CC BY
21Е.В. Ломако, Н.А. Кузьмичева
ПРИМЕНЕНИЕ ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В АНАЛИЗЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ, СОДЕРЖАЩЕГО ФЛАВОНОИДЫ
Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет
Изучено влияние вида и концентрации поверхностно-активных веществ (ПАВ) на степень экстракции флавоноидов из лекарственного растительного сырья (ЛРС), а также на кинетику фотометрической реакции рутина с алюминия хлоридом. Выявлены наиболее перспективные ПАВ для разработки методики извлечения и количественного определения флавоноидов в ЛРС. Это позволит полностью отказаться от применения в анализе дорогостоящих, фармакологически неиндифферентных и ядовитых растворителей, заменив их на водные растворы ПАВ в низких концентрациях. Наилучшие результаты показали 0,0005% раствор мирамистина и 0,1% раствор полигексаметиленбигуанида гидрохлорида, которые экстрагируют в 2—4 раза больше флавоноидов из ЛРС по сравнению с 70% этанолом, а также в 2—3 раза ускоряют достижение равновесия в реакции комплексообразования с алюминия хлоридом, что может существенно сокращать время проведения количественного анализа.
Ключевые слова: флавоноиды, ПАВ, экстракция, спектрофотометрия, кинетика фотометрической реакции.
ВВЕДЕНИЕ
Флавоноиды - биологически активные вещества, широко применяемые в современной медицине. Флавоноидные соединения используются как противовоспалительные, капилляропротекторные, спазмолитические и желчегонные средства [1]. В качестве источников флавоноидов используется различное ЛРС, лекарственные средства этой группы представляют собой как индивидуальные вещества, так и суммы соединений, присутствующих в растении.
Стандартизация ЛРС по содержанию флавоноидов проводится с помощью физико-химических методов - спектрофото-метрии, хроматоспектрофотометрии, флуо-риметрии [2]. Государственная фармакопея Республики Беларусь для анализа ЛРС, содержащего флавоноиды, предлагает спек-трофотометрические методики, которые различаются по способам экстракции, составу экстрагентов, кислотных реагентов, условиям фотометрического определения. В качестве экстрагентов рекомендуются водные растворы этанола и хлористоводородной кислоты различной концентрации, а также этилацетат, ацетон и некоторые другие органические растворители, обладающие известной токсичностью [3, 4]. Этанол
в концентрации 50-70% является хорошим экстрагентом для флавоноидов, но извлекает вместе с ними и большое количество сопутствующих веществ, мешающих проведению анализа. В то же время, за последние годы в литературе все чаще появляются данные об эффективности применения для этих целей ПАВ [5].
Водные растворы ПАВ могут быть использованы в жидкостной экстракции под давлением (ЖЭД) - ускоренном методе экстракции из твердых простых матриц как альтернативе органическим растворителям, для снижения загрязнения окружающей среды. Было показано, что ЖЭД с применением натрия додецилсульфата или Тритон Х-100 эффективна в той же мере, как и с применением органических растворителей. ЖЭД с применением ПАВ используется в первую очередь как метод пробоподготовки для проведения мицел-лярной электрокинетической хроматографии [6]. В этом методе ПАВ добавляются к электролиту для формирования мицелл. В процессе электрокинетического разделения неполярные фракции нейтральных веществ из раствора включаются в ядро мицелл и мигрируют с той же скоростью, что и мицеллы, тогда как полярные фракции свободны и мигрируют со скоростью электро-осмотического потока [7].
В недавних исследованиях взаимодействие различных простых флавоноидов с анионными ПАВ, в частности, водным раствором натрия додецилсульфата, было изучено с помощью абсорбционной спектроскопии как функции содержания ПАВ, в концентрации выше или ниже предельной концентрации мицеллообразования. Примерное число молекул флавоноидов, встроившихся в мицеллу, предположительно находится в зависимости от концентрации натрия додецилсульфата. Встраивание флавоноидов в мицеллы сдвигает УФ-спектр поглощения в сторону больших длин волн, а батохромный сдвиг также зависит от природы основной гидрофильной группы ПАВ [7].
В исследованиях влияния ПАВ на выделение и идентификацию фенольных соединений при сравнении экстрагентов показана наибольшая эффективность водного раствора ПАВ по сравнению с водно-ме-танольной смесью (20:80), метанольным раствором ПАВ и водно-метанольным раствором ПАВ. При изучении влияния типа и концентрации ПАВ исследованы цетилтриметиламмония бромид, натрия додецилсульфат, Тритон Х-100, ПЭГ 2000, Бридж 35, причем неионогенные ПАВ оказались лучшими экстрагентами, среди них наиболее высокую эффективность имеет Бридж 35. Положительное влияние концентрации ПАВ проявилось при уровне выше критической концентрации мицел-лообразования [8].
Установлено, что растворители, используемые в составах лекарственных и косметических средств (ДМСО, ПЭО 400, ПГ, их смеси с водой), обладают высокой экстрагирующей способностью по отношению к флавоноидам и антраценпроиз-водным (АП). Изучена также зависимость эффективности экстракции флавоноидов и антраценпроизводных от рода и гидро-фильно-липофильного баланса (ГЛБ) ПАВ, применяемых в качестве эмульгаторов в двухфазных системах экстрагентов. Для гидрофильных биологически активных веществ (БАВ) наблюдается экстремальная зависимость, а именно - существует оптимальное значение ГЛБ, при котором в водной фазе достигается максимальная концентрация флавоноидов и АП. Степень экстракции флавоноидов при значениях ГЛБ до 9 невелика и практически постоянна. При дальнейшем увеличении
ГЛБ она резко возрастает, причем максимальная концентрация суммы флавоно-идов в водной фазе достигается при ГЛБ ~13,5; затем происходит уменьшение концентрации.
Растворы ПГ проявляют экстракционную способность по отношению к флаво-ноидам и АП, близкую к экстракционной способности водных растворов этилового спирта. По отношению к флавоноидам состав смеси ПГ с водой имеет синергидный оптимум: наибольшая степень экстракции флавоноидов наблюдается для 60 - 70% растворов ПГ. В случае применения ПЭО наибольшая степень экстракции флавоно-идов достигается в широком интервале соотношений - от 40 до 80% ПЭО в смеси с водой; при этом 100% ПЭО-400 практически не извлекает ни флавоноиды, ни АП. По-видимому, это объясняется высокой вязкостью и молекулярной массой оли-гомера, что затрудняет диффузию ПЭО в клетку и десорбцию БАВ. По степени экстракции АП водные 70-80% растворы ПЭО превосходят остальные исследованные экстрагенты, в том числе водно-спиртовые растворы.
ДМСО как экстрагент проявляет монотонное возрастание экстракционной способности по отношению и к флавоноидам, и к АП по мере увеличения его концентрации в водных растворах. По-видимому, это объясняется высокими растворяющими свойствами ДМСО, а также его способностью диффундировать в клетку и десорби-ровать БАВ. Однако процесс сольватации растительного сырья и десорбции БАВ для ДМСО носят иной характер, чем для спирта, так как ДМСО является апротонным растворителем. Поэтому суммарная экстракционная способность ДМСО не превышает таковой для водных растворов ПГ и ПЭО 400 [9].
Разработана методика спектрофотоме-трического определения флавоноидов в лекарственном растительном сырье, включающая стадию экстракционного выделения флавоноидов с последующим их детектированием по реакции образования окрашенных комплексов с ионами алюминия в мицеллярных средах цетилпиридиния хлорида. Последний в сравнении с додецил-сульфатом натрия и Тритоном Х-100 проявляет оптимальное влияние на скорость протекания фотометрической реакции фла-воноидов с алюминия хлоридом [10].
Ионогенные (катионо- и анионоген-ные) и неионогенные ПАВ являются общедоступными, широко применяются как эмульгаторы, а также в качестве дезинфицирующих и антисептических средств.
Поэтому актуальным является изучение эффективности ПАВ в анализе ЛРС, содержащего флавоноиды. Перспективность темы обусловлена возможностью замены токсичных и фармакологически неиндифферентных растворителей растворами ПАВ низкой концентрации для фармакопейного анализа ЛРС.
Целью данной работы является исследование влияния ПАВ на процесс экстракции флавоноидов из ЛРС и на кинетику фотометрической реакции флавоноидов с алюминия хлоридом.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Листья березы заготавливали в июне 2013 г., листья ивы остролистной - в июле 2013 г. в окрестностях г. Витебска. Сушка воздушно-теневая. Образцы измельчали до частиц размером 1-2 мм. Соотношение сырье - экстрагент 1:100. Экстракцию проводили при нагревании на водяной бане в течение 30 мин. В качестве экс-трагентов использовали водные растворы твин-80, полипропиленгликоля (ПГ), до-децилсульфата натрия (ДДСН), полигекса-метиленбигуанида гидрохлорида (111 МБ), бензилдиметил-[3-(миристоиламино)-пропил] аммония хлорида (мирамистин), диметилсульфоксида (ДМСО) различной концентрации.
Растворы ПАВ готовили растворением в воде очищенной, из концентрированных растворов готовили серии разведений. Раствор алюминия хлорида 2% готовили растворением навески в 70% растворе этилового спирта в воде. Ацетатный буферный раствор (рН 3) готовили, прибавляя к 10 мл 1 М ШОН 57 мл 60г/л СН3СООН и доводя до 100 мл.
Количественное содержание флавоно-идов в полученных экстрактах определяли методом дифференциальной спектрофо-тометрии: к 0,2 мл извлечения прибавляли 0,2 мл 2% раствора алюминия хлорида в этаноле, 0,6 мл ацетатного буфера (рН 3) и 4 мл воды очищенной. Компенсационный раствор состоял из 0,2 мл извлечения, 0,6 мл ацетатного буфера (рН 3) и 4,2 мл воды очищенной. Через 40 мин измеряли опти-
ческую плотность при длине волны 411 нм. В качестве контроля использовали экстракты из тех же образцов листьев, приготовленные аналогично с использованием 70% этанола, а также растворы в этаноле стандартных образцов гиперозида 500 мкг/мл или лютеолин-7-О-глюкозида 500 мкг/мл. Количественное содержание суммы фла-воноидов в листьях березы рассчитывали в мг/мл в пересчете на гиперозид, а в листьях ивы остролистной в пересчете на лютеолин-7-О-глюкозид. Кроме того, рассчитывали количественное содержание флавоноидов в экстрактах, полученных при помощи различных ПАВ, в процентах по отношению к их концентрации в этанольном экстракте (активность ПАВ). Для сравнения эффективности различных ПАВ, применяемых в разных концентрациях, рассчитывали также индекс активности как отношение активности ПАВ к его концентрации.
Кинетику протекания фотометрической реакции с алюминия хлоридом изучали при помощи растворов, полученных смешиванием 0,2 мл 0,5 мг/мл спиртового раствора рутина или лютеолин-7-глюкозида, 0,6 мл ацетатного буфера (рН = 3) и 4 мл раствора ПАВ. Измеряли оптическую плотность растворов непосредственно после прибавления 0,2 мл 2% раствора алюминия хлорида, а также каждую минуту в течение 10 минут, каждые 5 минут до истечения 40 минут после смешивания. В качестве сред для проведения реакции использовали растворы твин-80, моностеара-та глицерина, мирамистина, «Мукосанин» (раствор полигексаметиленбигуанида гидрохлорида с феноксиэтанолом), «Септо-цид» (раствор полигексаметиленбигуани-да спиртовой).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Экстракция ЛРС растворами ПАВ
Результаты определения суммы фла-воноидов в полученных экстрактах, а также активность и индекс активности ПАВ, представлены в таблице 1.
Количественное содержание суммы флавоноидов в экстрактах, полученных с помощью 0,5% раствора твин-80, 0,5% раствора полипропиленгликоля-2000, ока-за-лось ниже, а 0,1% и 0,35% раствора ПГ МБ, а также растворов всех изученных концентраций ДДСН, ДМСО и мирамистина -выше, чем в этанольных извлечениях.
Таблица 1 - Содержание флавоноидов в экстрактах, полученных при помощи различных ПАВ, в сравнении с этанольным экстрактом
Наименование и концентрация ПАВ Содержание флавоноидов в экстракте Индекс активности (отношение активности к конц. ПАВ)
в мг/мл в % к этанольному экстракту (активность)
ЕЮН 70% 0,111 100
твин-80 0,5% 0,061 55 110
Полипропиленгликоль 0,5% 0,062 56 111
ДДС N 0,1% 0,128 116 1157
ДДС N 0,01% 0,135 122 12187
ДДС N 0,001% 0,130 118 117523
ПГМБ г/хл 0,04%/вода 0,111 100 2500
ПГМБ г/хл 0,04%/ЕЮН 8% 0,093 84 2100
ПГМБ г/хл 0,1% 0,204 184 1840
ПГМБ г/хл 0,35% 0,447 403 1151
мирамистин 0,01% 0,266 239 23946
мирамистин 0,005% 0,270 243 48659
мирамистин 0,002% 0,310 279 139684
мирамистин 0,001% 0,348 314 313625
мирамистин 0,0005% 0,475 427 854969
мирамистин 0,0001% 0,334 301 3007423
ДМСО 0,001% 0,381 343 343243
ДМСО 0,01% 0,369 332 33243
ДМСО 0,1% 0,341 307 3072
ДМСО 1% 0,260 234 234
ДМСО 5% 0,302 272 54
ДМСО 20% 0,467 421 21
Столь низкая активность неионоген-ных ПАВ не согласуется с литературными данными [8], что может быть связано с применением их в данном исследовании в концентрациях ниже ККМ (таблица 2).
При изучении ряда разведений мира-мистина наивысшее содержание флавоно-идов обнаружено в экстракте, полученном с помощью 0,0005% раствора, что намного ниже его ККМ (0,08%). Для ПГМБ наиболее эффективной оказалась концентрация 0,35%, причем раствор в воде очищенной показал более высокий результат, чем водно-спиртовой раствор той же концентрации. Для ДМСО наблюдается два максимума - 0,001% и 20%, что может свиде-
тельствовать о смене механизма взаимодействия данного ПАВ с флавоноидами при экстракции. Раствор ДДСН в концентрации 0,01% также показал более высокий результат по сравнению со спиртовым извлечением, однако меньше, чем у других ПАВ. Данная концентрация, составляющая в пересчете 3,45х10-4моль/л, оказалась ниже, чем критическая концентрация ми-целлообразования - 8,1х10-3моль/л.
Следует принять во внимание, что в присутствии ПАВ фотометрическая реакция с алюминия хлоридом эффективно протекает в водной среде, следовательно, не требуется применение спирта для проведения анализа.
Таблица 2 - Мицеллярные свойства изучаемых веществ
Наименование ПАВ ККМ, моль/л М, г/моль
твин-80 0,06 ~182000
ППГ ~1х10-4 2000
ДМСО 4х10-3 (31,2%) 78
ПГМБ - ~2900
ДДСН 8,1х10-3 288,4
мирамистин 1,75х10-3 (0,08%) 457,14
Таким образом, можно отметить, что наиболее эффективным экстрагентом фла-воноидов из листьев березы и ивы остролистной оказалось катионогенное поверхностно-активное вещество мирамистин-бензилдиметил-[3-(миристоиламино)про-пил]аммония хлорид (отношение активности ПАВ по сравнению с этанольным извлечением к концентрации ПАВ 8,5х105), также заметную активность проявил неионогенный ПАВ ДМСО (отношение 3,4х105). Для ДДСН этот индекс составил 1,2х104, а для ПГМБ - всего 1,1х103. Индекс позволит оценить экономическую целесообразность применения ПАВ в анализе.
Рисунок 1
Рисунок 2
При добавлении твин-80 в концентрации 0,5% к реакционной смеси равновесие наступало через 15 мин, так же как и в при-
Кинетика фотометрической реакции в растворах ПАВ
Одной из наиболее важных характеристик для проведения анализа является время достижения равновесия, когда оптическая плотность становится постоянной. Стандартные методики указывают время протекания фотометрической реакции около 40 мин. Время наступления равновесия оценивали по характеру кривой скорости фотометрической реакции, достижению плато на графике, наличию экстремума. Результаты определения влияния ПАВ на кинетику фотометрической реакции с алюминия хлоридом представлены на рисунках 1-5.
сутствии 0,5% раствора моностеарата глицерина. Исследование растворов мирами-стина показало, что равновесие наступает
- Скорость реакции образования комплекса рутина с алюминия хлоридом в присутствии твин-80 0,5%
- Кинетика фотометрической реакции рутина с алюминия хлоридом в присутствии моностеарата глицерина
раньше при добавлении 0,0005% раствора, в обоих случаях постоянство оптической чем 0,01%, однако разница несущественна, плотности достигается также к 15 мин.
Рисунок 3 - Скорость фотометрической реакции в присутствии мирамистина
Рисунок 4 - Скорость фотохимической реакции рутина с алюминия хлоридом в
присутствии мукосанина
Рисунок 5 - Скорость реакции рутина с алюминия хлоридом в присутствии септоцида
В присутствии мукосанина (рисунок 4) реакция завершилась также через 15 мин, причем на кинетической кривой можно отметить четкий экстремум, в отличие от растворов других ПАВ.
В присутствии додецилсульфата натрия в концентрации 0,5% кинетика реакции существенно не изменялась. Добавление септоцида к реакционной смеси также не отразилось на кинетической кривой (рисунок 5), равновесие устанавливается около 40 мин.
Все исследованные ПАВ увеличивают оптическую плотность растворов. Однако значимый эффект наблюдается лишь у некоторых из них, в частности, мирамистина и водного раствора полигексаметиленби-гуанида гидрохлорида.
Присутствие других ПАВ существенно не влияет на скорость образования окрашенного комплекса рутина (точки перегиба кривых оптической плотности раствора с добавлением ПАВ и контрольного раствора имеют приблизительно одинаковые координаты по оси абсцисс).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Изучено влияние вида и концентрации ПАВ на степень экстракции флавоноидов из ЛРС, а также на кинетику фотометрической реакции рутина с алюминия хлоридом. Выявлены наиболее перспективные ПАВ для разработки методики извлечения и количественного определения флавоноидов в ЛРС.
На основании данного исследования можно рекомендовать раствор мирамисти-на в концентрации 0,0005% в качестве экс-трагента для извлечения флавоноидов из лекарственного растительного сырья. Отмечено положительное влияние растворов мирамистина на кинетику фотометрической реакции с алюминия хлоридом, что может сокращать время проведения количественного анализа экстрактов, полученных в присутствии данного вещества. Водный раствор полигексаметиленбигуанида гидрохлорида также может быть рекомендован как экс-трагент (в концентрации 0,1% и выше) и как среда проведения фотометрической реакции с алюминия хлоридом для сокращения времени достижения равновесия.
Для экстракции флавоноидов перспективным также является использование растворов диметилсульфоксида в концентрации 0,1% - 0,001%.
Научные публикации SUMMARY
E.V.Lomako, N.A.Kuzmichova
APPLICATION OF SURFACTANTS
IN THE ANALYSIS OF MEDICINAL VEGETATIVE RAW MATERIAL CONTAINING FLAVONOIDS
The influence of the type and concentration of surfactants on the extraction of flavo-noids from medicinal vegetative raw material (VMR), as well as on the kinetics of the photometric reaction of the rutin with aluminum chloride is studied. The most promising surfactants for extraction and quantitative determination of flavonoids in the VMR were identified. This will completely abandon the use of costly, pharmacologically non-indifferent and poisonous solvents in analyses, replacing them with aqueous solutions of surfactants in low concentrations. The best results showed 0,0005% miramistin solution and 0,1% solution of polihexamethylenbiguanidin hydrochloride, which extract in 2-4 times more flavonoids from VMR compared with 70% ethanol and faster achievement of equilibrium in reaction to chelation of aluminum chloride in 2-3 times, which can significantly reduce the time of quantitative analysis.
Keywords: flavonoids, surfactants, extraction, spectrophotometry, kinetics of photometric reaction.
ЛИТЕРАТУРА
1. Химический анализ флавоноидов / Фармакогнозия // [Электронный ресурс]. -Режим доступа: http://intranet.tdmu.edu.ua. -Дата доступа: 20.02.2014.
2. Идентификация и количественная оценка флавоноидов в комплексных фитопрепаратах/ М.А.Огай [и др.] // Научные ведомости. Серия Медицина. - Фармация. -2010. - №10 (81). - Выпуск 10. - С. 85 - 88.
3. Государственная фармакопея Республики Беларусь. В 3 т. Т.2. Контроль качества вспомогательных веществ и лекарственного растительного сырья/ УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; под общ.ред. А.А. Шерякова. - Молодечно: Тип. «Победа», 2008. - 472 с.
4. Государственная фармакопея Республики Беларусь. В 3 т. Т.3. Контроль качества фармацевтических субстанций/ М-во здравоохранения Респ. Беларусь, УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; под общ.ред. А.А. Шерякова.
- Молодечно: Типография «Победа», 2009.
- 728 с.
5. Васильев, В.П. Аналитическая химия. Физико-химические методы анализа: учеб. для студ. вузов, обучающихся по химико-технол. спец. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Дрофа, 2002. - 384 с.
6. Surfactant-assisted pressurized liquid extraction for determination of flavonoids from Costusspeciosus by micellarelectrokinetic chromatography / Y.Q. Chang [et al.] // J. Sep. Sci. - 2011. - 34. - P.462 - 468.
7. Flavonoids: chemistry, biochemistry, and applications / edited by Goodwin M. Andersen and Kenneth R. Markham. Р. 2006 CRC Press Taylor & Francis Group. Р. 30, 108 - 109.
8. Study of the Effect of Surfactants on Extraction and Determination of Polyphenolic Compounds and Antioxidant Capacity of Fruits Extracts: Research article. 2013 / R. Hosseinzadeh [et al.] // [Электронный ресурс]. Режим доступа: www.plosone.org. -
Дата доступа: 15.02.2014.
9. Хаззаа Ияд Хапед. Экстракция травы зверобоя и сушеницы двухфазными системами растворителей с применением ПАВ: автореф. дис...канд. фарм. н. -Санкт-Петербург, 2004. - 39 с.
10. Спектрофотометрическое определение флавоноидов в растительном сырье/ А. В. Булатов [и др.] // Аналитика и контроль. - 2012. - Т. 16, № 4. - С. 358 - 362.
Адрес для корреспонденции:
210023, Республика Беларусь, г. Витебск, пр. Фрунзе, 27, УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет», кафедра фармакогнозии c курсом ФПК и ПК, тел. раб.: 8(0212) 37-09-29, Кузьмичева Н.А.
Поступила 23.06.2014 г.
О.А. Веремчук, Д.В. Моисеев
МАКРО- И МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ ПОБЕГОВ ВЕРЕСКА ОБЫКНОВЕННОГО И ИХ ПРОЯВЛЯЕМОСТЬ ПРИ РАЗЛИЧНОЙ СТЕПЕНИ
ИЗМЕЛЬЧЕННОСТИ
Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет
Вереск обыкновенный широко используется в народной медицине, однако до настоящего времени не нашел своего применения в научной медицинской практике. Целью нашего исследования было выделить внешние и анатомо-диагностические признаки побегов вереска обыкновенного, а также установить влияние степени из-мельченности сырья на возможность их определения. В ходе исследования при помощи макро- и микроскопического анализа были выявлены внешние и анатомо-диагно-стические признаки побегов вереска обыкновенного. На фракциях сырья с различной степенью измельченности была изучена проявляемость диагностических признаков. Установлено, что измельчение частиц сырья до размера 200 мкм не влияет на обнаружение анатомо-диагностических признаков, а по внешним признакам побеги вереска обыкновенного можно идентифицировать при степени измельчения не менее 1500.
Ключевые слова: вереск обыкновенный, Calluna vulgaris, внешние признаки, ана-томо-диагностические признаки.
ВВЕДЕНИЕ
Вереск обыкновенный (Calluna vulgaris Hull.) - единственный представитель рода Calluna в семействе Ericaceae. Это вечнозеленое растение распространено в Европейской части СНГ, Западной и Восточной
Сибири, встречается в Азии (главным образом в западной части), в Северной Африке (Марокко), на Азорских островах, в Гренландии и на Атлантическом побережье Америки. Вереск обыкновенный произрастает преимущественно на песчаных и супесчаных почвах разной степени увлажне-
