CC BY
11
УД К1б 15.282.074:543.644.41
ПРИМЕНЕНИЕ КРУГОВОЙ БУМАЖНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ДЛЯ АНАЛИЗА ФУНГИЦИДА З-З'-ЭТИ ЛЕН-БИС И ПРОДУКТОВ
ЕГО РАЗЛОЖЕНИЯ
В. С. Билибина
Кафедра гигиены детей и подростков и кафгдра фзрчацгвтической химии I Московского медицинского института им. И. М. Сзчгнова
Фунгицид эдитон как производное дитиокарбаминовой кислоты является нестойким препаратом и в зависимости от условий хранения разлагается с выделением как газообразных (сероуглерод, сероводород), так и некоторых других, пока недостаточно изученных компонентов. Постоянное присутствие примесей в эдитоне чрезвычайно усложняет его анализ. Это привело к необходимости разработки новых методов быстрого и точного определения присутствия в смеси как самого эдитона, так и продуктов его разложения.
За последнее время при анализе разнообразных пестицидов широко применяется метод бумажной хроматографии. Простой и доступной модификацией метода бумажной хроматографии является круговая бумажная хроматография. Как показали наши исследования, метод круговой бумажной хроматографии чрезвычайно быстр, не требует специального оборудования и очень чувствителен при вполне удовлетворительном разделении компонентов смесей.
Мы остановили свой выбор на методе круговой бумажной хроматографии по способу Giri и Rao с использованием секторной хроматографии по способу Proum и Woiwod.
Экспериментальная часть заключается в следующем. На листе хро-матографической бумаги марки «М-ленинградская» рисуют 2 окружности с общим центром и диаметрами 10 и 2,5 см. Бумаги обрезают по периметру внешней окружности, а в центре окружности прорезают отверстие, в которое вставляют фитиль (свернутый в трубку кусок бумаги размером 4x6 см). По внутренней окружности наносят любое число проб исследуемого вещества, но не более 8.
В качестве хроматографической камеры можно использовать чашку Петри диаметром 13,5 см или кристаллизатор с плотно прилагающей крышкой. Внутри камеры помещают бюкс, в который наливают подвижную фазу. Неподвижную же фазу наливают на дно камеры. В том же случае, если используют однофазную систему, для проведения анализа можно воспользоваться двумя одинаковыми основаниями чашек Петри, вложив между ними такую же бумажную заготовку, но только с укороченным фитильком. И в том и в другом случае насыщение камер проходит за очень короткий промежуток времени, однако для еще большей интенсификации насыщения атмосфзры камеры компонентами неподвижной фазы при использовании кристаллизатора стенки камеры рекомендуется выстилать фильтровальной бумагой (И. М. Хайс и К. Мацек).
Из изученных нами растворителей мы остановились на смеси хлороформа, этилового спирта и воды в соотношениях 50:5:45 и 0,1% растворе лимонной кислоты. Для проявления эдитона и продуктов его разложения мы применяли следующие реагенты.
А. Пары йода. Реакция эдитона и продуктов его разложения с йодом на бумаге чувствительна, но не специфична. Аналогично ведут себя многие гетероциклические соединения, которые при обработке парами йода также образуют коричневые пятна.
Б. После опрыскивания хроматограмм смесью равных объемов 2% раствора нитрата серебра в дистиллированной воде и 0,4% раствора бром-
фенолового синего в ацетоне их погружают на несколько минут в кювету, содержащую 0,1% раствор лимонной кислоты в дистиллированной воде (наша модификация метода Getz). При этом появляются синие пятна на желтом фоне. Реактив реагирует только с органическими серусодержащими соединениями. Как показали наши исследования, благодаря специфичности этой реакции ею лучше пользоваться при анализе биологических объектов.
Методика работы такова. 0,1 г эдитона растворяют в 2,5 мл диметил-формамида и полученный раствор доводят до метки в мерной колбе на 50 мл метиловым спиртом. На бумажную заготовку наносят пробы, содержащие 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 и 1 мкг эдитона, после чего проводят хроматографирование в системе хлороформ — этиловый спирт — вода в соотношении 50:5:45. Расстояние фронта от стартовой линии должно быть не менее 3—3,5 см. При использовании того и другого проявляющих реактивов на хроматограм-ме при минимальной концентрации 0,2 мкг обнаруживаются дуги с Rt= 1. В то же время в зависимости от нанесенного количества раствора, серии порошка, срока хранения эдитона на хроматограмме может появиться второй ряд дуг с Rt=0,5.
Мы условно назвали вещество, дающее дуги с Rt=l, веществом х, а вещество с i?f=0,5 — веществом у.
Для доказательства того, что вещество х является исходным по отно-'шению к веществу у, пользовались следующей методикой: на линию старта хроматограммы в каждую из точек наносили насыщенный раствор эдитона в хлороформе в количестве 0,01 мл. Хроматографирование проводили обычным способом. Не проявляя хроматограммы, из нее вырезали участки, где предположительно должны находиться дуги с и с Rt=0,5. Для
последующих манипуляций собирали батарею, состоящую из 2 колб с притертыми пробками, содержащими по 1 мл воды, 2 аналогичных колб, содержащих 0,22% раствор карбоната натрия. Используемые растворы по некоторым свойствам близки к физиологическим жидкостям организма. Определению присутствия эдитона и продуктов его разложения в биологических объектах посвящена другая статья из данной серии.
Вырезанные участки хроматограммы помещали каждый при комнатной температуре на сутки в названные выше растворы, через сутки каждый из растворов трижды обрабатывали 3 мл хлороформа. Обработку производили в делительных воронках, тщательно встряхивая их в течение 5 мин. Водный слой отбрасывали, а хлороформный элюат после процеживания через вату собирали в бюксы. Хлороформ при комнатной температуре отгоняли в вытяжном шкафу. Остаток, образовавшийся в бюксах, вновь растворяли в нескольких каплях хлороформа и наносили на хроматограмму. Последующее хроматографирование в той же системе показывает, что их фракции с #f=0,5 получают, как было описано выше, одну дугу также с Rt=0,5, а из фракции с i?f = l—2 — дуги с Rt, соответственно равным 1 и 0,5.
На основании этих данных мы сделали вывод, что вещество у является продуктом разложения вещества х — эдитона.
По литературным данным, производные дитиокарбаминовой кислоты дают в качестве одного их продуктов разложения этилентиомочевину (Р. Люд-вич и Дж. Торн). Использование последней в качестве свидетеля в названных выше системах в круговой и нисходящей хроматографиях, а также хроматографирование в системах вода и н-бутанол — уксусная кислота — вода в соотношении 4:1:5 позволило нам сделать вывод, что вещество у — это этилентиомочевина.
Чувствительность этилентиомочевины в отношении того и другого проявляющих реактивов составляет для круговой секторной хроматографии соответственно 0,04 и 0,02 мкг.
Приведенная выше методика, помимо того, что она дает возможность разделить эдитон и продукт его разложения — этилентиомочевину, может быть также использована как тест-метод для определения доброкачественности эдитона. В этом случае, чем ниже чистота эдитона, тем при меньших
его концентрациях будут обнаруживаться продукты его разложения. Концентрация эдигона, при которой впервые будут обнаруживаться продукты его разложения, может служить показателем доброкачественности эдитона данной серии. Ддя обнаружения продуктов разложения в эдитоне можно воспользоваться и однофазной системой — 0,1% раствором лимонной кислоты в дистил лированной воде. В предлагаемой системе образуются две дуги: с Rt =0 и с /?г=0,74. Нам удалось доказать, что пятно с 7?f=0 соответствует эдигону. Хроматограмму, проведенную через названную выше однофазную систему, подсушивают и, не проявляя, переносят в систему хлороформ — этиюзый спирт — вода в соотношении 5Э : 5 : 45. Следует отметить, что в этой системе дуга с Rt=0 приобретает /?г = 1. Дальнейшие исследования привели нас к заключению, что дуга с Rt=0,74 соответствует продуктам разложения эдитона. Из хроматограммы, полученной в системе хлорофэрм — спирт — вода в соотношении 50:5:45 вырезают участок бумаги, где предположительно находится дугас/?г=0,5 (этилентиомо-чевина) и элюируют 0,5 мл ацетона. Пэсле нанесения элюата на бумагу и хроматографирозания в 0,1% растворе лимонной кислоты образуется одна дуга с Rt=0,74; таким образом, дуга с R,~Э,5, образующаяся в двухфазной системе, соответствует дуге с /?( = 0,74 в однофазной системе, а вещество, их образующее, есть этилентиомочевина. Следует также указать, что появление продуктов разложения не является результатом взаимодействия эдигона с кислой системой. Последнее обстоятельство довольно просто доказывается тем, что эдитон, очищенный от продуктов разложения хроматографированием в 0,1% растворе лимонной кислоты, после просушивания при повторном проведении хроматограммы через ту же систему дает одну дугу с /?г=0.
Так как продукты разложения эдитона в той и другой системах обнаруживают при одной и той же концентрации эдигона данной серии, обе системы могут быть одинаковово рекомендозаны для характеристики доброкачественности эдигона.
Выводы
1. Предложен тест-метод для определения доброкачественности эдитона.
2. Разработана методика для обнаружения в фунгициде З-З'-этилен-бис (4, 6-диметилтетрагидро-1,3,5-тиадиазин-2-тионе) — эдитоне — продукта его разложения — этилентиомочевины.
ЛИТЕРАТУРА
Методы анализа пестицидов. М., 1957. —G i г i К- V., R а о N. А. N.. Curr. Sci, 1951, v. 20, p. 295. — Р г о u m Н., Woiwod A. J., J. gen. Microbiol., 1951, p. 681. — X а й с И. M., M а ц с к К., Хроматография на бумаге. М., 1962. — Людвиг Р., Торн Дж. В кн.: Успехи в области изучения пестицидов. М., 1962, с. 137.
Поступила 19/XII 1968 г.
УДК 613.633-073.75
ПРИМЕНЕНИЕ РЕНТГЕНОФАЗОВОГО АНАЛИЗА ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ СОСТАВА ПЫЛИ В ГИГИЕНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
И. Н. Титова, канд. мед. наук Ю. В. Новиков, А. А. Полынкова Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
Метод фазового рентгеновского анализа основан на дифракции рентгеновых лучей мелкокристаллическими телами (метод порошка). Когда на образец попадают рентгеновы лучи, их электромагнитные волны вы-
