CC BY
9
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ_
Головкина Л.Л., Каландаров Р.С., Пшеничникова О.С., Сурин В.Л., Стремоухова А.Г., Пушкина Т.Д., Атрощенко Г.В., Хасигова Б.Б.
ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ СИСТЕМЫ АВО У РОССИЯН
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения России, Москва
Введение. Существующий полиморфизм клинически значимых антигенов эритроцитарных систем, в том числе системы АВО, обусловлен многообразными мутациями генов (миссенс-мутации, делеции и др.). Знание молекулярных основ формирования и распределения аллельных вариантов генов системы АВО, как и других антигенных систем эритроцитов, необходимо для прогнозирования характера и частоты возникновения потенциальных проблем в практической трансфузиологии и иммуногематологии.
Цель. Описать варианты аллелей генов системы АВО у россиян и дать серологическую характеристику кодируемых ими антигенов.
Материалы и методы. Материалом исследований являлись эритроциты 175 человек с проблемами в определении группы крови системы АВО, которым было проведено молекулярное исследование генов системы АВО. Группу крови определяли методом агглютинации на плоскости с применением цоликлонов анти-А, анти-Асл, анти-В и лектина (анти-А1), а также гелевым методом с применением гелевых карт. Генетическое типирование проводилось методом прямого секвенирования по Сэн-геру и методом полимеразной цепной реакции с секвенс-специфическими праймерами (ПЦР-ССП).
Результаты. Исследование на молекулярном уровне было выполнено 175 индивидумам: 105 - прямое секвени-рование гена АВО, 70 - только полимеразной цепной реакцией с секвенс-специфическими праймерами (ПЦР-ССП), 49 из 105 - двумя методами. Генотипы обследованных лиц с группами крови А и АВ (151 человек) без расшифровки аллелей были такими: А1А1 - у 6 человек, А1А2 - у 1, А1О - у 17, А1В1 - у 10, А2О - у 83, А2В1 - у 27, Aw.060 - у 4, Aw.06B - у 1, АхО - у 1 и АхО - у 1. У 14 обследованных была определена группа крови В: В1В1 - у 1человека и В1О - у 13 человек. Группу крови О выявили у 10 человек.
О-аллели были идентифицированы у 128 человек, в том числе у гетерозигот в сочетании с разными вариантами антигена А (106 человек) и антигена В (13 человек), а также у 9 человек с группой крови О (18 аллелей), т. е. всего 137 аллелей. Обнаружено 13 вариантов О-аллеля, из них десять делеционных аллелей и три неделеционные аллеля из группы О.02: АВО*О.02.01, АВО*О.02.02 и АВО*О.02.03. Наиболее часто встречал-
ся референсный аллель АВ0*0.01.01 (94, или 68,61 %), реже аллели АВО*О.01.02 (8, или 5,84 %), АВ0*0.01.11 и АВО*О.01.26 (по 7, или по 5,11 %), АВО*О.01.12 и не-делеционный аллель АВО*О.02.01 (по 6, или по 4,38 %), АВО*О.01.13 и АВО*О.01.44 (по 2 или по 1,46 %). Остальные аллели с характерной делецией (АВО*О.01.05, АВО* 0.01.46 и АВ0*0.01.68), а также два неделеционных аллеля (АВ0*0.02.02 и АВ0*0.02.03) были выявлены каждый в одном случае (по 0,73 %).
У 151 человека с учетом гомозигот идентифицированы 157 А-аллелей, при этом обнаружены 8 различных А-аллелей. По результатам прямого секвенирования определили 34 референсных аллеля АВ0*А1.01 и 6 аллелей АВ0*А1.02. Самым частым из аллелей, ослабляющих экспрессию антигена А, оказался классический аллель АВ0*А2.01: 102 из 117 (87,18 %). Остальные аллели встречались значительно реже: АВ0*А2.06 - 6 (5,14 %), АВ0*Ато06 - 5 (4,27 %), АВ0*А2.05 и АВ0*А2.09 - по 1 (по 0,85 %). В 2 случаях в реакции полимеразной цепной реакции с секвенс-специфическими праймерами (ПЦР-ССП) был идентифицирован аллель АВ0*Ах. Аллели АВ0*А1.01 и АВ0*А1.02 фенотипически проявлялись как антиген А1 (в двух случаях при генотипе АВ0*А1.01 В.01.01 определялся антиген А2). Аллели АВ0*А2.01 и аллель АВ0*А2.09 серологически проявлялись как А2. При аллеле АВ0*А2.05 выявлен А3. Из 6 случаев с аллелем АВ0*А2.06 в 1 случае определен А1, в 2-х случаях - А3, в 3-х случаях - А2. У обследованных с аллелями ABO*Aw.06 и АВ0*Ах экспрессия антигена А была очень слабой.
У 51 человека были определены 52 В-аллеля, выявлено 3 различных В-аллеля: АВ0*В.01.01 - 50, АВ0*В.01.02 и АВ0*В.01.08 - по 1. Экспрессия антигена В во всех случаях была одинаковой.
Выводы. Доказана значительная выраженность полиморфизма генов системы АВО среди россиян. В практической работе заподозрить присутствие антигена А с ослабленной экспрессией можно в серологических методах при появлении мелкой или смешанной агглютинации с цоликлонами или при расслоении эритроцитов в геле, что может стать поводом для генетического типирова-ния. Современные молекулярные методы позволяют идентифицировать редкие аллели генов и генотипы.
Головкина Л.Л., Каландаров Р.С., Пшеничникова О.С., Сурин В.Л., Стремоухова, Т.Д.
Пушкина А.Г., Атрощенко Г.В., Хасигова Б.Б.
ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ СИСТЕМЫ РЕЗУС У РОССИЯН
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения России, Москва
Введение. Система Резус - вторая по значимости стема эритроцитов. Изучение существующих аллелей для практической трансфузиологии антигенная си- генов системы Резус позволит успешно выявлять ва-
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 3, 2021
рианты резус-антигенов с ослабленной экспрессией и предупреждать посттрансфузионные осложнения, связанные с несовместимостью по данной системе.
Цель. Исследовать полиморфизмы генов RHD и RHCE и дать серологическую характеристику ослабленных вариантов кодируемых ими антигенов.
Материалы и методы. Материалом исследований являлись эритроциты 213 человек с ослабленным антигеном RhD, которым было выполнено генетическое типирование, и 9 человек, у которых определяли полиморфизмы гена RHCE. Серологическое определение слабых и парциальных вариантов антигена RhD проводили 5 методами: метод агглютинации на плоскости с Цоликлоном анти-D супер, реакция агглютинации в солевой среде, гелевый метод с Цоликлонами, непрямой антиглобулиновый тест, непрямой антиглобулиновый тест в гелевом методе с применением гелевых карт. Определение других антигенов системы Резус проводили методом агглютинации на плоскости с Цоликло-нами анти-С супер, анти-Cw супер, анти-с супер, анти-Е супер, анти-е супер и в гелевом методе с гелевыми картами. Молекулярное исследование осуществляли методом полимеразной цепной реакции (с секвенс-специфическими праймерами (ПЦР-ССП] для гена RHD и с аллель-специфическими праймерами (ПЦР-АСП] для гена RHCE] и методом прямого секвенирования по Сэнгеру.
Результаты. У двух человек со слабым антигеном RhD были обнаружены аллели RHD*DNB и RHD*DVII, кодирующие парциальные варианты RhD - RhDNB (серологически определенный фенотип - CCDwee) и RhDVII (серологически был установлен редкий фенотип CCDwEe, в сыворотке крови обнаружены антитела анти-D]. Заподозрить присутствие парциальных антигенов RhD можно по расхождению результатов двух серологических методов: слабая агглютинация или химера с Цоликлоном на плоскости и сильная реакция в гелевом методе.
У 211 человек были определены 12 различных аллелей гена RHD, кодирующих ослабленные варианты антигена RhD: RHD weak type 1 (54 случая], RHD weak type 2 (25 случаев], RHD weak type 3 (119 случаев], RHD weak type 4.2 (DAR] (2 случая], RHD weak type 6 (1 слу-
чай] RHD weak type 15 (3 случая], RHD weak type 67 (1 случай], RHD weak type G255R (1 случай], RHD weak type 122 (1 случай], RHD weak type IVS5-38del4 (1 случай], RHD*Dpxi (2 случая] и новый ген RHD*423delGAT (1 случай]. В серологических исследованиях слабый антиген RhD weak type 1 во всех случаях сочетался с фенотипом CcDwee, как и варианты RhD weak type G255R, RhD weak type 122 и RhD weak type IVS5del4; вариант RhD weak type 3 в 17 из 19 случаев также сочетался с этим фенотипом (в 2 случаях выявлены фенотипы ccDwee и CCDwee]. Антигены RhD weak type 2, RhD weak type 15 и RhD weak type 67 сочетались с фенотипом ccDwEe, антиген RhD weak type 4.2 (DAR] - с фенотипом ccDwee. Варианты RhD weak type 2, RhD weak type 15, RhD weak type 67, RhD weak type G255R и RhD weak type IVS5del4 не реагировали с Цоликлоном анти-D на плоскости (RhD weak type 15 выявлялся только в классическом непрямом антиглобулиновом тесте и в гелевом непрямом антиглобулиновом тесте], RhD weak type 122 показывал мелкую пылевидную агглютинацию. Наиболее эффективными методами определения слабых вариантов антигена RhD были классическая непрямая проба Кумбса и непрямая проба Кумбса в геле. Антиген, кодируемый геном RHD*423delGAT, серологически не выявляется ни в одном методе (фенотип Ccdee].
Из 9 человек, у которых изучали полиморфизмы гена RHCE, у пятерых был обнаружен ген RHCE*Cw (в 3 случаях фенотипы CwcDee, в 2 случаях фенотипы CwCDee]. У 2 человек прямым секвенированием был выявлен аллель RHCE*Ce.09, кодирующий антиген RhCx (при этом методом ПЦР-ССП был определен обычный ген RHCE*C], серологически были установлены фенотипы foDee и CcDEe (но эритроциты не реагировали с Цоликлоном анти-С на плоскости]. Еще у 2 человек с фенотипами CucDEe (экспрессия RhC ослаблена] и Ccdee молекулярное исследование определило обычный ген RHCE*C.
Выводы. Полиморфизм генов RHD и RHCE среди россиян значительно выражен. Варианты слабых и парциальных вариантов антигенов RhD и RhC могут быть установлены только при молекулярно-генетиче-ском исследовании.
Киселева А.Н., Бутина Е.В., Исаева Н.В.
АССОЦИАЦИЯ ГЕНОВ СИСТЕМЫ HLA КЛАССА II С ПАТОЛОГИЕЙ СПЕРМАТОГЕНЕЗА
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», Киров
Введение. Бесплодие является одной из нерешенных проблем современной медицины и характеризуется снижением или отсутствием способности к воспроизведению потомства. Бесплодный брак - ненаступление беременности в течение одного года регулярной половой жизни без применения контрацептивных средств. В настоящее время доля бесплодных супружеских пар достаточно стабильна и не имеет тенденции к снижению. Внимание врачей и научного сообщества сосредоточено на углубленном изучении множества факторов,
вызывающих нарушение фертильности. Особое место среди них занимают гены системы ^А. Одной из ее важнейших функций, которая тесно связана с контролем иммунного ответа, является участие в репродуктивных процессах. Мужское бесплодие может быть связано с патоспермией, эякуляторными, сексуальными, анатомическими, эндокринными, воспалительными, иммунологическими и другими причинами. В структуре бесплодного брака оно составляет до 40%, и ему необходимо уделять такое же пристальное внимание, как
