CC BY
9УДК 616.314-089. 843.5:616.342-002.44
О.А. Непрелюк
ВЛИЯНИЕ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ЖЕЛУДКА И ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ У ОРТОПЕДИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ ПОСЛЕ УСТАНОВКИ ЭНДООССАЛЬНЫХ ИМПЛАНТАТОВ НА ФЕРМЕНТАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ
ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ
ГУ «Крымский государственный медицинский университет имени С. И. Георгиевского», г. Симферополь
РЕЗЮМЕ
Цитохiмiчнi дослщження нейтрофшв периферично! кровi у ортопедичних хворих шсля встановлення iмплантатiв дозволило прийти до висновку, що наявшсть у ортопедичних хворих фоново! соматично! патологи (виразкова хвороба шлунка i 12-типало! кишки) проявляеться бiльш манiфест ними змiнами цитохiмiчно! активности нейтрофiлiв периферично! кровi i значно знижуе процеси репарацп. Застосування iмуномодулятора «ЕРБ1СОЛ» посилюе процеси репарацй пiсля установки iмплантатiв.
Ключов1 слова: нейтрофши, iмплантати, цитохiмiя, виразкова хвороба шлунка i 12-пало! кишки.
SUMMARY
At the present stage of development of the prosthetic dentistry the prevention of complications of inflammation process in tissue complex of bearing zones of prosthetic constructions still does not lose its importance. Achievement of positive results, treating patients with dental implants, can't be completed without effective rehabilitation of the surrounding tissue structures. Gastrointestinal diseases are known to have the biggest influence on the changes in oral cavity. Changes in the gastrointestinal tract may become the starting element in the occurrence of dental diseases, and vice versa, the changes in the oral cavity can cause organic changes of the latter. As the material for our research we used the peripheral blood of the patients, who underwent dental implantation. We examined 87 patients (37 women and 50 men) aged 21 - 64 years. The patients were divided into 3 groups: the 1st group included patients without somatic pathology - 20 patients; the 2n - orthopedic patients with somatic pathology (peptic ulcer and duodenal ulcer) - 27 patients; the 3rd - 25 patients requiring orthopedic care with somatic diseases, which during the first 30 days after implantation received immunomodulator "Erbisol." We examined 15 almost healthy people (normal) - control group. Orthopaedic treatment was carried out by a two-stage implantation procedure using endosseous spiral implants "Wimple". Peripheral blood sampling for the research was conducted on 1,3,6,12 months after the implant have been placed. Dehydrogenase activity was studied in blood neutrophils - succinate dehydrogenase (SDH) and lactate dehydrogenase (LDH), the values of which were considered as a nonspecific indicator of cell damage. The technique of the study was: the cells of heparinized blood smears were made after treatment with appropriate reagents an hour after incubation. Dried smears were viewed through a microscope under oil immersion lens. To assess the activity of enzymes in blood cells Astaldi methodics was used. The whole digital material was processed using variational statistics andStudent's t test, reliable indicators considered at p <0.05. Cytochemical analysis of indicators in peripheral blood neutrophils showed that in all 3 groups for the 1 st month, a statistically significant relatively to the control reduction of aerobic oxidation and growth of anaerobic glycolysis occurs. The 3rd month of observations showed a significant decrease in aerobic oxidation in all groups (SDG), but mostly in the second group, while LDH (anaerobic glycoly-sis) showed an inverse pattern. By the 6th month, patients of the first group and the 3rd group had normalization of cytochemical activity of neutrophils. However, by this time the 2nd group of patients remained high cytochemical imbalances which had a statistically significant nature, and cytochemical approach to monitoring indicators was observed only by the 12th month of observations. The conducted researches have shown that the presence of somatic pathology in orthopedic patients (peptic ulcer and duodenal ulcer) causes more symptomatic changes of the cytochemical activity of peripheral blood neutrophils, which greatly reduces the repair processes. The usage of immunomodulator "Erbisol" strengthens the repair processes and accelerates processes of adaptation after the set of implant.
Key words: neutrophils, implants, cytochemical, gastric ulcer disease and duodenal ulcer.
На современном этапе развития ортопедической стоматологии, учитывая множественные публикации и научные работы в области дентальной имплантологии, тема профилактики развития осложнений воспалительного характера в тканевом комплексе опорных зон ортопедических конструкций не теряет свою важность. [7] Достижение положительного результата в лечении пациентов с применением дентальных имлантатов невозможно без эффективной реабилитации окружающих тканевых структур. В осуществлении данного процесса решающую роль исполняют такие факторы как реактивность мягких опорных тканей, а также их мофологические и функциональные характеристики. [3,7]
Исходя из данных источников литературы, несмотря на значительную теоретическую и экспериментально-клиническую базу, по прежнему актуальными остаются вопросы, касающиеся темы развития ранних осложнений воспалительного характера в периимплантантных тканях опорных зон ортопедических конструкций. Не полностью раскрытым является вопрос их влияния на установление сроков начала протезирования, их особенности при лечении больных с наличием фоновой соматической патологии. [3,7]Опираясь на данные, предоставленные раз-
личными авторами в своих работах, было установлено, что наибольшее влияние на изменения в ротовой полости оказывают гастропатии. Это обосновано в первую очередь большей вероятностью диагностики среди этих групп населения и тесной анатомо-физиологической связью полости рта с органами желудочно-кишечного тракта. [8,9]Анализ данных отечественных и зарубежных исследований позволил прийти к выводу, что изменения в желудочно-кишечном тракте являются пусковым звеном в возникновении стоматологических болезней, и наоборот, изменения в ротовой полости могут послужить причиной возникновения органических изменений желудочно-кишечного тракта.[4,5,6]
Исходя из вышеизложенного, целью нашего исследования явилось проведение цитохимического мониторинга нейтрофилов периферической крови у ортопедических больных после установки внут-рикостных имплантатов на фоне язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки.
Материалы и методы
Материалом нашего исследования служила периферическая кровь пациентов, которым была проведена дентальная имплантация. Для проведения исследования было обследовано 87 пациентов (37 женщин и 50 мужчин) в возрасте от 21 - 64 лет. Подбирая пациентов, мы учитывали
общее состояние организма, перенесены и сопутствующие заболевания, анатомо-физиологическое состояние полости рта. Пациенты были разделены на 3 группы: в 1-ю группу вошли пациенты без соматической патологии - 20 пациентов; во 2-ю группу - ортопедические больные с соматической патологией (язвенная болезнь желудка и 12-перстной кишки) - 27 пациентов; 3-ю группу составили 25 пациентов, требующих ортопедическую помощь и с фоновой соматической патологией, которым в течении первых 30 суток после имплантации через день в/м вводился иммуномо-дулятор «Эрбисол» по 1 мл. Кроме того, обследовано 15 практически здоровых лиц (норма), не страдающих дентальной патологией - контрольная группа. Ортопедическое лечение проводили по двухэтапной методике имплантации винтовыми эндооссальными имплантатами «Уимпл».
При проведении исследования мы использовали препарат «Эрбисол» -иммуномодулятор, репарант, адаптоген. Этот препарат содержит низкомолекулярные «сигнальные» фрагменты мембранных гликопротеинов, выполняющих функцию «маркеров физиологического состояния клеток», которые при патологических нарушениях гемостаза активируют иммунную систему. Препараты класса Эрбисол воздействуют только на разба-лансированные системы, пораженные органы и ткани и остаются практически индифферентными для здорового организма, не вызывая побочных реакций.
Забор периферической крови для исследования проводился на 1,3,6,12 месяцах после установки имплантатов.
Несомненный интерес представляло изучение активности дегидрогеназ - ферментов цикла Кребса и гликолиза: сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ), значения которых рассматривались нами как неспецифический показатель повреждения клеток. Общеизвестно, что сукцинатдегидрогеназа и лактатдегидрогеназа относятся к числу важнейших клеточных ферментов. Сукцинатдегидрогеназа прочно связана с внутренней митохондриальной мембраной клеток и катализирует реакцию, при которой янтараня кислота (сукцинат) дегидратируется в фума-ровою кислоту (фумарат). Лактатдегидрогеназа находится в цитолизе клетки и в анаэробных условиях катализирует реакцию восстановления пировиноградной кислоты (пируват) в молочную (лактат), являющуюся конечным продуктом гликолиза. Поскольку цитохимические методы исследования указанных ферментов в клетках крови подробно описаны в литературе, то здесь указаны принципы их определения. Дегидрогеназы -ферменты, которые отщепляют водород от соответствующего субстрата и переностя его на акцептор. Этот механизм действия используется в цитохимических методах, при которых в систему вводится индикатор, принимающий на себя водород. Индикатор при этом должен иметь окраску и выпадать в осадок. Для этих целей наиболее часто применяют водорастворимые соли тетразолия: неотетразольный хлорид (НТ), синий тетразо-лий (СТ), нитротетразольный синий (НСТ) и другие, которые под воздействием восстанавливающих веществ превращаются в водорастворимый окрашенный формазан, позволяющий установить внутриклеточную локализацию дегидрогеназ под световым микроскопом. Сущность цитохимического метода изучения дегидрогеназ в клетках крови состоит в том, что последние должны помещаться в среду (либо подвергаться обработке), содержащую субстрат, кофермент, ингибитор ферментов, краситель. В указанной среде клетки крови инкубируются в течении 45 - 60 минут при температуре 37оС. Фермент СДГ не требует кофермента, так как образующийся продукт (фумарат) не тормозит реакцию, и, следовательно, не нужно вводить какой-либо агент, связывающий его.
Оригинальная методика изучения активности дегидрогеназ в нейтро-филах крови предложена в работах [1], когда мазки клеток гепаринизиро-ванной крови делали после обработки соответствующими реактивами через час после инкубации. В наших исследованиях в качестве индикатора ферментного процесса использован нитротетразолий синий (НСТ), образующий при восстановлении в клетке мелкие гранулы формазана, окрашивающие цитоплазму от дымчато-серого до насыщенного синего цвета. В работе использовали тонкие нативные мазки крови, высушенные на воздухе, которые после соответствующей обработки, инкубировали в течении 45 минут при температуре 37ОС. Ядра клеток докрашивали раствором метиленового зеленого. Высушенные мазки микроскопировали
под импресионным объективом на микроскопе МБИ-15. Приготовленные растворы реактивов в соответствующих концентрациях и объемах наносили на мазок следующей последовательности.
Определение активности ЛДГ. Растворы: цианида натрия, лактата натрия, НСТ, гемодез, никотинамидадениндинуклеотида (НАД). Последний готовили непосредственно перед применением. Отложение гранул фор-мазана наблюдалось в местах локализации ЛДГ. Интенсивность окраски варьировала от дымчато-серого до интенсивного синего цвета. Ядра клеток были хорошо контурированы.
Определение активности СДГ. Растворы: НСТ, сукцината натрия, фосфатного буфера. Отмечалась четкая локализация гранул формазана. Об активности СДГ судили по интенсивности отложений гранул формазана.
Для оценки активности ферментов в клетках крови применялась методика Astaldi с вычеслением среднего цитохимического показателя (СЦП) по формуле:
_ (» о
СЦП 1Q|i
Где х - количество клеток из 100 просмотренных нейтрофилов в одном мазке с определенной степенью активности фермента;
1,2,3,4 - степень активности;
100 - число просмотренных нейтрофилов в одном мазке.
При этом выделяется четыре степени активности (4ст - нейтрофил полностью покрыт гранулами формазана; 3ст -3 /4 активности; 2ст - й активности и 1ст - % активности).
Весь полученный цифровой материал обрабатывали методом вариационной статистики с выведением критерия Стьюдента, достоверными считали показатели при р<0,05.
Результаты и их обсуждение
Анализ цитохимических показателей в ней-трофилах периферической крови у ортопедических больных после установки имплантатов показал, что во всех 3-х группах наблюдений к 1-му месяцу наблюдалось статистически значимое по отношению к контролю (р<0,05) снижение аэробного окисления и рост анаэробного гликолиза. К 3-му месяцу наблюдений отмечалось значительное снижение аэробного окисления во всех исследуемых группах, но наиболее манифестно во 2-ой группе, где СЦП показатель СДГ составил 1,34±0,05 усл. ед., что было на 27,5% ниже контроля (р<0,01), при этом со стороны активности ЛДГ (анаэробный гликолиз) наблюдалась обратная закономерность, он увеличивался на 25,9% (р<0,01) и составил 2,87±0,15 усл. Ед.. К 6-му месяцу наблюдений у пациентов 1-ой группы (ортопедические больные без соматической патологии) и 3 группы (ортопедические больные с соматической патологией и применением иммуномодулятора «Эрбисола» наблюдалась нормализация цитохимической активности нейтрофилов, где они приобретали по отношению к контролю статистически незначимый характер (р>0,05) (табл.1).
Таблица 1
Группы наблюдений Показатель Сроки наблюдений (месяцы)
1 3 6 12
1 группа - Ортопедические больные без соматической патологии п=20 СДГ Р ЛДГ р 1,53±0,05 <0,05 2,65±0,14 <0,05 1,39±0,07 <0,05 2,71±0,17 <0,05 1,65±0,04 >0,05 2,51±0,10 >0,05 1,81±0,06 >0,05 2,34±0,13 >0,05
2 группа - Ортопедические больные с соматической патологией п=27 СДГ р ЛДГ р 1,50±0,03 <0,05 2,67±0,11 <0,05 1,34±0,05 <0,01 2,87±0,15 <0,01 1,42±0,04 <0,05 2,75±0,17 <0,05 1,64±0,07 >0,05 2,51±0,09 >0,05
3 группа - ортопедические больные с соматической патологией с применением «Эрбисола» п=25 СДГ р ЛДГ р 1,51±0,07 <0,05 2,66±0,16 <0,05 1,38±0,05 <0,05 2,75±0,13 <0,05 1,61±0,06 >0,05 2,59±0,14 >0,05 1,80±0,04 >0,05 2,42±0,12 >0,05
Контроль (здоровые) п=15 СДГ ЛДГ 1,85±0,06 2,28±0,15
р - достоверность по отношению к контролю.
Цитохимические показатели нейтрофилов периферической крови у ортопедических больных после установки имплантатов на фоне
язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки (усл.ед.)
Однако к этому сроку у пациентов 2 группы цитохимический дисбаланс оставался высоким и носил статистически значимый характер, а приближение цитохимических показателей к контролю в этой группе наблюдалось только к 12 месяцу наблюдений.
Проведенные исследования цитохимической активности нейтрофилов периферической крови у ортопедических больных после установки им-плантатов показали, что сама установка импланта-тов сопровождается снижением аэробного окисления и ростом анаэробного гликолиза. Наличие соматической патологии ведет к более выраженному и длительному цитохимическому дисбалансу.
Таким образом, установка имплантатов является травматичным и энергоемким процессом, о чем свидетельствует статистически значимое снижение аэробного окисления (СДГ)и рост анаэробного гликолиза (ЛДГ).
Наличие у ортопедических больных фоновой соматической патологии (язвенная болезнь желудка и 12-перстной кишки) проявляется более манифестными изменениями цитохимической активности нейтрофилов периферической крови, что значительно снижает процессы репарации.
Применение иммуномодулятора «Эрбисол» усиливает процессы репарации и ускоряет процессы адаптации после установки имплантатов.
Литература
1. Борисова М.А., Овчаренко Н.И., Шпак С.И. и др. Суправитальные способы цитохимического определения активности а-глицерофосфатдегидрогеназы и глкозо-6-фосфатдегирдрогеназы в лейкоцитах периферической крови. Лаб. дело. 1983. №9. С 8-10.
2. Борисова М. А., Овчаренко Н. И., Спахов А. С. Новые суправитальные способы цитохимического определения сукцинатдегид-рогеназы и лактатдегидрогеназы в клетках крови. Лабораторное дело. 1975. №12. С 723-725.
3. Матвеева А.И., Волкова Т.И. Клинико-морфофункциональная оценка состояния тканей десны при протезировании с использованием имплантатов СТОМАТОЛОГИЯ, 2, 2007. С63-65.
4. Луцкая И.К. Проявления на слизистой оболочке полости рта заболеваний внутренних органов. Медицинские новости. - 2008. - №5. - С. 24-32.
5. Справочник по детской стоматологии под ред. А. Камерона, Р. Уидмена. М., 2003. С. 190.
6. Стоматология детей и подростков под ред. Р. МакДональда, Д. Эйвери. Изд. 7-е. М., 2003. С. 570.
7. Кулаков А.А., Гветадзе Р.Ш., Подорванова С.В. Развитие технологий зубной имплантации сотрудниками ЦНИИС //Стоматология.- 2006.-№1,- С.28-33.
8. Цимбалистов А.В., Робакидзе Н.С. Влияние стоматологического статуса больных язвенной болезнью на инфицированность полости рта и слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori // Клиническая стоматология. - 2001. - №1. - С. 16-18.
9. Григорьян А.С., Грудянов А.И., Рабухина Н.А., Фролова О.А. Болезни пародонта //Руководство для врачей. - Москва, 2004. -287с.
References
1. Borisova M. A., Ovcharenko N. I., Shpak S. I. i dr. Supravitalnyie sposobyi tsitohimicheskogo opredeleniya aktivnosti a-glitserofosfatdegidrogenazyi i glkozo-6-fosfatdegirdrogenazyi v leykotsitah perifericheskoy krovi. Laboratornoe delo. 1983. #9. S 8-10
2. Borisova M. A., Ovcharenko N. I., Spahov A. S. Novyie supravitalnyie sposobyi tsitohimicheskogo opredeleniya suktsinatdegidrogenazyi i laktatdegidrogenazyi v kletkah krovi. Laboratornoe delo. 1975. #12. S 723-725.
3. A.I. Matveeva, T.I. Volkova Kliniko-morfofunktsionalnaya otsenka sostoyaniya tkaney desnyi pri protezirovanii s ispolzovaniem implantatov STOMATOLOGIYa, 2, 2007. S63-65.
4. I.K. Lutskaya Proyavleniya na slizistoy obolochke polosti rta zabolevaniy vnutrennih organov. Meditsinskie novosti. - 2008. - #5. - S. 24-32.
5. Spravochnik po detskoy stomatologii pod red. A. Kamerona, R. Uidmena. M., 2003. S. 190.
6. Stomatologiya detey i podrostkov pod red. R. MakDonalda, D. Eyveri. Izd. 7-e. M., 2003. S. 570.
7. Kulakov A.A., Gvetadze R.Sh., Podorvanova S.V. Razvitie tehnologiy zubnoy implantatsii sotrudnikami TsNIIS //Stomatologiya.- 2006.-#1,- S.28-33.
8. Tsimbalistov A.V., Robakidze N.S. Vliyanie stomatologicheskogo statusa bolnyih yazvennoy boleznyu na infitsirovannost polosti rta i slizistoy obolochki zheludka Helicobacter pylori // Klinicheskaya stomatologiya. - 2001. - #1. - S.16-18.
9. Grigoryan A.S., Grudyanov A.I., Rabuhina N.A., Frolova O.A. Bolezni parodonta //Rukovodstvo dlya vrachey. - Moskva, 2004. -287s.
Сведения об авторе
НЕПРЕЛЮК ОЛЬГА АНАТОЛЬЕВНА, к.мед.н., доцент каф. ортопедической стоматологии Медицинской академии имени С.И. Георгиевского, адрес: РФ, Крым, 295034 г. Симферополь, ул. Киевская, 120 Б, кор.2, кв. 122. Тел. +7-978-73-53-445; [email protected]
© НЕПРЕЛЮК О.А., 2015 Поступила 2.09.2015
