0.134Ю.012* 0.183Ю.012 0.226Ю.036
1,045±0,253 0,238Ю,050 0,218Ю,035* 0,366Ю,061 0,56910,154
0.886±0.127 0,13710.032 0.118Ю.005* 0.170Ю.011 0.227Ю.016**
0,930±0,145 0,165+0,020 0,20110,026" 0,72210,107 0,38610,083**
1.06110.208 0,036+0.004 0,100+0.016** 0,231+0.058 0.225Ю.025"
0,66810,072 0,096Ю,028 0,205+0,043"* 0,426Ю,069 0,20110,020**
12 0.77210.056 0.29910.036 0,318Ю.060" 0.20110,014 0.158+0.008"
1,32710,159 0,314Ю,038 0,27710,060# 0,276Ю,034 0,34810,089'
24 0.47510.059 0.075Ю.008 0.107Ю.016* 0.266Ю.023 0.339Ю.037
1,25510,133 0,070+0,007 0,185+0,041** 0,629Ю,205 0,47910,074*
48 1,06210.109 0,12010.018 0.125+0.01/ 0.775Ю.171 0.353Ю.041**
1,49610,174 0,182Ю,047 0Л72Ю,040* 0,650Ю,103 0,385+0,051**
72 0.63710.049 0.098Ю.011 0.156Ю.039* 0.439+0.068 0.834Ю.277
0,65610,024 0,099Ю,006 0,12610,018* 0,994Ю,073 0,53910,075*
96 0.35510.047 0.108Ю.021 0.174Ю.023* 0.794+0.108 1,17010.204*
0,44410,046 0,159Ю,041 0,21110,02 5* 1,521+0,293 0,89510,103*
120 0.545+0.046 0.163Ю.015 0.143Ю.022* 0.551+0.058 0.604Ю.083
1,12110,206 0,236Ю,054 0,177Ю,027* 0,899+0,144 0,966Ю,202
а для третичной - 128%. Усиление продукции активных форм кислорода в опытных группах на фоне снижения общего числа циркулирующих клеток может свидетельствовать о появлении в ЦЖ неких факторов, способствующих активации целомоцитов, либо о выходе в циркуляцию новых клеток, обладающих повышенной способностью к продукции О;. В пользу первой точки зрения свидетельствует обнаружение цитокин-подобных молекул у иглокожих [4]. Вторая точка зрения косвенно подтверждается приведенными ниже результатами МТТ-теста. Повторные введения ЭЧ приводили к снижению продукции 02 на сроках 12 и 48 ч. Обнаружена корреляция между динамикой синтеза О; в иммунизации 3 и
группе сравнения 3 при ответе на введение ЭЧ (г - 0,681±0,244, р < 0,05). Динамика продукции супероксиданиона в контрольных группах иммунизации 2 и 3 мало отличалось от таковой в группах сравнения при инъекции ФР, о чем свидетельствует высокая корреляция между показателями (г - 0,731±0,227 при р < 0,05 для контрольных групп иммунизации 2 и группы сравнения 2 и г = 0,629±0,259 при р < 0,05 для контрольных групп иммунизации 3 и группы сравнения 3).
Результаты МТТ-теста показали, что первичное введение ЭЧ всегда сопровождалось снижением метаболической активности на ранних сроках, а при повторных иммунизациях регистрировались приросты данной активности. Увеличение метаболической активности
Таблица 3. Динамика зимозан-инауцированной продукции активных форм кислорода целомоцитами А. гиЬепэ при ответе на первичное и повторное введение ЭЧ; Х±в, ед. ОП/1 млн клеток, и ¡> 12
Время, ч Иммунизация 2 Иммунизация 3
Иммунизация 1 группа сравнения 2 иммунизация 2 группа сравнения 3 иммунизация 3
0 0,573±0,105 0,277Ю,033 0.199Ю.031* 0,293Ю,032* 0,37910,023 0.331Ю.048* 0,255Ю,041*
1 0.486±0,115 0.517Ю.150 0,78110,231 0.526Ю.033 0.755Ю.209
0,332±0,067 0,496+0,142 0,58610,158 0,673Ю,076 0,52610,085
0.35210.069 0,18010,037 0,34910,085 0.277Ю.015 0.418Ю.054*
0,713+0,209 0,50310,121 0,83510,207 0,994+0,130 1,33310,279
р. 0.86710.119 0.325Ю.084 0.277Ю.016* 0.307Ю.031 0.302Ю.018*
0,714Ю,108 0,747+0,136 0,56210,066 1,32710,163 0,81310,133*
о 0.946Ю.148 0.095Ю.025 0.279Ю.050** 0.532Ю.118 0.669Ю.137
0,51610,064 0,21010,029 0,387Ю,065 0,90910,210 0,743+0,111
12 0.58910.021 0.351Ю.046 0.843Ю.187* 0.491Ю.039 0.360Ю.054**
1,02610,123 0,87510,163 0,97010,205 0,82110,143 0,64910,115*
24 0,36410,051 0.16410,052 0.203+0.030* 0.793Ю.082 0.615Ю.109*
0,896+0,176 0,294+0,031 0,514+0,080* 1,04310,216 1,42910,113*
48 0.99610.169 0.667Ю.094 0.368Ю.028** 0.710Ю.121 0.364Ю.039**
2,297Ю,429 0,85510,172 0,89010,191* 1,587Ю,151 0,900Ю,142**
72 1.46610.466 0.304Ю.039 0.363Ю.052* 1.799Ю-343 1.240Ю.132
0,906+0,195 0,474+0,063 0,448Ю,089* 1,232+0,231 1,729Ю,212*
96 0.86510.155 0.183Ю.037 0.343Ю.060** 1.55310.396 1.695Ю.247*
0,652Ю,135 0,415Ю,084 0,47010,045 2,63510,288 1,897+0,278**
120 1.133Ю.136 0.271Ю.028 0.282Ю.035* 0.578Ю.152 1.36010.122*
1,284Ю,198 0,45810,119 0,401Ю,064* 2,021+0,245 2,372Ю,439*
косвенно указывает на быструю активацию целомоцитов при повторном контакте с антигеном и, возможно, выход из депо большего числа клеток, способных к пролиферации. Прирост метаболической активности наблюдался на сроках 12, 48-72 ч во всех группах животных, которым производили введение ЭЧ.
Гуморальные факторы иглокожих, как и многих других беспозвоночных, не обладают той высокой специфичностью взаимодействия с антигенами, свойственной антителам позвоночных [1]. Среди веществ целомической жидкости, участвующих в гуморальной защите, выделяют гемолизины [12], агглютинины [13], антимикробные [7] и комплемент-подобные факторы [20]. Основным источником данных факторов являются целомоциты, которые при стимуляции способны к синтезу ингибиторов бактериальных протеаз, серино-вых протеаз, сходные с тромбином, эластазой, плазмином и т. д. [19]. При изучение динамики титров ГА было показано, что ведение ЭЧ и ФР сопровождалось снижением концентрации данных факторов (рисунок). В точке 0 ч титр агглютининов у животных опытных групп превосходит аналогичный показатель групп сравнения. Исследование динамики ГА в ходе иммунизации 3 и группе сравнения 3 выявило корреляцию между показателями данных групп {г = 0,724±0,229, р < 0,01). Кроме того, высокий коэффициент корреляции между динамикой титров ГА при введении ЭЧ и введении ФР при иммунизации 2 и 3 (г = 0,626±0,260 (р < 0,05) и г = 0,628±0,259 (р < 0,05) соответственно) подтверждают ранее
Время, ч
Динамика титров гемагглютининов при ответе на первичное и повторные введения ЭМ и ФР.
А - иммунизация 2. Б - иммунизация 3. Квадраты - группа сравнения (черные квадраты -введение ЭЧ, белые квадраты - введение ФР); треугольники - опыт (черные треугольники - повторное ведение ЭЧ, белые треугольники - повторное ведение ФР); * - различия между группой сравнения и опытом достоверны при р < 0,05 по /-критерию.
выдвинутый тезис о том, что гуморальные факторы мало специфичны и выполняют вспомогательные функции в защитных реакциях морских звезд [3].
Таким образом, полученные результаты указывают на отсутствие у морской звезды ■'A. rubens иммунологической памяти в отношении корпускулярных ксеноантигенов в традиционном понимании этого явления. Нами не было обнаружено ни ускорения ответной реакции, ни повышения амплитуды изменений изученных показателей. Вместе с тем исследованные показатели реакций врожденного иммунитета позволяют предположить, что в какой-то форме информация о предыдущем контакте с антигеном у морской звезды все же сохраняется. Это проявляется в повышении показателей стимулированной продукции су-пероксиданиона и МТТ-теста и отсутствии динамики в изменении числа циркулирующих клеток при повторных иммунизациях в отличие от первичной. На основании непредставленных данных можно утверждать, что эти изменения в течение вторичного и третичного ответов не сказывались на эффективности защитной реакции и не являлись результатом сезонных явлений. Хотя понятие «память» применительно к реакциям врожденного иммунитета традиционно не используется, все же можно предполагать наличие у иглокожих ка-ких-либо неизвестных механизмов сохранения Подобной информации, характер которых, возможно, будет выяснен в ходе дальнейших исследований.
Summary
Kudryavtsev 1. К, Dyachkov L S., Kharazova A. D., Polevschikov A. V. The search of immunological memory in starfish Asterias rubens defense reactions. I
This article is devoted to the investigation of starfish Asterias rubens defense reactions. The dynamics of cellular and humoral defense factors in response to secondary HRBS injections revealed that the information about the preceding contact with antigen could be maintained in echinoderms.
Литература
1. Галактионов В. Г. Очерки эволюционной иммунологии. М., 1995. 2. Кудрявцев И. В., Дьячков И. С., Казаков А. А. и др. Гуморальные реакции врожденного иммунитета морской звезды Asterias rubens II Журн. эволюц. физиол. и биохим. 2004. Т. 41, №1. С. 23-28. 3. Кудрявцев И. В., Дьячков И. С., Казаков А. А. и др. Клеточные реакции врожденного иммунитета морской звезды Asterias rubens II Журн. эволюц. физиол. и биохим. 2005. Т. 41, № 2. С. 107-113. 4. Beck G. Macrokines: invertebrate cytokine-like molecules? // Front. Biosc. 1998. Vol. 3. P. 559-569. 5. Beulter B. Innate immunity: an overview // Mol. Immunil. 2004. Vol. 40. P. 845-859. 6. CanicattiC., DAncona G. Cellular aspects ofHolo-thuria polii immune response // J. Invert. Pathol. 1989. Vol. 53. P. 152-158. 7. Choi D. H., Shin S., Park I. K. Characterization of antimicrobial agents extracted from Asterina pectinifera II Int. J. Antimicr. Agents. 1999. Vol. 11. P. 65-68. 8. Coffaro K. Clearance of bacteriophage T4 in the sea urchin Lytechinuspictus II J. Inv. Path. 1978. Vol.32. P. 384-385. 9. Coffaro K., Hinegardner R. Immune response in the sea urchin Lytechinus pictus П Science. 1977. Vol. 197. P. 1389-1390. 10. CoteurG., DeBeckerG., WarnauM. etal. Reactive oxygen species (ROS) production by amoebocytes of Asterias rubens (Echinodermata) // Fish and Shellfish Immunology. 2002. Vol. 12. P. 187-200. 11. Faulhaber L. M, KarpR.D. A diphasic immune response against bacteria in the American cockroach // Immunology. 1992. Vol.75. P. 378-381. 12. Hatakeyama Т., Nagotomo #., Yamasaki N. Interaction of the hemolitic lectin CEL-Ш from the marine invertebrate Cucumaria eqhinata with the erythrocyte membrane // J. iriiol- u'nem. Vol. 270. P. 3560— 3564. 13. KakiuchiM., Okino N., Sueyoshi N. et al. Purification, characterization, and cDNA cloning of a-N-acetyl-galactosamine-specific lectin from starfish, Asterina pectinifera // Glycobiology. 2002. Vol. 12. P. 85-94. 14. Kurtz J. Memory in the innate and adaptive immune systems // Microbes and Infection. 2004. Vol. 6. P. 1410-1417. 15.KurtzJ., FranzK. Evidence for memory in invertebrate immunity // Nature. 2003. Vol.425. P. 37-38. 16 .LemaitreB., ReichhartJ.-M., Hoffmann J. A. Drosophila host defense: differential induction of antimicrobial peptide genes after infection by various classes of microorganisms // PNAS. 1997. Vol. 94. P. 14614-14619. 17. Little T. J., O'Connor В., Colegrave N. et al. Maternal transfer of strain-specific immunity in an invertebrate // Curr. Biol. 2003. Vol. 13. P. 489^192. 18. Smith L. C., Britten R. J., Davidson E. H. Lipopolysaccharide activates the sea urchin immune system // Dev. Сотр. Immunol. 1995. Vol. 19. P. 217-224. 19. Smith L. C, ChangL., Britten R. J. et al. Sea urchin genes expressed in activated coelomo-cytes are identified by expressed sequence tags. Complement homologues and other putative immune response genes suggest immune system homology within the deuterostomes // J. Immunol. 1996. Vol. 156. P. 593-602. 20. Smith L. C., Clow L. A., Terwilliger D. P. The ancestral complement system in sea urchins 11 Immunol. Rev. 2001. Vol. 180. P. 16-34. 21. WitteveldtJ., CifuentesC. C., VJakJ.M. etal. Protection of Penaeus monodon against white spot syndrome virus by oral vaccination // J. Virol. 2004. Vol. 78. P. 2057-2061. 22. YuiM. A., Bayne C. J. Echinoderm immunology: bacterial clearance by the sea urchin Strongylo-centrotuspurpuratus II Biol. Bull. 1983. Vol. 165. P. 478^186.
Статья поступила в редакцию 5 мая 2005 г.
