CC BY
60крымский журнал экспериментальной и клинической медицины
УДК 616-079.1-008.64-612.2:576.08 Пивоварова О. А.
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ 2 ТИПА
ФГАОУ ВО «Севастопольский государственный университет», 299053, улица Университетская 33, Севастополь, Россия
Для корреспонденции: Пивоварова Оксана Анатольевна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры пищевые технологии и оборудование ФГАОУ ВО «Севастопольский государственный университет», Е-mail: [email protected]
For correspondence: Oksana А. Pivovarova, PhD of the Depatment of Food technology and Equipment «Sevastopol National University», Е-mail: [email protected]
INFORMATION ABOUT AUTHORS Pivovarova O.A., http://orcid.org/0000-0003-4234-1869
РЕЗЮМЕ
Значение для структурно-функционального состояния клеток дыхательной системы при сахарном диабете 2 типа (СД 2 типа) и выполнения метаболических процессов принадлежит энергообеспечению, осуществляемое митохондриями. К биохимическим проявлениям нарушения энергообмена относят увеличение
концентрации лактата и митохондриального маркерного фермента - сукцинатдегидрогеназы (СДГ).
Целью исследования являлся цитохимический анализ состояния митохондриальной функции у пациентов с относительной инсулиновой недостаточностью.
Цитохимический анализ основывался на изучении степени активности основных ферментов, катализирующих аэробный и анаэробный обмены клетки - СДГ и ЛДГ в лимфоцитах периферической крови, с визуальной и компьютерной морфометрией с использованием пакета программ «Видеотест 4.0». Субстратом для изучения клеточных факторов дыхательной системы являлся бронхоальвеолярный секрет, полученный в ходе диагностической бронхоскопии по стандартной методике.
При исследовании бронхоальвеолярного лаважа определено снижение качественных показателей, функциональной активности клеток бронхоальвеолярного пространства при СД 2 типа.
В результате цитохимического исследования, установлено угнетение клеточного метаболизма лимфоцитов в виде снижения уровня активности СДГ и ЛДГ у пациентов с СД 2 типа при сравнении с показателями в контрольной группе в 1,7 и 2,5 раза, соответственно, при р<0,001.
Показатели низкой клеточной активности в 27 раз (p<0,05) чаще регистрировались при СД 2 типа при сравнении с данными у лиц без диабета, у которых высокая активность фиксировалась в 6 раз (p<0,05) чаще.
Уровень активности митохондриальных дегидрогеназ оказывал влияние на жизнеспособность клеточных элементов дыхательной системы и находился под влиянием уровня гипергликемии.
В результате исследования удалось установить, что в условиях гипергликемии, уровень дегидрогеназной активности лимфоцитов может служить диагностическим критерием функционального состояния митохондрий и показателем энергообеспечения воздухоносных путей и легочной ткани в целом.
Ключевые слова: сахарный диабет 2 типа; митохондрии; активность лактатдегидрогеназы; активность сукцинатдегидрогеназы.
SUMMARY
DIAGNOSTIC CRITERIA FOR MITOCHONDRIAL DYSFUNCTION IN TYPE 2 DIABETES MELLITUS
Pivovarova O. A.
Significance for structural and functional state of cells in the respiratory system in type 2 diabetes and perform metabolic processes owned energy supply, carried out by mitochondria. By biochemical manifestations of energy exchange include an increase in concentration of lactate and mitochondrial marker enzyme - succinate dehydrogenase (SDH).
The aim of the study was the cytochemical analysis of mitochondrial function in patients with relative insulin deficiency.
Cytochemical analysis was based on a study of the degree of activity of the major enzymes catalyzing the aerobic and anaerobic cells exchanges in peripheral blood lymphocytes - SDH and LDH, with visual and computer morphometry using the program «Videotest 4.0» package. The substrate for the study of cellular factors of the respiratory system was the bronchoalveolar secret obtained during diagnostic bronchoscopy according to standard procedure.
In the study of bronchoalveolar lavage determined reduction of quality indicators, the functional activity of cells in the bronchoalveolar space of type 2 diabetes.
As a result, cytochemical investigation detected inhibition of cellular metabolism of lymphocytes in the form of lower levels of SDH and LDH activity in patients with type 2 diabetes when compared with those in the control group
by 1.7 and 2.5 times, respectively, with p <0.001. The level of activity of mitochondrial dehydrogenases influenced the viability of the cellular elements of the respiratory system, and was influenced by the level of hyperglycemia.
A result of research was found that in hyperglycemic conditions, the level of lymphocyte dehydrogenase activity may serve as a diagnostic criterion of the functional state of mitochondria and an indicator of energy supply airways and lung tissue as a whole.
Key words: type 2 diabetes; mitochondria; lactate dehydrogenase activity; succinate dehydrogenase activity.
Сложный механизм развития возрастающих легочных осложнений при сахарном диабете (СД) многие ученые предлагают рассматривать с учетом развития гипоксических нарушений при митохондриальной дисфункции [1-3]. При этом, существенное значение для структурно-функционального состояния клеток легочной ткани и осуществления ими многочисленных метаболических процессов принадлежит энергообеспечению, которое осуществляют митохондрии [4].
Энергетическая дисфункция клеток сопровож-дается полиморфизмом, но к основным биохимическим проявлениям на-рушения энергообмена относят увеличение кон-центрации лактата и пирувата, изменения в спектре липидов и фосфолипидов крови [5]. Биохимические показатели не имеют значительного различия в зависимости от конкретного заболевания с митохондриальной недостаточностью -они служат диагностическим ориентиром [6-7].
В результате вызванного гипоксией перехода метаболизма тканей на преимущественное использование с энергообразующей целью окисления свободных жирных кислот, в противовес аэробному окислению глюкозы, происходит в матриксе митохондрий и приводит к повреждению мембранной структуры митохондрий из-за накопления в клетке избыточного количества лактата [8].
В настоящее время, интерес исследователей привлекает митохондриальный маркерный фермент - 8Н-содержащим фермент, прочно связанный с внутренней мембраной митохондрий - сукцинатдегидрогеназу (СДГ) [9-10]. Учитывая последние данные исследований об участии СДГ в реакциях цикла Кребса, в транспорте электронов митохондриальной дыхательной цепи, можно использовать данный критерий для оценки выраженности митохон-дриальной дисфункции в респираторной системе при СД наряду с цитоплазменным ферментом - лактатдегидрогеназой (ЛДГ) [11-12].
Таким образом, исходя из вышеизложенного, целью исследования являлся цитохимический анализ состояния митохондриальной функции у пациентов с сахарным диабетом 2 типа.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В условиях эндокринологического отделения Областной клинической больницы было
обследовано 63 пациента с СД 2 типа в возрасте 54,2±1,3 года с длительностью заболевания - 10,3±0,54 лет и 59 практически здоровых лиц в возрасте 47,8±3,5 года (все данные приведены в виде средних арифметических и их стандартной ошибки среднего (М±т). Больные с СД, а также лица контрольной группы не курили и не имели в анамнезе заболеваний бронхо-ле-гочной системы. Уровень гликозилированного гемоглобина (HbAlc) у больных с СД 2 типа был равен 8,7±0,18%, у лиц контрольной группы - 4,2±1,4%. У исследуемых, производилось определение жизнеспособности эпителиоцитов (ЖЭ) и альвеолярных макрофагов (ЖАМ) при помощи теста на исключение трипанового синего, а также изучение фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов по результатам их инкубации с полистероловыми частицами латекса (определение фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса) [13-14]. В качестве интегрального теста для оценки потенциальной микробицидной активности фагоцитирующих клеток применялся НСТ тест. Субстратом для изучения клеточных факторов дыхательной системы являлся бронхоальвеолярный секрет, который получали в ходе диагностической бронхоскопии по стандартной методике [15-16].
Цитохимический анализ основывался на изучении степени активности основных ферментов, катализирующих аэробный и анаэробный обмены клетки - СДГ и ЛДГ в лимфоцитах периферической крови (метод Пирса, 1957 г. в модификации Р.П. Нарцис-сова (1986) [17], с последующей визуальной и компьютерной морфометрией с использованием пакета программ «Видеотест 4.0» [18]. Статистический анализ проводился с использованием пакета лицензионных программ "Statistica", "Microsoft Exel" [19-20].
РЕЗУЛЬТАТЫ
При исследовании клеточного состава жидкости бронхоальвеолярного лаважа в группе больных с СД 2 типа, ЖЭ и ЖАМ бронхиального дерева была достоверно ниже при сравнении с аналогичными показателями в контрольной группе и составляла 48,4+2,3% и 57,6+1,9%, (р=0,0003), а также 72,6+2,3% и 85,3+2,7% (р=0,0004), соответственно. Кроме этого, в исследуемой группе пациентов с ин-
2016, т. 6, №4
крымскии журнал экспериментальном и клиническои медицины
сулиновой недостаточностью зафиксировано меньшее количество НСТ-положительных АМ при сравнении с контрольной группой - 25,3+1,4% и 31,9+1,6% (р=0,008). Цитологическое изучение материала, позволило установить статистически достоверное нарушение функциональной способности фагоцитирующих клеток у пациентов с СД 2 типа, по от-
ношению к полученным данным в контрольной группе - 39,1 + 1,8 и 48,8 + 1,3 (р=0,006).
В результате цитохимического исследования, установлено угнетение клеточного метаболизма лимфоцитов в виде снижения уровня активности СДГ (АСДГ) у пациентов с СД 2 типа при сравнении с показателями у наблюдаемых контрольной группы в 1,7 раза, при р<0,001 (рис. 1).
Рис. 1. Уровень активности сукцинатдегидрогеназы у обследованных лиц.
Примечание: а - р<0,001 статистическая достоверность отличий уровня активности сукцинатдегидрогеназы у пациентов с СД 2 типа при сравнении с контрольной группой. АСДГ при СД 2 типа/АСДГ в контр.гр.: 1-знач.=-7,90; р=0,000005; Б-отн.дисп=1,22
При этом, показатель АСДГ при СД 2 типа имел практически равнозначное распределение ферментативной активности наблюдавшееся в интервалах от 1,8 до 19,8 усл.ед. у 57 (90,5%) пациентов, при критерии нормальности Колмогорова-Смирнова р>.20; Лиллиефорса р<,05 Шапи-ро-Уилка W=,96, р=,03 в отличие от контрольной группы, где были выявлены значения в интервале от 13,3 до 19,3 усл.ед у 24 (41,4%) исследуемых, при критерии нормальности Колмогорова-Смирнова р> .20; Шапиро-Уилка W=,96, р=,05.
Распределение и частота встречаемости различных значений АСДГ в группах представлено в табл. 1.
Аналогичные изменения митохондриаль-ной ферментативной активности были зафиксированы при исследовании ЛДГ. Показатели активности ЛДГ (АЛДГ) в группе пациентов с СД 2 типа были ниже в 2,5 раза, при сравнении со значениями активности фермента в контрольной группе, при р<0,001 (рис. 2).
Изучаемые данные, методом номинальных переменных, позволили выявить, что наибольшая АЛДГ среди больных с СД 2 типа - от 6,3 до 12,3 усл.ед. у 30 (47,6%) человек, при крите-
рии Колмогорова-Смирнова р>.20; Лиллиефор-са р<,15 Шапиро-Уилка W=,95, р=,03, в отличие от контрольной группы, где АЛДГ определялась в интервале от 23,6 до 32,6 усл.ед. у 26 (44,8%) наблюдаемых при критерии Колмогорова-Смирнова р>.20 и Шапиро-Уилка - W=,97, р=,15.
Распределение и частота встречаемости различных значений АЛДГ в группах представлено в табл. 2. Изменения качественного состава реагирующих клеток у исследуемых респондентов демонстрировало тенденцию к снижению активности при инсулиновой недостаточности. Так, показатели низкой клеточной активности в 27 раз (р<0,05) чаще регистрировались при СД 2 типа при сравнении с данными у лиц без инсулиновой недостаточности, у которых высокая активность фиксировалась в 6 раз (р<0,05) чаще (рис. 3).
В ходе работы была проанализирована динамика изменения ЖЭ и ЖАМ под воздействием различных факторов и установлена на момент обследования статистически достоверная корреляционная взаимосвязь между жизнеспособностью клеток респираторной системы и активностью митохондриальных дегидрогеназ у пациентов СД 2 типа (рис. 4).
Таблица 1
Распределение и частота встречаемости активности сукцинатдегидрогеназы в исследуемых группах
Группа пациентов с СД 2 типа
Интервал распределения Частота Кумул. частота Процент Кумул. %
1,800000<=х<7,800000 18 18 10,8433 10,8434
7,800000<=х<13,80000 19 37 11,4457 22,2892
13,80000<=х<19,80000 20 57 12,0481 34,3373
19,80000<=х<25,80000 6 63 3,61446 37,9518
Контрольная группа
Интервал распределения Частота Кумул. частота Процент Кумул. %
7,300000<=х<13,30000 6 6 3,61446 3,6145
13,30000<=х<19,30000 24 30 14,4578 18,072
19,30000<=х<25,30000 14 44 8,43373 26,506
25,30000<=х<31,30000 14 58 8,43373 34,939
Рис. 2. Уровень активности лактатдегидрогеназы у обследованных лиц.
Примечание: а - р<0,001 статистическая достоверность отличий уровня активности лактатдегидрогеназы у пациентов с СД 2 типа при сравнении с контрольной группой. АЛДГ при СД 2 типа/АЛДГ в контр.гр.: 1-знач.=-10,59; р=0,00001; Б-отн.дисп.= 2,05.
Таблица 2
Распределение и частота встречаемости активности лактатдегидрогеназы исследуемых группах
Группа пациентов с СД 2 типа
Интервал распределения Частота Кумул. частота Процент Кумул. %
3000000<=х<6,300000 17 17 10,2409 10,2410
6,300000<=х<12,30000 30 47 18,0722 28,3133
12,30000<=х<18,30000 10 57 6,02410 34,3373
18,30000<=х<24,30000 5 62 3,01205 37,3494
24,30000<=х<30,30000 1 63 0,60241 37,9518
2016 т 6 №4 крымскии журнал экспериментальной и клиническои медицины
Продолжение табл.2
Контрольная группа
Интервал распределения Частота Кумул. частота Процент Кумул. %
5,600000<=х<14,60000 9 9 5,4216 5,4217
14,60000<=х<23,60000 16 25 9,6385 15,060
23,60000<=х<32,60000 26 51 15,6626 30,722
32,60000<=х<41,60000 7 58 4,21687 34,939
Рис. 3. Качественный состав реагирующих клеток в исследуемых группах.
* - р<0,05 относительно исходных данных
■ъ. ЖАМ ЖАМ
Рис 4. Корреляция между уровнями дегидрогеназной активности лимфоцитов и жизнеспособностью клеточных элементов респираторной системы у пациентов с СД 2 типа.
Примечание: АСДГ при СД2 типа/ЖЭ при СД2 типа: г2 = 0,17; г = 0,42; р = 0,002; АСДГ при СД2 типа/ ЖАМ при СД2 типа: г2 = 0,21; г = 0,46; р = 0,0006; АЛДГ при СД2 типа/ ЖЭ при СД2 типа: г2 = 0,16; г = 0,39; р = 0,002; АЛДГ при СД2 типа/ ЖАМ при СД2 типа: г2 = 0,26; г = 0,51; р = 0,0001.
Учитывая значения множественного коэффициента детерминации, отражающего долю дисперсии результативного признака в группе пациентов с инсулиновой недостаточностью, можно сделать вывод, что вы-
явленная качественная оценка тесноты, статистически достоверной, взаимосвязи является умеренной силы между уровнем НвА1с и активностью митохондриальных ферментов для пациентов с СД 2 типа (рис. 5).
Рис. 5. Корреляция между уровнями дегидрогеназной активности лимфоцитов и гликозилирован-
ным гемоглобином у пациентов с СД 2 типа.
Примечание: НвА1с при СД 2 типа/ АСДГ при CД 2 типа: г2 = 0,15; г = -0,39; p = 0,001. НвА1с при СД 2 типа/ АЛДГ при ОД 2 типа: г2 = 0,18; г = -0,42; p = 0,0006
ОБСУЖДЕНИЕ
В результате проведенного исследования удалось установить, что в условиях гипергликемии дегидрогеназный статус лимфоцитов может характеризовать не только функциональное состояние митохондрий, но и показатели энергообеспечения воздухоносных путей и легочной ткани в целом.
В этом заключается взаимосвязь СД и легочной патологии. В исследовании установлено, что хроническая гипергликемия вызывает дисфункцию митохондрий, что вероятно приводит к перепроизводству дегидрогеназ и вызывает нарушение функции эпителиоцитов и альвеолярных макрофагов, и в последующем влечёт за собой ремоделирование воздухоносных путей.
Однако, в современных научных работах, посвящённых описанию развития осложнений СД, отсутствует характеристика развития патологических изменений митохондрий дыхательной системы. Поэтому, исследование данного вопроса являлось актуальной задачей современной эндокринологии.
Установленное в работе снижение АСДГ лимфоцитов уменьшало скорость реакций ци-тратного цикла, а АЛДГ больных с СД 2 типа отражало кризис процессов анаэробного превра-
щения углеводов при патологии респираторной системы в отличие от показателей цитоэнзи-матического статуса наблюдаемых без диабета.
Следует заметить, что выявленные отклонения активности дегидрогеназ лимфоцитов, отражали напряженность компенсаторно-приспособительных реакций в условиях ранее зафиксированной гипоксии при патологии респираторной системы у категории пациентов с относительной инсулиновой недостаточностью.
Выводы. Состояние энзиматического статуса при СД 2 типа характеризуется, как стойкое энергодефицитное состояние митохондрий с преобразованием углеводного обмена внутри клетки и может рассматриваться как вторичная митохондриальная дисфункция.
Установленное энергодефицитное состояние клеточных органелл оказывает негативное влияние на факторы неспецифической защиты бронхо-легочной системы.
В исследовании показано, что уровень биохимических маркеров энергообмена в респираторной системе при СД 2 типа зависит от уровня гликемии.
Определение активности ЛДГ и СДГ может быть использовано для оценки состояния энергетического обмена и оценки эффективности профилактических средств, направ-
крымский журнал экспериментальной и клинической медицины
ленных на снижение неблагоприятного влияния гипергликемии на респираторный тракт.
Конфликт интересов. Автор заявляет об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование исследований и публикаций: финансовая поддержка отсутствовала.
ЛИТЕРАТУРА
1. Makrodimitri S., Kosmidou А. Community-acquired pneumonia - impacts of diabetes mellitus as a comorbidity: A prospective, observational study. European Respiratory Journal. 2015;46 (suppl.59):1841. doi:10.1183/13993003. congress-2015.
2. Hsia C.W., Raskin P. Lung involvement in diabetes. Diabetes Care. 2008; 31(4):828-829. doi:10.2337/dc08-0103
3. Powell C.S., Jackson R.M. Mitochondrial complex I, aconitase, and succinate dehydrogenase during hypoxia-reoxygenation: modulation of enzyme activities by MnSOD. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2003;285(1):189-198. doi:10.1152/ajplung.00253.2002.
4. Thangboonjit W., Barnes P., Durham A., Adcock I. Mitochondrial function in three different types of airway epithelial cells. European Respiratory Journal. 2015;46(suppl.59):909. doi:1 0.11 83/1 3993003. congress-2015.
5. Sun R.C., Koong A., Giaccia A., Denko N.C. Measuring the impact of microenvironmental conditions on mitochondrial dehydrogenase activity in cultured cells. Adv. Exp. Med. Biol. 2016;899:113-120. doi: 10.1007/978-3-319-26666-4_7.
6. Lamprini T., Panagiotis G., Euthymia I., Panagiotis A. Diabetes mellitus and obstructive pulmonary disease. Is there an association? European Respiratory Journal. 2014; 44 (suppl. 58): 2938. doi: 10.1185/2397184.023.
7. Lerner C.A., Sundar I.K., Rahman I. Mitochondrial redox system, dynamics, and dysfunction in lung inflammaging and COPD. Int. J. Biochem. Cell. Biol. 2016;26.pii:S1357-2725(16)30200-X. doi:10.1016/j. biocel.2016.07.026.
8. Wiegman C.H., Michaeloudes C., Haji G. Oxidative stress-induced mitochondrial dysfunction drives inflammation and airway smooth muscle remodeling in patients with chronic obstructive pulmonary disease. J. Allergy. Clin. Immunol. 2015;136(3):769-780. doi: 10.1016/j. jaci.2015.01.046.
9. Halestrap A.P., Richardson A.P. The mitochondrial permeability transition: a current perspective on its identity and role in ischaemia/reperfusion injury. J. Mo. Cel. Cardiol. 2015; 78:129-141. doi: 10.1016/j.yjmcc.2014.08.018.
10. Chouchani E.T., Pell V.R., Gaude E., Aksentijevic D. Ischaemic accumulation of succinate controls reperfusion injury through mitochondrial ROS. Nature. 2014;515:431-435. doi: 10.1038/nature13909.
11. Martins M., Froes F., Boavida J. M., Raposo J. F. Prevalence and impact of diabetes mellitus among hospitalized community-acquired pneumonia patients.
European Respiratory Journal. 2015;46(suppl.59):PA1104. doi:10.1183/13993003.congress-2015.PA1104
12. Ainscow E. K., Zhao C., Rutter G. A. Acute overexpression of lactate dehydrogenase-a perturbs - cell mitochondrial metabolism and insulin secretion. Diabetes. 2000;49:1149-1155. doi: 10.2337/diabetes.49.7.1149.
13. Хронический бронхит и обструктивная болезнь легких. Наследственная предрасположенность к хронической обструктивной патологии легких и вопросы ее диагностики. Под. ред. Кокосова А.Н., Ивчик Т.В.: Издательство СПб.: Лань; 2002:81-86.
14. Клиника и лечение хронического бронхита. К оценке диагностического и прогностического значения функциональной активности альвеолярных макрофагов у больных хроническим бронхитом. Под. ред. Кокосова А.Н., Ивчик Т.В.: Издательство Ленинград; 1980: 40-44.
15. Rennard S. I. Bronchoalveolar lavage: performance, sampling procedure, processing and assessment. Eur. Respir. J. 1998;26:13-15.
16. Руководство по клинической эндоскопии. Под ред. Савельева В.С., Буянова В.М., Лукомского Г.И.: Издательство Медицина; 1985.
17. Нарциссов Р.П. Применение паранитротетеразо-лия фиолетового для количественного цитохимического определения дегидрогеназ лимфоцитов человека. Архив анатомии, гистологии, эмбриологии. 1969;5:85-91.
18. "ВидеоТест 4.0": Pуководство пользователя программы.: Издательство НЕВО-АСС, СПб; 2006.
19. Карась С.И. Информационные основы принятия решений в медицине: Учебное пособие. Томск: Печатная мануфактура; 2003.
20. Кобринский Б.А., Зарубина Т.В. Медицинская информатика: Учебник. М.: Академия; 2009.
REFERENCES
1. Makrodimitri S., Kosmidou А. Community-acquired pneumonia - impacts of diabetes mellitus as a comorbidity: A prospective, observational study. European Respiratory Journal. 2015;46 (suppl.59):1841. doi:10.1183/13993003. congress-2015.
2. Hsia C.W., Raskin P. Lung involvement in diabetes. Diabetes Care. 2008; 31(4):828-829. doi:10.2337/dc08-0103
3. Powell C.S., Jackson R.M. Mitochondrial complex I, aconitase, and succinate dehydrogenase during hypoxia-reoxygenation: modulation of enzyme activities by MnSOD. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2003;285(1):189-198. doi: 10.1152/ajplung.00253.2002.
4. Thangboonjit W., Barnes P., Durham A., Adcock I. Mitochondrial function in three different types of airway epithelial cells. European Respiratory Journal. 2015;46(suppl.59):909.doi:10.1183/13 993003. congress-2015.
5. Sun R.C., Koong A., Giaccia A., Denko N.C. Measuring the impact of microenvironmental conditions on mitochondrial dehydrogenase activity in cultured cells. Adv. Exp. Med. Biol. 2016;899:113-120. doi: 10.1007/978-3-319-26666-4_7.
6. Lamprini T., Panagiotis G., Euthymia I., Panagiotis A. Diabetes mellitus and obstructive pulmonary disease. Is there an association? European Respiratory Journal. 2014; 44 (suppl. 58): 2938.
7. Lerner C.A., Sundar I.K., Rahman I. Mitochondrial redox system, dynamics, and dysfunction in lung inflammaging and COPD. Int. J. Biochem. Cell. Biol. 2016;26.pii:S1357-2725(16)30200-X. doi:10.1016/j. biocel.2016.07.026.
8. Wiegman C.H., Michaeloudes C., Haji G. Oxidative stress-induced mitochondrial dysfunction drives inflammation and airway smooth muscle remodeling in patients with chronic obstructive pulmonary disease. J. Allergy. Clin. Immunol. 2015;136(3):769-780. doi: 10.1016/j. jaci.2015.01.046.
9. Halestrap A.P., Richardson A.P. The mitochondrial permeability transition: a current perspective on its identity and role in ischaemia/reperfusion injury. J. Mo. Cel. Cardiol. 2015; 78:129-141. doi:10.1016/j.yjmcc.2014.08.018.
10. Chouchani E.T., Pell V.R., Gaude E., Aksentijevic D. Ischaemic accumulation of succinate controls reperfusion injury through mitochondrial ROS. Nature. 2014;515:431-435. doi:10.1038/nature13909.
11. Martins M., Froes F., Boavida J. M., Raposo J. F. Prevalence and impact of diabetes mellitus among hospitalized community-acquired pneumonia patients. European Respiratory Journal. 2015;46(suppl.59):PA1104. doi:10.1183/13993003.congress-2015.PA1104
12. Ainscow E. K., Zhao C., Rutter G. A. Acute overexpression of lactate dehydrogenase-a perturbs - cell
mitochondrial metabolism and insulin secretion. Diabetes. 2000;49:1149-1155. doi:10.2337/diabetes.49.7.1149.
13. Hronicheskij bronhit i obstruktivnaja bolezn' legkih. Nasledstvennaja predraspolozhennost' k hronicheskoj obstruktivnoj patologii legkih i voprosy ee diagnostiki. Pod. red. Kokosova A.N., Ivchik T.V.: Izdatel'stvo SPb.: Lan'; 2002:81-86. (In Russ).
14. Klinika i lechenie hronicheskogo bronhita. K ocenke diagnosticheskogo i prognosticheskogo znachenija funkcional'noj aktivnosti al'veoljarnyh makrofagov u bol'nyh hronicheskim bronhitom. Pod. red. Kokosova A.N., Ivchik T.V.: Izdatel'stvo Leningrad; 1980: 40-44. (In Russ).
15. Rennard S. I. Bronchoalveolar lavage: performance, sampling procedure, processing and assessment. Eur. Respir. J. 1998;26:13-15.
16. Rukovodstvo po klinicheskoj jendoskopii. Pod red. Savel'eva V.S., Bujanova V.M., Lukomskogo G.I.: Izdatel'stvo Medicina; 1985. (In Russ).
17. Narcissov R.P. Primenenie paranitroteterazolija fioletovogo dlja kolichestvennogo citohimicheskogo opredelenija degidrogenaz limfocitov cheloveka. Arhiv anatomii, gistologii, jembriologii. 1969;5:85-91. (In Russ).
18. "VideoTest 4.0": Pukovodstvo pol'zovatelja programmy.: Izdatel'stvo NEVO-ASS, SPb; 2006. (In Russ).
19. Karas' S.I. Informacionnye osnovy prinjatija reshenij v medicine: Uchebnoe posobie. Tomsk: Pechatnaja manufaktura; 2003. (In Russ).
20. Kobrinskij B.A., Zarubina T.V. Medicinskaja informatika: Uchebnik. M.: Akademija; 2009. (In Russ).
