CC BY
5
УДК 576.851.252.07.093.31+614.3-078-093.3)
ПРИМЕНЕНИЕ СРЕДЫ КФ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ЭНТЕРОКОККОВ
Доцент В. В. Ильин, В. С. Касторский
Кафедра микробиологии и кафедра гигиены питания Ленинградского санитарно-гигие-
нического медицинского института
При выделении и подсчете энтерококков на обычных питательных средах возникают затруднения в связи с тем, что при наличии смешанной микрофлоры рост микроорганизмов может быть слабым, а идентификация требует проведения серии подтверждающих тестов. Был предложен ряд селективных сред для энтерококков, содержащих ингибиторы посторонней флоры,— азид натрия, теллурит калия или ацетат таллия. Судя по литературным данным, одной из наиболее пригодных для практической работы является среда КФ, предложенная Kenner, Clark и КаЫег и получившая положительную оценку в работах Raibaud с соавторами и Hall с соавторами.
Мы провели испытание этой среды при санитарно-микробиологичес-ких исследованиях различных объектов. В пропись среды КФ, использованной нами как в плотном, так и в жидком виде, были внесены некоторые изменения, заключавшиеся в замене импортных протеозного пептона и дрожжевого экстракта отечественными и в исключении глицерофосфата натрия. Техника изготовления среды сводилась к следующему. В 900 мл дистиллированной воды растворяли 20 г пептона, 5 г хлористого натрия, 20 г мальтозы, 1 г лактозы, 0,636 г углекислого натрия и 0,4 г азида натрия. К раствору добавляли 100 мл жидкого дрожжевого экстракта и небольшое количество спиртового раствора индикатора бромкрезолпурпур (из расчета .0,015 г сухого вещества на 1 л среды КФ). Жидкую среду сразу стерилизовали при 120° в течение 10 мин.; при изготовлении же плотной среды к ней перед автоклавированием добавляли 2% агар-агара. На 1 л готовой плотной среды перед разливкой добавляли 10 мл 1% водного раствора трифенилтетразолхлорида, который предварительно подвергали кипячению на протяжении 5 мин. Готовая среда имела темно-синий цвет и рН 7,2—7,3. Посевы инкубировали 2 суток при 35—37°. При росте энтерококков цвет среды переходил в желтый, а на агаре КФ колонии этого микроба диаметром 0,2— 2 мм окрашивались в красный цвет и были легко отличимы.
Селективные свойства среды КФ испытывали путем посева чистых культур Str. faecalis, Str. faecium, Staphylococcus aureus, Str. cremoris, Str. lactis, Str. thermophilus, Lactobacillus acidophillus, Lactobacillus bulgaricus, Escherichia coli, Citrobacter freundii, Klebsiella aero-genes и Вас. anthracoides. Оказалось, что в жидкой и на твердой среде КФ росли только энтерококки. В жидкой среде развивались единичные штаммы Str. faecalis; на агаре КФ они не вырастали.
Потребовалось выяснить, не угнетает ли агар КФ в какой-либо мере развитие тех культур энтерококков, которые способны на нем развиваться. Для этого были произведены параллельные количественные высевы ряда штаммов на среду КФ, сахарный МПА, сахарный МПА с 6,5% хлористого натрия и на среду Эндо. В результате 64 опытов мы удостоверились, что среда КФ абсолютно лишена ингибиторных свойств в отношении тех штаммов энтерококков, которые на ней развиваются. Если принять за 100 количество колоний, выраставших на сахарном МПА, то на среде КФ развивалось в среднем 90—110%, на солевом сахарном агаре— 80% и на среде Эндо — 30% колоний. В 22 опытах на тот же ряд сред засевали кишечную палочку: соотношения числа колоний составили 100—0—40—90%.
Наконец, в 12 опытах были осуществлены параллельные посевы смесей культур энтерококков и кишечной палочки. Результаты этой серии наблюдений показывают, что среда КФ, не пригодная для развития энтеробактерий, в то же время не вызывала угнетения роста энтерококков. Напротив, на среде Эндо они развивались в незначительном количестве, по-видимому, в связи с известным ингибиторным действием фуксин сульфитной смеси и наличием коли-антагонизма.
Значение среды КФ как фактора, устраняющего антагонистическое действие посторонней флоры на энтерококки, было подтверждено серией опытов по совместному выращиванию этих микробов с культурой антра-коида. На сахарном агаре малые количества энтерококков полностью вытеснялись, а на среде КФ, где развитие антракоида было невозможно, выявлялись полностью.
Следующая серия опытов была посвящена испытанию среды КФ путем посевов на нее искусственно зараженной энтерококками воды. Последнюю пропускали через мембранные фильтры № 3, которые затем накладывали на различные плотные питательные среды. Число колоний энтерококков, выраставших на сахарном агаре, было принято за 100. Соответствующие величины в среднем по 14 опытам составили: на среде КФ 140%, на солевом сахарном МПА 70% и на среде Эндо 30%.
Высокая элективность среды КФ была подтверждена и при выполненных аналогичным методом исследованиях воды из отстойника городской больницы и пожарного водоема. При этом наличие значительных загрязнений посторонней флорой не препятствовало выявлению и подсчету колоний энтерококков. На агаре КФ вырастали только эти микробы, а на средах Эндо, Плоскирева и Вильсона — Блэра колонии энтерококков не были обнаружены ни разу.
Среду КФ мы использовали для определения титра энтерококков при 64 исследованиях воды и 32 исследованиях почвы земледельческих полей орошения.
Исследования показали, что титр энтерококков в воде колебался от Ю-2 до 10~8, а в почве — от Ю-2 до 10_3. При исследовании этих объектов установлено, что на среде КФ нередко вырастали колонии грамположительных палочек, кокков и сарцин, но количество их было несоизмеримо меньше, чем число колоний энтерококков. Таким образом, наблюдения свидетельствовали об исключительной элективности этой среды по отношению к энтерококкам. Чаще всего отмечалось полное совпадение результатов посевов на жидкую и плотную среду.
Среда КФ была применена также для определения титра энтерококков в сыром и пастеризованном молоке. При исследованиях сырого молока, поступающего на молочный завод, мы применяли посевы в жидкую среду КФ по 1 мл из разведений от Ю-2 до Ю-7. Пастеризованное молоко засевали в неразведенном виде в объеме 0,1 мл. После двухсуточной инкубации при 35—37° из пробирок, где произошло изменение окраски, производили высев на плотную среду КФ; затем посевы 2 суток вновь выдерживали при 35—37°. Ввиду того что при посевах малых разведений молока в жидкой среде возникало помутнение, критерием роста могло служить только изменение цвета. Выделенные с плотной среды культуры энтерококков идентифицировали по схеме РарауаБзШои: у каждого штамма изучали способность к редукции теллурита калия (0,04%), трифенилтетразолхлорида и лакмусового молока, рост на средах, содержащих 6,5% хлористого натрия, ферментацию глицерина, сорбита, арабинозы и раффинозы. Титр энтерококков устанавливали по последнему разведению, где эти микробы обнаруживали как в жидкой, так и на плотной среде КФ.
При исследовании 100 проб сырого молока обнаружены энтерококки во всех случаях.
Из 100 проверенных проб молока, пастеризованного при 85°, энтерококки были найдены в 14.
Таким образом, подтверждалась высокая чувствительность среды КФ. В половине проб сырого молока установленный с ее помощью титр энтерококков равнялся 10~6—Ю-7; результаты идентификации полученных штаммов говорили об отсутствии выраженного ингибиторного действия по отношению к любому из основных видов этих микроорганизмов.
Проведенные нами специальные опыты показали, что использование редукции трифенилтетразолхлорида для дифференциации Str. faecalis возможно в большинстве случаев, но имеются исключения; поэтому целиком полагаться на этот тест нельзя; для окончательной идентификации энтерококков необходимо проводить дополнительные исследования биохимических свойств этих микроорганизмов.
Выводы
1. Среда КФ обладает высокими селективными свойствами в отношении энтерококков.
2. С помощью среды КФ возможно количественное определение энтерококков в воде, почве и молоке как методом титрования в жидкой среде КФ, так и с использованием техники мембранных фильтров.
ЛИТЕРАТУРА
Hall Н. Е„ Brown D. F., Angelott i R., J. Food. Sei., 1963, v. 28, p. 566,— Kenner В. A., Clark H. F., Kab,ler P. W„ Am. J. publ. Hlth., 1960, v. 50, p. 1553,— Idem, Appl. Microbiol., 1961, v. 9, p. 15.—P apavassiliou J., Ibid., Appl. Microbiol., 1962, v. 10, p. 65, —Raibau d P., Caulet M., Galpin J. V., J. appl. Bact., 1961, v. 24, p. 285.
Поступила 27/Xl 1964 г
УДК 614.73-07:51
ГРАФИКО-МАТЕМАТИЧЕСКИЙ СПОСОБ АНАЛИЗА РАДИОАКТИВНОГО РАСПАДА СМЕСИ 1*аА, ЯаВ и ЯаС
С. Г. Малахов, Б. Г. Стариков
Большая часть методов определения загрязненности воздуха дочерними продуктами радона (ИаА, ИаВ и ИаС), описанных И. И. Гусаровым и В. К- Ляпидевским, основана на снятии кривой радиоактивного распада смеси указанных изотопов. Для раздельного определения концентраций 1?аА, КаВ и 1?аС полученную кривую подвергают математической обработке с использованием метода наименьших квадратов или снимают с нее 3 экспериментальные точки, после чего решают 3 уравнения с 3 неизвестными, или же сопоставляют ее с заранее рассчитанными кривыми с различным соотношением концентраций ИаА, 1?аВ и ИаС. Все эти методы имеют недостатки: первый из них громоздок и требует продолжительных расчетов, а второй и третий связаны с существенными ошибками. Практика показывает, например, что при применении второго метода нередко получают отрицательные значения концентраций отдельных изотопов, и результаты вычислений часто зависят от выбора 3 экспериментальных значений.
В настоящей работе предлагается новый графико-математический способ раздельного определения концентраций ИаА, ИаВ и ИаС в атмо-
