CC BY
54
department Bureau of Forensic Medicine of Moscow region.
Keywords: ethanol, analysis, blood, urine, vitreous humour
ВВЕДЕНИЕ
Определение алкоголя в биопробах имеет большое значение в установлении причины смерти и влияния на поведение человека. Преимущественным объектом исследования является кровь. Однако, важное значение имеет исследование других жидкостей биологического происхождения, в том числе мочи и внутриглазной жидкости. Концентрация этанола в различных объектах важна также при установлении стадии резорбции и элиминации. Содержание алкоголя в пробах зависит от многих факторов, в том числе от времени, техники и места взятия проб, времени между смертью, аутопсией и анализом, диффузии, окружающих условий, присутствия микроорганизмов, состояния ферментативной системы, наличия углеводов в диете, условий хранения проб. Несмотря на большое число проводимых анализов по определению алкоголя в объектах биологического происхождения, этот вид анализа, по-прежнему, не является простым и требует внимательного изучения.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
В судебно-медицинской и химико-токсикологической практике за рубежом с целью определения содержания алкоголя (измерение массовой концентрации этанола) в крови и других объектах биологического происхождения используется газохроматографический метод анализа равновесного пара при помощи газового хроматографа с пламенно-ионизационным детектором (ПИД), укомплектованного автоматическим дозатором с применением газоплотного шприца с минимальной пробоподготов-кой. Метод позволяет одновременно идентифицировать и количественно определить не только алкоголь, но и другие летучие вещества без предварительного образования производных.
Метод включает работу двух хроматографов в одинаковых условиях с разными внутренними стандартами (1-пропанол - на одном и 2-бутанол - на другом). Каждый из хроматографов укомплектован двумя пламенно-ионизационными детекторами, двумя капиллярными колонками со специальной фирменной фазой «Agilent Technologies' для исследования алкоголя в крови DB-ALC-1(#125-9134) (30 м х 0,53 мм, толщина пленки 3 цт) и DB-ALC-2 (#125-9234) (30 м х 0,53 мм, толщина пленки 2 цт), соединенными через сплитер Graphpack divider Gerstel в единый инжектор. Автосамплер обеспечивает пропускную способность хроматографической системы со временем анализа тестовых веществ в пределах 5 мин. Результаты достоверны, исследование для обеих линий проводится сразу на двух разных колонках с различной элюирующей способностью, что повышает идентификационный эффект.
ВЫВОДЫ
Методика имеет преимущество по сравнению с алкил-нитритным методом возможностью обнаружения в пробах одновременно с алкоголем других летучих веществ при острых отравлениях, например, при вдыхании газов и легколетучих растворителей токсикоманами, при случайном или преднамеренном отравлении. Некоторые вещества метаболизируются, и их метаболиты можно идентифицировать в крови и моче (например, ацетальдегид).
Таким образом,
• на двух колонках получено полное разделение шести веществ;
• хорошая разрешающая способность позволяет разделять и идентифицировать основные низкомолекулярные летучие вещества. Проверено влияние 32 веществ. Установлено, что ацетон элюируется с ацетонитрилом, а МЭК с этилацетатом на колонке ОБ-АЬС-1, но на колонке ОБ-АЬС-2 все они разделяются; не установлено других веществ, элюирующихся с аналитами на обеих колонках;
• метод имеет преимущества по сравнению с забором парогазовой фазы после переведения в алкилнитриты и ввода в инжектор ручным способом;
• определение алкоголя в пробе одновременно в двух хроматографических системах обеспечивает надежность получаемого результата.
Проверка работы системы комплекса приборов в течение 3 месяцев показала увеличение суточной пропускной способности анализа проб для обнаружения, идентификации и определения содержания алкоголя в крови и других жидких средах организма.
Результаты, полученные с помощью газовых хроматографов, укомплектованных двумя колонками и двумя пламенно-ионизационными детекторами и соответствующей методологией, подтверждают, что эта система может успешно использоваться для анализа алкоголя в биожидкостях.
Преаналитический этап производства судебмо-химической экспертизы (исследования) биологических объектов живых лиц
• Н. А. Крупина, Р.Р. Краснова, В.В. Гайдичук
ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» МЗ МО (нач.— д.м.н., проф. В. А. Клевно) Аннотация: Доклад посвящен рекомендациям по отбору биологического материала, его упаковке, хранению, доставке для проведения су-дебно-химических, химико-токсикологических исследований и судебно-химических экспертиз. Ключевые слова: преаналитический этап, судебно-химическая экспертиза, биологические объекты
Preanalytical stage of forensic chemical investigations of specimen of alive persons
• N. A. Krupina, R. R. Krasnova, V. V. Gaidichuk Abstract: The report focuses on the recommendation for specimen selection, sampling, storage of them for hospital toxicology, drugs of abuse testing in biological fluids, alcohol, drugs and driving cases, workplace drug testing.
Keywords: preanalytical stage, forensic laboratories, biological objects
ВВЕДЕНИЕ
Изучена литература и предложены правила забора, упаковки, направления, хранения, доставки из медицинских организаций Московской области биологического материала от живых лиц для проведения в ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» судебно-химических и химико-токсикологических исследований (СХ и ХТИ) и судебно-химиче-ских экспертиз (СХЭ) с целью определения алкоголя, летучих и технических жидкостей, наркотических средств, лекарственных, психотропных и других токсических веществ, карбоксигемоглобина.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Судебно-химические и химико-токсикологические исследования биологических объектов живых лиц (кровь, моча, рвотные массы, промывные воды желудка, слюна, волосы, ногти) на наличие потенциально токсичных веществ по направлениям врачей медицинских учреждений Московской области и сотрудников правоохранительных учреждений Московской области осуществляются в судебно-химическом отделе и районных судебно-хи-мических отделениях ГБУЗ МО «Бюро СМЭ. В 2014 году в ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» зарегистрировано и проведено 31514 судебно-химических исследований (экспертиз) биообъектов живых лиц.
Предлагаемые правила регламентируют забор, упаковку, направление, хранение, доставку из медицинских организаций Московской области биологического материала от живых лиц для проведения в ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» судебно-химических и химико-токсикологических исследований с целью обнаружения алкоголя, летучих и технических жидкостей, наркотических средств, лекарственных, психотропных и других токсических веществ.
Разработаны требования по отбору и инструкции по технике взятия крови, мочи, промывных вод желудка, слюны, волос, ногтей.
Предложены формы направлений для проведения СХИ. Изложены требования по маркировке и упаковке, хранению и доставке биологических объектов для проведения СХ и ХТИ и СХЭ.
ВЫВОДЫ
В целях организации работы по забору, упаковке, направлению, хранению, доставке из медицинских организаций Московской области биологического материала от живых лиц для проведения в ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» судебно-химических и химико-токсикологических исследований с целью обнаружения алкоголя, летучих и технических жидкостей, лекарственных, наркотических, психотропных и других токсических веществ подготовлен проект приказа Министерства здравоохранения Московской области.
I Количественное определение амфетамина, метамфетамина, МОА, МАМА, МОЕА, МБОБ в биожидкостях методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором
• Н. А. Крупина, М. В. Марченко, Р. Р. Краснова ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» МЗ МО (нач.— д.м.н., проф. В. А. Клевно) Аннотация: Доклад посвящен хромато-масс-спектрометрическому методу определения амфетамина, метамфетамина, 3,4- метилендиоксиамфетамина (МДА), 3,4- метилендиоксиметамфетамина (МДМА), 3,4-метилендиоксиэтиламфетамина (МДЕА), 1-(1,3-бензодиоксол-5-ил)-^метилбутан-2-ами-на (МБДБ) в моче с использованием в качестве калибраторов поверочных контролей мочи с целевыми значениями каждого из соединений; амфетамина и МДМА в крови с использованием в качестве калибраторов - стандартных растворов амфетамина и МДМА. Ключевые слова: амфетамин, метамфет-амин, МДА, МДМА, МДЕА, МБДБ, газовая хроматография с масс-селективным детектором, жидкость - жидкостная экстракция
Quantitative determination of amphetamine, metamfetamine, MDA, MDMA, MDEA, MBDB in biological fluids by gas chromatography / mass-spectrometry (GC / MS)
• N. A. Krupina, M. V. Marchenko, R. R. Krasnova Abstract: The report focuses on GC/MS method for the determination of amphetamine, methamphetamine, MDA, MDMA, MDEA, MBDB in urine using as calibrators - urine calibration controls with target values of each + 25% and -25% from cut-off values (MEDICHEM); amphetamine and MDMA in the blood using as calibrators - standard solutions of amphetamine and MDMA (GosNIIOKHT). Keywords: amphetamine, methamphetamine, MDA, MDMA, MDEA, MBDB, GC / MS, liquid -liquid extraction
ВВЕДЕНИЕ
На протяжении последних десятилетий проведение исследований объектов биологического происхождения на соединения класса амфетаминов не теряет своей актуальности. Надежным и наиболее распространенным методом идентификации и определения таких соединений является газовая хроматография с масс-селективным детектором с применением процедуры жидкость-жидкостной экстракции.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
По отчетным данным судебно-химического отдела ГБУЗ МО Бюро СМЭ за 2014 год количество случаев обнаружения различных соединений класса амфетаминов при аналитической диагностики наркотического опьянения у живых лиц составляет 1630 случаев, что составляет 18% от общего числа обнаруженных наркотических средств и занимает 3 место после наркотических веществ группы опия и каннабиноидов. По сравнению с 2004 годом количество обнаружений соединений класса амфетаминов у живых лиц выросло в 13 раз. Количество случаев их обнаружения за 2014 год в трупном материале составляет 162 случая, что составляет 6% от общего числа обнаруженных наркотических средств и занимает также 3 место после наркотических веществ группы опия и каннабинои-дов.
Процедура подготовки биологических жидкостей основана на жидкость - жидкостной экстракции с последующим проведением дериватизации с использованием пентафторпропионового ангидрида (ПФПА). ПФПА производные амфетамина, метамфетамина, МДА, МДМА, МДЕА, МБДБ идентифицируют и определяют методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором в режиме сканирования индивидуальных ионов (SIM) по масс-спектрам электронного удара методом внутреннего стандарта. Для количественного определения амфетамина, метамфетамина, МДА, МДМА, МДЕА, МБДБ в моче используют в качестве калибраторов поверочные контроли мочи с целевыми значениями каждого из производных фенилалакиламина (Drug U-Confirmation фирмы MEDICHEM) в двухуровневой концентрации (концентрация добавленных веществ лежат в диапазоне -25% и +25% от пороговых значений (величины Cut-off). Для количественного определения амфетамина и МДМА в крови используют в качестве калибраторов стандартные растворы амфетамина и МДМА (ФГУП ГосНИИОХТ).
Методика подготовки биологических жидкостей: по 1 мл мочи / крови вносят в пробирки, добавляют по 1 мл дистиллированной воды, пробирки герметично закрывают и выдержали на УЗ-бане 30 минут при комнатной температуре. К гидролизатам добавляют по 50 мкл р-ра 3-фе-
