CC BY
71
References
1. Katusov D. N., Shatov A. A. Prodovol'stvennaya bezopasnost' - osnova natsional'noi bezopasnosti strany (Food safety - bases for national safety of the country), Sb. dokl. X Mezhdunarod. nauch.-praktich. konf. molodykh uchenykh (Nauchno-tekhnicheskii progress v sel'skokhozyaistvennom proizvodstve), Velikie Luki, 2015, pp. 203-207.
2. Madison V. Vozvrashchenie golshtinskoi «zolushki» (Return of Holstein Cinderella), Zhivotnovodstvo Rossii, 2005, No. 6, pp. 2-6.
3. Zukhrabov M. G., Zukhrabova Z. M. Nekotorye parametry adaptatsii vysokoproduktivnykh korov, zavezennykh na territoriyu RT iz zarubezhnykh stran k novym usloviyam ikh soderzhaniya (Some parameters of adaptation of highly productive imported cows to new housing conditions), Uchenye zapiski Kazanskoi gosudarstvennoi akademii veterinarnoi meditsiny im. N.E. Baumana, Kazan, Kazanskii gos. akad. veterinar. med., 2012, T. 211, pp. 259-263.
4. Donnik I. M. Biologicheskie osobennosti sel'skokhozyaistvennykh zhivotnykh i ustoichivost' k zabolevaniyam v raznykh ekologicheskikh zonakh Ural'skogo regiona (Biological features of domestic animals and resistance to diseases in different ecological zones of the Urals region), Problemy radioekologii i programmnykh distsiplin, Ekaterinburg, 1999, Vyp. 2, pp. 214-239.5.
5. Vereshchak N. A. Otsenka pokazatelei immunnoi sistemy i metody korrektsii immunnoi nedostatochnosti u produk-tivnykh zhivotnykh i ptitsy v ural'skom regione (Evaluation of immune system indicators and methods of correction of immune lack in productive animals and poultry in the Urals region), avtoref. dis. ... d-ra veterinar. nauk [Ural'skaya gos. s.-kh. akad.], Ekaterinburg, 2007, p. 41.
6. Vereshchak N. A. Immunomorfologicheskie pokazateli zhivotnykh v Ural'skom regione (Immune-morphological indicators of animals in the Urals region), Agrarnyi vestnik Urala, 2007, No. 3, P. 26.
7. Donnik I. M. Sostoyanie zdorov'ya sel'skokhozyaistvennykh zhivotnykh v industrial'nykh territoriyakh (Health state of domestic animals in industrial territories), Sb. nauch. tr. (Prodovol'stvennaya bezopasnost' - XXI vek), Ekaterinburg, 2000, pp. 114-130.
8. Ibishov D. F. Vliyanie vitadaptina na vosproizvoditel'nuyu funktsiyu korov (influence of vitadaptin on reproductive functions in cows), Veterinariya, 2010, No. 12, pp. 12-13.
9. Ibishov D. F. Vozrastnye aspekty nakopleniya tyazhelykh metallov v organizme krupnogo rogatogo skota v kho-zyaistvakh Permskogo kraya (Age aspects of accumulating heavy metals in bodies of cattle in the farms of Permskii krai), Voprosy normativno-pravovogo regulirovaniya v veterinarii, Saint Petersburg, Izd-vo: Sankt-Peterburgskoi gos. akad. veteri-nar. med., 2010, pp 196-198.
10. Lamonov S., Pogodaev S. Stressoustoichivost' i udoi (Stress resistance and milk yield), Zhivotnovodstvo Rossii, 2005, No. 1, P. 33.
11. Pas'ko N. V. Peroksidnoe okislenie lipidov, antioksidantnaya sistema i oksid azota pri poslerodovykh narusheni-yakh sokratitel'noi funktsii matki u korov (Lipids peroxide oxidation, antioxidation system and nitrogen oxide in postpartum distortion of uterus contractive function in cows), avtoref. dis. ... kand. biol. nauk [Vseros. NII patologii, farmakologii i tera-pii RASKhN], Voronezh, 2009, 21 p.
12. Reinald Pamplona, David Costantini, Molecular andstructural antioxidant defenses against oxidative stress in animals, American Journal of Physiology - Regulatory, Integrative and Comparative Physiology Published 1 October 2011, Vol. 301 no. 4, R843-R863 DOI:10.1152 / ajpregu.00034. 2011.
13. Vnutrennie nezaraznye bolezni sel'skokhozyaistvennykh zhivotnykh (Internal non-contagious diseases of domestic animals), I. G. Sharabrin [etc.], pod red. I G. Sharabrina, izd. 6-e, ispr. i dop., Moscow, Agropromizdat, 1985, 527 p.
УДК 616:578.81
ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ ПРОТЕЙНЫХ БАКТЕРИОФАГОВ
Е. О. Чугунова, канд. ветеринар. наук, доцент;
Н. А. Татарникова, д-р ветеринар. наук, профессор,
ФГБОУ ВО Пермская ГСХА,
ул. Петропавловская, 23, г. Пермь, Россия, 614990
E-mail: chugunova.elen@yandex.ru, tatarnikova.n.a@yandex.ru
Аннотация. Лабораторные испытания проводились в Пермском крае в 2014-2015 гг. Материалом для исследования служили штаммы Proteus spp., Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, выделенные из мясной продукции (мясо птицы, говядина, свинина, субпродукты, полуфабрикаты), а также Salmonella spp., Shigella flexneri, Escherichia coli, полученные из Федерального государственного бюджетного учреждения «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения России. При работе использовали традиционные приемы обогащения по методу Адамса. Для очистки фаголизата от бактерий и их обломков проводили предварительную механическую фильтрацию через ватно-марлевый, а затем через бумажный фильтр «белая лента». Далее осуществляли прогрев лизата при 60°С в
течение 30 мин, центрифугирование материала 20 мин при 3000 об/мин и фильтрацию через мембранные фильтры. В результате исследований с помощью спот-теста определены лизаты, содержащие бактериофаги, активные в отношении Proteus spp. Свойства фагов изучали, предварительно получив их чистые линии и повысив литическую активность. Также проведен анализ их чувствительности, установлена активность выделенных бактериофагов на жидких и твердых питательных средах. В первую очередь определяли специфическую активность полученных бактериофагов по методу Аппельмана. Концентрацию фаговых частиц в фаголизате определяли на двухслойном агаре по методу А. Gratia. При анализе полученных результатов установлено, что все изучаемые бактериофаги проявили специфическую активность в отношении протея и не вызывали лизис прочих взятых в опыт микроорганизмов. В результате получены четыре чувствительных и специфичных в отношении Pr. vulgaris и Pr. mirabilis фаголизата. Три из них на мясо-пептонном бульоне проявили хорошую активность к соответствующим бактериям. При изучении титра на двухслойном агаре по методу Грациа корпускулы фагов удалось посчитать у трех фаголизатов из четырех. Данный фаголизат показал титр по Аппель-ману 10- , по Грациа - способствовал формированию 3,6х10 корпускул фагов. Выявлено, что за период хранения при 4°С (срок наблюдения - 13 мес.) титр бактериофагов не изменился, также сохранены их литические свойства в отношении Proteus spp.
Ключевые слова: бактериофаги, бактерии рода Proteus, спот-тест, специфичность, чувствительность, титр по Аппельману и Грациа.
Введение. Бактериофаг - ультрамикроскопический, внутриклеточный облигатный паразит-вирус, лизирующий бактерии и акти-номицеты [1, 2]. Ему присуща наследственность, изменчивость, приспособляемость и другие свойства вирусов. Каждая фаговая частица (вирион) содержит геном, представленный молекулой ДНК или РНК. Однако роль РНК бактериофагов еще не достаточно изучена [3]. Бактериофаги широко распространены в природе. Почти везде, где условия обитания благоприятны для размножения бактерий и актиномицетов, удается обнаружить паразитирующие в их клетках бактериофаги. Они поражают более 140 различных родов бактерий [4, 5]. Специфическое взаимодействие бактериофагов с бактериальной клеткой-хозяином дает непосредственную возможность использовать их для идентификации бактерий, в том числе патогенных. В отличие от множества искусственно созданных систем для определения и дифференциации различных структур бактериальных клеток, основанных на использовании антител или на амплификации, бактериофаг, естественно возникнув в ходе эволюции, специфически распознает свои рецепторы и связывается исключительно с клетками своего хозяина. Это взаимодействие используется в целом ряде различных методик специфического определения и дифференциации штаммов бактерий-хозяев бактериофагов [6, 7, 8, 9]. Поэтому мы считаем
весьма актуальным выделение и получение фагов с высокой активностью для последующего применения их в лабораторной практике для фаготипизации бактерий.
Цель работы - выделить бактериофаги с высокой активностью в отношении бактерий рода Proteus.
Задачи исследований:
1. Получить фаголизат специфичный и чувствительный в отношении бактерий рода Proteus;
2. Установить титр выделенных бактериофагов.
Методика. Материалом для исследования служили штаммы Proteus spp., S. aureus, L. monocytogenes, выделенные из мясной продукции (мясо птицы, говядина, свинина, субпродукты, полуфабрикаты), а также Salmonella spp., Sh. flexneri, E. coli, полученные из ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России.
Для выделения изолятов фагов бактерий рода Proteus пользовались традиционными приемами обогащения по методу Адамса: пробы обогащали типичными по культураль-ным, морфологическим, ферментативным и серологическим свойствам бактериями рода Proteus в логарифмической фазе роста и засевали на мясо-пептонный бульон (МПБ). Всего было собрано 10 фаголизатов. Далее среду фильтровали через ватно-марлевый и бумажный фильтры, прогревали в циркуляционном
термостате TW2.02 (Латвия) при температуре 60°С в течение 30 мин, затем центрифугировали 20 мин при 3000 об/мин. Для стерилизации культур по рекомендации Адамса (1961) [10] добавляли хлороформ в соотношении 1 капля на 10 см фаголизата. Очистку бактериофага от бактериальных клеток, эндотоксина и балластных веществ осуществляли осветляющей микрофильтрацией через мембраны Владипор марки МФАС-ОС-3 с размером пор 0,8 мкм, затем - МФАС-ОС-2 с размером пор 0,45 мкм, которые представляют собой мелкопористый пленочный материал, изготовленный на основе смеси ацетатов целлюлозы. В итоге фаголизаты подвергали стерилизующей фильтрации с помощью фильтрующей насадки фирмы MШipore Millex-GP с полиэфирсульфоно-вым наполнителем и диаметром пор 0,22 мкм.
Результаты. Наличие фагов в собранных лизатах определяли спот-тестом. Для этого на
Бактериофаг № 1 вызвал полный лизис Pr. vulgaris, а при взаимодействии с культурой Pr. мirabilis было отмечено образование плохо различимых зон стерильности с большим количеством вторичного роста. Лизат № 4 показал хорошие литические свойства в отношении обоих видов протея. Фаги лизатов №№ 3 и 8 дали наличие еле уловимых признаков ли-
При анализе полученных результатов установлено, что выделенные бактериофаги в 100 % случаев лизировали соответствующие бактерии.
Далее мы проверили специфичность выделенных бактериофагов, и кроме соответ-
газон соответствующих микроорганизмов наносили каплю испытуемого лизата, инкубировали в течение 24±2 часов при 37°С. По истечении указанного времени просматривали чашки и отмечали наличие зон лизиса. Одновременно определили чувствительность протея к бактериофагам и установили специфичность полученных фагов.
При оценке чувствительности за полный лизис принимали прозрачные стерильные пятна без колоний вторичного роста. Зону стерильности с единичными колониями оценивали как значительный лизис культуры. При образовании стерильного пятна с большим количеством вторичного роста фиксировали лизис культуры, наличие еле уловимых признаков лизиса интерпретировали как слабый лизис. В случае нечувствительности микроорганизмов к испытуемым бактериофагам отмечали отсутствие лизиса (табл. 1).
зиса. В лизатах №№ 2, 5...7, 9 и 10 наличие фагов не выявлено. Дальнейшую работу проводили с лизатами №№ 1, 3, 4 и 8.
Кроме чувствительности на твердых питательных средах был изучен диапазон лити-ческой активности. Результаты представлены в таблице 2.
ствующих микроорганизмов в исследование взяли Salmonella spp., E. coli, Sh. flexneri, S. aureus, L. monocytogenes (табл. 3).
Таблица 1
Оценка чувствительности протейных фагов
Вид и серотип возбудителя Номер фаголизата
1 3 4 8
Pr. vulgaris ++++ + +++ +
Pr. mirabilis ++ ++ +++ +
Учет результатов: + + + + полный лизис; + + + значительный лизис культуры; ++ лизис культуры; + слабый лизис; - отсутствие лизиса
Таблица 2
Диапазон литической активности фагов в отношении Proteus spp.
Номер фаголизата Вид возбудителя %
Pr. vulgaris Pr. mirabilis
1 + + 100,0
3 + + 100,0
4 + + 100,0
8 + + 100,0
Таблица 3
Специфичность бактериофагов в отношении Proteus spp.
Номер фаголизата Вид возбудителя
Proteus spp. Salmonella spp. E. coli Sh. flexneri S. aureus L. monocyt.
1 + - - - - -
3 + - - - - -
4 + - - - - -
8 + - - - - -
Примечание: + возбудитель чувствителен к испытуемому бактериофагу;
- возбудитель нечувствителен к испытуемому бактериофагу.
Все изучаемые бактериофаги проявили специфическую активность в отношении протея и не вызывали лизис прочих взятых в опыт микроорганизмов.
Свойства фагов изучали, предварительно получив их чистые линии и повысив литиче-скую активность. Для этого фаголизат засевали по методу агаровых слоев, подбирая такое разведение, чтобы на чашке сформировались отдельные колонии. Одну из них, расположенную отдельно на расстоянии не менее 10 мм от других колоний, брали пастеровской пипеткой и помещали в МПБ с чистой культурой бактерий. Инкубировали при 37°С в течение 18 (± 2) часов, и на следующий день проводили вышеописанную процедуру очистки. Полученную жидкость вновь испытывали по методу агаровых слоев и отбирали колонию, идентичную предыдущей, с которой проделывали такую же операцию. Так поступали 5-7 раз подряд, добиваясь получения чистой линии фага с высокой литической активностью.
Как следует из таблицы 4, бактериофаг № 1 вызвал лизис Pr. vulgaris в высоких титрах, титр в отношении Pr. mirabilis составил всего 10" . Аналогичный результат получили при работе с фагом № 4, который показал титры 10"8 и 10"1, соответственно. Лизат № 3 в отношении Pr. mirabilis показал титр 10"6, а Pr. vulgaris лизировал только во втором разведении. Фаголизат № 8 проявил слабую активность на МПБ: лизис Pr. vulgaris в четвер-
При сравнении активности некоторых фагов, установленной в жидких и твердых питательных средах, возможно резкое несоответствие полученных данных [2].
В первую очередь определяли специфическую активность полученных бактериофагов по методу Аппельмана [11]. Для этого брали 12 пробирок и наливали по 4,5 см3 МПБ. В первую пробирку вносили 0,5 см3 испытуемого фага. Затем делали последовательные разведения, перенося отдельными пипетками из пробирки в пробирку по 0,5 см фага. Из десятой пробирки лишние 0,5 см3 выливали, затем во все пробирки вносили по одной капле 18-часовой бульонной культуры. 11-я и 12-я пробирки являлись контрольными: в 11-й пробирке -бульон и культура (без фага), в 12 -й — один бульон (контроль на стерильность). Все 12 пробирок помещали в термостат при 37°С на 18 часов. Титр устанавливали при встряхивании по последней прозрачной пробирке и выражали в разведении фага (табл. 4).
том разведении и отсутствие активности в отношении Pr. mirabilis.
Концентрацию фаговых частиц в фаголи-зате определяли на двухслойном агаре по методу А. Gratia [12]. Для этого использовали 1,5% МПА, который разливали по чашкам и высушивали в ламинарном боксе под бактерицидной лампой в течение 2-2,5 часов. Затем закрывали крышками и в перевернутом виде оставляли на ночь. Предварительно разлитый
Таблица 4
Активность бактериофагов на жидкой питательной среде
Номер фаголизата Вид возбудителя
Pr. vulgaris Pr. mirabilis
1 <10"1U 10-3
3 10-2 10-6
4 10-8 10-1
8 10-4 -
в пробирки 0,7% агар в количестве 2,5 см3 расплавляли в циркуляционном термостате TW 2.02 и доводили до температуры 46-47°С. Исследуемый фаг в количестве 1 см3 наливали в 2,5 см3 0,7% агара, добавляли 0,1 см3 эталонной культуры, все быстро и тщательно перемешивали и выливали на поверхность 1,5% агара. Смесь осторожными движениями распределяли по поверхности 1,5% агара, чашки для затвердения оставляли в ламинарном боксе на 1,5 часа, а затем инкубировали в термостате при 37°С. Через 5-6 часов подсчитывали
количество колоний фага. Полученное число умножали на фактор разведения.
По данным таблицы 5 видно, что лизаты №№ 1 и 3 сформировали негативные колонии как с Pr. vulgaris, так и с Pr. mirabilis. Бактериофаг № 4 в восьмом разведении образовал 13 негативных колоний на чашке с Pr. vulgaris, но при этом не смог лизировать Pr. mirabilis. При работе с фаголизатом № 8 не удалось добиться формирования негативных колоний.
Таблица 5
Активность бактериофагов на твердой питательной среде
Номер фаголизата Вид возбудителя
Pr. vulgaris Pr. mirabilis
1 1,5х109 1,6х103
3 2,8х104 4,8х107
4 1,3х109 -
8 - -
Выводы. В результате проведенной работы нами получены четыре чувствительных и специфичных в отношении Pr. vulgaris и Pr. mirabilis фаголизата. Три из них на МПБ проявили хорошую активность к соответствующим бактериям. При изучении титра на двухслойном агаре по методу Грациа корпускулы фагов удалось посчитать у трех фаголизатов из четырех. Необходимо отметить, что лизаты №№ 1 и 3 сформировали негативные колонии на агаре с Pr. vulgaris и Pr. mirabilis, тогда как лизат № 4 образовал колонии только на чашке с Pr. vulgaris. Исходя из полученных резуль-
татов, для дальнейшей работы рекомендуем использовать объединенный фаголизат, состоящий из лизатов №№ 1, 3 и 4. Данный фаголизат показал титр по Аппельману 10-9, по Грациа - способствовал формированию 3,6х1010 корпускул фагов; вызывал полный или значительный лизис культур протея, выделенного из мясных куриных продуктов (n=62). Необходимо отметить, что за период хранения при 4°С (срок наблюдения - 13 мес.) титр бактериофагов не изменился, также сохранены их литические свойства в отношении Proteus spp.
Литература
1. Адамс М. Бактериофаги. М. : Изд-во иностранной литературы, 1961. 527 с.
2. Тимаков В. Д., Гольдфарб Д. М. Основы экспериментальной медицинской бактериологии. М. : Медгиз, 1958. 347 с.
3. Krishnamurthy S. R., Janowski A. B., Zhao G., Barouch D., Wang D. Hyperexpansion of RNA Bacteriophage Diversity. [электронный ресурс] http://dx.doi.org/10.1371/journal.pbio.1002409 (дата обращения: 28.03.2016).
4. Ackermann H. W., Dubow M. S. Viruses of prokaryotes. V.1. General properties of bacteriophages. CRC Press, Boca Raton, FL., 1987. Р. 96.
5. Руководство по медицинской микробиологии. Книга I. Общая и санитарная микробиология / Под ред. А. С. Лабинской, Е. Г. Волиной. М. : Изд-во БИНОМ, 2008. 1080 с.
6. Бактериофаги: биологическое и практическое применение / Под ред. Э. Катер, А. Сулаквелидзе. М. : Научный мир, 2012. 640 с.
7. Акимкин В. Г., Дарбеева О. С., Колков В. Ф. Бактериофаги: исторические и современные аспекты: опыт и перспективы // Клиническая практика. 2010. № 4. С. 48-54.
8. Коритняк Б. М. Изучение биологических свойств выделенных бактериофагов Yersinia enterocolitica и разработка на их основе технологии индикации и идентификации возбудителя кишечного иерсиниоза : дисс. ... канд. биол. наук. Ульяновск, 2005. 164 с.
9. Пульчеровская Л. П. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Citrobacter и их применение в диагностике : дис. ... канд. биол. наук. Ульяновск, 2004. 186 с.
10. Adams M. M. Bakteriophages. NewYork, 1961. P. 528.
11. Ганюшкин В. Я. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии : учебное пособие. Ульяновск, 1988. - 84 с.
12. Gratia A. Pes relation numerigues entre bacterins lysogenes et particules de bacteriophage // Ann. Instit. Pasteur. 1936. Vol. 57 (6). P. 652-676.
STUDYING OF PROTEUS BACTERIOPHAGES PROPERTIES
E. O. Chugunova, Cand. Vet. Sci., Associate Professor
N. A. Tatarnikova, Dr. Vet. Sci., Professor
Perm State Agricultural Academy
23 Petropavlovskaya St., Perm 614990 Russia
E-mail: chugunova.elen@yandex.ru, tatarnikova.n.a@yandex.ru
ABSTRACT
Laboratory research was carried out in Permskii krai in 2014-15. The material for research were strains of Proteus spp., Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes allocated from meat production (fowl, beef, pork, an offal, semi-finished products), and also Salmonella spp., Shigella flexneri, Escherichia coli received from the Federal State Scientific Center. Traditional methods of enrichment by Adams's method were used during the work. Lysate was purified from bacteria and their fragments by preliminary mechanical filtration through a gauze and cotton filter, and then through the paper filter "White band". Then it was warmed-up at 60 °C for 30 min, centrifuged for 20 min at 3000 revolutions in minute and filtrated through membrane filters. As a result of research the lysates containing active Proteus spp. bacteriophages are defined by the spot-test. Properties of phages were studied, previously having received their pure lines and having increased lytic activity. Also the analysis of their sensitivity, activity on liquid and firm nutrient mediums was carried out. First we determined specific activity of the received bacteriophages by Appelman's method. Concentration of bacteriophages in a lysate was determined on a two-layer agar by A. Gratia method. Four sensitive and specific for Pr. vulgaris and Pr. mirabilis lysates were received as a result of the work. Three of them have shown good activity to the Proteus spp on peptone broth. The corpuscles of phages on a two-layer agar were were possible to calculate in three lysates from four. Appelman's titer was 10-9. Gratia's had 3.6 x 1010 corpuscles of phages. It should be noted that during storage at 4°C (supervision term - 13 months) the caption of bacteriophages did not changed, their lytic properties concerning Proteus spp. were also kept.
Key words: bacteriophages, Proteus spp., spot test, specificity, sensitivity, Appelman and Gratia titers.
References
1. Adams M. Bakteriofagi (Bacteriophages), Moscow, Izd-vo inostrannoi literatury, 1961, 527 p.
2. Timakov V. D., Gol'dfarb D. M. Osnovy eksperimental'noi meditsinskoi bakteriologii (Basis of experimental medical bacteriology), Moscow, Medgiz, 1958, 347 p.
3. Krishnamurthy S. R., Janowski A. B., Zhao G., Barouch D., Wang D. Hyperexpansion of RNA Bacteriophage Diversity, [elektronnyi resurs] http://dx.doi.org/10.1371/journal.pbio.1002409 (data obrashcheniya: 28.03.2016).
4. Ackermann H. W., Dubow M. S. Viruses of prokaryotes, V.1, General properties of bacteriophages, CRC Press, Boca Raton, FL., 1987, P. 96.
5. Rukovodstvo po meditsinskoi mikrobiologii (Guide on medical microbiology. General and sanitary microbiology.), Kniga I. Obshchaya i sanitarnaya mikrobiologiya, Pod red. A. S. Labinskoi, E. G. Volinoi, Moscow, Izd-vo BINOM, 2008, 1080 p.
6. Bakteriofagi: biologicheskoe i prakticheskoe primenenie (Bacteriophages: biological and practical application), Pod red. E. Kater, A. Sulakvelidze, Moscow, Nauchnyi mir, 2012, 640 p.
7. Akimkin V. G., Darbeeva O. S., Kolkov V. F. Bakteriofagi: istoricheskie i sovremennye aspekty: opyt i perspektivy (Bacteriophages: historical and modern aspects: experience and prospects), Klinicheskaya praktika, 2010, No. 4, pp. 48-54.
8. Koritnyak B. M. Izuchenie biologicheskikh svoistv vydelennykh bakteriofagov Yersinia enterocolitica i razrabotka na ikh osnove tekhnologii indikatsii i identifikatsii vozbuditelya kishechnogo iersinioza (Studying of biological properties of the allocated Yersinia enterocolitica bacteriophages and development on their basis of indication and identification technology), diss. ... kand. biol. nauk, Ulyanovsk, 2005, 164 p.
9. Pul'cherovskaya L. P. Vydelenie i izuchenie osnovnykh biologicheskikh svoistv bakteriofagov Citrobacter i ikh primenenie v diagnostike (Allocation and studying of the main biological properties of Citrobacter bacteriophages and their application in diagnostics), dis. ... kand. biol. nauk, Ul'yanovsk, 2004, 186 p.
10. Adams M. M. Bakteriophages, NewYork, 1961, P. 528.
11. Ganyushkin V. Ya. Bakteriofagi sal'monell i ikh primenenie v veterinarii (Bacteriophages of Salmonella spp. and their application in veterinary science), uchebnoe posobie, Ul'yanovsk, 1988, 84 p.
12. Gratia A. Pes relation numerigues entre bacterins lysogenes et particules de bacteriophage, Ann. Instit. Pasteur., 1936, Vol. 57 (6), pp. 652-676.
