CC BY
205
УДК 616:578.81
ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИОФАГОВ ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ БАКТЕРИЙ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
Е. О. Чугунова, канд. ветеринар. наук, доцент;
Н. А. Татарникова, д-р ветеринар. наук, профессор,
ФГБОУ ВО Пермская ГСХА,
ул. Петропавловская, 23, г. Пермь, Россия, 614990
E-mail: [email protected]. [email protected]
Аннотация. В статье проанализированы возможности использования бактериофагов. Цель данного обзора - показать роль бактериофагов в лабораторной диагностике болезней и определении наличия патогенных бактерий в продуктах питания. Во введении представлена краткая характеристика бактериофагов, дана их классификация, основанная на современных представлениях о морфологии фагов и знаниях об их геноме. В основной части работы рассмотрено специфическое взаимодействие бактериофагов с бактериальной клеткой-хозяином, которое используется в целом ряде различных методик, касающихся фагоидентификации и фаготипиро-вания бактерий. Особое внимание уделено вопросам лизиса фагами сальмонелл и прочих энте-робактерий. В статье представлены и другие методы, основанные на способности бактериофагов специфически связываться с клетками бактерий-хозяев. В их числе использование флуоресцентно-меченых антител против специфически адсорбирующихся фаговых частиц или флуоресцентно-меченых фагов, использование тест-полосок или иммунологических микропланшетов с иммобилизованными за счет пассивной адсорбции фагами. Дана характеристика реакции нарастания титра фага (РНФ), разработанной В.Д. Тимаковым и Д.М. Гольдфарбом. В заключении определена перспективность данного направления в науке и практике.
Ключевые слова: бактериофаги, идентификация, патогенные бактерии, фаготипирова-ние, реакция нарастания титра фага.
Введение. История открытия бактериофагов относится к 1896 г., когда британский химик Эрнест Ханкин, изучая антибактериальное действие вод индийских рек Ганга и Джумны, впервые описал агент, легко проходящий через непроницаемые для бактерий мембранные фильтры и вызывающий лизис микробов. Явление бактериофагии наблюдал в 1898 г. Н.Ф. Гамалея, позднее - Туорт в 1915 г. и д'Эррелль в 1917 г. Канадский сотрудник института Пастера в Париже Феликс Д'Эрелль предложил для найденных агентов название «бактериофаги» - пожиратели бактерий, он же в дальнейшем определил, что бактериофаги представляют собой бактериальные вирусы, чей антибактериальный эффект обусловлен специфическим лизисом бактерий в очаге воспаления [1, 2]. Бактериофаги несут всю информацию, необходимую для процесса их репродукции в соответствующих клетках, но не имеют собственного механизма для генерации энергии и рибосом для синтеза белков [1, 3]. Каждая фаговая частица (вирион) содержит геном, представленный молекулой
ДНК или РНК [4]. Бактериофаги выделены в 1 отряд, 13 семейств и 31 род. Более 95% известных фагов принадлежит порядку Саиёоу!-rales - хвостатые фаги. Три главных семейства порядка Caudovirales различаются строением хвоста: 60 % из охарактеризованных фагов относятся к семейству Siphoviridae с очень длинными, часто гибкими несократимыми хвостами; 25 % - Myoviridae с сократимым хвостом; и 15 % - Podoviridae с короткими несократимыми хвостами [3]. Кроме семейств в классификации большое значение имеют морфологические типы фагов [5].
Цель работы - показать роль бактериофагов в лабораторной диагностике болезней и определении наличия патогенных бактерий в продуктах питания.
Обсуждение. Специфическое взаимодействие бактериофагов с бактериальной клеткой-хозяином дает непосредственную возможность использовать их для идентификации бактерий, в том числе патогенных. В отличие от множества искусственно созданных систем для определения и дифференциации различ-
ных структур бактериальных клеток, основанных на использовании антител или на амплификации, бактериофаг, естественно возникнув в ходе эволюции, специфически распознает свои рецепторы и связывается исключительно с клетками своего хозяина. Это взаимодействие используется в целом ряде различных методик специфического определения и дифференциации штаммов бактерий - хозяев бактериофагов [3].
Метод фаготипирования для идентификации местных случаев заболевания людей сальмонеллезами от приезжих был предложен
A. Foley, G. Petzold, С. Fowler и соавторами [6]. Фагодиагностика как один из методов индикации и идентификации позволяет быстро и точно определить принадлежность исследуемой бактерии не только к определённому роду, но и к виду и даже фаговару [7]. Метод фагодиагностики основан на специфической способности фагов взаимодействовать с определёнными видами (идентификация) или типами (фаготипирование) бактерий, в результате чего происходит их лизис. Феномен лизиса является основой для использования фага в диагностических целях и широко используется в лабораторной практике для идентификации различных видов микроорганизмов [8].
Лизис фагами сальмонелл был достаточно глубоко озвучен многими учеными прошлого столетия. A. Lylinghen и др. предложили схему типирования S. typhimurium, для чего использовали фаги, изолированные из фекалий, сточных вод, изогенных штаммов сальмонелл. Наиболее широкое признание в диагностической практике получил метод Феликса (1955), основанный на использовании фагов, с помощью которых могут быть идентифицированы 13 фаготипов S. Typhimurium. Применяются в лабораторной практике и другие сальмонел-лезные фаги [6]. Аврех В.В. (1954) предлагал использовать фаги специфические по отношению к различных видам сальмонелл, считая данный метод более надёжным, чем реакция с монорецепторными сыворотками. Для быстрой диагностики бактерий кишечной группы
B.А. Килессо (1960) применяла сальмонеллёз-ный О-фаг с широким спектром действия, ли-зирующий 40 различных серотипов сальмонелл, а также некоторые штаммы шигелл.
Н.И. Николаенко, И.К. Тутов (1970) отмечают перспективность использования бактериофага, лизирующего Salmonella abortus ovis и позволяющего сократить сроки диагностики до 4-6 часов.
По данным И.И. Ревенко (1978), коли-гертнер-фаг обладает довольно широким диапазоном литической активности. При испытании 206 культур S. enteritidis, выделенных от телят и коров в разное время и в различных местностях, этот фаг лизировал 164 культуры (79,6%). Кроме того, он лизировал значительное количество культур S. suipestifer и S. cholerae suis, выделенных от поросят [9, 10].
Феликсом и Кэллоу (1943, 1951, 1956) разработаны схемы фаготипирования для двух видов Salmonella, имеющих большое значение - S. paratyphi B и S. typhimurium, где дифференциация типов осуществляется путем определения типа реакции штаммов на фаги. Существует другой метод фаготипирования, предложенный Лиллингеном (1948) для S. typhimurium, при котором используют 12 ти-пирующих фагов, с помощью которых S. typhimurium подразделяют на 24 типа.
Установлено, что все фаготипы S. paratyphi B лизогенны (Шолтенс, 1950; Феликс, Кэллоу, 1951; Хэмон и Николль, 1951; Ни-коль, Хэмон и Эддингер, 1951; Шолтенс 1952, 1955, 1956). Находящийся в них фаг (или фаги) характерен для каждого типа, и некоторые типирующие фаги идентичны умеренным фагам. В схеме фаготипирования группы S. para-typhi B некоторые фаги выполняют двойную функцию - типирующую и типоопределяю-щую [11].
Наряду с данными разработаны и схемы фаготипирования для S. paratyphi А (Байкер, 1955), S. dublin (Лиллинген, 1950, У. Смит, 1951), S. enteritidis (Лиллинген, 1950), S. galli-narum-pullorum (Лиллинген, 1952).
В 1938 году J. Craigie и C. Yan, изучая антигенные свойства брюшнотифозных Vi-фагов, их термостабильность и диапазон действия, подразделили их на 4 основных типа, которые применяются для фаготипирования брюшнотифозных Vi-культур. Фаготипирова-ние как метод идентификации разработан в отношении широкого спектра возбудителей: брюшнотифозных и паратифозных А и Б бактерий, палочек Бреслау. Оригинальную схему для фаготапирования S. typhimurium разработали Л.Г. Чиракадзе с соавт. (1974). Литиче-скую реакцию изучали у 2708 штаммов S. typhimurium как эталонных и музейных, так и выделенных из разных источников при помощи 16 типовых фагов. В ветеринарной практике одними из первых применили фаготипи-
рование Т.А. Давиденко (1972), Н.М. Ники-тюк (1970), И.И. Архангельский, Б.А. Степанов (1966), А.И. Ивашура (1967), Б.А. Байрак (1970), Л.И. Петрушина (1967). В своих исследованиях они указывают на эффективность фаготипирования сальмонелл, которые выделяются от различных видов животных, из мяса и других субстратов [9, 10].
Были разработаны и другие методы, основанные на способности бактериофагов специфически связываться с клетками бактерий-хозяев. В их числе использование флуоресцентно-меченых антител против специфически адсорбирующихся фаговых частиц (Watson and Evcland, 1965) или флуоресцентно -меченых фагов за счет ковалентного пришивания красителей к поверхности фагов (Henries et al., 1995; Goodridge et al., 1999) [3].
В целом методы индикации и идентификации микроорганизмов с помощью бактериофагов специфичны, не требуют больших затрат времени, материалов и общедоступны [12]. Б.М. Коритняк (2005) были выделены и депонированы иерсиниозные бактериофаги, а также разработаны технологические параметры по получению диагностического биопрепарата на их основе и схемы по выделению и фагоидентификации бактерий вида Y enterocolitica в патологическом материале, пищевых продуктах, кормах и объектах внешней среды [7]. Н.П. Катмаковой (2010) разработана технология изготовления диагностического биопрепарата на основе специфических псевдотуберкулезных фагов [13]. Н.А. Феоктистовой, Е.А. Булькановой и Е.Н. Пожарни-ковой (2006) разработаны биотехнологические параметры фагоиндикации и фагоидентифи-кации бактерий рода Proteus, Enterobacter и клебсиелл в объектах ветеринарного надзора [12. 14. 15]. С.Н. Золотухиным (2007) разработаны методы фагоиндикации и фагоиденти-фикации энтеробактерий родов Proteus, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, видов Morganella morganii, Yersinia enterocolitica и Escherichia coli сероваров 0157:H7 и 0157:H в объектах ветеринарного надзора [16]. Р.Н. Лобач (2014) обосновал целесообразность применения в практическом здравоохранении для индикации и идентификации возбудителя сибирской язвы препарат сибиреязвенного бактериофага Гамма А-26 [17].
По мере развития знаний о структуре и функциях бактериофагов предлагается все большее число вариантов использования фаговых частиц и белков фагов для детекции патогенов. Так, фаг Salmonella Felix 01 (также известный как фаг Sapphire) был использован в качестве биосорбента для селективного отделения клеток его хозяина от других родственных ему микроорганизмов, присутствовавших в суспензии (Bennett et al., 1997). Фаг Felix 01 был иммобилизован за счет пассивной адсорбции на полистироловых поверхностях (тест-полосок или иммунологических микропланшетов). Полученные таким образом биосорбенты погружали в культуры Salmonella, и после отмывания неспецифически связанных клеток присутствие клеток Salmonella на поверхности обнаруживали либо прямой флуоресцентной микроскопией, либо косвенно, с помощью ПЦР. В обоих случаях наблюдалось специфическое связывание клеток сальмонелл, и в варианте с иммунологическим планшетом сальмонелл можно было селективно концентрировать в присутствии такого же количества конкурирующих клеток других энтеробактерий. Штаммы Salmonella, нечувствительные к данному фагу, не связывались с биосорбентом [3].
О.А. Миних (2010) разработан биолюминесцентный метод определения клеток E.coli в смеси с S. Typhimurium с использованием бактериофага Т4, предел количественного обнаружения которого составляет 6,2x103 КОЕ/мл при длительности анализа 2 часа. При этом автор отмечает эффективность физической сорбции фага на алюминиевых нановолокни-стых фильтрах «Disruptor» [18].
Определенный интерес специалистов ветеринарных лабораторий заслуживает реакция нарастания титра фага (РНФ), разработанная В.Д. Тимаковым и Д.М. Гольдфарбом в 1955 г. Данный метод позволяет определять патогенные микроорганизмы непосредственно в исследуемом материале без выделения чистой культуры. РНФ основана на способности фага к репродукции на гомологичных бактериях. О наличии бактерий судят по увеличению титра индикаторного фага, в качестве которого может служить вирулентный фаг с лимитированным спектром действия, определяемым целями исследования. Так, для обнаружения возбудителя из объектов внешней среды без
конкретизации его антигенной, биохимической или типовой принадлежности можно использовать индикаторный фаг с относительно широким спектром. Для решения эпидемиологических задач, когда необходима типовая и видовая идентификация возбудителя, индикаторный фаг должен иметь узкий спектр действия. Кроме того, индикаторный фаг должен обладать высокой адсорбционной способностью, коротким латентным периодом и высокой урожайностью [19].
Кроме высокой специфичности действия бактериофагов, необходимо отметить и скорость фагодиагностики, по сравнению с классическим бактериологическим методом. Так, Е.Н. Семаниной (2012) разработана и апробирована схема реакции нарастания титра фага, которая за 26 часов позволяет выявить бакте-
рии B. Bronchiseptica на объектах внешней среды и в патологическом материале от больных животных [20].
Вывод. С целью повышения эффективности фагопрепаратов предпринимаются попытки их усовершенствования путем постоянного пополнения новыми высокоактивными штаммами или расами фагов, выделяемыми из различных источников или адаптируемыми к свежевыделенным культурам возбудителей, которые циркулируют в данное время в определенной местности [8]. Таким образом, учитывая накопленный практический опыт, доказывающий эффективность фагов, их применение для детекции бактерий в пищевых продуктах и сырье является актуальным и перспективным направлением.
Литература
1. Тимаков В. Д., Гольдфарб Д. М. Основы экспериментальной медицинской бактериологии. М. : Медгиз, 1958. 347 с.
2. Акимкин В. Г., Дарбеева О. С., Колков В. Ф. Бактериофаги: исторические и современные аспекты их применения: опыт и перспективы // Клиническая практика. 2010. № 4. С. 48-54
3. Бактериофаги: биологическое и практическое применение / Под ред. Элизабет Каттер, Александра Сулак-велидзе; пер. с англ. Изд-во «Научный мир», 2012. 638 с.
4. Krishnamurthy S. R., Janowski A. B., Zhao G., Barouch D., Wang D. Hyperexpansion of RNA Bacteriophage Diversity. URL: http://dx.doi.org/10.1371/journal.pbio.1002409 (дата обращения: 28.03.2016).
5. Bradley D. E. The morphology and physiology of bacteriophages as revealed by the electron microscope. J. R. Mi-crosc. Soc. 1965. Vol. 84. P. 257-316.
6. Коритняк Б. М. Изучение биологических свойств выделенных бактериофагов Yersinia enterocolitica и разработка на их основе технологии индикации и идентификации возбудителя кишечного иерсиниоза : дис. ... канд. биол. наук. Ульяновск, 2005. 164 с.
7. Пульчеровская Л. П. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Citrobacter и их применение в диагностике : дис. ... канд. биол. наук. Ульяновск, 2004. 186 с.
8. Пименов Н. В. Эффективность бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур : дис. ... канд. биол. наук. Москва, 2003. 138 с.
9. Adams M. M. Bakteriophages. NewYork, 1961. P. 528.
10. Кузнецов А. Ю. Бактериофаги Morganella morganii и их применение с диагностической целью : дис. ...канд. биол. наук. Ульяновск, 2000. 160 с.
11. Фаги листерий и их практическое применение : учебное пособие / И. А. Бакулов [и др.].Ульяновск : УГСХА, 1998. 33 с.
12. Феоктистова Н. А. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов рода Proteus, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров практического применения : дис. ... канд. биол. наук. Ульяновск, 2006. 166 с.
13. Катмакова Н. П. Разработка и применение диагностического биопрепарата "YP-09 УГСХА" на основе бактериофагов YersiniaPseudotuberculosis : дис. ... канд. биол. наук. Ульяновск, 2010. 151 с.
14. Бульканова Е. А. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Klebsiella, конструирование на их основе биопрепарата : дис. ... канд. биол. наук. Ульяновск, 2006. 162 с.,
15. Пожарникова Е. Н. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Enterobacter и конструирование на их основе биопрепарата : дис. ... канд. биол. наук. Ульяновск, 2006. 169 с.
16. Золотухин С. Н. Создание и разработка схем применения диагностических биопрепаратов на основе выделенных и изученных бактериофагов энтеробактерий : дис. ... д-ра. биол. наук. Ульяновск, 2007. 341 с.
17. Лобач Р. Н. Диагностическая ценность сибиреязвенных иммуноглобулинов и бактериофага Гамма А-26 при выявлении и идентификации возбудителя сибирской язвы : дис. ... канд. биол. наук. Москва, 2014. 135 с.
18. Миних О. А. Бактериофаги и биосорбенты на их основе для специфической детекции клеток Escherichia coli биолюминесцентным методом : дис. ... канд. хим. наук. Москва, 2010. 118 с.
19. Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. / Под ред. А. С. Лабин-ской, Е. Г. Волиной. М.: Изд-во БИНОМ, 2008. Кн. I. 1080 с.
20. Семанина Е. Н. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Bordetella bronchiseptica и разработка на их основе биопрепарата для индикации и идентификации : дис. ... канд. биол. наук. Ульяновск, 2012. 147 с.
APPLICATION OF BACTERIOPHAGES FOR BACTERIA DETECTION (THE LITERATURE REVIEW)
E. O. Chugunova, Cand. Vet. Sci., Associate Professor
N. A. Tatarnikova, Dr. Vet. Sci., Professor
Perm State Agricultural Academy
23 Petropavlovskaya St., Perm 614990 Russia
E-mail: [email protected], [email protected]
ABSTRACT
The paper shows possibilities of bacteriophages use. The purpose of this review is showing the role of bacteriophages in laboratory diagnosis of diseases and definition of pathogenic bacteria in food. Short characteristic of bacteriophages and their classification based on modern ideas of morphology of phages and knowledge of their genome is given in introduction of this article. In the main part of work is considered specific interaction of bacteriophages with bacteria. This bacteriophages property is used in a number of various techniques concerning identification and typing of bacteria. The special attention is paid to lyses of Salmonella spp. and other enterobacteria by phages. Other methods based on ability of bacteriophages specifically to contact of bacteria owners also are presented in the article. Among them are using of fluorescent and marked antibodies against specifically adsorbed particles, bacteriophages parts or fluorescent and marked phages, use of test strips or immunological micro tablets with the phages immobilized due to passive adsorption. The characteristic of the reaction of phage titer increase (RNF) developed by V.D. Timakov and D. M. Goldfarb is given. In the conclusion prospects of this direction in science and practice are defined.
Keywords: bacteriophages, identification, pathogenic bacteria, typing of bacteria, reaction of phage titer increase.
References
1. Timakov V. D., Gol'dfarb D. M. Osnovy eksperimental'noi meditsinskoi bakteriologii (Basis of experimental medical bacteriology), Moscow, Medgiz, 1958, 347 p.
2. Akimkin V. G., Darbeeva O. S., Kolkov V. F. Bakteriofagi: istoricheskie i sovremennye aspekty ikh primeneniya: opyt i perspektivy (Bacteriophages: historical and modern aspects: experience and prospects), Klinicheskaya praktika, 2010, No. 4, pp. 48-54
3. Bakteriofagi: biologicheskoe i prakticheskoe primenenie (Bacteriophages: biological and practical application), Pod red. Elizabet Katter, Aleksandra Sulakvelidze; per. s angl. Izd-vo «Nauchnyi mir», 2012, 638 p.
4. Krishnamurthy S. R., Janowski A. B., Zhao G., Barouch D., Wang D. Hyperexpansion of RNA Bacteriophage Diversity. URL: http://dx.doi.org/10.1371/journal.pbio.1002409 (data obrashcheniya: 28.03.2016).
5. Bradley D. E. The morphology and physiology of bacteriophages as revealed by the electron microscope, J. R. Mi-crosc, Soc. 1965, Vol. 84, pp. 257-316.
6. Koritnyak B. M. Izuchenie biologicheskikh svoistv vydelennykh bakteriofagov Yersinia enterocolitica i razrabotka na ikh osnove tekhnologii indikatsii i identifikatsii vozbuditelya kishechnogo iersinioza (Studying of biological properties of the allocated Yersinia enterocolitica bacteriophages and development on their basis of indication and identification technology), dis. ... kand. biol. nauk, Ul'yanovsk, 2005, 164 p.
7. Pul'cherovskaya L. P. Vydelenie i izuchenie osnovnykh biologicheskikh svoistv bakteriofagov Citrobacter i ikh primenenie v diagnostike (Allocation and studying of the main biological properties of Citrobacter bacteriophages and their application in diagnostics), dis. ... kand. biol. nauk, Ul'yanovsk, 2004, 186 p.
8. Pimenov N. V. Effektivnost' bivalentnogo sal'mofaga protiv sal'monelleza enteritidis i pulloroza-tifa kur (Efficiency of a bivalent bacteriophages against Salmonella Enteritidis and Salmonella Pullorum), dis. ... kand. biol. nauk, Moscow, 2003, 138 p.
9. Adams M. M. Bakteriophages, NewYork, 1961, P. 528.
10. Kuznetsov A. Yu. Bakteriofagi Morganella morganii i ikh primenenie s diagnosticheskoi tsel'yu (Bacteriophages of Morganella morganii and their application with the diagnostic purpose), dis. .. .kand. biol. nauk, Ul'yanovsk, 2000, 160 p.
11. Bakulov I.A., Kolpikova T.I., Vasilyev D. A., Merkulov A.V., Kotlyarov V. M. Fagi listerii i ikh prakticheskoe primenenie (Bakteriophages of listeriya and their practical application), uchebnoe posobie, Ul'yanovsk, UGSKhA, 1998, 33 p.
12. Feoktistova N. A. Vydelenie i izuchenie biologicheskikh svoistv bakteriofagov roda Proteus, konstruirovanie na ikh osnove biopreparata i razrabotka parametrov prakticheskogo primeneniya (Allocation and studying of biological properties of bacteriophages against Proteus spp., designing on their basis of a biological product and development of parameters of practical application), dis. ... kand. biol. nauk, Ul'yanovsk, 2006, 166 p.
13. Katmakova N. P. Razrabotka i primenenie diagnosticheskogo biopreparata "YP-09 UGSKhA" na osnove bakterio-fagov Yersinia Pseudotuberculosis (Development and application of a diagnostic biological product of "YP-09 UGSHA" on the basis of bacteriophages against Yersinia Pseudotuberculosis), dis. ... kand. biol. nauk, Ul'yanovsk, 2010, 151 p.
14. Bul'kanova E. A. Vydelenie i izuchenie osnovnykh biologicheskikh svoistv bakteriofagov Klebsiella, konstruiro-vanie na ikh osnove biopreparata (Allocation and studying of the main biological properties of bacteriophages against Klebsiella, designing on their basis of a biological product), dis. ... kand. biol. nauk, Ul'yanovsk, 2006, 162 p.
15. Pozharnikova E. N. Vydelenie i izuchenie osnovnykh biologicheskikh svoistv bakteriofagov Enterobacter i kon-struirovanie na ikh osnove biopreparata (Allocation and studying of the main biological properties of bacteriophages against Enterobacteria and designing on their basis of a biological product), dis. ... kand. biol. nauk, Ul'yanovsk, 2006, 169 p.
16. Zolotukhin S. N. Sozdanie i razrabotka skhem primeneniya diagnosticheskikh biopreparatov na osnove vydelen-nykh i izuchennykh bakteriofagov enterobakterii (Creation and development of application schemes of diagnostic biological products on the basis of the allocated and studied bacteriophages against Enterobacteria), dis. ... d-ra. biol. nauk, Ul'yanovsk, 2007, 341 p.
17. Lobach R. N. Diagnosticheskaya tsennost' sibireyazvennykh immunoglobulinov i bakteriofaga Gamma A-26 pri vyyavlenii i identifikatsii vozbuditelya sibirskoi yazvy (Value of immunoglobulin against bacillus anthrax of and bacteriophages A-26 at identification of the anthrax), dis. ... kand. biol. nauk, Moscow, 2014, 135 p.
18. Minikh O. A. Bakteriofagi i biosorbenty na ikh osnove dlya spetsificheskoi detektsii kletok Escherichia coli biol-yuminestsentnym metodom (Bacteriophages and biosorbents on their basis for specific detection Escherichia coli by a bioluminescent method), dis. ... kand. khim. nauk, Moscow, 2010, 118 p.
19. Rukovodstvo po meditsinskoi mikrobiologii. Obshchaya i sanitarnaya mikrobiologiya (Manual on medical microbiology. General and sanitary microbiology), pod red. A. S. Labinskoi, E. G. Volinoi, Moscow, Izd-vo BINOM, 2008, Kn. I, 1080 p.
20. Semanina E. N. Vydelenie i izuchenie biologicheskikh svoistv bakteriofagov Bordetella bronchiseptica i razrabotka na ikh osnove biopreparata dlya indikatsii i identifikatsii (Allocation and studying of biological properties of Bordetella bronchiseptica bacteriophages and development on their basis biological product for indication and identification), dis. ... kand. biol. nauk, Ul'yanovsk, 2012, 147 p.
