CC BY
5
УДК 612.015.32:547,455.6231-087.45
О. И. Юрасова, А. Г. Ужовская, И. Н. Елисеев
ПРИЖИЗНЕННАЯ ОЦЕНКА ДИНАМИКИ ОКИСЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ В ГИГИЕНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
Институт общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва
В настоящее время большое значение имеет использование метода изотопной индикации для прижизненного изучения изменений обмена веществ. При постановке гигиенического эксперимента такие исследования не применялись, хотя возможности прижизненной радиометрии позволяют в значительной мере сократить объем опытов на животных, сделав эти работы более точными (Brody и Spencer).
Мы проводили прижизненное определение динамики окисления глю-глюкозы, меченной С14, по количеству выдыхаемой меченой углекислоты у белых крыс-самцов со средним весом 152±13,7 г. Интенсивность окисления меченой глюкозы определяли в течение 3 часов у контрольных и подопытных животных. На протяжении месяца перед исследованием подопытные животные получали с водопроводной водой из автопоилок раствор хлористого никеля из растчета 0,005 мг/кг (1-я группа) и 5 мг/кг (2-я группа).
Необходимость постановки эксперимента по изучению интенсивности окисления меченой глюкозы в организме после воздействия растворов никеля малой концентрации связана с выяснением возможного механизма действия этого микроэлемента на углеводный обмен. В последнее время установлено влияние многих микроэлементов на обмен веществ за счет изменения активности ферментов (М. Г. Коломийцева и Р. Д. Габович). Перед исследованием подопытным животным внутримышечно вводили 5 мккюри меченой глюкозы в объеме 0,3 мл стерильной воды, что соответствовало 0,56 мг стабильного углевода. После инъекции индикатора животное сразу помещают в эксикатор объемом Зли кран эксикатора закрывают. Систему эксикатора заранее соединяют с 3 сосудами для поглощения меченой двуокиси углерода, в каждом из которых 15 мл насыщенного раствора Ва(ОН)2 или 20% раствора ВаОН. Поглотительные сосуды соединяют последовательно между собой и с водоструйным насосом1. Скорость прокачивания воздуха из эксикатора через поглотительные сосуды на протяжении всего эксперимента составляет 0,34 л/мин. Содержание общего СО» в воздухе эксикатора во время исследования соответствовало 0,1 lrt 0,032%; определение общей двуокиси углерода проводили при помощи газового хроматографического анализа. Во время прокачивания воздуха кран эксикатора открывают. Батарея сосудов для поглощения двуокиси углерода заменяется новой через каждые 15 мин. на протяжении 3 часов исследования. При изучении динамики выдыхания меченой двуо-окиси углерода у подопытного животного получают 30 осадков карбоната бария в поглотительных сосудах или 30 сосудов с карбонатом натрия. Полученные осадки карбоната бария из каждого поглотительного сосуда отфильтровывают на разборной воронке для приготовления равномерно распределенных на подложке осадков.
В качестве бумажного фильтра используют «Synpor 6». Фильтрование проводят при небольшой скорости отссса, давая осадку отстояться для образования равномерного по толщине слоя. Для частичного высушивания через осадок просасывают воздух в течение нескольких минут. Фильтр затем извлекают из воронки, ссадок оставляют сушиться на воздухе в течение суток.
1 Принцип монтажа системы эксикатора с поглотительными сосудами и водоструйным насосом в нашей работе аналогичен указаниям М. И. Прохоровой и 3. Н. Тупиковой в кн.: «Большой практикум по углеводному и лнпидному обмену». Л., 1965, с. 9.
После высушивания препаратов их взвешивают, измеряют активность на газопроточном счетчике «Протока». При расчете истинной активности препарата учитывают прдварительно установленные поправки на поглощение излучения С14 в слое препарата. Если поглощают меченую двуокись углерода в растворе гидроокиси натрия, то все 3 поглотительных сосуда анализируют суммарно. Количество С14 в этих сосудах определяют на жидкостном сцинтилляционном счетчике. Мы использовали жидкостной сцин-тилляционный счетчик венгерской фирмы «Гамма».
Данные об изменении активности углекислого газа в выдыхаемом воздухе после введения меченой глюкозы контрольным крысам и крысам, получавшим хлористый никель из расчета 0,005 мг/кг, приведены на рисунке. При построении графика на оси ординат откладывают количество С14 в осадках карбоната бария или в растворе карбоната натрия (в расп/сек), а на оси абсцисс — сроки отбора проб воздуха из эксикатора от момента введения индикатора животному. Как видно из представленных на графике зависимостей, количество меченой двуокиси углерода в выдыхаемом воздухе постепенно увеличивается, достигает максимума и уменьшается в конце исследования. Вмете с тем установленные зависимости для контрольных и подопытных животных различны. В частности, максимальное выделение меченой двуокиси углерода контрольными животными происходит на 75-й минуте, а крысы, подвергавшиеся воздействию никеля из расчета 0,005 мг/кг, максимально выдыхают двуокись углерода на 60-й минуте после введения индикатора.
Подопытные животные через 60 мин. выдыхали больше меченой двуокиси углерода, чем контрольные крысы через 75 мин. от начала эксперимента. При обработке результатов исследования установлено достоверное превышение (Р <С 0,05) количества меченой двуокиси углерода в воздухе, выдыхаемом подопытными животными, по сравнению с контролем уже через 30 мин. от момента введения индикатора. Кроме того, из представленных зависимостей видно, что интенсивное выделение меченой двуокиси углерода подопытными животными в первой трети исследования обусловливает в конце его закономерное уменьшение содержания ее в выдыхаемом воздухе по сравнению с контрольными крысами (Р = 0,05).
Установленные закономерности динамики выделения меченой двуокиси углерода с выдыхаемым воздухом у подопытных и контрольных крыс свидетельствуют об изменении скорости окисления меченой глюкозы под влиянием месячного воздействия растворов никеля в концентрации 0,005 мг/кг. Полученные результаты указывают на ускорение процессов окисления глюкозы под влиянием этой концентрации никеля, что, вероятно, связано с ускорением процессов декарбоксилирования.
На основании установленных в динамике опыта величин выделения меченой двуокиси углерода контрольными и подопытными животными мы оценили количество окисленной глюкозы на каждом этапе и в итоге исследования к общему количеству глюкозы, введенной крысам.
Через 3 часа после введения индикатора у контрольных крыс и крыс, подвергавшихся воздействию никеля из расчета 5 мг/кг, окислилось оди-
5Г 5000 _
£ 4500 -
&4000 -
§ 3500 -
I 3000 -
2500 -
2000 -
1 /500 -
I /ООО -
1 500 -
0
60 SO /00 /20 140 ISO /80 Время, мин.
Динамика изменения количества С1 Юг в выдыхаемом воздухе белых крыс на протяжении 3 часов эксперимента. / — контроль; 2 — воздействие хлористого никеля в концентрации 0.005 мг/кг.
наковое количество глюкозы (13,6 и 13,8% соответственно). У крыс, подвергавшихся воздействию никеля из расчета 0,005 мг/кг, к концу опыта окислилось глюкозы на 1,3% больше, чем у животных контрольной группы, что указывает на влияние никеля в этой концентрации на процессы окисления глюкозы.
Оценка количества окисленной глюкозы на отдельных этапах исследования в изученных группах животных свидетельствует о различном влиянии опытных концентраций никеля (0,005 и 5 мг/кг) на процессы окисления глюкозы. Так, через 15 и 60 мин. от момента введения индикатора у крыс 1-й группы окислилось больше глюкозы, чем в контрольной группе. Это могло свидетельствовать об активизации процессов окисления глюкозы под воздействием концентрации никеля 0,005 мг/кг. У крыс 2-й группы на 45, 60 и 75-й минутах от момента введения индикатора окислилось меньше глюкозы, чем в контроле. Полученные данные, вероятно, свидетельствуют о том, что под влиянием никеля в концентрации 5 мг/кг происходит экономное расходование глюкозы. По-видимому, при воздействии этой концентрации происходит торможение процессов декарбоксилирования глюкозы, что позволяет раскрыть механизмы действия никеля на организм при изученных концентрациях.
ЛИТЕРАТУРА. Коломийцева М. Г., Габович Р. Д. Микроэлементы в медицине. М., 1970.— В rod у К. R., Spencer R. P., Int. J. appl. Radial., 1972, v. 23, p. 390.
Поступила 27/VI 1973 г.
УДК 614.777-078:576.851.49(280)
Канд. мед. наук В. И. Немыря
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА НАКОПИТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ В МОРСКОЙ ВОДЕ
Институт общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва
Для сравнительной оценки были использованы среды накопления, которые хорошо зарекомендовали себя при исследовании воды открытых водоемов: обогатительный бульон с тетратионатом калия (по Пройсу) 5-кратной концентрации (Ockert и Gerwien), среда с охмеленным суслом (Ю. Г. Та-лаева; И. С. Далон-Моше), хлормагниевая среда х, приготовленная из отечественных ингредиентов (Г. П. Калина и В. А. Шиганова; Г. П. Калина), а также модифицированные нами тетратионатная и хлормагниевая среды.
Исследования проводили на имитате морской воды, которая по солевому составу соответствовала воде Черного моря. Имитат готовили путем растворения морской соли в дистиллированной воде (концентрация 17 г/л) с последующей стерилизацией в автоклаве. Стерильную морскую воду заражали односуточной культурой Salmonella typhi murium. Концентрацию бактерий для заражения воды определяли по оптическому стандарту мутности из расчета 10 микробных клеток в 1 мл воды. Посевы с накопительными средами инкубировали при 37° в течение 24 часов.
Накопительные способности испытуемых сред устанавливали путем сопоставления количества бактерий до и после подращивания при посеве на чашки Петри с висмут-сульфитным агаром. Среды накопления последовательно разводили стерильным физиологическим раствором до Ю-9. Из каждого разведения по 0,1 мл жидкости наносили на поверхность агара и тщательно растирали шпателем. Через 1 сутки подсчитывали количество выросших колоний.
1 Рекомендации по применению и приготовлению хлористомагниевой среды для обнаружения сальмонелл в биологически загрязненных жидкостях, 1971.
