CC BY
9
В сыворотке крови больных определяли уровень таких маркеров гемостатической формы ЭД, как тромбомодулин, О-димеры, РФМК и активность фактора фон Виллебранда, уровень провоспалительных цитокинов — TNF-a, ^-ф, ^-6 и острофазовых белков — С-реак-тивного белка, фибриногена, а также уровень маркера антивоспалительной резистентности — противовоспалительного цитокина ^-4. Группу контроля составляли 20 здоровых доноров.
Результаты и обсуждение. Были выявлены признаки гемостатической формы ЭД, такие как повышение уровня тромбомодулина (р<0,001), и активности фактора Виллебранда (р<0,001), по сравнению с группой контроля. При этом маркеры тромбинемии —— уровень D-димеров и РФМК — не отличались от значений контрольной группы (р>0,05),
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
что свидетельствует о компенсации ЭД. Выявлялись признаки СВР, проявляющиеся повышением уровня ^-6 и по сравнению со значениями контрольной группы (для обоих значений р<0,001), и ослаблением антивоспалительной резистентности в виде снижения уровня ^-4 в сыворотке крови по сравнению с группой контроля (р<0,01).
Заключение. Полученные данные свидетельствуют о наличии в данной группы больных гемостатической формы ЭД, минимально выраженной хронической СВР, а также значительном снижении антивоспалительной резистентности, что в целом поддерживает воспалительную трансформацию эндотелиоцитов, приводящую к ми-кроциркуляторным нарушениям и прогрессированию полиорганной недостаточности.
Сидорова Ю. В., Глинщикова О. А., Бидерман Б. В., Гаврилина О. А., Лукьянова И. А., Троицкая В. В., Паровичникова Е. Н., Судариков А. Б.
КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ МОНИТОРИНГ МУТАЦИИ ГЕНА ШИ1 ДЛЯ ОЦЕНКИ МИНИМАЛЬНОЙ РЕЗИДУАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПРИ ОМЛ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. NPM1 (нуклеофозмин 1) —— онкоген, состоящий из 12 эк-зонов, расположен в локусе 5q35. Мутация гена NPM1 —— самое частое генетическое нарушение при острых миелоидных лейкозах (ОМЛ). Выявляется в 25—30% ОМЛ. Представляет собой 4-х нуклеотидную вставку в положении 956—959. До 75—80% мутаций имеют вставку «типа А» — TCTG и еще 10-14% приходится на вставку «типа О и В» — CCTG и СATG. К основным методам диагностики мутаций NPM1 относится секвенирование, фрагментный анализ (ФА) и аллель-специфичная ПЦР (АС-ПЦР). Однако только метод АС-ПЦР в реальном времени способен обеспечить чувствительность определения 10-5, необходимую для мониторинга минимальной резидуальной болезни (МРБ).
Цель работы. Разработка высокочувствительного метода детекции мутации ЫРМ1 для количественной оценки МРБ.
Материалы и методы. Для определения мутации гена ЫРМ1 исследовали ДНК пациентов с ОМЛ, наблюдавшихся в НМИЦ гематологии Минздрава России с 2017 года. Использовали методы фрагментного анализа, секвенирования по Сэнгеру, количественной TаqMаn АС-ПЦР. Для АС-ПЦР были подобраны LNA-модифициро-ванные праймеры к наиболее частым типам мутации "А, О, В". Чувствительность метода протестировали на основе серийных разведений опухолевой ДНК в ДНК здорового донора.
Результаты и обсуждение. Методом АС-ПЦР была выявлена мутация ЫРМ1 у 38 из 43 (88%) пациентов, у которых ранее наличие мутации было показано при помощи ФА. У 33 (77%) пациентов была выявлена мутация типа А, у 5 пациентов (11%) — мутация типов В или О. У 3 из 5 пациентов с отрицательным результатом АС-ПЦР была выявлена методом секвенирования по Сэнгеру нестандартная вставка, которая отличалась от вставки типов А, О и В по нуклеотид-ному составу или расположению. Методом стандартных разведений была показана чувствительность АС-ПЦР 10-5, что было достаточно для диагностики МРБ, и также продемонстрирована возможность
количественного анализа частоты мутантного аллеля (рис. 1). Пер-систенция клеток с мутацией ЫРМ1 сохранялась после завершения первого курса индукционной химиотерапии у 11 из 12 (92%) обследо -ванных пациентов с ОМЛ и после завершения второго курса индукционной терапии у 4 из 11 (36%) пациентов.
Заключение. Количественная оценка мутации ЫРМ1 является высокочувствительным методом детекции МРБ, что может быть использовано в стандартных протоколах ведения пациентов с ОМЛ для оценки эффективности противоопухолевой терапии.
Сидорова Ю. В., Дорохина Е. И., Никулина Е. Е., Моисеева Т. Н., Ковригина А. М., Шуплецова И. А., Судариков А. Б.
ИССЛЕДОВАНИЕ B-КЛЕТОЧНОЙ КЛОНАЛЬНОСТИ ПРИ НОДУЛЯРНОЙ С ЛИМФОИДНЫМ ПРЕОБЛАДАНИЕМ
ЛИМФОМЫ ХОДЖКИНА
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Нодулярная с лимфоидным преобладанием лимфома Ходжкина (НЛПЛХ) является редкой (5-10%) нозологической формой лимфомы Ходжкина (ЛХ), опухолевый субстрат которой характеризуется преобладанием крупных клеток с морфологией LP-клеток. Современные методы молекулярной диагностики позволяют выявить клональность по реаранжировкам генов КН и/или КК в биопсийном материале при классической ЛХ в 24-49% случаев. Ранее мы продемонстрировали наличие клональности по генам ЮН у 34,6% пациентов с классической лимфомой Ходжкина. При этом считается, что выявление моноклональности обусловлено клональной природой клеток Ходжкина и Березовского-Штернберга. В литературе отсутствуют данные по исследованию В-клеточной клональности в группе пациентов с НЛПЛХ.
Цель работы. Определить частоту выявления В-клеточной клональ -ности при НЛПЛХ в биоптатах лимфатических узлов и костном мозге.
Материалы и методы. Исследованы биоптаты лимфатических узлов и пунктаты костного мозга у 16 пациентов с установленным диагнозом НЛПЛХ. Оценку В-клеточной клональности проводили по реаранжировкам генов IGH (FR1, FR2, FR3). Для этого использовали метод ПЦР по протоколу Biomed-2 и последующий фрагментный анализ на секвенаторе ABI PRISM 3130 (Applied Biosystems).
Результаты и обсуждение. В-клеточная моноклональность была обнаружена у 6 из 16 (37,5%) пациентов: только в лимфатическом узле —— у 3-х пациентов, у одного пациента —— только в костном мозге. У 2-х пациентов В-клеточная клональность одновременно выявлялась в лимфатическом узле и в костном мозге, при этом кло-нальные продукты, выявленные в костном мозге, совпадали с таковыми из лимфатического узла. У одного из этих пациентов был установлен диагноз композитной лимфомы (НЛПЛХ плюс лимфо-ма маргинальной зоны), у другого пациента была верифицирована
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2020; ТОМ 65; №1 |
опухолевая трансформация НЛПЛХ в диффузную В-крупнокле-точную лимфому.
Заключение. Таким образом, частота выявления В-клеточ-ной клональности при НЛПЛХ составила 37,5%, что практически не отличается от частоты выявления В-клеточной клональности
при классической лимфоме Ходжкина. Появление идентичных клональных продуктов в лимфатическом узле и костном мозге свидетельствует о распространенной стадии и прогрессии заболевания или о необходимости исключения композитной В-клеточной лимфомы.
Силин А. П., Ребриков А. Н., Капорская Т. С., Киселев И. В., Сараева Н. О., Петрова Л. М., Романова Е. В., Лужнова Н. Н., Кустанович М. А., Лыскова В. А., Грекина М. А., Малюшкина Е. С., Кузема Е. С., Хороших О. В., Киселева Н. В., Мишарина Н. П.,
Лавшук А. М., Пилявин Л. Я.
АНАЛИЗ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК БОЛЬНЫМ ЛЕЙКОЗАМИ ИРКУТСКОГО РЕГИОНА
ФГБОУ ВО «Иркутский государственный медицинский университет» Минздрава России; ГБУЗ «Иркутская ордена «Знак Почета» областная клиническая больница»
Введение. Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) стала неотъемлемой частью в лечении гематологических заболеваний. Применение ТГСК позволяет использовать высокодозные режимы полихимиотерапии у больных острыми лейкозами (ОЛ) и множественной миеломой (ММ), благодаря чему достигается лучший и более длительный ответ на лечение, а в некоторых случаях может применяться как терапия «спасения».
Цель работы. Провести анализ данных пациентов гематологического отделения ГБУЗ «ИОКБ», получивших ТГСК.
Материалы и методы. Нами ретроспективно проанализирована медицинская документация пациентов гематологического отделения ГБУЗ «ИОКБ» и представлены результаты применения алло-ТГСК при ОЛ и ХМЛ, ауто-ТГСК при ММ. За период 2013-2019 гг. ал-ло-ТГСК выполнена 21 пациенту с ОЛ (11 муж. и 10 жен.) в возрасте от 19 до 67 лет (медиана — 40 лет). Острый миелобластный лейкоз (ОМЛ) был верифицирован у 12 больных; острый лимфобластный ва -риант (ОЛЛ) — у 7 больных; смешанный фенотип был выявлен у 2 па -циентов. Алло-ТГСК проведена в клинике НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой, ГБОУ ВПО «ПСПбГМУ им. И.П. Павлова» 19 пациентам, в клинике Израиля — 1, в клинике Кореи — 1 (родственных проведено 7, неродственных — 14). Алло-ТГСК при ОЛ была выполнена в стадии ремиссии у 20 чел., в раннем рецидиве — у 1 пациента. Алло-ТГСК была применена двум больным ХМЛ: мужчине 43 лет (ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова»,
СПб, в 2018 г.) и женщине 38 лет (ГНЦ РАМН, г. Москва, в 1998 г.). В обоих случаях на лечение ХМЛ в хронической фазе не было получено ответа; обе ТГСК — родственные. Ауто-ТГСК за период 2006—2019 гг. выполнена 60 больным ММ (27 муж. и 33 жен.) в возрасте от 36 до 67 лет (медиана — 54 года) в четырех учреждениях РФ, в том числе в гематологическом отделении ГБУЗ «ИОКБ» (Иркутск) у 41 пациента. У абсолютного большинства больных ММ на момент постановки диагноза определена II стадия заболевания. В качестве индукционной терапии преимущественно проводился режим «VCD»; у абсолютного большинства пациентов была достигнута ОХЧР. В качестве режима кондиционирования у всех пациентов использовались высокие дозы мелфалана (от 100 до 200/м2).
Результаты и обсуждение. На текущий момент после проведенной алло-ТГСК при ОЛ живы 15 чел. (период наблюдения 6—56 мес), прогрессия заболевания отмечена у 4-х больных. Пациенты с ХМЛ живы и находятся в ремиссии. При ММ живы 58 чел., прогрессия заболевания отмечена у 16. Один больной ММ умер от пневмонии, развившейся в период миелодепрессии после этапа кондиционирования. На фоне прогрессии заболевания умерли 7 пациентов ММ.
Заключение. Таким образом, ТГСК становится более доступным методом лечения для жителей Иркутской области. У большинства пациентов ОЛ, ХМЛ и ММ отмечена безопасность и эффективность ТГСК, позволившая увеличить продолжительность и качество жизни этих больных.
Силин А. П., Смирнова В. В., Лужнова Н. Н., Романова Е. В.
ГЕМОФИЛИЯ И БОЛЕЗНЬ ВИЛЛЕБРАНДА: ГОСПИТАЛЬНЫЙ ПОРТРЕТ В НАЧАЛЕ XXI ВЕКА
ФГБОУ ВО «Иркутский государственный медицинский университет» Минздрава России; ГБУЗ «Иркутская ордена «Знак Почета» областная клиническая больница»
Введение. Внедрение профилактического лечения как при гемофилии (Гф), так и при болезни Виллебранда (БВ) на амбулаторном этапе имеет очевидные успехи, в частности выражающиеся в значимом снижении госпитализаций пациентов. Современный стационарный этап лечения представляется малоизученным.
Цель работы. Сравнительное изучение госпитализаций больных
Гф и БВ.
Материалы и методы. Ретроспективно проанализировано 140 историй болезни 75 больных, находившихся на стационарном лечении в отделении гематологии ГБУЗ Иркутской ОКБ в период 2007-2017 гг.; из них Гф А — 54 чел. (72%), Гф В — 11 (14,7%), БВ — 10 (13,3%). Соотношение по полу (м:ж) при Гф и БВ составило соответственно 65:0 и 6:4. Возраст больных Гф составил 15-61 год (медиана 31,7), больных БВ — от 18 до 71 (37,1). Госпитализации при Гф были экстренными в 92 случаях, плановыми — в 28. Показаниями явились: гематомы — у 23, гемартрозы — у 23, артропатия — у 6, стоматологическое вмешательство — у 13 больных, луночное кровотечение — у 4, травмы — у 12, почечное кровотечение — у 10, желудочно-кишечное кровотечение (ЖКК) — у 7, другие кровотечения — у 13 чел. Госпитализации при БВ были экстренными в 17 случаях, плановыми — в 3. Показаниями явились: ЖКК — у 6 чел., стоматологическое вмешательство — 3, луночное кровотечение — 1, почечное кровотечение — 1, другие кровотечения — 9 (из них носовые — 5, маточные —
3, кровохарканье — 1). Заместительная терапия (ЗТ) у пациентов с Гф использовалась в 107 случаях, из них вводились ФС в 89, КПП/ СЗП — в 18. ЗТ у пациентов с БВ использовалась в 17 случаях; ФС вводился в 14, СЗП — в 3. Наибольшее количество ФС на одну госпитализацию потребовалось в 2012 г. (23 833,3 МЕ).
Результаты и обсуждение. Сравнение показаний для госпитализации при Гф и при БВ выявило отличия по гемартрозам (р<0,01), гематомам (р<0,05), ЖКК (р<0,05) — чаще встречаются при Гф, носовым кровотечениям (р<0,01) — чаще встречаются при БВ. Отличий не выявлено по поводу стоматологического вмешательства и луночного кровотечения, травм, почечного кровотечения (все р>0,05). АПТВ оказалось удлинено при тяжелой Гф А в отличие от тяжелой БВ: 56,8±5,89 с против 39,4±3,40 с (р<0,05). Осложнение в виде постгеморрагической анемии развилось примерно у половины больных. Исходами госпитализации при Гф явились: улучшение — 119, смерть — 1 (от желудочного кровотечения); при БВ: улучшение — 20 (100%).
Заключение. Таким образом, в структуре госпитализаций как при Гф, так и при БВ преобладали экстренные. При сравнительной оценке госпитализаций при тяжелой Гф А и БВ достоверно выявлено: преобладание гемартрозов, гематом и ЖКК у пациентов с Гф; носовые кровотечения преобладали при БВ. Затраты на ЗТ больным Гф и БВ остаются высокими для лечебного учреждения, но необходимыми.
