CC BY
40
Статья
Результаты. Воздействие ПМП в течение 30 дней приводит к развитию цитолитического синдрома повреждения гепато-цитов, их недостаточности и развитию иммуновоспалительного синдрома. У животных через сутки после последнего отравления ЧХУ выявлено развитие острого токсического поражения печени, (синдромы биохимического поражения печени: цитолиз, холе-стаз, печеночно-клеточная недостаточность, иммуновоспали-тельный синдром, угнетение синтетической функции)[4]. После совместного воздействия ЧХУ и ПМП на первые сутки после отравления эти синдромы еще более выражены. При этом синдром цитолиза и снижение синтетической функции сохраняются до 28 дня, печеночно-клеточной недостаточности до 21 дня, а иммуновоспалительный и холестаза - до 14 дня, после острого отравления ЧХУ (рис.). Одновременно в сыворотке крови опытных особей растет уровень ацилгидроперекисей в 4,2 раза и МДА
- в 2,0 раза, на 34,0% снижается активность каталазы, тогда как при совместном воздействии ЧХУ и ПМП эти показатели меняются еще больше. Все это говорит о необходимости в условиях острого токсического поражения печени, а тем более в условиях воздействия ПМП, раннего начала проведения специфической корригирующей терапии нарушений функциональной активности гепатоцитов и антиоксидантного статуса. Для этого нами изучалась эффективность двух фармакологических комплексов. На фоне приема комплекса препаратов «эссенциале + эспа-липон + коэнзим Q + тиамин хлорид + рибофлавин моноаденозинфосфат + никотинамид» через сутки после острого отравлении ЧХУ и 30дневного воздействия ПМП не развивается синдром печеночноклеточной недостаточности, снижается длительность иммуно-воспалительного синдрома, синдрома холестаза до 14 дней и восстанавливается синтетическая функция гепатоцитов уже на 2 неделе после последнего отравления гепатотропным ядом. Использование эссенциале вместе с витаминами и витаминоподобными соединениями сокращает длительность синдрома цитолиза на 7 дней, а иммуновоспалительного и синтетической недостаточности гепатоцитов - на 2 недели по сравнению с группой животных, не получавших данные препараты (рис.). Применение фармакологического комплекса «эссенциале + глутоксим + рибоксин» оказалось еще более эффективным, чем эссенциале с витаминами. Его использование не дает развитию у животных в условиях острого отравления ЧХУ и воздействия ПМП иммуно-воспалительного синдрома, печеночно-клеточной недостаточности и сохраняет синтетическую функцию гепатоцитов. Длительность синдрома холестаза снижается на 3 недели, а цитолиза - на 2, по сравнению с группой животных, не получавших корригирующих средств. Та же эффективность предложенных схем наблюдается и при изучении корригирующего их эффекта на концентрацию продуктов ПОЛ и активность каталазы. Использование эссенциале с комплексом витаминов нормализует активность каталазы уже на 1-е сутки после отравления ЧХУ и воздействия ПМП, МДА на 14 день, а АГП - на 28 день. Использование эссенциале вместе с рибоксином и глутоксимом нормализует уже на первые сутки концентрацию АГП и активность каталазы, тогда как концентрация МДА приходит к норме к 21 дню.
Вывод. Применение в условиях острого токсического поражения печени и действия магнитного поля комплекса эссен-циале с витаминами (а-липоевая кислота, коэнзим Q, тиамин хлорид, рибофлавин моноаденозинфосфат, никотинамид) или в большей степени с глутоксимом и рибоксином эффективно корригирует нарушенные показатели функциональной активности гепатоцитов и снижает выраженность ПОЛ, особенно в период наибольшей их выраженности (первые сутки).
Литература
1. Алексеева Н.Н. и др. Печень и иммунологическая реактивность.- Киев.: Наук. думка.- 1991.- 168 с.
2. Кушманова О.Д., Ивченко Е.М. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии.- М.: Медицина.- 1983.-С.98-99.
3. Меньшикова В.В. Лабораторные методы исследования в клинике: справочник.- М.: Медицина, 1987.- 365 с.
4. Подымова С.Д. Болезни печени (рук-во для врачей).- М.: Медицина, 1998.- 704 с.
5. Стальная Н.Д., Гаришвилли Т.Г. // Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича.- М., 1977.- С. 66-68.
PHARMACOLOGIC CORRECTION OF DISORDERS OF FUNCTIONAL ACTIVITY OF HYPATOCYTES AND ANTI-OXIDANT STATUS IN CONDITIONS OF ACUTE TOXIC DEFEAT OF LIVER AND EXPOSURE OF CONSTANT MAGNETIC FIELD
V.P. GAVRILYUK, V.T. DUDKA, A.I. KONOPLYA, A.V. PIGAREVA, E.S. ROMANOVA
Summary
Application in conditions of acute toxic defeat of a liver and exposure of a constant magnetic field of a complex essentiale with vitamins and a-acidum lipoicum, coenzyme Q) reduces the broken parameters of functional activity of hepatocytes and reduces an expressiveness of oxidation of the lipids, caused by influence of a hepa-totropic poison and the physical agent. The combination essentiale with glutoxinum and riboxinum appeared more effective.
Key words: magnetic field, hepatocytes, acute toxic poisoning.
УДК 612-083: 577.112.6 : 616.36
ПРИМЕНЕНИЕ ОПИОИДНОГО ПЕПТИДА DSLET ПРИ ОСТРЫХ ТОКСИЧЕСКИХ ГЕПАТОПАТИЯХ
И.И. БОБЫНЦЕВ, А.И. КОНОПЛЯ, Л.А. СЕВЕРЬЯНОВА,
М.Ю. СМАХТИН*
Введение. Ныне активно изучается возможность применения при разных формах патологий регуляторных пептидов. Многие из них уже нашли применение в клинической практике. Не ослабевает интерес к группе опиоидных пептидов, обладающих анальгетической и противовоспалительной активностью [4, 8]. Синтетический опиоидный пептид DSLET (Tyr — D — Ser —
— Gly — Phe — Leu — Thr ) является высокоселективным лигандом опиоидных ё (дельта)-рецепторов [4], которые экспрессируются лимфоцитами в различных лимфоидных органах и гепатоцитами [3]. Природные лиганды этих рецепторов (энкефалины) оказывают влияние на метаболиэм в клетках печени [6].
Установлено стимулирующее влияние DSLET в отношении физиологической регенерации гепатоцитов [10]. Отсутствие данных об эффектах этого пептида и подобных ему лигандов в условиях патологии печени затрудняет дальнейшее изучение роли регуляторных механизмов ее регенерации, а также целенаправленный поиск новых гепатопротекторных препаратов пептидной природы. Иммунная система участвует в контроле процессов регенерации печени [2], а эффекты опиоидных пептидов могут зависеть от исходной активности иммунной функции [4].
Цель работы - изучение гепато- и иммунотропной активности селективного агониста ё-опиатных рецепторов (пептида DSLET) в условиях экспериментальных токсических гепатопатий, отличающихся исходным уровнем иммунной реактивности.
Материалы и методы исследования. Исследования выполнены на мышах СВА массой 22-25 г с использованием экспериментальных моделей острых токсических гепатопатий, сопровождающихся как повышением иммунной реактивности (отравление CCI4), так и ее снижением (отравление гидразином) [11]. Острое токсическое поражение печени вызывали внутрижелу-дочным введением 50% раствора CCI4 в растительном масле по 3 мл/кг массы тела в течение 5 дней подряд или однократным внутрибрюшинным введением 50 мг/кг сернокислого гидразина. DSLET был синтезирован в Кардиологическом научном центре РАМН. На основе исследований гепато- и иммунотропных эффектов DSLET в физиологических условиях [10] были выбраны три дозы пептида - 1.5, 50 и 150 мкг/кг массы, отличающиеся по степени выраженности его эффектов. Навески растворяли в стерильном изотоническом растворе NaCl и вводили внутри-брюшинно в объеме 0.1 мл 10-кратно с интервалом в 24 часа между инъекциями до, одновременно и после поступления гепа-тотропных ядов. На следующий день после последнего введения препарата животных забивали под эфирным наркозом и выделяли печень. Кусочки органов фиксировали в 10% нейтральном фор-
* 305041, г. Курск, ул. К. Маркса 3, Курский государственный медунивер-ситет, кафедра биохимии и кафедра патофизиологии, тел. (0712) 56-54-60
И.И. Бoбынцев, А.И. ^гопля, Л.А. Северьядова и др.
малине на 0.1М фосфатном буфере рН=7.2 и заливали в парафин по общепринятой методике. Парафиновые срезы печени окрашивали гематоксилином и эозином, изучали морфологическую картину органа. Подсчитывали митотический индекс гепатоцитов (МИГ), отражающий активность клеточной формы регенерации, и индекс двуядерных гепатоцитов (ИДГ) - выраженность ацито-кинетической активности как формы внутриклеточной регенерации и резерва полиплоидизации [9]. Пептид вводили до, во время и после иммунизации в течение 10 дней. Об интенсивности гуморального иммунного ответа судили по числу антителообразующих клеток (АК) в селезенке на 5-й день после иммунизации эритроцитами барана [5]. Математическую обработку вели, вычисляя M±m. Достоверность различий средних величин оценивали по ґ-критерию Стьюдента и U критерия Манна - Уитни.
Результаты исследования. Пятидневное введение тетра-хлорметана вызывало развитие центролобулярных некрозов, выраженную жировую дистрофию гепатоцитов и активацию их репаративной регенерации (табл.). В этих условиях DSLET в дозе
1.5 мкг/кг активировал репаративную регенерацию печени, повышая число митозов и двуядерных гепатоцитов. При дозах 50 и 150 мкг/кг стимулирующий эффект пептида был менее выраженным, т. к. нет достоверного увеличения числа двуядерных клеток. При введении пептида в дозах 50 и 150 мкг/кг митотическая активность не изменялась по сравнению с ее уровнем в группе, получавшей пептид в дозе 1.5 мкг/кг, а в физиологических условиях более выраженный митотический эффект отмечался именно при дозах DSLET 50 и 150 мкг/кг [10]. Возможно, данное обстоятельство обусловлено проявлением модуляторных эффектов DSLET в отношении компенсаторных реакций.
Введение тетрахлорметана сопровождалось активацией гуморального иммунного ответа, о чем свидетельствовало повышение числа антителообразующих клеток в селезенке отравленных животных. При этом DSLET во всех изученных дозах снижал число антителообразующих клеток до их значений у контрольных особей, получавших масло и изотонический раствор NaCl. В данных условиях пептид активировал репаративную регенерацию печени, повышая как число митозов, так и количество двуядер-ных гепатоцитов, однако увеличение дозы не усиливало репара-тивную и иммуносупрессирующую активность пептида.
В условиях гидразиновой гепатопатии с исходно сниженной активностью иммунной функции также наблюдается выраженная центролобулярная жировая дистрофия гепатоцитов. В данных условиях пептид не оказывал существенного влияния на митозы гепатоцитов, но повышал число двуядерных клеток с наибольшей выраженностью эффекта при введении в дозах 50 и 150 мкг/кг (табл.), что обусловливает усиление функции печени при сохранении числа функционирующих клеток [9]. В тех же дозах DSLET нормализовал уровень гуморального иммунного ответа, о чем говорит рост числа антителообразующих клеток в селезенке до их уровня у здоровых особей. Иммунокорригирующий эффект не наблюдался при дозе пептида 1.5 мкг/кг, а его репаративное влияние проявлялось во всех дозах. В условиях гепатопатии, сопровождающейся изначально сниженной функцией иммунной системы, DSLET не только не проявляет иммуносу-прессирующего влияния, но даже меняет направленность эффекта в сторону повышения и нормализации иммунной реактивности, осуществляя тем самым иммуномодуляторную активность.
Использованные модели гепатопатий отличаются по состоянию иммунной функции. Пятикратное введение тетрахлор-метана сопровождается более выраженным синдромом цитолиза, выходом протеаз, их действием на макрофаги и эритроциты, что ведет к усилению секреции иммуностимулирующих цитокинов (преимущественно интерлейкина-1), с чем и связан рост иммунной реактивности в этой модели [1, 11]. В этих условиях DSLET стимулировал репаративную регенерацию гепатоцитов и нормализовал иммунологическую реактивность, препятствуя гиперактивации иммунной функции. Повышение дозы пептида не усиливало его эффекты - следствие механизма обратной отрицательной связи, который существенно снижает экспрессию (5-опиатных рецепторов при длительном воздействии их агонистов.
В опытной модели с применением гидразина даже его однократное введение ведет к вторичному иммунодефициту, вызванному иммунотоксическим действием гепатотропного яда и выделением иммуносупрессирующих субстанций [1]. При иммунодефиците регенераторные процессы протекают менее интенсивно [1]. С этим фактом связаны вялые репаративные эффекты
DSLET, т. е. отсутствие влияния пептида на митозы гепатоцитов, хотя росла ацитокинетическая его активность в отношении гепа-тоцитов и менялась направленность иммунотропного действия.
Таблица
Гепаю и иммунoтрoпные эффекты DSLET (M±m, n=8-9) в уcлoвиях ocтрых тoкcичеcких гепат^^тий
Условия опыта МИГ, %о ИДГ, %о АК, (103) на селезенку
Отравление CCl4
Контроль (масло+NaCl) 5,8 ±1,1 179,9 ±11,9 32,7 ±5,4
CCl4+NaCl 10,3 ±2,1 *1 233,7 ±15,2*1 86,З±10,4*1
CCl4 +DSLET, 1,5 мкг/кг 19,2 ±3,2 *1,2 316,2 ±17,2 *1,2 35,9 ±6,1*2
CCl4 + DSLET, 50 мкг/кг 18,4 ±2,7 *1,2 263,8 ±16,1*1^ 43,5 ±6,8*2
CCl4+DSLET, 150мкг/кг 196 ±3,4 *1,2 265,1 ±16,9*13 34,3 ±5,9*2
Отравление гидразином
Контроль (NaCl) 5,4±1,1 162,З±11,1 30,2 ±5,8
Гидразин + NaCl 10,5 ± 2,1 *1 226,8 ± 12,4 *1 15,4±2,6*1
Гидразин + DSLET, 1,5 мкг/кг 9,1 ± 1,8 *1 298 ± 14,6 *12 10,8±2,1*1
Гидразин +DSLET, 50 мкг/кг 11,5 ± 2,2 *1 360 ± 15,4 *1-3 2З,9±2,4*2,3
Гидразин +DSLET, 150мкг/кг 12,4 ± 2,8 *1 385,6 ± 16 *1-3 22,З±2,2*2,3
Примечание. р < 0.05 , *- показывает достоверные отличия. Цифры рядом со звездочкой означают номера групп, с какими сравнивались различия
В этой модели пептид оказывал иммуностимулирующее, а не супрессирующее влияние. Эти эффекты связаны с выраженным стресс-лимитирующим действием, характерным для опиои-дов, и ослаблением секреции глюкокортикостероидов, имеющих иммуносупрессорную активность [7]. Можно признать модуляторное влияние опиоидного пептида П8ЬЕТ на репаративную регенерацию печени и иммунную реактивность в условиях токсических гепатопатий, т.к. опиоидные пептиды являются регуляторами биосистем, способных менять их уровень функционирования в зависимости от исходного состояния [4].
Вывод. В условиях токсических гепатопатий, отличающихся по исходному уровню иммунной реактивности (как с ее повышением, так и снижением), опиоидный пептид В51ЕТ стимулировал репаративную регенерацию гепатоцитов и корригировал иммунную реактивность, проявляя регуляторное влияние на восстановление печени и функции иммунной системы. Эффекты пептида при токсических поражениях печени и в физиологических условиях [10] различны и зависят от исходной активности и выраженности компенсаторно-приспособительных реакций.
Литература
1. Алексеева И.Н. и др. Печень и иммунологическая реактивность.- Киев, 1991.
2. Бабаева А.Г. // Бюл. эксперим. биол. и медицины-
1999.- Т. 128, №11.- С. 484-490.
3. Виноградов В.А.. и др. Проблемы нейрогуморальной регуляции деятельности висцеральных систем.- Л., 1987.
4. Зозуля А.А., Пшеничкин С.Ф. // Итоги науки и техники: Сер. «Иммунология».- 1990.- Т 25.- С. 48-120.
5. Иммунологические методы / Под. ред. Г. Фримеля; Пер. с нем.- М., 1987.
6. Лебедев В.П. и др. // Рос. физиол. ж. им. И.М.Сеченова-
2000.- Т. 86, №11.- С. 1449-1457.
7. Меерсон Ф.З., Сухих Г.Т. // Вестн. АМН СССР.- 1985.-№ 8.- С. 23-29.
8. Панькова Т.Д., Тимошин С.С. // Бюл. эксперим. биол. и медицины.- 1990.- Т. 110, №7.- С. 96-98.
9. Саркисов Д. С. Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций - М., 1987.
10. Смахтин М.Ю. и др. // Бюл. эксперим. биол. и медицины.- 2003.- Т. 135, №5.- С. 505-507.
11. Смахтин М. Ю. и др. // Патол. физиология и эксперим. терапия - 2003.- №2.- С. 19-21.
