CC BY
5
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
С.П. Свитина, Ж.Ю. Сидорова, Ю.С. Дрижун, А.А. Жернякова, И.И. Кострома, С.И. Капустин, С.В. Грицаев
ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ И АУТОЛОГИЧНАЯ ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ
МИЕЛОМОЙ
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии федерального медико-биологического агентства», г. Санкт-Петербург
Введение. Трансплантация аутологичных гемопоэтиче-ских стволовых клеток (ауто-ТГСК) у некоторых пациентов с множественной миеломой (ММ) не приводит к улучшению качества ответа, что может негативно отразиться на эффективности лечения. Участие некоторых цитокинов в регуляции кроветворения и иммунного ответа у больных ММ позволяет предположить их возможную роль в качестве негативных предикторов ответа на терапию.
Цель. Оценить влияние полиморфизма ряда генов иммунной системы (IL-6, TNF-A, IL-1B, IL-10) на эффективность ауто-ТГСК у пациентов с ММ.
Материалы и методы. В исследование включены 28 пациентов с Мм (15 мужчин и 13 женщин, средний возраст 53,7 ± 6,8 года), всем пациентам была проведена ауто-ТГСК. Улучшение качества ответа после первой ауто-ТГСК констатировано у 16 (57,1%) пациентов, тогда как у 12 (42,9%) больных улучшение качества ответа не наблюдалось. Генотипирование ал-лельного полиморфизма IL-6 -174G /С, TNF-A -308G/A, IL-1B -31T/C, IL-10 -592C/A проводили методом ПЦР-ПДРФ. Для выявления межгрупповых различий в распределении генотипов использовали точный метод Фишера, с определением коэффициента отношения шансов (OR - odds ratio) и р-значения.
Результаты. Частоты встречаемости генотипов Т№-А, 1В и ^-10 существенно не отличались в группах пациентов с или без улучшения качества ответа после ауто-ТГСК. Однако доля гомозигот по редкому аллелю -592А гена ^-10 была почти в 3 раза выше у пациентов с улучшением качества ответа, чем у пациентов без него (20,0% против 8,3% соответственно; р=0,12; OR=3,3). Частота встречаемости генотипа ^-1В -31ТТ также была увеличена в группе пациентов с эффективной ауто-ТГСК по сравнению с группой «без улучшения» (37,5% против 16,7%, соответственно; р=0,4; OR=3,0). Статистически значимое различие между группами пациентов было зафиксировано при оценке распределения генотипов ^-6. Доля носителей аллеля ^-6 -174С среди пациентов с улучшением качества ответа была почти в 2 раза выше (81,3% против 41,6% в группе без улучшения; р=0,05; OR=6,1).
Выводы. Результаты данного исследования позволили обнаружить возможную связь между полиморфизмом гена ^-6 -174G /С и эффективностью ауто-ТГСК у пациентов с ММ. Необходимы дальнейшие исследования, с расширением группы больных для уточнения значимости вариаций генов иммунной системы в прогнозировании эффективности ауто-ТГСК у пациентов с ММ.
Н.А. Северина, Ю.В. Сидорова, Б.В. Бидерман, Н.В. Рисинская, Е.Б. Ликольд, О.А. Глинщикова, А. С. Пшеничный,
А.Б. Судариков
СОПОСТАВЛЕНИЕ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДИК ВЫЯВЛЕНИЯ НЕСТАНДАРТНОЙ ВСТАВКИ ГЕНА NPM1 У БОЛЬНЫХ ОМЛ
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. №М1 (нуклеофозмин 1) - онкоген, состоящий из 12 экзонов, расположен в локусе 5q35. Мутация гена №М1 - самое частое генетическое нарушение при острых миелоидных лейкозах (ОМЛ), выявляется в 25-30% ОМЛ. До 90% мутаций приходится на 4-х нуклеотидную вставку в положении 956-959 экзона. 75-80% мутаций имеют вставку типа "А" - ТСТО, 10-14% приходится на вставки типа и "В" - ССТО и САГС. «Золотой стандарт» исследования мутаций гена №М1 - метод фрагмент-ного анализа (ФА). Для более точного определения стандартных вставок используют метод аллель-специфичной ПЦР (АС-ПЦР). Однако, встречаются нестандартные вставки, отличающиеся по длине, нуклеотидной последовательности и месту расположения от стандартных. Такие образцы требуют проведения секве-нирования для уточнения данных о наличии вставки.
Цель. Сопоставление данных различных методик выявления нестандартной вставки гена ЫРМ1 у больных ОМЛ и анализа ее последовательности.
Материалы и методы. Для анализа наличия и типа мутации гена ЫРМ1 исследовали ДНК пациентов с ОМЛ, наблюдавшихся в "НМИЦ Гематологии" в 2020г. При первичной диагностике методом ФА выявляли наличие вставки в 12 экзоне гена ЫРМ1. При отсутствии вставки выявляется 1 продукт длиной 330 пар нуклеотидов (нп), при наличии вставки выявляются 2 продукта, имеющих длину 330 и 334 нп, соответственно. ФА проводили в трех повторах для оценки воспроизводимости результатов и исключения артефактов. АС-ПЦР подтверждали наличие или отсутствие стандартной вставки. Если вставка не подтверждалась АС-ПЦР, данные образцы анализировались
методами секвенирования по Сэнгеру и/или следующего поколения (NGS).
Результаты. За 2020 г. после проведения ФА и АС-ПЦР было выявлено 15 случаев, когда по данным ФА был определен дополнительный продукт, но по результатам АС-ПЦР вставка не подтверждалась: 3 образца с мутантным пиком, отличающимся на 1 нуклеотид (+/-1нп) от дикого, 1 образец со вставкой +2 нп, 1 образец с делецией 4 нп, 10 пациентов со вставкой +4 нп. У всех 10 пациентов со стандартной картиной ФА (+4 нп) было подтверждено наличие вставки в 12 экзоне секвениро-ванием по Сэнгеру. При этом вставка имела либо нестандартную нуклеотидную последовательность, либо нестандартное расположение. В двух случаях из этих 10 было невозможно точно установить нуклеотидную последовательность вставки с помощью секвенирования по Сэнгеру из-за гетерогенности ПЦР-продукта. Наличие поли-Т фрагмента в интроне, близко расположенном к экзону гена №М1, затрудняет прочтение последовательности в обе стороны. У этих 2-х пациентов с помощью NGS выявили сложный характер изменений в 12 экзоне гена №М1 (вставка + делеция + нуклеотидные замены). В остальных 5 образцах при секвенировании по Сэнгеру и NGS не выявили вставок /делеций в экзоне. В одном образце была выявлена делеция 4-х нуклеотидов в интроне (в области поли-Т), которая могла привести к ложноположительной картине на ФА со смещением дикого и мутантого пиков относительно референсных значений. В 4х образцах с короткой вставкой/ делецией (1-2 нп) были выявлены нуклеотидные замены в интроне. Возможно, они приводили к изменению электрофо-
