CC BY
13
В сыворотке крови больных определяли уровень таких маркеров гемостатической формы ЭД, как тромбомодулин, О-димеры, РФМК и активность фактора фон Виллебранда, уровень провоспалительных цитокинов — TNF-a, ^-ф, ^-6 и острофазовых белков — С-реак-тивного белка, фибриногена, а также уровень маркера антивоспалительной резистентности — противовоспалительного цитокина ^-4. Группу контроля составляли 20 здоровых доноров.
Результаты и обсуждение. Были выявлены признаки гемостатической формы ЭД, такие как повышение уровня тромбомодулина (р<0,001), и активности фактора Виллебранда (р<0,001), по сравнению с группой контроля. При этом маркеры тромбинемии —— уровень D-димеров и РФМК — не отличались от значений контрольной группы (р>0,05),
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
что свидетельствует о компенсации ЭД. Выявлялись признаки СВР, проявляющиеся повышением уровня ^-6 и по сравнению со значениями контрольной группы (для обоих значений р<0,001), и ослаблением антивоспалительной резистентности в виде снижения уровня ^-4 в сыворотке крови по сравнению с группой контроля (р<0,01).
Заключение. Полученные данные свидетельствуют о наличии в данной группы больных гемостатической формы ЭД, минимально выраженной хронической СВР, а также значительном снижении антивоспалительной резистентности, что в целом поддерживает воспалительную трансформацию эндотелиоцитов, приводящую к ми-кроциркуляторным нарушениям и прогрессированию полиорганной недостаточности.
Сидорова Ю. В., Глинщикова О. А., Бидерман Б. В., Гаврилина О. А., Лукьянова И. А., Троицкая В. В., Паровичникова Е. Н., Судариков А. Б.
КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ МОНИТОРИНГ МУТАЦИИ ГЕНА ШИ1 ДЛЯ ОЦЕНКИ МИНИМАЛЬНОЙ РЕЗИДУАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПРИ ОМЛ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. NPM1 (нуклеофозмин 1) —— онкоген, состоящий из 12 эк-зонов, расположен в локусе 5q35. Мутация гена NPM1 —— самое частое генетическое нарушение при острых миелоидных лейкозах (ОМЛ). Выявляется в 25—30% ОМЛ. Представляет собой 4-х нуклеотидную вставку в положении 956—959. До 75—80% мутаций имеют вставку «типа А» — TCTG и еще 10-14% приходится на вставку «типа О и В» — CCTG и СATG. К основным методам диагностики мутаций NPM1 относится секвенирование, фрагментный анализ (ФА) и аллель-специфичная ПЦР (АС-ПЦР). Однако только метод АС-ПЦР в реальном времени способен обеспечить чувствительность определения 10-5, необходимую для мониторинга минимальной резидуальной болезни (МРБ).
Цель работы. Разработка высокочувствительного метода детекции мутации ЫРМ1 для количественной оценки МРБ.
Материалы и методы. Для определения мутации гена ЫРМ1 исследовали ДНК пациентов с ОМЛ, наблюдавшихся в НМИЦ гематологии Минздрава России с 2017 года. Использовали методы фрагментного анализа, секвенирования по Сэнгеру, количественной TаqMаn АС-ПЦР. Для АС-ПЦР были подобраны LNA-модифициро-ванные праймеры к наиболее частым типам мутации "А, О, В". Чувствительность метода протестировали на основе серийных разведений опухолевой ДНК в ДНК здорового донора.
Результаты и обсуждение. Методом АС-ПЦР была выявлена мутация ЫРМ1 у 38 из 43 (88%) пациентов, у которых ранее наличие мутации было показано при помощи ФА. У 33 (77%) пациентов была выявлена мутация типа А, у 5 пациентов (11%) — мутация типов В или О. У 3 из 5 пациентов с отрицательным результатом АС-ПЦР была выявлена методом секвенирования по Сэнгеру нестандартная вставка, которая отличалась от вставки типов А, О и В по нуклеотид-ному составу или расположению. Методом стандартных разведений была показана чувствительность АС-ПЦР 10-5, что было достаточно для диагностики МРБ, и также продемонстрирована возможность
количественного анализа частоты мутантного аллеля (рис. 1). Пер-систенция клеток с мутацией ЫРМ1 сохранялась после завершения первого курса индукционной химиотерапии у 11 из 12 (92%) обследо -ванных пациентов с ОМЛ и после завершения второго курса индукционной терапии у 4 из 11 (36%) пациентов.
Заключение. Количественная оценка мутации ЫРМ1 является высокочувствительным методом детекции МРБ, что может быть использовано в стандартных протоколах ведения пациентов с ОМЛ для оценки эффективности противоопухолевой терапии.
Сидорова Ю. В., Дорохина Е. И., Никулина Е. Е., Моисеева Т. Н., Ковригина А. М., Шуплецова И. А., Судариков А. Б.
ИССЛЕДОВАНИЕ B-КЛЕТОЧНОЙ КЛОНАЛЬНОСТИ ПРИ НОДУЛЯРНОЙ С ЛИМФОИДНЫМ ПРЕОБЛАДАНИЕМ
ЛИМФОМЫ ХОДЖКИНА
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Нодулярная с лимфоидным преобладанием лимфома Ходжкина (НЛПЛХ) является редкой (5-10%) нозологической формой лимфомы Ходжкина (ЛХ), опухолевый субстрат которой характеризуется преобладанием крупных клеток с морфологией LP-клеток. Современные методы молекулярной диагностики позволяют выявить клональность по реаранжировкам генов КН и/или КК в биопсийном материале при классической ЛХ в 24-49% случаев. Ранее мы продемонстрировали наличие клональности по генам ЮН у 34,6% пациентов с классической лимфомой Ходжкина. При этом считается, что выявление моноклональности обусловлено клональной природой клеток Ходжкина и Березовского-Штернберга. В литературе отсутствуют данные по исследованию В-клеточной клональности в группе пациентов с НЛПЛХ.
Цель работы. Определить частоту выявления В-клеточной клональ -ности при НЛПЛХ в биоптатах лимфатических узлов и костном мозге.
Материалы и методы. Исследованы биоптаты лимфатических узлов и пунктаты костного мозга у 16 пациентов с установленным диагнозом НЛПЛХ. Оценку В-клеточной клональности проводили по реаранжировкам генов IGH (FR1, FR2, FR3). Для этого использовали метод ПЦР по протоколу Biomed-2 и последующий фрагментный анализ на секвенаторе ABI PRISM 3130 (Applied Biosystems).
Результаты и обсуждение. В-клеточная моноклональность была обнаружена у 6 из 16 (37,5%) пациентов: только в лимфатическом узле —— у 3-х пациентов, у одного пациента —— только в костном мозге. У 2-х пациентов В-клеточная клональность одновременно выявлялась в лимфатическом узле и в костном мозге, при этом кло-нальные продукты, выявленные в костном мозге, совпадали с таковыми из лимфатического узла. У одного из этих пациентов был установлен диагноз композитной лимфомы (НЛПЛХ плюс лимфо-ма маргинальной зоны), у другого пациента была верифицирована
