CC BY
17ФАРМАКОГНОЗИЯ И БОТАНИКА
В.Л.Шелюто1, С.В.Онегин2, Н.С.Фурса2
ОБНАРУЖЕНИЕ, ВЫДЕЛЕНИЕ, ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ФЛАВОНОИДОВ В ТРАВЕ ВЕРЕСКА ОБЫКНОВЕННОГО
1Витебский государственный медицинский университет 2Ярославская государственная медицинская академия
Двумерной хроматографией на бумаге в траве вереска обыкновенного обнаружено 18 флавоноидов. При исчерпывающей экстракции спиртом этиловым, упаривании в вакууме до удаления спирта, разбавлении горячей водой и очистке получили водный экстракт, в котором на холоду выпал мелкокристаллический осадок желтого цвета. При его хроматографировании на колонке полиамидного сорбента, а также упаренных ди-этилэфирного и этилацетатного извлечений из водного экстракта выделено 7 веществ в индивидуальном состоянии, отождест-вленных с кемпферолом, кверцетином, гербацетином, астрагали-ном, 8-глюкозидом гербацетина, изо-
кверцитри-ном и гиперозидом. Разработана УФ-спектрофотометрическая
методика определения флавоноидов в траве вереска, определена их сумма в образцах из разных мест произрастания и отмечено, что содержание флавоноидов в образце из Беларуси равнялось средним значениям большинства образцов из Российской Федерации.
ВВЕДЕНИЕ
Одними из важных действующих веществ, обусловливающих отдельные виды фармакологического действия вереска обыкновенного (Calluna vulgaris (L.) Hull.), являются флавоноиды [1-6].
Вереск - монотипный род семейства вересковые (Ericaceae Juss.), подсемей-
ства вересковые (Епсо1ёеае Бг^е). Его родиной является Юго-Восточная Азия. Современный ареал растения обширен (от Северной Африки до Арктики). На территории России он произрастает в Европейской части (все районы от севера до степей), Западной и Восточной Сибири [7,8]. Цветет вереск в июле-августе, а в южных частях ареала в сентябре. Цветение продолжается до глубокой осени [9-11].
Состав флавоноидов надземной части растения разнообразен, в частности, в ней обнаружены дигидрогербацетин, 8-глюкозид, 4’-глюкозид и 8-гентиобиозид гербацетина, гелидолин и его 3-метиловый эфир 7-глюкозида, мирицетин, мирицит-рин, кверцитрин, 3-О-галактозид, 3-[2,3,4-триацетил-а-Ь-арабинозил-(1^6)-Р-Д-глю-козид], 3-О-глюкозид и 3-а-Ь-арабинозид кверцетина, 7-О-в-Б-(2-ацетил) пираног-люкуроновой кислоты метиловый эфир апигенина, таксифолин и его 3-глюкозид, кемпферол и его 3-О-а-Ь-(2,3,5-триацетил)-арабинофуранозил-(1 ^6)-Р-Б-глюкопиранозид, каллюнин, 2”-ацетилкал-люнин, 3-дезокси-каллюнин, витексин,
изорамнетин, нарингенин, изоскутеляреин [1-6,8,12].
Вместе с тем, сравнительное количественное определение флавоноидов в траве вереска из различных мест произрастания не проводилось.
Целью настоящего исследования явилось хроматографическое и физикохимическое изучение, а также количественное определение флавоноидов надземной части вереска.
Для этого предстояло решить следующие задачи:
• с помощью двумерной хроматографии на бумаге проанализировать состав флавоноидов,
• выделить их сумму и разделить на индивидуальные компоненты,
• изучить оптимальные условия экстрагирования флавоноидов и на основе полученных данных разработать методику их количественного определения,
• провести количественное определение этих соединений в траве вереска, произрастающего в Республике Беларусь и в различных регионах Российской Федерации.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Материалом для исследования служила трава вереска обыкновенного, собранная в окрестностях г. Витебска, в Ярославской и прилегающих к ней (Костромской, Ивановской, Вологодской, Тверской) областях, а также в Республиках Карелия, Коми, Брянской, Мурманской и Архангельской областях в июле-сентябре с 1994 по 2004 год.
Анализ флавоноидов надземной части вереска проводили двумерной хроматографией на бумаге (FN-4, производства Германия) восходящим методом в системах растворителей: I-ое направление - н-бутанол - уксусная кислота - вода в соотношении 4:1:2; II-ое направление - 15% раствор уксусной кислоты.
Сумму флавоноидов извлекали этанолом. Ее фракционировали и разделяли на колонке с полиамидом [1,11].
Для количественного определения анализируемых веществ использовали спектрофотометрическую методику, в основе которой лежит реакция комплексооб-разования с алюминия хлоридом, вызывающим батохромный сдвиг полосы поглощения флавоноидов с 333-350 до 390410 нм [13].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
При хроматографическом изучении этанольного извлечения нами обнаружено
18 веществ флавоноидной природы (таблица 1), среди которых доминировали по окраске до и после проявления специфическими реактивами, а также совпадали по показателям кверцетин и гиперозид (1 и 10 вещества соответственно). Для подтверждения этих данных вначале получили кверцетин, гиперозид и сопутствующие им вещества в индивидуальном состоянии. Для этого 0,5 кг обмолоченной надземной части вереска экстрагировали этанолом 3 раза по 3 л, извлечение объединяли, упаривали до удаления спирта, разбавляли горячей водой, охлаждали, фильтровали и очищали хлороформом. На холоду в очищенном экстракте выпал мелкокристаллический осадок желтого цвета, в котором одномерной и двумерной хроматографией на бумаге обнаружили 5 веществ, условно обозначенных нами как вещества 1-1У, VI. В упаренном диэтилэфирном извлечении из водного экстракта преобладало три вещества (I, II, V), а в упаренном этилаце-татном извлечении - четыре вещества (III-V, VII). С использованием хроматографии на колонке полиамидного сорбента каждое из упомянутых веществ нами выделено в индивидуальном состоянии. В первом и в третьем случае элюированием первоначально водно-спиртовой смесью с возрастающей концентрацией спирта, а затем спиртом изопропиловым; во втором - хлороформно-спиртовой смесью.
Физико-химические свойства выделенных соединений обобщены в таблице 2.
При исследовании выделенных веществ в УФ-области спектра в присутствии ионизирующих и комплексообразующих реагентов установлено следующее:
Таблица 1 - Результаты хроматографического анализа флавоноидов травы ________________________вереска обыкновенного________________________
№ пятна на двумерной хроматограмме Значения Rf в системах Окраска в УФ-свете
до проявления после проявления 2% р-ром ZrOCl2 и парами NH4OH
I II
1 0,б5 +++ 0,02 +++ желтый желто- оранжевый
2 0,76 0,02 ++ - салатный
3 0,47 0,05 - салатный
4 0,65 0,07 - салатный
5 0,39 ++ 0,06 ++ светло-желтый желтый
6 0,49 ++ 0,11 ++ желтый желтый
7 0,42 0,12 - салатно- коричневый
8 0,55 0,24 салатный салатный
9 0,45 + 0,37 + темно- коричневый темно- коричневый
10 0,57 +++ 0,42 +++ темно- коричневый желто- оранжевый
11 0,76 0,41 - салатный
12 0,67 + 0,47 + темно- коричневый салатный
13 0,47 ++ 0,50 ++ темно- коричневый желтый
14 0,54 0,50 - темно- коричневый
15 0,64 0,55 - желтый
16 0,51 0,55 - желтый
17 0,62 0,59 - желто-салатный
18 0,78 0,63 - салатный
Условные обозначения. Система I - н-бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:2); система II - 15% уксусная кислота; + - слабо выраженная окраска, ++
- умеренно выраженная окраска, +++ -сильно выраженная окраска.
вещество I - наличие батохромного сдвига максимума длинноволновой полосы на 15 нм под ионизирующим влиянием натрия ацетата (гидроксильная группа в положении 7), в результате комплексообразования с циркония нитратом наличие батохромного сдвига
максимума длинноволновой полосы на 8,5 нм, который не разрушался при добавлении кислоты лимонной, но уменьшался (сдвиг составлял 45 нм), что указывало на наличие свободных фенольных гидроксильных групп в положениях 3 и 5; при комплексообразо-вании с алюминия хлоридом батохром-ный сдвиг составлял 55 нм и не разрушался под влиянием кислоты хлористоводородной (свободная гидроксильная группа в положении 5);
Таблица 2 - Физико-химические свойства отдельных флавоноидов вереска
Соединение Суммарная формула Т.пл. Значение Яґ в системах ^■шах (нм)
I II III
Вещество I С15Н10О6 275- 277° 0,90 0,79 0,05 265, 369
Вещество II С- О 0 Н51 5 С1 309- 312° 0,56 0,67 0,03 256, 268, 375
Вещество III С21Н20О11 174- 175° 0,68 0,42 265, 355
Вещество IV С21Н20О12Н2О 237- 239° 0,63 0,35 257, 268, 360
Вещество V С15Н10О7 262- 265° 0,63 0,62 0,04 278, 376
Вещество VI С21Н20О12^Н2О 278- 282° - 0,60 0,43 273, 376
Вещество VII С21Н20О12 214- 216 - 0,59 0,37 255, 265, 360
Примечание. Система I - бензол-этилацетат-кислота уксусная-формамид (73,5:24,5:2:1), система II - н-бутанол-кислота уксусная-вода (4:1:2), система III - 15% раствор кислоты уксусной.
вещество II - в среде натрия ацетата обнаруживался батохромный сдвиг максимума длинноволновой полосы на 10 нм (свободная гидроксильная группа в положении 7), борная кислота в его присутствии также продуцировала ба-тохромный сдвиг на 15 нм, что свидетельствовало о наличии 3’,4’-диоксигруппировки; при добавлении циркония нитрата батохромный сдвиг максимума длинноволновой полосы составлял 90 нм, а при добавлении кислоты лимонной - 50 нм (гидроксильные группы в положениях 3 и 5);
вещество III - в присутствии натрия ацетата батохромия равнялась 15 нм (гидроксильная группа в положении 7), в среде натрия ацетата и кислоты борной УФ-спектр не изменялся (отсутствие орто-диоксигруппировки в кольце В), при добавлении алюминия хлорида батохромный сдвиг максимума длинноволновой полосы составлял 50 нм, который не исчезал при добавлении кислоты хлористоводородной (гидроксильная группа в положении 5);
вещество IV - в присутствии натрия ацетата наблюдался батохромный сдвиг максимума длинноволновой полосы на 15 нм и коротковолновой полосы на 6 нм (наличие гидроксильной группы в положении 7), с добавлением кислоты борной батохромия составляла 20 нм, а в среде натрия метилата - 50 нм
(наличие орто-диоксигруппировки в кольце В, т.е. гидроксильные группы имелись в положениях 3’ и 4’), наличие батохромии цирконильного комплекса на 68 нм, исчезавшего при добавлении кислоты лимонной, указывало на наличие гидроксильной группы в положении 5;
вещество V - при добавлении натрия ацетата в УФ-спектре появлялись батохромные сдвиги максимума длинноволновой полосы на 23 нм и коротковолновой полосы на 8 нм, свидетельствовавшие о наличии свободной гидроксильной группы в положении 7; в присутствии алюминия хлорида наблюдалась батохромия на 59 нм, не исчезающая при добавлении кислоты хлористоводородной (наличие свободных гидроксильных групп в положениях 3 и 5); батохромный сдвиг максимума длинноволновой полосы на 50 нм от добавления натрия метилата указывал на свободную оксигруппу в положении 4’ кольца В, в среде натрия ацетата и кислоты борной не происходило заметных изменений в УФ-спектре, что свидетельствовало об отсутствии орто-диоксигруппировки в кольце В;
вещество VI - в среде натрия ме-тилата обнаруживался батохромный сдвиг максимума длинноволновой полосы на 54 нм, указывавший на наличие гидроксильной группы п в положении
4’; значительный батохромный сдвиг (98 нм) этого же максимума при добавлении алюминия хлорида позволял предполагать о наличии свободных гидроксильных групп в положениях 5 и 3 кольца А. При добавлении кислоты хлористоводородной он уменьшался на 39 нм, а остаточный сдвиг в 59 нм подтверждал наличие гидроксила при С-5; в среде кислоты борной и натрия ацетата батохромного сдвига длинноволнового максимума не отмечали, что свидетельствовало об отсутствии в кольце В орто-оксигруппировки по положениям 3’ и 4’; сдвиг коротковолнового максимума в среде натрия ацетата был незначительным, что возможно для тех фла-вонолов, которые содержат, помимо 7-ОН-группы, кислородсодержащий заместитель в положении 6 или 8.
вещество VII - наличие бато-хромных сдвигов максимума длинноволновой полосы при добавлении таких реагентов как: натрия ацетата (на 20 нм), натрия ацетата и кислоты борной (на 22 нм), натрия метилата (на 50 нм), циркония нитрата (на 48 нм) с незначительным уменьшением при добавлении кислоты лимонной (2 нм) указывало на свободные гидроксильные группы в положениях 5,7,3’,4’ колец А и В.
При анализе ПМР-спектров выделенных соединений отметили следующее:
вещество I - наличие таких сигналов: как дублет при 7,85 м.д. интенсивностью 2Н ( = 8 Гц) - Н-2’,6’; как дублет при 6,80 м.д. интенсивностью 2Н ( = 8 Гц) - Н-3’,5’; два дублета 6,25 м.д. и 6,10 м.д. интенсивностью 1Н ( = 2,5 Гц) - Н-8 и Н-6, свидетельствовавшие
об отсутствии заместителей в положениях 6,8,2’,6’,3’,5’;
вещество II - наличие следующих сигналов: квадруплета 7,68 и 7,58 м.д. интенсивностью 1Н ( = 2,5 Гц, ] =
10 Гц) - сигнал протона Н-6’; дублета 7,28 м.д. интенсивностью 1Н ( = 2,5 Гц)
- сигнал протона Н2’; дублета 6,80 м.д. интенсивностью 1Н ( = 8 Гц) - сигнал протона Н-5’, два дублета при 6,40 м.д. и 6,10 м.д. интенсивностью 1Н ( = 2,5
Гц) - сигналы протонов Н-8 и Н-6, что указывало на наличие заместителей в положениях 3,5,7,3’,4’;
вещество III - кроме сигналов, характеризующих строение вещества I, наличие дублета при 5,47 м.д. ( = 7 Гц) 1Н сигнал протона гликозидного центра углеводного компонента (константа спин-спинового взаимодействия, равная
7 Гц, свидетельствовала о в-конфигурации) и мультиплета 3,2-3,8 м.д., отвечавшая шести его протонам;
вещество IV - кроме сигналов, характеризующих строение вещества II, наличие дублета при 5,60 м.д. ] = 7,5 Гц, 1Н - сигнала аномерного протона Б-галактозы в положении 3, а также сигналов в области 3,3-3,9 м.д., соответствовавших шести ее протонам;
вещество V - наличие сигналов 4’-замещенного кольца В флавонола, двух других двупротонных дублетов ( = 8,5 Гц) при 8,1 м.д. (Н-2’,6’) и 6,87 м.д. (Н-3’,5’), а также сигнала при 6,17 м.д. интенсивностью в 1Н, вызванного одним из протонов трехзамещенного кольца А, который по величине химического сдвига может быть отнесен к Н-8. Отсутствие других сигналов - свидетельство того, что все заместители являлись гидроксильными группами, расположенными в положениях 3,5,7,8,4’.
вещество VI - кроме сигналов, специфичных для вышеприведенного вещества, наличие дублета при 6,48 м.д., 1Н, ] = 6 Гц, характерного для протона гликозидного центра Б-глюкозы, присоединенной в-гликозидной связью, и сигналов в области 3,4-3,9 м.д. других протонов глюкозы;
вещество VII - наличие сигналов мультиплета при 7,50 м.д., 2Н - протоны в положении 2’,6’ при 3’,4’ замещении кольца В; дублета при 6,80 м.д. и 6,10 м.д. интенсивностью 1Н каждый, ] = 2,5 Гц (Н-8 и Н-6); дублета при 5,81 м.д., ] = 7 Гц - сигнала аномерного протона Б-глюкозы, присоединенной в-гликозидной связью в положении 3, а также шести ее протонам соответствовали сигналы в области 3,3-3,7 м.д.
На основании приведенных выше данных вещество I охарактеризовали как 3,5,7,4’-тетраоксифлавон (кемпферол), вещество II - как 3,5,7,3’,4’-пентаоксифлавон (кверцетин), вещество III - как 3-О-Р-Б-глюкозид кемпферола (астрагалин), вещество IV - как 3-О-в-Б-галактозид кверцетина (гиперозид),
вещество V - как 3,5,7,8,4’-пента-оксифлавон (гербацетин), вещество VI -как 8-О-в-Б-глюкозид гербацетина и вещество VII - как 3-О-в-Б-глюкозид кверцетина (изокверцитрин). Их формулы приведены в таблице 3.
Таблица 3 - Структурные формулы отдельных флавоноидов вереска
НО^ /О. / \ ОН О Вещество I -3,5,7,4’-тетраоксифлавон (кемпферол) н^^^ / \ |'/[|''''ОН ОН ОН О Вещество II -3,5,7,3’,4’-пентаоксифлавон (кверцетин)
ОН О I н он[ нн Вещество III -3-О-в-Б-глюкозид кемпферола (астрагалин) но^'^^/ \ ЦД^у^О он ^ОН ОН О [ н он| н н Вещество IV -3-О-в-Б-галактозид кверцетина (гиперозид)
ОН ОН О Вещество V - 3,5,7,8,4’-пентаоксифлавон (гербацетин)
н н н! но ^^Лтон но н ОН О Вещество VI -8-О-в-Б-глюкозид гербацетина НО^ ,^О^ / \ ХГ \ Т ОН оно^^^Ц.Д^он [ н он| н Н Вещество VII -3-О-в-Б-глюкозид кверцетина (изокверцитрин)
При выборе экстрагента для количественного определения суммы фла-воноидов в траве вереска использовали водно-спиртовые смеси различной концентрации, в частности 40, 50, 70, 90 и
96%-ный спирт этиловый.При этом нами отмечено, что максимальное количество анализируемых веществ наблюдалось при экстракции 70%-ным этанолом (таблица 4).
Таблица 4 - Влияние концентрации спирта на экстракцию суммы фла-
воноидов
Концентрация спирта, % 40 50 70 90 96
Концентрация суммы _______флавоноидов, %
0,840
1,49б
2,139
1,947
1,803
Для установления времени и кратности наиболее полного экстрагирования веществ извлечение проводили однократно, двукратно, треекратно и четырехкратно на протяжении 15 и 30
минут. Результаты исследования показали, что полнота экстрагирования суммы флавоноидов достигалась после троекратного экстрагирования в течение 15 минут (табл. 5).
Таблица 5 - Влияние условий экстрагирования на выход суммы флавоноидов
Шмер опыта Количество экстракций Время одного экстрагирования, мин Выход суммы флавоноидов, %
1 1 15 1,594
2 1 30 1,838
3 2 15 2,бб4
4 2 30 2,582
5 3 15 2,848
б 3 30 2,500
7 4 15 2,725
8 4 30 2,74б
№ основании изложенных данных количественное определение фла-воноидов в траве вереска из различных мест произрастания провели по нижеприведенной методике.
1,0 г сырья (точная навеска) помещали в колбу вместимостью 100 мл, заливали 30 мл 70% спирта этилового, колбу закрывали обратным холодильником и нагревали на кипящей водяной бане в течение 15 минут, постоянно перемешивая. Горячее извлечение фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Процесс повторяли троекратно. Горячее извлечение фильтровали в ту же мерную колбу через тот же фильтр. Сырьё на фильтре промывали 3 мл 70%, этанола и после охлаждения объём извлечения доводили до метки 70% спиртом этиловым и перемешивали. Далее 2 мл извлечения помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляли 10 мл
96% этанола, 0,5 мл 33 % раствора кислоты уксусной, 1,5 мл 10 % раствора алюминия хлорида, 2 мл 5 % свежеприготовленного раствора гексаметилен-тетрамина, доводили объём раствора до метки водой очищенной и тщательно перемешивали. Через 40 минут определяли оптическую плотность раствора на спектрофотометре СФ-46 при X = 425 нм, в кювете с длиной рабочего слоя 1 см. В качестве раствора сравнения использовали раствор, содержащий 2 мл извлечения,10 мл 96% этанола, 0,5 мл 33% раствора кислоты уксусной и воды очищенной до 25 мл.
Совпадение максимумов дифференциальных спектров поглощения комплексов извлечения вереска с алюминия хлоридом и кверцетин-стандарта с алюминия хлоридом (рис. 1) позволили использовать кверцетин в качестве стандартного вещества.
■ УФ-спектр кверцетин-стандарта с алюминия хлоридом.
■ УФ-спектр гиперозид-стандарта с алюминия хлоридом.
■ УФ-спектр этанольного извлечения вереска с алюминия хлоридом.
Длина волны, нм
Рис. 1. УФ-спектры поглощения комплексов кверцетина-стандарта, гиперозида-стандарта и этанольного извлечения вереска обыкновенного с алюминия хлоридом.
Содержание суммы флавоноидов в сырье в пересчете на кверцетин вычисляли по формуле с использованием удельного показателя поглощения квер-цетин-алюминиевого комплекса, равного 596.
Б•100 • 25
Х,% =------------------, где
^ см • 2 • а
Б - оптическая плотность исследуемого раствора,
100 - объём мерной колбы, ис-
пользуемой для сбора извлечения, мл;
25 - объём мерной колбы, ис-
пользуемой для разведения и анализа, мл;
Е
1см - удельный показатель
кверцетин-алюминиевого комплекса при 425 нм, равный 596;
2 - объём извлечения, взя-
тый для разведения и анализа, мл;
а - навеска сырья, г.
Статистическую обработку проводили в соответствии с ГФ XI издания [14]. Метрологическая характеристика методики количественного определения флавоноидов представлена в таблице 6. Результаты количественного определения суммы флавоноидов в траве вереска обыкновенного из разных мест произрастания обобщены в таблице 7.
Таблица 6 - Метрологическая характеристика количественного
п хсред. Б2 Б Бх Р, % Ах 8, %
10 9 0,878 0,0003066 0,0175099 0,0058366 95 0,0132 1,5
Таблица 7 - Содержание суммы флавоноидов в траве вереска обыкновенного,
произрастающего в Республике Беларусь и различных регионах РФ
№ об- разца Содержание гид-роксикоричных кислот, % № об- разца Содержание гидро-ксикоричных кислот, % № об- разца Содержание гидроксикорич-ных кислот, %
1 0,881±0,0079 14 0,824±0,0017 27 0,455±0,0041
2 1,386±0,0051 15 1,019±0,0023 28 0,761±0,0044
3 1,036±0,0105 16 1,256±0,0111 29 0,499±0,0028
4 1,105±0,0084 17 0,749±0,0090 30 0,680±0,0025
5 0,828±0,0031 18 0,818±0,0069 31 0,950±0,0020
6 0,475±0,0051 19 0,789±0,0036 32 0,638±0,0049
7 1,338±0,0121 20 1,215±0,0037 33 0,448±0,0030
8 0,952±0,0043 21 0,596±0,0063 34 0,413±0,0010
9 0,823±0,0032 22 0,468±0,0041 35 0,690±0,0054
10 0,449±0,0020 23 0,413±0,0031 36 0,631±0,0022
11 0,712±0,0031 24 0,390±0,0026 37 0,837±0,0047
12 1,033±0,0065 25 0,775±0,0051
13 1,108±0,0034 26 0,436±0,0048
Примечание. Места сбора следующие:
I - окр. г. Витебск Республики Беларусь, август 2003 г.; 2 - окр. г. Петрозаводск Республики Карелия, сентябрь 1999 г.; 3 - окр. д. Студенец Усть-Вымского района Республики Коми, август 2001 г.; 4 - окр. с. Ужга Койгород-ского района Республики Коми, август 2004 г.; 5 - окр. д. Слободка Вишегор-ского района Архангельской обл., август 2002 г.; 6 - окр. г. Брянск, сентябрь 1999 г.; 7 - окр. оз. Вохи Кирилловского района Вологодской обл., июль 2002 г.;
8 - окр. с. Оларево Сокольского района Вологодской обл., август 2002 г.; 9 -окр. пос. Смирдомский Чагодощенского района Вологодской обл., июль 2003 г.; 10 - окр. дер. Шулма Череповецкого района Вологодской обл., июль 2003 г.;
II - окр. дер. Новоиваново Ильинского района Ивановской обл., сентябрь 2003 г.; 12 - окр. г. Кострома, сентябрь 1999 г.; 13 - окр. г. Нея Костромской обл., август 1994 г.; 14 - окр. с. Унжа Ней-ского района Костромской обл., август 1999 г.; 15 - окр. дер. Якимово Макарь-евского района Костромской обл., август 1995 г.; 16 - окр. г. Мурманск, июль 2004 г.; 17 - окр. г. Остров Псковской обл., август 2004 г.; 18 - окр. г. Удомель Тверской обл., август 1996 г.;
19 - окр. дер. Остряковка Брейтовского района Ярославской обл., август 2003 г.;
20 - окр. санатория «Малые соли» Некрасовского района Ярославской обл., август 1997 г.; 21 - окр. д. Тощиха Некрасовского района Ярославской обл., август 1994 г.; 22 - окр. д. Тощиха Некрасовского района Ярославской обл.,
август 1997 г.; 23 - окр. местечка Симак Переславского района Ярославской обл., август 2004 г.; 24 - окр. г. Рыбинск Ярославской обл., август 1998 г.; 25 -окр. пос. Волжский Рыбинского района Ярославской обл., сентябрь 2000 г.; 26 -окр. д. Кобостоло Рыбинского района Ярославской обл., июнь 2003 г.; 27 -окр. с. Коприно Рыбинского района Ярославской обл., август 2003 г.; 28 -окр. пос. Тихмеево Рыбинского района Ярославской обл., июль 1999 г.; 29 -остров Майский на Рыбинском водохранилище Ярославской области, август 1998 г.; 30 - окр. п. Брейтово Ярославского района Ярославской обл., август 1998 г.; 31 - окр. дер. Гаврилово Ярославского района Ярославской обл., август 1997 г.; 32 - окр. д. Ляпино Ярославского района Ярославской обл., август 2003 г.; 33 - окр. д. Малый Солонец Ярославского района Ярославской обл., сентябрь 1998 г.; 34 - окр. пос. Нижний Ярославского района Ярославской обл., август 2003 г.; 35 - окр. пос. Прусово Ярославского района Ярославской обл., август 2003 г.; 36 - окр. пос. Туношна Ярославского района Ярославской обл., август 1999 г.; 37 - Смоленский сосновый бор Ярославского района Ярославской обл., июль 1998 г.
При проведении количественного определения флавоноидов в траве вереска, произрастающего в Республике Беларусь и в различных регионах Российской Федерации нами использовано 37 образцов растения. Выявлено, что содержание суммы флавоноидов в них варьировало от 0,413% до 1,386%. При
этом минимальное количество флаво-ноидов приходилось на образцы, собранные в окр. г. Рыбинска, в окр. местечка Симак, в окр. пос. Нижний, дер. Кобостово, дер. Малый Солонец Ярославской области, окр. г. Брянска и др., а максимальное - на образцы, заготовленные в окр. г. Петрозаводск Республики Карелия, окр. г. Вохи Кирилловского района Вологодской области, окр. г. Мурманск, окр. санатория «Малые соли» Некрасовского района Ярославской области, окр. с. Унжа Койгород-ского района Республики Коми и др.
ВЫВОДЫ
1. Двумерной хроматографией на бумаге в траве вереска обыкновенного (Calluna vulgaris (L.) Hull.) обнаружено 1В флавоноидных соединений, среди которых преобладали производные кверцетина.
2. При экстракции этанолом и упаривании в вакууме выделена сумма флавоноидов, фракционирование которой с дальнейшим разделением колоночной хроматографией на полиамиде позволило получить в индивидуальном состоянии 7 веществ, отождествленных с кемпферолом, кверцетином, гербаце-тином, астрагалином, В-глюкозидом гербацетина, изокверцитрином и гипе-розидом.
3. Разработана УФ- спектрофотометрическая методика количественного определения флавоноидов в траве вереска, с использованием которой определено их содержание в 37 образцах из различных мест произрастания, и отмечено, что в образце, заготовленном в окр. г. Витебска, она равнялась средним значениям большинства образцов из Российской Федерации.
SUMMARY V.L.Shelyuto, S.V.Onegin, N.S.Fursa DETECTION, ALLOCATION, PHYSICO-CHEMICAL AND QUANTITATIVE DETERMINATION FLAVONOIDS IN A GRASS HEATHER
The features of detection flavonoids by bivariate paper chromatography in a grass heather (Calluna vulgaris (L.) Hull) are adduced, allocation 7 of them (kaemp-ferolum, quercetinum, herbacetinum, as-tragalini, 8-glucoside herbacetini, isoquer-citrin and hyperosidi) in a personal condition and outcomes of quantitative determination flavonoids on reacting a complex formation from aluminium by chloride уф-in the field of a spectrum in 37 samples from miscellaneous places in Byelorussia and Russia.
ЛИТЕРАТУРА
1. Флавоноиды Calluna vulgaris / В.Л. Шелюто [и др.] // Химия природ. соедин. - 1975. - №5. - С. 652.
2. Флавоноиды Calluna vulgaris / В.Л. Шелютто [и др.] // Химия природ. соедин. - 1977. - №6. - С. 859-860.
3. Flavon and flavonol glycosides from Calluna vulgaris / Daovy P. Allais [et al.]; // Phytochemistry. - 1991. - Vol. 30, Issue 9. - P. 3099-3101.
4. Further flavonoid glycosides from Calluna vulgaris / A. Simon et al. // Phytochemistry. -1993. - Vol. 33. - №5. - P. 1237-1240.
5. Jussi-Pekka, R. The search for biological activity in Finnish plant extracts containing phenolic compounds // R.Ju. Academic dissertation. - Helsinki, 2001. -72 p.
6. Olechnowiz-Stepien, W. Flavonoids of Calluna vulgaris flawers / W., Olechnowiz-Stepien, H. Kzadkowska-Bodalska, E. Lamer-Zarawska // Pol. J. Chem. - 1978. - Vol. 52. - №11. - P. 2167-2172.
7. Ареалы деревьев и кустарников СССР. В трех томах / С.А. Соколов [и др.]; - Т. 3.- М.: Наука, 1986. - 182 с.
8. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Paeoniaceae - Thymelaeaceae / Ответ. ред. П. Д. Соколов. - Л.: Наука, 1986.336 с.
9. Жизнь растений / Под ред. А.Л. Тахтаджяна. - Т. 5 (2). - М.: Просвещение, 19В1. - С.92-95.
10. Верес звичайний як лшарська рослина / Ф.І Мамчур [и др.] // Фармацевтичний журнал. - 19Вб. - №4. - С. 7071.
11. Флора СССР. Сем. Вересковые -Ericaceae / Под ред. В.Л. Комарова. -Т.1В. - М.,Л.,1952. - С. В-104.
12. Зозуля, Р.Н., Химические и фармакологические особенности вереска обыкновенного / Р. Н. Зозуля, В. Г. Ре-гир, Я. И. Попко // Растительные ресурсы. - 1974. - Вып.2. - С.247 - 24В.
13. Беликов, А. А. Аналитическое исследование природных фенольных соединений и разработка методов их
количественного определения: Автореф. дис. ... д-ра фармац. н.: 02,00,02 / А.А. Беликов - Харьков, 1990. - 36 с.
14. Государственная фармакопея СССР. 11-е издание . Вып. 1,2. - М.: Медицина, 1987; 1990.
15. Тевс, В.Т. / Материалы к географическому распространению вереска обыкновенного // В.Т. Тевс. Вопросы фармакогнозии. - 1964. - Вып. 2. - С. 29-37.
Поступила 20.0З.2007 г.
