CC BY
11Оригiнальнi досл '!дження
УДК: 616.314+089;843.5
Показатели цитохимического спектра нейтрофилов периферической крови у ортопедических больных после установки дентальных имплантатов на фоне никотиновой интоксикации
С.И. Жадько, Ф.И. Герасименко, П.Н. Колбасин
Государственное учреждение «Крымский государственный медицинский университет им. С.И. Георгиевского», г. Симферополь
Ключевые слова: нейтрофилы, имплантаты, цитохимия, никотиновая интоксикация.
В дентальной имплантологии несмотря на значительные успехи и научные достижения, по-прежнему остаются актуальными вопросы, связанные с профилактикой развития воспалительных осложнений в тканевом комплексе опорных зон ортопедических конструкций[4]. Клинический успех ортопедического лечения пациентов с применением дентальных имплантатов возможен лишь при условии эффективной реабилитации окружающих тканевых структур и зависит в частности от морфофункционального состояния опорных мягких тканей [6,7].
Анализ отечественной и зарубежной литературы показал, что, несмотря на большое число работ теоретического и экспериментально-клинического характера недостаточно изученными остаются вопросы, связанные с развитием ранних воспалительных осложнений в периимплантатных мягких тканях опорных зон ортопедических конструкций и их влиянием на сроки начала протезирования, особенно у пациентов с хронической никотиновой интоксикацией [6,7].
В стоматологии курение ухудшает заживление после проведения операций на слизистых и десне. Заживление тканей после кюретажа и лоскутных манипуляций у курильщиков протекает значительно хуже, чем у некурящих. У курящих отмечают повышенное скопление зубного налета, более
высокую вероятность развития гингивита и паро-донтита, потери зубов, а также, более выраженную резорбцию альвеолярного отростка. Курение вызывает вазоконстрикцию артериол, что снижает кровоснабжение. Токсичные побочные продукты курения табака, например, никотин, моноксид углерода и цианид водорода, являются факторами, подавляющими заживление.
Данные, полученные при изучении лечения ортопедических больных с никотиновой зависимостью методом дентальной имплантации, могут быть основой для возможности снижения вероятности развития осложнений до уровня некурящих при отказе от курения.
Исходя из вышеизложенного, целью нашего исследования явилось проведение цитохимического мониторинга нейтрофилов периферической крови у ортопедических больных после установки внутри-костных имплантатов на фоне никотиновой интоксикации.
Материал и методы
Материалом нашего исследования служила периферическая кровь пациентов, которым была проведена дентальная имплантация. Для проведения исследования было обследовано 98пациентов (17 женщин и 81 мужчина) в возрасте от 21 - 64 лет.
Подбирая пациентов, мы учитывали общее состояние организма, перенесенные и сопутствующие заболевания, анатомо-физиологическое состояние полости рта. Пациенты были разделены на 3 группы: в 1-ю группу вошли ортопедические больные без никотиновой интоксикации — 25 пациентов; во 2 группу - ортопедические больные с никотиновой интоксикацией — 32 пациентов; 3 группу составили 35 пациентов, требующих ортопедическую помощь и с никотиновой интоксикацией, которым в течении первых 30 суток после имплантации через день в/м вводился иммуномодулятор «Эрбисол» по 1 мл. Кроме того, обследовано 16 практически здоровых лиц (норма), не страдающих дентальной патологией и не курящая - контрольная группа. Ортопедическое лечение проводили по двухэтапной методике имплантации винтовыми эндооссальными имплан-татами «Уимпл».
При проведении исследования мы использовали препарат «Эрбисол» - иммуномодулятор, репарант, адаптоген. Этот препарат содержит низкомолекулярные «сигнальные» фрагменты мембранных гли-копротеинов, выполняющих функцию «маркеров физиологического состояния клеток», которые при патологических нарушениях гомеостаза активируют иммунную систему. Препараты класса Эрби-сол воздействуют только на разбалансированные системы, пораженные органы и ткани и остаются практически индифферентными для здорового организма, не вызывая побочных реакций. Забор периферической крови для исследования проводился на 1,3,6, месяцах после установки имплантатов.
Несомненный интерес представляло изучение активности дегидрогеназ-ферментов цикла Кребса и гликолиза: сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и лак-татдегидрогеназы (ЛДГ), значение которых рассматривались нами как неспецифический показатель повреждения клеток. Общеизвестно, что сукцинат-дегидрогеназа и лактатдегидрогеназа относятся к числу важнейших клеточных ферментов. Сукци-натдегидрогеназа прочно связана с внутренней ми-тохондральной мембраной клеток и катализирует реакцию, при которой янтарная кислота (сукцинат) дегитратируется в фумаровую кислоту (фумарат). Лактатдегидрогеназа находится в цитолизе клетки и в анаэробны условиях катализирует реакцию восстановления пировиноградной кислоты (пиро-уват) в молочную (лактат), являющуюся конечным продуктом гликолиза. Поскольку цитохимические методы исследования указанных ферментов в клетках крови подробно описаны в литературе, то здесь указаны принципы их определения.
Дегидрогеназы - ферменты, которые отщепляют водород от соответствующего субстрата и переносят его на акцептор. Этот механизм действия используется в цитохимических методах, при которых в систему вводится индикатор, принимающий на себя водород. Индикатор при этом должен иметь окраску и выпадать в осадок. Для этих целей наиболее часто применяют водорастворимые соли те-
тразолия: неотетразольный хлорид (НТ), синий те-тразолий (СТ), нитротетразольный синий (НСТ) и другие, которые под воздействием восстанавливающих веществ превращаются в водорастворимый окрашенный формазан, позволяющий установить внутриклеточную локализацию дегидрогеназ под световым микроскопом.
Сущность цитохимического метода изучения дегидрогеназ в клетках крови состоит в том, что последние должны помещаться в среду (либо подвергаться обработке), содержащую субстрат, кофер-мент, ингибитор ферментов, краситель. В указанной среде клетки крови инкубируются в течении 45-60 минут при температуре 37°С. Фермент СДГ не требует кофермента, так как образующийся продукт (фумарат) не тормозит реакцию, и, следовательно, не нужно вводить какой либо агент, связывающий его.
Оригинальная методика изучения активности дегидрогеназ в нейтрофилах крови предложена в работах [8], когда мазки клеток гепаринизирован-ной крови делали после обработки соответствующими реактивами через час после инкубации. В наших исследованиях в качестве индикатора ферментного процесса использован нитротетразолий синий (НСТ), образующий при восстановлении в клетке мелкие гранулы формазана, окрашивающие цитоплазму от дымчато-серого до насыщенного синего цвета.
В работе использовали тонкие нативные мазки крови, высушенные на воздухе, которые после соответствующей обработки, инкубировали в течении 45 минут при температуре 37°С. Ядра клеток докрашивали раствором метиленового зеленого. Высушенные мазки микроскопировали под иммерсионным объективом на микроскопе МБИ-15. Приготовленные растворы реактивов в соответствующих концентрациях и объемах наносили на мазок следующей последовательности.
Определение активности ЛДГ. Растворы: цианида натрия, лактата натрия, НСТ, гемодез, никотина-ми-дадениндинуклеотида (НАД). Последний готовили непосредственно перед применением. Отложение гранул формазана наблюдалось в местах локализации ЛДГ. Интенсивность окраски варьировала от дымчато-серого до интенсивного синего цвета.
Определение активности СДГ. Растворы: НСТ, сукцината натрия, фосфатного буфера. Отмечалась четкая локализация гранул формазана. Об активности СДГ судили по интенсивности отложения фанта формазана.
Для оценки активности ферментов в клетках крови применялась методика Astaldi [6] с вычислением среднего цитохимического показателя (СЦП) по формуле:
сцп= (Хх1)+(Хх2)+(ХхЗ)+(Хх4) 100
где х - количество клеток из 100 просмотренных нейтрофилов в одном мазке с определенной степе-
Табл. 1
Цитохимические показатели нейтрофилов периферической крови у ортопедических больных после установки имплантатов на фоне никотиновой интоксикации (усл. ед.).
Группы наблюдений Показатель Сроки наблюдений (месяцы)
1 3 6
1 группа - Ортопедические больные без никотиновой интоксикации, п=25 СДГ Р ЛДГ Р 1,53+0,05 <0,05 2,65+0,14 <0,05 1,59+0,07 >0,05 2,61+0,17 >0,05 1,81+0,04 >0,05 2,34+0,10 >0,05
2 группа - Ортопедические больные с никотиновой интоксикацией, п=32 СДГ Р ЛДГ Р 1,50+0,03 <0,05 2,67+0,11 <0,05 1,34+0,05 <0,01 2,87+0,15 <0,01 1,42+0,04 <0,05 2,75+0,17 <0,05
3 группа - Ортопедические больные с никотиновой интоксикацией с применением «Эрбисола» п=25 СДГ Р ЛДГ Р 1,51+0,07 <0,05 2,66+0,16 <0,05 1,58+0,05 >0,05 2,60+0,13 >0,05 1,80+0,06 >0,05 2,42+0,14 >0,05
Контроль СДГ 1,85+0,06
(здоровые) п=16 ЛДГ 2,28+0,15
Примечание: р- достоверность по отношению к контролю.
нью активности фермента;
1,2,3,4 - степень активности;
100 - число просмотренных нейтрофилов в одном мазке.
При этом выделяли четыре степени активности (4ст— нейтрофил полностью покрыт гранулами формазана; Зет-3/4 активности ;2ст-1/2 активности и 1ст-1/4 активности).
Весь полученный цифровой материал обрабатывали методом вариационной статистики с выведением критерия Стьюдента, достоверными считали показатели при р< 0,05.
Результаты и их обсуждение
Анализ цитохимических показателей в нейтро-филах периферической крови у ортопедических больных после установки имплантатов показал, что во всех 3-х группах наблюдений к 1-му месяцу наблюдалось статистическое значимое по отношению к контролю (р<0,05) снижение аэробного окисления и рост анаэробного гликолиза.
К 3-му месяцу наблюдений отмечалось значительное снижение аэробного окисления в нейтро-филах периферической крови во всех исследуемых группах, но наиболее манифестно во 2-ой группе, где СЦП показатель СДГ составил 1,34±0,05 усл. ед., что было на 27,5% ниже контроля (р<0,01), при этом со стороны активности ЛДГ (анаэробный гликолиз) наблюдалась обратная закономерность, он увеличивался на 25,9% (р<0,01) и составил 2,87±0,15 усл. ед..
К 6-му месяцу наблюдений у пациентов 1-ой группы (ортопедические больные без никотиновой интоксикации) и 3 группы (ортопедические больные с никотиновой интоксикацией и применением иммуномодулятора «Эрбисола» наблюдалась нормализация цитохимической активности нейтрофи-
лов, где они приобретали по отношению к контролю статистически не значимый характер (р>0,05) (табл.1).
Однако к этому сроку у пациентов 2 группы цитохимический дисбаланс оставался высоким и носил статистически значимый характер.
Проведенные исследования цитохимической активности нейтрофилов периферической крови у ортопедических больных после установки имплан-татов показали, что сама установка имплантатов сопровождается снижением аэробного окисления и ростом анаэробного гликолиза. Наличие никотиновой интоксикации ведет к более выраженному и длительному цитохимическому дисбалансу.
Выводы
1. Установка имплантатов является травматичным и энергоемким процессом, о чем свидетельствует статистически значимое снижение аэробного окисления (СДГ) и рост анаэробного гликолиза (ЛДГ).
2. Наличие у ортопедических больных фоновой патологии (никотиновая интоксикация) проявляется более манифестными изменениями цитохимической активности нейтрофилов периферической крови, что значительно снижает процессы репарации.
3. Применение иммуномодулятора «Эрбисол» усиливает процессы репарации и ускоряет процессы адаптации после установки имплантатов.
Литература
1. Борисова МА, Овчаренко Н.И., Шпак С.И. и др. Суправитальные способы цитохимического определения активности -глицерофосфатдегидро-геназы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в лейкоцитах периферической крови. Лабораторное дело. 1983. №9. С 8-10
2. Борисова МЛ., Овчаренко Н.И., Спахов А.С. Новые Суправитальные способы цитохимического определения
сукцинатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы в клетках крови. Лабораторное дело. 1975.Ш2. С 723-725.
3. Бухманн P. (Buchmann R) Факторы риска в пародонтологии. Комплексная терапия заболеваний пародонтау пациентов, входящих в группу риска / Р. Бухманн // Новое в стоматологии. 2002. - №8 (108). - С. 10-13.
4. Гветадзе Р.Ш., Матвеева А.И. Диагностика и прогнозирование функционального состояния тканей протезного ложа в дентальной имплантологии // Проблемы стоматологии и нейростоматологии.-М.,1999.-№2-С.38-40.
5. Гилева О. С. Влияние табака на ткани полости рта и биомеханические показатели / О.С. Гилева, Ю.А. Петрович // Стоматология. -1987. -№4.-С. 79-82.
6. ДанилевскийН.Ф. Влияние табачного дыма на активность ферментов протеолиза и их ингибиторов ротовой жидкости человека / Н.Ф. Данилевский, JI.B. Ищенко // Стоматология. 1990. - №2. - С. 29-30.
7. Матвеева А.И., Кулаков АА. Некоторые аспекты осложнений при использовании зубных имплантатов //Сборник научных трудов.-Сама-ра, 1992.-С. 114-116.
8. Перов М.Д. Разнообразие последствий табакокурения на слизистой оболочке рта и: красной кайме губ / М.Д. Перов, О.В. Бородав-
ко; Центр пародонтологии и дентальной имплантации и клиника «ОлДентя.-Ml, 2005. -21с.
9. Рыбаков А.И., Банченко Г.В, Заболевания слизистой оболочки полости рта.-Москва: Медицина, ~1978.-232с.
Цитохiмiчний мошторинг нейтрофШв перiферiйноï KpoBi у ортопедичних хворих тсля установки iMn«aHTiB на ™ никотиновоï' штоксикацп
С.1. Жадько, П.1. Герасименко, П.М. Колбасн
UHroxiMÎ4m дослщження нейтрофш1в периферичноï KpoBi у ортопедичних хворих тсля встановлення iMnraHTaTÎB дозволило прийти до висновку, що наявшсть у ортопедичних хворих з нжотиновою штоксикащею проявляеться бшьш-менш матфестними змшами цитoхiмiчнoï активносп нейтрофш1в периферичжи кpoвi i значно знижуе процеси репарацп. Застосування iмунoмoдулятopа "ЕРБ1СОЛ" посилюе процеси репарацп тсля установки iM^m™.
Cytochemical monitoring of peripheral blood neutrophils in orthopedic patient after installation of implants in the presence of nicotine intoxication
S.I. Zhadko, P.I. Gerasymenko, P. N. Kolbasin
Cytochemical study of peripheral blood neutrophils from the patients with orthopedic implants after installation allowed to come to the conclution that presence of background somatic pathology (nicotine intoxication) appears in more manifesting changes of cytochemical activity of peripheral blood neutrophils and reduces repair processes. The usage of imunomodulator "Erbisol" reinforces the processes of regeneration after installation of implants.
