CC BY
0
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Сергеева А. М., Сурин В. Л., Соловьев М. В., Крайзман А. А., Чабаева Ю. А., Куликов С. М., Менделеева Л. П.
ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ РАЗЛИЧИЯ МУТАЦИЙ ГЕНОВ КМ8 И N^8 В ОПУХОЛИ У ПАЦИЕНТОВ В ДЕБЮТЕ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЫ (ММ)
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Прогностическая значимость мутаций генов KRAS и NRAS в опухолевых клетках ММ оценивалась в серии работ, однако окончательного решения по этому вопросу не существует на сегодня. Наличие мутации в гене KRAS коррелирует с низкими значениями ВБП и OB по сравнению с группой без мутаций у пациентов в дебюте заболевания. По данным других авторов, наличие мутации не влияет на течение ММ. В то же время есть работы, показывающие, что эффект от наличия мутаций RAS может быть благоприятным. Результаты изучения биологических свойств типов мутаций на модельных организмах показали, что появление мутации может привести как к преднеопластической, так и к агрессивной форме заболевания. Установление функциональных различий мутаций генов NRAS и KRAS может иметь важное прогностическое значение и в дальнейшем влиять на выбор терапии.
Цель работы. Провести функциональный анализ мутаций генов KRAS и NRAS у пациентов в дебюте ММ, используя современные подходы in ¿ilœo и данные о глубине ответа на бортезомиб-содержащие схемы лечения.
Материалы и методы. В исследование включено 89 больных с ММ до начала лечения с медианой возраста 58,5 года. Последовательность интересующих фрагментов ДНК плазматических клеток (CD138+) костного мозга пациентов с ММ определяли методом секвенирования по Сэнгеру. Для определения уровня онкогенности мутаций in ¿ilœo использовали программы Mutation Taster, Polyphen2, FATHMM-XF. Статистический анализ проводили с помощью процедур пакета SAS 9.4.
Результаты и обсуждение. Анализ in ¿itœo показал, что все выявленные мутации являются онкогенными. Уровень онко-
генности варьировал. На основании анализа выделена группа мутаций «высокого риска»: в гене NRAS Glyl3Arg и Gln61Lys; в гене KRAS Glyl2Val, Glyl2Asp, Glyl2Ala, GlylSAsp, Leul9Pke, Gln61Arg, Tyr64Asn, Lysl04Arg, Alal46Pro, Alal46Val. Для дальнейшего поиска мутаций, имеющих прогностическое значение при ММ, был сформирован синтетический риск-фактор. В эту группу вошли пациенты, не достигшие ПР или ОХЧР на бор-тезомиб-содержащие курсы и имеющие мутацию из группы, которая сформировалась на основании многофакторного анализа с целевым признаком — ответом на бортезомиб. В результате была сформирована группа пациентов с одной из 5 видов мутаций гена KRAS, относящихся к группе высокого риска по прогнозу in /dico (Glyl2Val, Glyl2Asp, Glyl2Ala, Gln61Arg, Alal46Val), одной «неопасной мутацией» Gln61His и 2 мутациями NRAS (Glyl3Asp, Gln61His). В группе с риск-фактором доля пациентов, достигших ПР или ОХЧР, составила 10,53% (п=19), в стандартной группе - 63,64% (п=55) (р<0,00007, ОШ 14,87). Статистический анализ группы из 33 пациентов, которым была выполнена ауто-ТКМ, показал взаимосвязь между наличием риск-мутации RAS и глубины ответа перед ауто-ТКМ или на 100-й день после ТКМ
(Р=0,006 и 0,002, ОШ 17,5 и 36,67).
Заключение. Мутации генов KRAS и NRAS в опухолиу пациентов в дебюте ММ функционально неодинаковы. Анализ in diluyo позволяет найти большую часть мутаций, имеющих прогностическую значимость при ММ. Нами выделена группа мутаций, которая имеет статистически достоверное влияние на эффективность лечения при введении бортезомиб-содержащих схем больным в дебюте ММ.
Сидорова Ю. В., Горенкова Л. Г., Бидерман Б. В., Рыжикова Н. В., Судариков А. Б.
ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА N08 ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛОНАЛЬНОСТИ В ДИАГНОСТИКЕ ГРИБОВИДНОГО МИКОЗА
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Грибовидный микоз (ГМ) — наиболее часто встречающаяся Т-клеточная лимфома кожи. Диагностика ГМ в начальной стадии (Ia—Ib; IIa) или его эритродермических форм (ЭГМ) — сложная задача. В большинстве случаев ни гистологи-ческое/иммуногистохимическое исследование, ни ПЦР-методы определения клональности не дают однозначного заключения. Исследование клональности методом ПЦР по генам TCRG и TCRB с последующим фрагментным анализом (ФА) используется как стандартный диагностический метод, необходимый при дифференциальной диагностике лимфом кожи с другими дерматозами. Чувствительность определения опухолевых клеток методом ПЦР-ФА достаточно высока (1—10%), но количество ложноотрицательных результатов при начальных стадиях ГМ достигает 25%. Кроме того, выявление клональных продуктов (ложноположительный результат) возможно при неопухолевых дерматозах и достигает 10—15%. Секвенирование нового поколения (NGS) генов TCRG и TCRB обеспечивает более точную идентификацию клона Т-клеток и обеспечивает количественную оценку клонального продукта в пораженномучастке. В данной работе мы публикуем первые результаты NGS тестирования клональности при ГМ.
Цель работы. Сравнить методы NGS и ПЦР-ФА выявления клональности по генам TCRG и TCRB при ГМ.
Материалы и методы. В работе исследованы биоптаты кожи пациентов с ГМ (п=7) и неопухолевыми дерматозами (п=6), наблюдавшихся в ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России с 2011 г. Оценку клональности по генам TCRG и TCRB методом ПЦР-ФА проводили по протоколу Biomed-2 на генетическом анализаторе «Нанофор05» (ИАП РАН, Россия) и методом NGS
при помощи коммерческих наборов Lymphotrack (Invivoscribe, США) по протоколам производителя на генетическом анализаторе MiSeq (Illumina, США).
Результаты и обсуждение. Результаты ПЦР-ФА и NGS совпали в 92% исследованных образцов (табл.), при этом доминирующий клональный продукт в количестве более 2,5% методом NGS был выявлену всех пациентов с ГМ, за исключением 2 пациентов с эритродермической формой. У пациента № 1 с начальной стадией ГМ методом ПЦР-ФА клональность не была выявлена, однако при NGS-TCRB исследовании был выявлен преобладающий клональный продукт, аллельная нагрузка которого составила 9,1%. Интересно, что преобладающий продукт NGS-TCRG в данном образце, по всей видимости, имел реактивную природу, так как не выявлялся в биоптате кожи, взятом через 10 лет в развернутой стадии заболевания. Еще одно возможное объяснение — клональный дрифт. Такжеу пациента № 4 обоими методами по генам TCRG было обнаружено несколько доминирующих клональных продуктов (олигоклональная картина). У всех пациентов с ЭГМ (2 из 2) не было выявлено клональности ни одним из методов. Это подтверждает, что при эритродермической форме опухолевый клон имеет незначительный размер и создает объективную сложность в диагностике данной формы ГМ. У всех пациентов с реактивными дерматозами (п=6) клональность методами ПЦР-ФА и NGS не выявлялась, а аллельная нагрузка клональных продуктов составляла менее 2,5%.
Заключение. Метод NGS демонстрирует несколько большую чувствительность при выявлении начальных стадий ГМ, однако для окончательных выводов требуется исследование большего количества пациентов.
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2022; ТОМ 67; №2 |
Таблица. Результаты ПЦР и ЫСБ исследований генов ТС1Ю/ТС1?В образцов кожи при грибовидном микозе (ГМ), эритродермической форме ГМ (ЭГМ) и неопухолевых дерматозах (Д). *Результаты обследования пациента через 10 лет после постановки диагноза, выделены совпадающие клональные продукты
№ Диагноз ПЦР/TCRG NGS TCRG (аллельная нагрузка основных клонов, %) nqPTCRB NGS TCRB (аллельная нагрузка основных клонов, %)
1 ГМ IB Тд- 2.5; 2.4; 1.0; 0.9 ТЬ- 9.1; 1.0; 0.3; 0.25
1 ГМ* IVa тд+ 30.5; 4.4; 0.2; 6x10-6 ТЬ+ 41.8; 10.2:4x10-6
2 ГМ IVa тд+ 18.4 1.1; 0.95; 0.8 ТЬ+ НД
3 ГМПЬ Тд+ 23.4 14.1; 1.0; 0.4 ТЬ+ 9.0; 3.2; 0.96; 0.7
4 ГМ1а Тд+ 5.5 5.1; 4.6; 4.2 ТЬ+ 11.2; 2.3; 1.3; 1.2
5 ГМ IIa Тд+ 68.2; 0.2; 0.2; 0.1 ТЬ+ 32.4; 10.1; 0.2; 0,04
6 ЭГМ lila Тд- 1.4; 1.2; 1.1; 0.7 ТЬ- 1.3; 1.1; 0.7; 0.6
7 ЭГМШЬ Тд- 1.1; 0.98; 0.9; 0.8 ТЬ- 1.3; 0.34; 0.32; 0.3
8 Д Тд- 0.6; 0.5; 0.4; 0.4 ТЬ- 0.5; 0.3; 0.3; 0.3
9 Д Тд- 1.2; 0.8; 0.8; 0.6 ТЬ- 1.1; 0.7; 0.7; 0.6
10 Д Тд- 1.3; 0.95; 0.6; 0.6 ТЬ- 0.9; 0.7; 0.4; 0.4
11 Д Тд- 2.4; 1.6; 0.8; 0.7 ТЬ- 1.2; 0.85; 0.4; 0.3
12 Д Тд- 0.8; 0.7; 0.5; 0.5 ТЬ- 0.9; 0.6; 0.4; 0.3
13 Д Тд- 1.1; 0.47; 0.4; 0.4 ТЬ- 0.4; 0.3; 0.3; 0.2
Сиордия Н. Т.1, Матвиенко Ю. Д.1, Сендерова О. М.2, Очирова О. Е.3, Жалсанова Э. Б.3, Димов Г. П.4, Ли О. Ю.5, Тризна К. Б.6, Михалев М. А.7, Сокурова Е. В.8, Отморская А. А.9, Хазиева А. С.10, Фуртовская А. Ю.1, Алексеева Ю. А.1, | Зарицкий А. Ю.1, | Ломаиа Е. Г.1
РЕЗУЛЬТАТЫ ТЕРАПИИ РУКСОЛИТИНИБОМ У ПАЦИЕНТОВ С ПРОМЕЖУТОЧНОЙ-1 ГРУППОЙ РИСКА
ПО ШКАЛЕ DIPSS ПРИ МИЕЛОФИБРОЗЕ
'ФГБУ «НМИЦ им. В. А. Алмазова» Минздрава России, 2ГБУЗ «Иркутская ордена «Знак Почета» ОКБ», 3ГАУЗ «Республиканская клиническая больница им. Н.А. Семашко», 4ГБУЗ «Челябинская областная больница», 5ГБУЗ «Сахалинская областная клиническая больница», 6ОГАУЗ «Томская областная клиническая больница», 7КГБУЗ «Красноярская межрайонная клиническая больница № 7», 8КГБУЗ «Владивостокская поликлиника № 4», 9КГБУЗ «Краевая клиническая больница», ,0Красноярская краевая клиническая больница
Введение. Ингибитор ЛАК1/2 тирозинкиназы руксолитиниб имеет высокую эффективность у пациентов с миелофиброзом — препарат приводит к быстрому купированию симптомов заболевания и редукции размеров селезенки. Длительные наблюдения показали, что руксолитиниб не только повышает качество жизни пациентов с миелофиброзом, но и увеличивает общую выживаемость (ОВ) в неблагоприятных группах риска.
Цель работы. Оценить эффективность и отдаленные результаты терапии руксолитинибому пациентов с миелофиброзом, относящихся к промежуточной-1 группе риска по шкале 01Р88, с неудачей терапии гидроксикарбамидом, в реальной клинической практике в России.
Материалы и методы. Было проведено ретроспективное исследование на базе 10 центров РФ. В исследование были включены 56 пациентов с ПМФ, пост-ИП или пост-ЭТ миелофиброзом,
Таблица. Исходные клинико-демографические характеристики пациентов
Параметры Все пациенты, п=33
Возраст Медиана (разброс), лет 55 (25-75)
>65 лет, п (%) 6 (18%)
Мужчин, п (%) 13 (39%)
Время от диагноза МФ до РУКСО, медиана (мес. и разброс) 24 (1-80)
Уровень гемоглобина Медиана (разброс), г/л 125 (95-184)
<100 г/л, п (%) 1 (3%)
Уровень тромбоцитов Медиана (разброс), х109/л 283 (26-1002)
<100х109/л,п(%) 3 (9%)
100-200х109/л,п(%) 9 (27%)
£200x109/л, п (%) 21 (64%)
Уровень лейкоцитов Медиана (разброс)х109/л 9 (3-45)
Й25х109/л, п (%) 2 (6%)
Бласты в ПК 51%, п (%) 6 (18%)
Терапия гидроксимочевиной в анамнезе 33/33 (100%)
Пальпируемая селезенка, длина Медиана (разброс), п (%) 12 (0-40)
<5 см 4 (12%)
5-9 см 5 (15%)
гЮсм 24 (73%)
Конституциональные симптомы, п (%) 29 (88%)
Исходнаядоза руксолитиниба, п (%) 20мгх2 р/д 7 (21%)
15мгх2 р/д 21 (64%)
10мгх2 р/д 2 (6%)
5мгх2 р/д 2 (6%)
7,5 мгх 1 р/д 1 (3%)
когда-либо получавших терапию руксолитинибом. Из них 33 пациента имели группу риска промежуточная-1. Мужчин было 13 (39%). Медиана возраста (на момент начала терапии руксолитинибом) составила 55 (25-75) лет. Все пациенты ранее получали гидроксимочевину и были резистентны к препарату.
Результаты и обсуждение. Медиана времени наблюдения от начала приема препарата до сбора данных составила 24 (181) мес. Медиана размеров селезенки исходно составляла 12 см (разброс 0—40 см) и уменьшилась до 9 (0—3б) см и 8 (0—31) см через 3 и б мес. лечения соответственно. Для оценки динамики размеров селезенки были доступны 23 пациента. Редукция размеров селезенки >50% отмечаласьу 9/23 (39%) и 13/23 (56%) пациентов на 3-й и 6-й мес. терапии руксолитинибом соответственно. У всех остальных пациентов ответ по селезенке соответствовал
