CC BY
78
УДК 615.451.16.012/.014
ПОЛУЧЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ ЭКСТРАКТОВ ЛИСТЬЕВ ЛУКА МЕДВЕЖЬЕГО И ЛУКА ПОБЕДНОГО
Манукян1 К.А., Айрапетова2А.Ю., Шаталова2 Т.А.
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Пятигорский государственный научно-исследовательский институт курортологии ", г. Пятигорск, Россия
2Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздрава России г. Пятигорск, Россия
Аннотация. Научно-обоснована и разработана технология получения жидких спиртовых экстрактов из свежесобранного сырья: двух видов черемши - лука медвежьего, собранного на Северном Кавказе, и лука победного (черемши), заготовленного в Алтайском крае в 2015 году. Экстракт получали из свежего измельченного сырья методом трехступенчатой экстракции (ремацерации). В качестве экстрагента использовали спирт этиловый 90%. Сырье оценивали по показателям: содержание влаги, золы общей и нерастворимой в кислоте хлористоводородной, серосодержащих соединений, хлорофилла, каротиноидов, экстрактивных веществ. Оценку качества полученных экстрактов проводили по внешнему виду, содержанию сухого остатка, содержанию серосодержащих соединений, каротиноидов, концентрации спирта, хлорофилла. Антиоксидантную активность (АОА) полученных экстрактов черемши определяли с использованием метода аскорбатзависимого пероксидного окисления липидов (ПОЛ), по снижению концентрации малонового диальдегида (МДА) в реакционной смеси. Выявлено, что спиртовые экстракты черемши обладают антиоксидантной активностью, превышающую активность экстракта чеснока посевного в среднем в 1,5 раза.
Ключевые слова. лук медвежий, лук победный, листья, экстракт жидкий, показатели качества, анти-оксидантная активность
В настоящее время особое внимание уделяется поиску растительных объектов с антиокси-дантным действием, изучению их активности [1]. Наиболее типичными представителями природных антиоксидантов являются полифенолы, аскорбиновая кислота, токоферолы, каротино-иды, группа серосодержащих соединений и др. [3]. Растениями, содержащими в своем составе практически все известные антиоксиданты, являются различные виды луков, в частности, Allium ursinum L. (лук медвежий или черемша европейская) и Allium victoraHs L. (лук победный или черемша сибирская)[1]. Однако, несмотря на это, черемша в России применяется только как пищевой продукт или в народной медицине. В связи с этим, возникает необходимость создания
новых лекарственных средств из лука медвежьего и лука победного. Поскольку, биологически активные вещества (БАВ) этих растений нестойки, быстро разрушаются при хранении и высушивании растительного сырья, разработка технологии экстрактов из свежего сырья, изучение их биологической активности является актуальной задачей.
Цель исследования. Изучение БАВ различных видов черемши, разработка технологии экстрактов из свежесобранных листьев лука медвежьего и лука победного, проведение оценки их качества и изучение антиоксидантного действия полученных экстрактов методом аскорбатзави-симого пероксидного окисления липидов (ПОЛ) [2].
Результаты исследования. В качестве объ- заготовленные в 2015 году в Алтайском крае. ектов исследования были выбраны листья двух Предварительно был проведен анализ свежего видов черемши - лука медвежьего, собранные на сырья обоих видов черемши. Результаты анализа Северном Кавказе, и лука победного (черемши), представлены в таблице 1.
Таблица 1
Основные показатели качества листьев лука медвежьего и лука победного
Показатели качества Листья лука медвежьего Листья лука победного
Органические сульфиды, мг% 450±18 560±21
Хлорофилл, мг% 12,84±0,29 14,16±0,34
Каротиноиды, мг% 12,35±0,35 14,17±0,36
Содержание влаги в сырье, % 86,21±0,42 84,47±0,44
Зола общая, % 9,45±0,28 9,78±0,27
Зола, нерастворимая в 10% растворе хлористоводородной кислоты, % 1,35±0,05 1,79±0,05
Экстрактивные вещества, % 20,18±9,93 22,67±9,39
Результаты исследований, представленные в таблице 1, показывают, что свежие листья обоих видов черемши содержат хлорофилл, каротино-иды, органические сульфиды.
Из свежего сырья были получены жидкие экстракты. В качестве способа экстрагирования была выбрана трехступенчатая экстракция (ре-мацерация). В качестве экстрагента использовали спирт этиловый 90%, который позволяет извлекать такие биологически активные вещества сырья, как органические сульфиды, хлорофилл, каротиноиды. Предварительные исследования [3, 5] позволили установить, что оптимальное время экстрагирования свежих листьев черемши на каждой ступени экстракции составило 3 часа. Экстракты черемши получали по нижеописанной методике. 100,0 г свежих, измельченных до кашицеобразного состояния листьев черемши,
Основные показатели качества экс
помещали в герметически закрывающийся пер-колятор, заливали 150 мл спирта этилового 90% и настаивали 3 часа при комнатной температуре. Полученную вытяжку сливали в отстойник, в перколятор помещали вторую порцию экстра-гента в количестве 75 мл и настаивание повторяли еще раз. По истечении 3-х часов вытяжку сливали в отстойник, и настаивание повторяли третий раз с 75 мл экстрагента. По окончании экстрагирования мезгу листьев черемши отжимали в прессе, отжим присоединяли к вытяжкам, собранным в общий отстойник. Экстракты отстаивали в течение 48 ч при температуре не выше 10°С. Полученные экстракты черемши представляли собой прозрачные жидкости темно-зеленого цвета с характерным чесночным запахом. Полученные жидкие экстракты оценивали по: внешнему виду, содержанию действующих веществ, спирта; сухому остатку (таблица 2).
Таблица 2
тов лука медвежьего и лука победного
Показатели качества Экстракт лука медвежьего жидкий Экстракт лука победногожидкий
Органические сульфиды, мг% 405±15 504±17
Хлорофилл, мг% 11,56±0,21 12,74±0,23
Каротиноиды, мг% 11,12±0,32 12,55±0,37
Содержание спирта, % 64,61±2,77 65,32±2,79
Сухой остаток, % 4,71±0,06 6,32±0,07
Результаты исследований, представленные в таблице 2, показывают, что экстракты обоих видов черемши содержат те же БАВ, что свежее сырье. Эффективность экстрагирования сырья составила 90%.
Антиоксидантную активность экстрактов лука медвежьего и лука победного (черемши) устанавливали с использованием метода аскор-батзависимого ПОЛ. Он основан на окислении липидов кислородом воздуха в разбавленных водных растворах остатков олеиновой кислоты в
присутствии твина-80 и кофакторов окисления -ионов железа (II) и аскорбиновой кислоты. При этом происходит снижение концентрации продукта окисления - комплекса малонового диаль-дегида (МДА) с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) (метод in vitro) [2]. Контролем служили пробы без добавления исследуемых образцов,
Влияние экстрактов черемши и чеснока
веществом сравнения - экстракт чеснока посевного. Степень снижения накопления МДА рассчитывали в процентах от контрольного опыта. Статистическую обработку результатов осуществляют с использованием критерия Стью-дента. Результаты влияния биологически активных соединений экстрактов на накопление МДА представлены в таблице 3.
Таблица 3
на накопление МДА в реакционной смеси
Образец экстракта % снижения МДА относительно контроля Достоверность различий (Р- относительно контроля, Р*-относительно экстракта чеснока)
Лук победный (образец черемши 1) 75,2 Р<0,05; Р*<0,05
Лук медвежий (образец черемши 2) 71,8 Р<0,05; Р*<0,05
Чеснок посевной 48,9 Р<0,05
Контроль 0 -
Примечание: Р- относительно контроля, Р*-отн
Результаты исследований, представленные в таблице 3, показывают, что экстракты обоих видов черемши обладают антиоксидантной активностью, превышающую активность экстракта чеснока посевного в 1,54 раза (экстракт лука победного) и в 1,47 раза (экстракт лука медвежьего).
Выводы. Разработана технология жидких экстрактов из двух видов черемши - лука медвежьего и лука победного. Проведена их оценка качества. Исследована суммарная антиоксидант-ная активность спиртовых экстрактов. Выявлено, что спиртовые экстракты черемши обладают антиоксидантной активностью, превышающую активность экстракта чеснока посевного в среднем в 1,5 раза.
ЛИТЕРАТУРА
1. Антирадикальная активность флавоноидов и других природных соединений на модельных системах разной сложности / Н.В. Кондакова,
гельно экстракта чеснока.
В.В. Сахарова, Н.В. Рипа, В.К. Колхир, НА. Тю-кавкина // Биоантиоксидант: труды международного симпозиума. Тюмень, 1997. С. 231-233.
2. Благородов С.Г., Шепелев А.П., Дмитриева Н.А. Определение антиокислительной активности химических соединений // Химико-фармацевтический журнал. 1987. Т.21. № 3. С.292-294.
3. Манукян К.А. Изучение биологически активных веществ листьев лука медвежьего (Allium ursinum L.) и создание лекарственного средства на их основе: дис.... канд. фарм. наук. Пятигорск, 2014.
4. Промышленная технология лекарств: в 2-х т. Т. 2/ В.И. Чуешов, О.И. Зайцев, СТ. Шеба-нова, М.Ю. Чернов - Харьков. МТК-Книга. Издательство НФАУ, 2002. 560 с.
5. Патент РФ 2559594 С1, МПК А61К 36/8962 Антиоксидантное средство из надземной части черемши (лука медвежьего или лука победного) /Манукян К.А., Аджиенко В.Л., Айра-петова А.Ю., Шаталова Т.А. (РФ). - Опубл. 10.08.2015. Бюл. №22. 6 с.
PREPARATION AND INVESTIGATION OF ANTIOXIDANT ACTIVITY OF EXTRACTS FROM LEAVES OF ALLIUM URSINUM L. AND АLLIUM VIC-TORАLIS L.
Manukyan1 K.A., Ayrapetovа2 AY., Shatalova2 T.A.
'Pyatigorsk Scientific and Research Institute of Balneology of the Federal Medico-Biological Agency", Pyatigorsk, Russia
2 Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute, a branch of "Volgograd State Medical University ", Pyatigorsk, Russia
Annotation. A technology for producing liquid alcohol extracts from freshly raw materials - of 2 types of ramson -Allium ursinum harvested in the North Caucasus and Allium victoralis, harvested in the Altai region in 2015 is science-based and developed. The extract obtained from the fresh leaves through the three-stage extraction (rematseratsiya) using 90% ethyl alcohol. The raw material was evaluated on parameters: moisture content, total ash and insoluble in hydrochloric acid, sulfur compounds, chlorophyll, carotenoids, extractives compounds.Quality evaluation of the obtained extracts was performed on parameters: estimating appearance, content of carotinoids and sulfur compounds, dry residue, the alcohol and chlorophyll concentration. Antioxidant activity (AOA) of the studied garlic extracts is determined using method of ascorbate lipid peroxidation by the decrease in the concentration of malondialdehyde (MDA) in reaction mixture. The effect of reducing the accumulation of MDA in the reaction mixture using ramson extracts exceeded garlic extract on average in 1,5 times.
Key words. Allium ursinum, liquid extract, bear's garlic, Allium victoralis, leaves, quality indicators, antioxidant activity
REFERENCES
1. The anti-radical activity of flavonoids and other natural compounds in model systems of varying complexity / N.V. Kondakova, V.V. Saharova, N.V. Ripa, V.K. Kolhir, N.A. Tyukavkina // Bioantioksidant: trudy mezhdunarodnogo simpoziuma. Tyumen', 1997, pp. 231233. (in Russian)
2. Blagorodov S.G., Shepelev A.P., Dmitrieva N.A. Determination of the antioxidant activity of chemical compounds // Himiko-farmacevticheskij zhurnal, 1987, vol.21, № 3, pp.292-294. (in Russian)
3. Manukyan K.A. The study of biologically active substances of bear's garlic leaves (Allium ursinum L.) and creation a drug based on them: Dis .... cand. Pharm. Sciences. - Pyatigorsk, 2014. (in Russian)
4. The industrial technology of drugs: in 2 vols. Vol. 2 / Chueshov V.I., Zaytsev O.I., Shebanova S.T., M.Y. Chernov - Kharkov, MTK-Kniga, Izdatel'stvo NFAU, 2002, p.560. (in Russian)
5. Patent RU 2559594 C1, MPK A61K 36/8962 Antioxidant means of the above-ground parts of ramson (Allium ursinum L. of Allium sativum L.)/ Manukyan K.A., Adzhienko V.L., Ayrapetova A.Y., Shatalova T.A.- Publ. 10.08.2015, bul. № 22, 6 p. (in Russian)
