CC BY
5УДК 619.616.98.636.2.053
ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТА «АЙСИДИВИТ» ПРИ ЛЕЧЕНИИ
ТРИХОФИТОЗА У ТЕЛЯТ
Кораблёва Т.Р., доктор ветеринарных наук, профессор; Скибин М.В., ассистент; Агротехнологическая академия ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского».
В эксперименте использована схема лечения трихофитоза у телят с применением лечебно-профилактической вакцины и иммуномодулятора. Телятам опытной группы (п=7) двукратно с интервалом 3 дня внутримышечно вводили препарат «Айсидивит» в дозе по 5мл, телятам контрольной группы (п=7) препарат «Айсидивит» не применяли. Через 10 суток после введения препарата «Айсидивит» животных обеих групп иммунизировали вакциной ЛТФ-130. Вакцину применяли внутримышечно, двукратно, с интервалом 14 суток в дозе по 15 мл на животное.
Иммунизация больных трихофи-тозом телят 2-х месячного возраста вакциной ЛТФ-130 в комплексе с имму-номодулирующим препаратом «Айсидивит», приводит к достоверному повышению функциональной активности нейтрофилов крови, бактерицидной активности сыворотки крови (в опыте 61,22± 2,17 % против 42,40±5,30 % в контроле), способствует снижению сроков регенерации поражённой кожи.
Ключевые слова: телята, трихо-фитоз, Айсидивит, вакцина ЛТФ-130.
APPLICATION THE PREPARATION "AYSIDIVIT"
IN THE TREATMENT OF TRICHOPHYTOSIS IN CALFS
Korablyeva T.R., Doctor of veterinary Sciences, Professor; Scibin M.V., assistent; Agrotechnological Academy FSAEI HE "V.I. Vernadsky Crimean Federal University".
In the experiment, a treatment scheme for trichophytosis in calves was used with the use of a therapeutic and prophylactic vaccine and an immunomodulator. Calves of the experimental group (n = 7) were injected intramuscularly with the drug "Isidivit" twice with an interval of 3 days at a dose of 5 ml, the calves of the control group (n = 7) did not use the drug "Isidivit". 10 days after the administration of the Isidivit preparation, the animals of both groups were immunized with the LTF-130 vaccine. The vaccine was administered intramuscularly, twice, with an interval of 14 days at a dose of 15 ml per animal.
Immunization of 2-month-old calves with trichophytosis with the LTF-130 vaccine in combination with the immunomodulatory drug "Isidivit" leads to a significant increase in the functional activity of blood neutrophils, bactericidal activity of blood serum (in the experiment 61.22 ± 2.17 % versus 42.40 ± 5.30 % in the control), helps to reduce the regeneration time of the affected skin.
Key words: calves, trichophytosis, Isidivitis, LTF-130 vaccine.
95
Введение. Среди мелких домашних и продуктивных животных повсеместно регистрируются дерматомикозы, в частности широко распространён -трихофитоз [8,9]. Заболеваемость дерматомикозами связана с нарушением зоогигиенических норм содержания животных,технологическими стресс-факторами, несбалансированным кормлением, несвоевременной вакцинацией, а также латентным течением болезни [2,10].
Приобретённые иммунодефицитные состояния организма, связанные с нарушением неспецифической резистентности молодняка крупного рогатого скота приводят к снижению эффективности специфической профилактики дер-матомикозов, что требует дополнительных материальных затрат и организационных усилий со стороны специалистов ветеринарной службы для борьбы с грибковыми болезнями кожи [6,7,12].
Цель исследования - определение эффективности комплексного применения вакцины ЛТФ-130 в сочетании с препаратом «Айсидивит» при лечении трихофитоза у телят.
Материал и методы исследований. Исследования выполнялись в условиях учебно-научно-технологического центра и учебной научно-исследовательской лаборатории кафедры микробиологии, эпизоотологии и ветсанэкс-пертизы АБиП ФГАУО ВО «КФУ им.В.И.Вернадского».
В производственных опытах было использовано 14 телят 2-х месячного возраста красной украинской породы. Для проведения экспериментальной части НИР по принципу аналогов были сформированы две группы животных. Отобранные для эксперимента телята содержались в отдельном изолированном загоне, получали одинаковый рацион кормления.
Телятам опытной группы (п=7) двукратно с интервалом 3 дня внутримышечно вводили препарат «Айсидивит» в дозе по 5 мл, телятам контрольной группы (п=7) препарат «Айсидивит» не применяли. Через 10 суток после введения препарата «Айсидивит» животных обеих групп иммунизировали вакциной ЛТФ-130. Вакцину применяли внутримышечно, двукратно, с интервалом 14 суток в дозе по 15 мл на животное.
Диагноз на трихофитоз устанавливали на основании эпизоотологических, клинических данных, а также результатов микологических исследований. В качестве исследуемого патологического материала использовали, отобранные с применением методов асептики, волосы, с поверхности кожи чешуйки и корочки. Соскобы кожи получали, очищая место поражения с помощью ваты, смоченной 70 % спиртом, для удаления поверхностных микроорганизмов, а края поражений соскребали стерильным лезвием скальпеля в чистый простерилизованный конверт из пергаментной бумаги. Каждый экземпляр полученного патологического материала был разделен на две части. Одна часть была использована для прямого микроскопического исследования, а другая часть — для выделения этиологического микробного агента в культуре. Часть каждого образца помещали в каплю 20% гидроксида натрия на чистое обезжиренное предметное стекло и
96
закрывали покровным стеклом. Препарат осторожно нагревали над пламенем спиртовки для разрыхления. Необходимое количество материала переносили на предметное стекло в каплю 50 % водного раствора глицерина, накрывали покровным стеклом и исследовали с помощью светового микроскопа [11]. Полученные препараты исследовали с помощью объективов 10* и 40* светового микроскопа «Микромед 2-20» на предмет наличия грибковых элементов.
Каждый из образцов кожи также инокулировали в чашку Петри, содержащую декстрозный агар Сабуро, циклогексимид в концентрации 0,5 мг/мл и хлорамфеникол в концентрации 16 мкг/мл. Образцы помещали непосредственно и вдавливали в среду с помощью бактериологической петли для обеспечения адекватного контакта между образцом и средой. Чашки Петри заклеивали липкой лентой, инкубировали при 37 °C и наблюдали за ростом грибков каждые 3 дня в течение 21-30 дней. В дальнейшем изучали морфологию и культу-ральные свойства выделенных микроорганизмов.
В ходе проведения эксперимента определяли клинический статус животных, а также гематологические, биохимические и иммунологические показатели. С этой целью у всех животных, используя правила асептики и биоэтики, отбирали пробы крови из яремной вены. Забор крови проводили через 10 суток после применения препарата «Аисидивит», 10 суток после первой вакцинации и 10 суток после ревакцинации телят.
Уровень гемоглобина в крови определяли гемоглобинцианидным методом, глюкозы - с использованием диагностического набора для количественного и качественного колориметрического определения концентрации глюкозы в биологических жидкостях (ООО Агат Биоконт, РФ), количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывали в камере Горяева, выведение лейкоцитарной формулы проводили общепринятым методом, скорость оседания эритроцитов определяли с помощью аппарата Панченкова [1].
Показатели неспецифической резистентности организма телят устанавливали в ходе постановки опсоно-фагоцитарной реакции (ОФР) и бактерицидной активности сыворотки крови (БАСК). Для постановки ОФР в качестве тест-микроба применяли 48-часовую, убитую нагреванием (800 °С в течение 30 минут) культуру Staphulococcus aureus (штамм 209-P). Определяли фагоцитарную активность (ФА) - процент активных нейтрофилов; подсчитывали фагоцитарное число (ФЧ) - среднее количество поглощённых микроорганизмов одним активным нейтрофилом [4]. Для определения переваривающей способности нейтрофилов устанавливали коэффициент фагоцитарного числа (КФК) после инкубации крови животных с тест-микробом в течение 30- и 120- минут. Показатели фагоцитоза нейтрофилов крови устанавливали - по С.А. Кост и М.И Стенко [3]. Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по методу О.В. Смирнова, Т. А. Кузьмина [5]. Цифровые данные обработаны методами вариационной статистики с применением сертифицированной компьютерной программы Statistica-6.
Результаты и обсуждение. Из 14 исследованных телят, у которых были
97
обнаружены дерматофиты, поражения стригущим лишаем чаще всего наблюдались в области головы, особенно вокруг глаз у 71,42 % (10/14), в то время как 8,0 % (1/14) поражений были обнаружены на шее, 8,0 % (1/14) - на спине, в остальных случаях (12,6%) - на конечностях.
У больных телят поражения кожи были дискретными, облысевшими, округлыми, ограниченными, твёрдыми и серовато-белыми, возвышающимися над кожей.
Дерматофиты были идентифицированы по размеру и форме макроконидий и микроконидий, хламидоспор, спиральных гиф. Колонии Т. verrucosum, как правило, были медленно растущими, пуговчатыми или в форме диска, белыми, с приподнятым центром и плоской периферией с некоторым погруженным ростом и желтым пигментом с обратной стороны. Микроскопически наблюдались широкие, неправильные гифы с обильными хламидоспорами в цепочках (цепочках «жемчуга»).
Результаты гематологических и биохимических исследований представлены в таблице 1.
Таблица 1. Результаты гематологических и биохимических исследований
(М±m)
Показатели Ед. изм. Норма Контроль Опыт
Через 10 суток после применения препарата «Айсидивит»
Гемоглобин г/л 9-14 15,1±0,15 15,1±0,21
СОЭ мм/ч 1-3 1,57±0,30 1,21±0,21
Глюкоза ммоль/л 2,3-3,4 3,57±0,22 4,21±0,26
Эритроциты 1012 5,0-7,0 6,86±0,56 7,35±0,19
Лейкоциты 109 5,0-10,0 12,43±2,62 13,51±3,67
Палочкоядерные нейтрофилы % 2-5 4,57±0,57 4,29±0,75
Сегментоядерные нейтрофилы % 25-50 34,57±4,89 28,57±2,67
Эозинофилы % 3-8 4,43±0,48 3,57±0,53
Базофилы % 0-0,5 0,71±0,42 0,14±0,14
Лимфоциты % 35-75 52,86±5,21 59,14±3,14
Моноциты % 3-10 2,86±0,51 4,29±0,64*
Общий белок г/л 60-80 89,84±3,01 95,66±1,96
БАСК % 30-60 35,32±5,28 41,48±3,12
через 10 суток после первой вакцинации
Гемоглобин г/л 9-14 14,61±0,46 15,07±0,27
СОЭ мм/ч 1-3 1,57±0,20 1,57±0,20
98
Продолжение таблицы 1
Глюкоза ммоль/л 2,3-3,4 3,53±0,19 3,96±0,30
Эритроциты 1012 5,0-7,0 6,51±0,33 6,90±0,27
Лейкоциты 109 5,0-10,0 12,07±1,44 13,57±0,71
Палочкоядерные нейтрофилы % 2-5 4,29±0,64 3,00±0,62
Сегментоядерные нейтрофилы % 25-50 34,43±3,62 36,43±2,05
Эозинофилы % 3-8 3,86±0,46 3,29±0,47
Базофилы % 0-0,5 1,71±0,42 3,29±0,47
Лимфоциты % 35-75 52,14±3,58 53,14±2,90
Моноциты % 3-10 3,43±0,61 2,57±0,69
Общий белок г/л 60-80 87,16±1,87 87,53±4,04
БАСК % 30-60 39,43±4,29 58,42± 3,34*
Через 10 суток после ревакцинации
Гемоглобин г/л 9-14 15,32±0,33 15,23±0,31
СОЭ мм/ч 1-3 1,62±0,24 1,58±0,22
Глюкоза ммоль/л 2,3-3,4 3,63±0,21 3,52±0,30
Эритроциты 1012 5,0-7,0 6,28±0,22 6,15±0,32
Лейкоциты 109 5,0-10,0 10,07±1,51 9,44±0,41
Палочкоядерные нейтрофилы % 2-5 4,30±0,34 3,23±0,22
Сегментоядерные нейтрофилы % 25-50 24,43±3,82 26,43±2,22
Эозинофилы % 3-8 3,80±0,51 3,19±0,24
Базофилы % 0-0,5 1,21±0,22 1.28±0,17
Лимфоциты % 35-75 64,21±2,34 63,23±3,51
Моноциты % 3-10 3,43±0,61 2,57±0,69
Общий белок г/л 60-80 89,23±1,87 88,13±4,23
БАСК % 30-60 42,40±5,30 61,22± 2,17*
Примечание: *р< 0,05 по отношению к группе контроля
Анализ данных табл. 1 показывает, что количество эритроцитов и лейкоцитов, уровень гемоглобина крови е всех телят находились в пределах физиологической нормы. После первой вакцинации у животных опытной группы достоверно (р<0,05) увеличился относительный процент моноцитов крови
99
(4,29 ± 0,64 % против 2,86 ± 0,51 % в контроле). Через 10 суток после ревакцинации у телят опытной группы определена достоверная разница (р< 0,05) между показателями бактерицидной активности сыворотки крови (61,22±2,17 % -в опыте, против 42,40±5,30 % - в контроле).
Через 10 суток после применения препарата «Айсидивит» определено статистически достоверное увеличение фагоцитарной активности нейтрофи-лов крови телят опытной группы, в 1,4 раза, эта тенденция сохранилась и после ревакцинации животных (табл. 2).
Таблица 2. Параметры функциональной активности нейтрофилов крови
телят ^±m)
Показатели Экспозиция 30 мин Экспозиция 120 мин КФЧ
ФА, % ФЧ ФА,% ФЧ
До применения биопрепаратов
28,3 ± 2,32 1,24 42,4 ± 1,62 0,86 1,44
Через 10 суток после применения препарата «Айсидивит»
Опыт 35,6 ± 3,85* 1,52 42,0 ± 7,76 1,50 1,01
Контроль 25,3 ± 1,08 1,44 23,3 ± 9,7 1,57 0,91
Через 10 суток после первой вакцинации
Опыт 32,6 ± 3,85 1,43 31,3 ± 2,05 0,61 2,34
Контроль 32,0 ± 1,63 0,24 39,6 ± 1,24 1,15 0,21
Через 10 суток после ревакцинации
Опыт 48,3 ± 2,35* 1,08 46,0 ± 2,9 0,56 1,92
Контроль 38,0 ± 1,63 1,21 47,0 ± 2,16 0,7 1,72
Примечание: *р< 0,05 по отношению к группе контроля
Исследования позволили установить статистически значимые различия между параметрами, отражающими функциональную активность нейтрофилов крови телят через 10 суток после их ревакцинации (р< 0,05). По сравнению с показателями, отражающими функциональную активность нейтрофилов крови до применения биопрепаратов, фагоцитарная активность нейтрофильных лейкоцитов крови животных через 10 суток после ревакцинации возросла в 1,7 раз, а у животных контрольной группы - в 1,35 раза. После первого введения вакцины ЛТФ-130 у телят контрольной группы в 6,8 раз снижается показатель КФЧ, при этом, у телят опытной группы этот показатель, напротив, был выше 1,63 раза уровня фоновых показателей. После ревакцинации животных показатель КФЧ телят опытной и контрольной групп превышает фоновые показатели в 1,33 и 1,19 раз соответственно.
100
Анализ клинических проявлений трихофитоза в ходе лечения телят показал, что полное выздоровление регистрировалось на 30 сутки после ревакцинации у 100 % животных опытной группы. При этом, стадия отторжения корок началась на 9 сутки у трёх животных, на 11 сутки у двух животных, на 12 сутки у двух животных. Стадия шелушения эпидермиса началась на 14 сутки у 2 животных, на 17 сутки у пяти животных. Стадия роста волос началась на 19 сутки у 2 животных, на 20 сутки у 3 животных, на 21 сутки у одного телёнка, 28 сутки также у одного животного (100 %).
Полное выздоровление наступило на 30 сутки после ревакцинации у 71 % животных контрольной группы (5 голов), у 29 % животных полного выздоровления не наступило. Стадия отторжения корочек на коже началась на 10 сутки у 2 животных и на 12 сутки у одного телёнка, на 114 сутки у 4 животных. Стадия шелушения эпидермиса началась на 16 сутки у одного животного, на 20 сутки у 2 животных, на 20 сутки у одного телёнка и на 21 сутки также у одного животного.
Массовые профилактические вакцинации крупного рогатого скота вакциной ЛТФ-130, позволили почти полностью предотвратить возникновение масштабных вспышек стригущего лишая у крупного рогатого скота, заболевание стало проявляться спорадически. В современных условиях ведения животноводства - при различных формах собственности с ограниченным числом поголовья и закрытым типом их содержания - изменилось проявление эпизоотического процесса трихофитоза и особенно на фоне иммунодефицитных состояний организма животных [2].
Ослабленная иммунная система из-за снижения иммунологической реактивности организма животных, несовершенства иммунной системы молодняка, некачественного кормления, нарушений гигиенических параметров содержания животных не в состоянии противостоять условно-патогенным микроорганизмам. В этой связи при проведении лечебно-профилактических мероприятий при многих заболеваниях рекомендуется применять стимуляторы иммунной системы, в том числе иммуностимулирующих препаратов, снижающих иммунодепрессивное состояние и нормализующих клеточный и гуморальный иммунитет до уровня физиологической нормы.
Вывод. Таким образом, применение для больных трихофитозом телят 2-х месячного возраста вакцины ЛТФ-130 в комплексе с иммуномодулирующим препаратом «Айсидивит», приводит к достоверному повышению функциональной активности нейтрофилов крови, бактерицидной активности сыворотки крови, способствует снижению сроков регенерации поражённой кожи.
Список использованных источников:
1. Кондрахин И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник - М.: Колос, 2004. - 520 с.
References:
1. Kondrakhin I. P. Methods of veterinary clinical laboratory diagnostics: Reference book-Moscow: Kolos, 2004 -520 p.
101
2. Кораблёва Т.Р. Применение препарата «Иммуновитал» при лечении трихофитоза у телят. Т.Р. Кораблёва, М.В. Скибин // Научные труды Южного филиала Национального университета биоресурсов и природопользования Украины Крымский агротехнологиче-ский университет. Серия: Ветеринарные науки. - 2014 (160). - С. 200-206.
3. Кост С.А. Определения фагоцитарной активности лейкоцитов. С.А Кост., М.И. Стенко // Клиническая гематология животных. - М.: Колос, 1974. - С. 99-100.
4. Плященко С.И. Естественная резистентность организма животных. - Л., 1979. - С. 33-35.
5. Смирнова О.В. Фотонефеломе-трический способ определения бактерицидной активности сыворотки крови. О.В. Смирнова, Т.А. Кузьмина // ЖМЭИ, - 1966, 4. - С. 8-11.
6. Antachopulus C, Waalsh T.J, Roilides E. Fungal infections in primary immunodeficiencies // Eur. J. Pediatr. -2007; 166(11).- Р.1099-1117.
7. Blanco J.L, Garcia M.E. Immune response to fungal infections // Vet. Immunol. Immunopathol. - 2008; 125 (1-2). - Р. 47-70.
8. Laksmipathy D.T, Kannabiran K. Reviewondermatomycosis:Pathogenesis and treatment // Nat. Sci.- 2010;2(7). -Р. 726-731.
9. MorettiA.,Agnetti F., Mancianti F., Nardoni S., et all. Dermatophytosis in animals:Epidemiological, clinical and zoonotic aspects // J. Ital. Dermatol. Venereol. - 2013;148(6). - Р. 563-572.
10. Padgett D.A, Glaser R. How stress influences the immune response //Trends Immunol. - 2003;24(8). - Р. 444-448.
2. Korableva T. R. Application of the drug "Immunovital" in the treatment of trichophytosis in calves. T. R. Korableva, M. V. Skibin / / Scientific works of the Southern branch of the National University of Bioresources and Nature Management of Ukraine Crimean Agrotechnological University. Series: Veterinary Sciences. -2014 (160). - P. 200-206.
3. Coast S. A. Determining the phagocytic activity of leukocytes. S. Coast., M. I. Stanko // Clinical Hematology animals. - M.: Kolos, 1974. - P. 99-100.
4. Plashenko S. I. Natural resistance of the animal organism. - L., 1979. -P. 33-35.
5. Smirnova O. V. Fotokataliticheskoi method of determining bactericidal activity of blood serum. O. V. Smirnova, T.A. Kuzmina REGION, - 1966, 4. -P. 8-11.
6. Antachopulus C, Waalsh T.J, Roilides E. Fungal infections in primary immunodeficiencies // Eur. J. Pediatr. - 2007; 166(11). - P.1099-1117. 7. Blanco J.L, Garcia M.E. Immune response to fungal infections // Vet. Immunol. Immunopathol.- 2008; 125 (1-2). - P. 47-70.
8. Laksmipathy D. T, Kannabiran K. Review on dermatomycosis:Pathogenesis and treatment // Nat. Sci.- 2010;2(7). -P. 726-731.
9. Moretti A., Agnetti F., Mancianti F., Nardoni S., et all. Dermatophytosis in animals:Epidemiological, clinical and zoonotic aspects // J. Ital. Dermatol. Venereol. - 2013;148(6). - P. 563-572.
10. Padgett D. A, Glaser R. How stress influences the immune response / / Trends Immunol. - 2003; 24(8). - P. 444-448.
102
11. Robert R, Pihet M. Conventional methods for the diagnosis of dermatophytosis // Mycopathologia. -2008;166 (5-6). - P. 295-306
12. Romani L. Reviews: Immunity to fungal infections// Nat. Rev. Immunol. -2004;4(1). - P. 1-13.
11. Robert R, Pihet M. Conventional methods for the diagnosis of dermatophytosis / / Mycopathologia. -2008;166(5-6). - P. 295-306.
12. Romani L. Reviews: Immunity to fungal infections// Nat. Rev. Immunol. -2004;4(1). - P. 1-13.
Сведения об авторах:
Кораблёва Татьяна Рафаилов-на - доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий кафедрой микробиологии, эпизоотологии, и ве-теринарно-санитарной экспертизы Агротехнологической академии ФГА-ОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского», 295492, Россия, Республика Крым, г. Симферополь, п. Аграрное, Агро-технологическая Академия ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского».
Скибин Михаил Вячеславович -ассистент кафедры микробиологии, эпизоотологии, и ветеринарно-сани-тарной экспертизы Агротехнологи-ческой академии ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского», e-mail: astemenkol@gmail.com, 295492, Россия, Республика Крым, г. Симферополь, п. Аграрное, Агротехнологи-ческая академия ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского».
Information about the authors:
Korableva Tatyana Rafailovna -Doctor of veterinary Sciences, Professor, Head of the Department of Microbiology, Epizootology, and Veterinary and Sanitary Expertise of the Agrotechnological Academy of the FSAEI HE «V. I. Vernadsky Crimean Federal University», 295492, Russia, Republic of Crimea, Simferopol, Agrotechnological Academy FSAEI HE «V. I. Vernadsky Crimean Federal University».
Skibin Mikhail Vyacheslavovich -Assistant of the Department of Microbiology, Epidemiology, and Veterinary and Sanitary Examination of the Agrotechnological Academy of the FSAEI HE «V. I. Vernadsky Crimean Federal University», e-mail: astemenkol@ gmail.com, 295492, Russia, Republic of Crimea, Simferopol, Agrotechnological Academy FSAEI HE «V. I. Vernadsky Crimean Federal University».
103
