CC BY
10УДК 577.15:612.313.1
Цитохимические показатели нейтрофилов периферической крови ортопедических больных при использовании направленной остеогенной стимуляции
B.А. Ткаченко, П.Н. Колбасин, О.В. Ткаченко, С.А. Бобкова, К.Г. Кушнир,
C.К. Северинова
Крымский государственный медицинский университет им. С.И. Георгиевского, Симферополь Ключевые слова: цитохимия, Коллапан-Л, ортопедия.
Широкому внедрению в стоматологическую практику имплантантов препятствует ряд факторов, среди которых сложность проводимых операций, и, пожалуй, самое главное, биологическая несовместимость, которая определяет, в большей степени, риск возникновения осложнений. В последние годы появились работы [1, 3, 5, 6] в которых предлагается воздействовать не на имплантаци-онный материал, а на реактивность организма, в частности, на способность тканей, окружающих имплантант, реагировать на него, как на родственный элемент. Такой подход, по мнению специалистов, рассматривается, как наиболее перспективный [8].
В качестве средств воздействия на окружающие ткани больше всего внимания уделяется остео-тропным общепринятым препаратам (солям кальция, фосфора,
витаминам и др.) [7]. Однако эффективность этих препаратов не очень высока [4]. Поэтому продолжается поиск новых более эффективных лечебно-профилактических остеотропных средств.
Целью данной работы явилось изучение комплексного действия остеотропного препарата «Кол-лапан-Л» и иммуномодулятора «Эрбисола» у
пациентов с периимплантитами по данным мониторинга цитохимической активности периферической крови.
Материал и методы исследований
Материалом исследования явилось периферическая кровь 22 больных с явлениями периим-плантита, а также со сниженными процессами репарации, которым мы применяли комплексную остеогенную терапию, включаю-
щую внесение «Коллапана- Л» и парентеральное введение имму-номодулятора «Эрбисол» в дозе 1,0 1 раз в сутки в течение 10 дней.
«Коллапан-Л» (интермедиапа-тит, производства России) - биоактивный материал, представляющий собой однородную композицию особо чистого
гидроксиапатита и коллагена специальной обработки насыщенной антибиотиком линкомици-ном. «Коллапаном-Л» заполнялась полость, имеющая не менее трех стенок, порошок смачивался кровью в дефекте кости и закрывался мембраной.
Забор периферической крови производился на момент обращения, а также на 1, 3 ,6 и 12 месяцы после использования остеогенных препаратов.
Несомненный интерес представляло изучение активности де-гидрогеназ, участвующих в окислительных процессах лактатде-
Крымский терапевтический журнал
гидрогеназы (ЛДГ) и сукцинаде-гидрогеназы (СДГ).
ЛДГ является одним из основных ферментов гликолиза, катализирующих обратимую реакцию превращения пировиноградной кислоты в молочную, а СДГ является одним из ферментов цикла трикарбоновых кислот Кребса и участвует в реакции дегидрирования янтарной кислоты в фумаро-вую.
Дегидрогеназы - ферменты, которые отщепляют водород от соответствующего субстрата и переносят его на акцептор. Этот механизм действия используется в цитохимических методах, при кото-
ках крови состоит в том, что последние должны помещаться в среду (либо подвергаться обработке), содержащую субстрат, ко-фермент, ингибитор ферментов, краситель. В указанной среде клетки крови инкубируются в течение 45-60 минут при температуре 37°С. Единственный фермент СДГ из определяемых гисто-химически не требует кофермен-та, так как образующийся продукт (фумарат) не тормозит реакцию, и, следовательно, не нужно вводить какой-либо агент, связывающий его. В указанных выше работах по определению активности дегидрогеназ использовались
Табл. 1
Цитохимические показатели нейтрофилов периферической крови ортопедических больных при использовании остеогенных
препаратов ( усл. ед.), п=22
Показатель На момент обращения Сроки наблюдений (месяцы)
1 3 6 12
СДГ 1,42±0,05 р1<0,05 1,55±0,08 р1<0,05 р2>0,05 1,72±0,06 р1>0,05 р2<0,05 1,84±0,0 7 р1<0,05 р2>0,01 1,86±0,07 р1<0,05 р2>0,01
ЛДГ 2,80±0,10 р1<0,05 2,69±0,11 р1<0,05 р2>0,05 2,47±0,09 р1>0,05 р2>0,05 2,33±0,0 9 р1<0,05 р2>0,05 2,27±0,13 р1<0,05 р2>0,05
Контроль СДГ, ЛДГ п=18 1,88±0,010 2,26±0,14
Р1- достоверность по отношению к контролю.
Р2- достоверность по отношению к показателю на момент обращения.
рых в систему вводится индикатор, принимающий на себя водород. Индикатор при этом должен менять окраску и выпадать в осадок, для этих целей наиболее часто применяют водорастворимые соли тетразолия-неотразолий хлорид (НТ), синий тетразолий (СТ), нитротетразолий синий (НСТ) и другие которые под действием восстанавливающих веществ
превращаются в водорастворимый окрашенный формазан, позволяющий устанавливать внутриклеточную локализацию дегидро-геназ под световым микроскопом. Сущность цитохимического метода изучения дегидрогеназ в клет-
разные индикаторы с соответствующей окраской клеток крови и методы фиксации (высушивание на воздухе, выдерживание в 60% ацетоне и другие).
В наших исследованиях в качестве индикатора ферментного процесса использован нитротет-разолий синий (НСТ), образующий при восстановлении в клетке мелкие гранулы формазана и окрашивающий цитоплазму от серо-дымчатого до интенсивно-синего цвета В работе использовали тонкие нативные мазки крови, высушенные на воздухе, которые после соответствующей обработки инкубировали в течение 45
минут при температуре 37° С. Ядра клеток докрашивали раствором метилового зеленого. Высушенные мазки микроскопировали с иммерсионным объективом на микроскопе МБИ-15.
Для оценки активности ферментов в клетках крови применялся морфометрический метод, с выведением среднего цитохимического показателя (СЦП) по следующей формуле: СЦП=
((Х1*1)+(Х2*2)+(Х3*3)+(Х4*4))/100
где х - количество клеток из 100 просмотренных нейтрофилов в одном мазке
с определенной степенью активности фермента;
1, 2, 3, 4 - степень активности; 100 - число просмотренных ней-трофилов в одном мазке.
При этом выделяли четыре степени активности (4 ст. - нейтро-фил полностью покрыт гранулами формазана; 3 ст. - 3/4 активности; 2 ст. - 1/2 активности и 1 ст. -1/4 активности).
Весь полученный цифровой материал обрабатывали методом вариационной статистики с выведением критерия Стьюдента, достоверными считали показатели при Р<0,05.
Результаты и обсуждение
Анализ цитохимических показателей нейтрофилов периферической крови у ортопедических больных с явлениями непереносимости к несъемным мостовидным протезам и периимплантита показал, что на момент обращения за стоматологической помощью отмечалось значительное снижение аэробного окисления, так, активность сукцинатдегидрогеназы составлял 1,42±0,05 усл. ед, что было на 24,5% (р1<0,05) ниже контроля и рост активности лактавдегидро-геяазы, которая была выше контроля на 23,9% (р1<0,05). (Таблица 1).
После применения остеогенных препаратов к 1 месяцу наблюдений отмечался рост аэробного
КТЖ 2006, №3 121
окисления и снижение анаэробного гликолиза, так, показатели СДГ активности к этому сроку составили 1,53±0,08 усл. ед., а активности ЛДГ 2,69±0,11 усл. ед. К 3-6 месяцу наблюдений после применения остеогенных препаратов цитохимические характеристики в нейтрофилах периферической крови приближались к ноказате-лям контроля, приобретая при этом по отношению к данным контроля недостоверный характер (р1>0,05), а по отношению к показателям цитохимической активности нейтрофилов периферической крови на момент обращения статистически выраженный характер (р2<005-0,01).
Таким образом, проведенные исследования цитохимической активности дегидрогеназ в нейтро-филах периферической крови показали, что применение остеоген-ных препаратов снижает процессы воспаления к 1 месяцу наблюдений, а к 3-6 месяцу цитохимиче
ская активность дегидрогеназ не отличается от контроля, что может свидетельствовать о закончившихся процессах репарации в ротовой полости.
Литература
1. Абрамова Ж.И., Оксенденгелер Г.И. Человек и противоокислительные вещества. — Л: Наука, 1985. -230с.
2. Берченко Г.Н с соавт. Активизация репа-ративного остеогенеза с помощью биоактивных резорбирующих материалов — кальций-фосфатной биокерамики и комплексного препарата Коллапан. //Ортопедия, травматология и протезирование. - 2000. - № 2. - С.96.
3.Григорьян А.С., Ялдунков В.И. Динамика структурных превращений аутотрансплантан-тов из теменной кости. //Стоматология, 2000. - № 6. -С.6-9.
4. 1лик Р.Р. Використання 1мплантант1в при замещент дефекты зубних ряПв. // Виник стоматологи. — 1997. -№4. — С.716-717.
5. Микроанатомическая организация регионарного лимфатического узла при дентальной имплантологии. //Российский стоматологический журнал.-2000,-№4-С. 11-14
6. Лосев Ф.Ф., Ширин А.Н. Эффективность направленной костнойрегенерации при си
нусмертинге и несъемном протезировании. //Российский стоматологический журнал, -2000. - № 1. - С. 40-41.
7. Мансур А., Левицкий А.П., Денью О.В. Влияние фитоадаптогенов на состояние костной ткани альвеолярного отростка нижней челюсти крыс. //Виник стоматологи. - 2002, - № 4. -С. 4-6.
8. Розуменко А.П. Разработка и обоснование способа профилактики атрофии альвеолярных гребней челюсти при протезировании с опорой
наимплантнт. /Авт. дис.... канд. мед. наук. -
Одесса, 2005. - 22с.
^TOxiMi4Hi показник нейтроф^в периферичноТ KpoBi ортопедичних хворих при вживанш спрямованоТ остеогенноТ стимуляци
B.А. Ткаченко, П.М. Колбаан, О.В. Ткаченко, С.А. БобковА, К.Г. Куштр,
C.К. Севертова
Вивчено вплив остеогенних препарата (Коллапана-Л и Ербкола) у хворих на перимлантати на цитохiмiчнi показнию кров! Встановлено позитивний ефект вив-чаемих показниюв при вживанш комплексно'' остеогенно'1 терапп. Ключовi слова: цитохiмiя, Коллапан-Л, ортопедiя.
The neutrophil cytochemical indicators in the peripheral blood of the orthopedic patients while using the direct osteogenic stimulation
V.A. Tkachenko, P.N. Kolbasyn, O.V. Tkachenko, S.A. Bobkova, K.G. Kushnir, S.K. Severinova
In the research it is revealed the affection of the osteogenic preparations (the Collapan-L and the Erbisol) of the patients with periimplantitis upon the cytochemical blood indicators. It was discovered the positive effect of the studied indicators while using the complex osteogenic stimulation.
Key words: cytochemistry, Collapan-L, orthopedics.
