CC BY
28
HayKOBHH BicHHK .HbBiBCbKoro Ha^0Ha№H0ro ymBepcurery BeTepHHapHOi MegnuUHH Ta 6i0TexH0H0riH iMeHi C.3. f^H^Koro Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyj
doi: 10.15421/nvlvet7155
ISSN 2413-5550 print ISSN 2518-1327 online
http://nvlvet.com.ua/
УДК 619:576.8:619:616.99:636.4
Показники антилiзoцимнol та антикомплементарноУ активностi MiKpoopraHi3MiB дистального вiддiлу кишечника поросят за змшаноУ
нематодозно-протозоозноУ швазп
Львiвський нацюнальний унгверситет ветеринарное медицини та бютехнологт iMeHi С.З. Гжицького,
вул. Пекарська, 50, м. Львiв, 79050, Украна
У cmümmi наведет результати до^дження впливу кишкових nаразитiв на показники антилiзоцимноi та антикомплементарноУ активноcтi мiкроорганiзмiв дистального вiддiлу кишечнику. Встановлено, що продукти життeдiяльноcтi кишкових паразитiв поросят знижують антилiзоцимну активтсть таких обл^атних анаeробiв, як Bifidobacterium spp. на 42,1% (р < 0,01), Prevotella spp. - на 14,3%, Clostridium spр. - на 66,7% (р < 0,001). ЗМАФАнМна 38,5% (р < 0,05) знижують у Lactobacillus spp. i на 50,0% (р < 0,01) - у Streptococcus spp. Вищою, порiвняно i3 контролем, антилiзоцимна активтсть булау Bacteroides spp. (р < 0,05), Eubacterium spp. (р < 0,001), Propionibacterium spp. (р < 0,01), Peptostreptococcus spp. (р < 0,05), Fusobacterium spp. (р < 0,01), E. coli лакт. «+» гем «-» (р < 0,05), Klebsiella spp. (р < 0,001), Citrobacter spp. (р < 0,01), Enterococcus spp. (р < 0,05), Staphylococcus spp. (р < 0,001), Candida spp. (р < 0,001), видыених i3 дистального вiддiлу кишечнику поросят, уражених змiшаною нематодозно-протозоозною iнвазieю.
За дИ продуктiв життeдiяльноcтi аскариЫв, еймерш та балантидш антикомплементарна активтсть вiрогiдно зрос-талау Prevotella spp. (р < 0,01), Clostridium spр. (р < 0,001), Eubacterium spp. (р < 0,001), Propionibacterium spp. (р < 0,001), Peptostreptococcus spp. (р < 0,001), Fusobacterium spp. (р < 0,001), Lactobacillus spp. (р < 0,05), E. coli лакт. «+» гем «-» (р < 0,01), E. coli лакт. «-» гем «+» (р < 0,001), Klebsiella spp. (р < 0,05), Enterobacter spp. (р < 0,001), Enterococcus spp. (р < 0,001), Streptococcus spp. (р < 0,001) i лише у Bacteroides spp. вона була вiрогiдно нижчою (р < 0,001), порiвняно з контролем.
Knmnoei слова: поросята, кишечник, змiшана iнвазiя, антилiзоцимна активтсть, антикомплементарна активтсть, анаеробна мжрофлора, аеробна мжрофлора, умовно-патогенна мжрофлора.
Показатели антилизоцимной и антикомплементарной активности микроорганизмов дистального отдела кишечника поросят при смешаной
нематодозно-протозоозной инвазии
Львовский национальный университет ветеринарной медицины и биотехнологий имени С.З. Гжицкого,
ул. Пекарская, 50, г. Львов, 79050, Украина
В статье приведены результаты исследования влияния кишечных паразитов на показатели антилизоцимной и антикомплементарной активности микроорганизмов дистального отдела кишечника. Установлено, что продукты жизнедеятельности кишечных паразитов поросят снижают антилизоцимную активность следующих облигатных анаэробов: Bifidobacterium spp. - на 42,1% (р <0,01), Prevotella spp. - на 14,3%, Clostridium spр. - на 66,7% (р < 0,001). С МАФАнМ на 38,5% (р < 0,05) снижают у Lactobacillus spp. и на 50,0% (р < 0,01) - в Streptococcus spp. Сравнительно с контролем, анти-лизоцимная активность была выше у Bacteroides spp. (р < 0,05), Eubacterium spp. (р < 0,001), Propiombacterium spp.
Citation:
Peleno, R.A. (2016). The indicators of anti lysozyme and anti complementary activity of microorganism of pigs intestine distal department for mixed - protoozic invasion. Scientific Messenger LNUVMBT named after S.Z. Gzhytskyj, 18, 3(71), 248-251.
Р.А. Пеленьо [email protected]
Р.А. Пеленьо [email protected]
(р < 0,01), Peptostreptococcus spp. (р < 0,05), Fusobacterium spp. (р < 0,01), E. coli лакто. «+» гем «-« (р < 0,05), Klebsiella spp. (р < 0,001), Citrobacter spp. (р < 0,01), Enterococcus spp. (р < 0,05), Staphylococcus spp. (р < 0,001), Candida spp. (р < 0,001), выделенных из дистального отдела кишечника поросят со смешанной нематодозно—протозоозной инвазией.
Под действием продуктов жизнедеятельности аскарисов, эймерий и балантидий антикомплементарная активность достоверно возрастала в Prevotella spp. (р < 0,01), Clostridium spр. (р < 0,001), Eubacterium spp. (р < 0,001), Propiombacterium spp. (р < 0,001), Peptostreptococcus spp. (р<0,001), Fusobacterium spp. (р < 0,001), Lactobacillus spp. (р < 0,05), E. coli лакто. «+» гем «—» (р < 0,01), E. coli лакто. «—» гем «+» (р < 0,001), Klebsiella spp. (р < 0,05), Enterobacter spp. (р < 0,001), Enterococcus spp. (р < 0,001), Streptococcus spp. (р < 0,001) и только в Bacteroides spp. она была достоверно ниже (р < 0,001) по сравнению с контролем.
Ключевые слова: поросята, кишечник, смешанная инвазия, антилизоцимная активность, антикомплементарная активность, анаэробная микрофлора, аэробная микрофлора, условно—патогенная микрофлора.
The indicators of anti lysozyme and anti complementary activity of microorganism of pigs intestine distal department for mixed - protoozic
invasion
R.A. Peleno [email protected]
Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyj,
Pekarska Str., 50, Lviv, 79050, Ukraine
The article deals with the results of search of the influence of intestinal parasites on the indicators of antilysozyme and anticomplementary activity of microorganism of distal department of intestine. It was established, that the products of intestinal parasites of pigs reduce anti lysozyme activity of such obligate anaerobes as Bifidobacterium spp. to 42.1% (p < 0.01), Prevotella spp. to 14.3%, Clostridium spp. to 66.7% (p < 0,001). With MAFAnM to 38.5% (p < 0.05) in Lactobacillus spp. and to 50.0% (p < 0.01) in Streptococcus spp. Higher compared with the control, antilysozyme activity was in Bacteroides spp. (p < 0.05), Eubacterium spp. (p < 0,001), Propionibacterium spp. (p < 0.01), Peptostreptococcus spp. (p < 0.05), Fusobacterium spp. (p < 0.01), E. coli lact. «+» hem «—» (p < 0.05), Klebsiella spp. (p < 0.001), Citrobacter spp. (p < 0.01), Enterococcus spp. (p < 0.05), Staphylococcus spp. (p<0.001), Candida spp. (p<0.001) abstracted from the distal intestine ofpigs affected with mixed nematodosis - protoozic invasion. With the action of products of vital functions of ascarices, eymeria and balantides, the anticomplementary activity significantly increases in Prevotella spp. (p < 0.01), Clostridium spp. (p < 0.001), Eubacterium spp. (p < 0.001), Propionibacterium spp. (p < 0.001), Peptostreptococcus spp. (p < 0,001), Fusobacterium spp. (p < 0.001), Lactobacillus spp. (p < 0.05), E. coli lact. «+» hem «-» (p < 0.01), E. coli lact. «-» hem «+» (p < 0.001), Klebsiella spp. (p < 0.05), Enterobacter spp. (p < 0.001), Enterococcus spp. (p < 0.001), Streptococcus spp. (p < 0.001) and only in Bacteroides spp. it was significantly lower (p < 0.001), compared with the control.
Key words: pigs, intestines, mixed invasion, antilysozyme activity, anticomplementary activity, anaerobic microflora, aerobicmi-cro flora, pathogenic microflora.
Вступ
Дш еколопчних i сезонних чиннишв, неповноцш-на годiвля, застосування антибактерiальних препаратов, незршсть iмунноl системи у молодих тварин, а також кишковi паразити е основними причинами мшробюлопчних порушень у кишечнику i формуван-ня осередшв хрошчно! шфекцц, зумовлено! умовно-патогенними мшрооргашзмами (УПМ) (Bondarenko, 2000; Masljanko and Bozhyk, L.Ja. (2011). Дiагностика таких шфекцш е утрудненою. Це пов'язано з ввдсут-шстю специфiчноl ктшчно! картини, полiетiологiчнi-стю захворювань, виаванням з патолопчного матерь алу асощацш iз представнишв нормально! мшрофло-ри уражено! частини кишечнику i транзиторних мш-роорганiзмiв. Крiм цього, вчеш звертають увагу й на таку здатшсть мiкроорганiзмiв, як секрецiя ними ан-тидефенсишв, що шактивують захисш мехашзми хазяша - лiзоцим та комплемент (Brudastov et al., 1996). Саме тому здатшсть бактерш специфiчно шак-тивувати лiзоцим макрооргашзму було визначено як антилiзоцимну актившсть (АЛА), а деградувати комплемент - як антикомплементарну актившсть (АКА).
Роль АЛА полягае в персистенци мжрооргашзма-ми в органiзмi господаря лiзоциму як чинника iмунi-тету, який входить до низки провщних бактерицидних ферментних систем клггин фагоцитарного ряду та шших клгтин i тканин оргашзму (Buharin et al., 1984; Buharin, 1994).
Антикомплементарна актившсть е складовою пер-систентного потенщалу, яким володшть стафшококи, стрептококи, нейсерп, псевдомонади та iншi мшроор-гашзми (Brudastov, 1992). Патогени, що володшть АКА, здатш утворювати б№ш стшш бюценози, н1ж п, що не мають ще! здатносп (Menkus, 2012).
Доа не вивченими залишаються питания впливу кишкових паразипв на секреторш фактори персистенци мiкрооргаиiзмiв кишечника поросят, що робить таш дослщження актуальними.
Метою роботи було вивчити АЛА й АКА мжроо-ргаиiзмiв дистального вщдшу кишечнику за змшано! протозоозно-нематодозно! швазп поросят.
Матерiал i методи дослщжень
В експериментах in vitro використовували мшроо-ргашзми, видшеш з мшробоценозу дистального вщщ-
лу кишечнику штактних поросят (контрольна група) та поросят, уражених асощащею «аскари-си+еймерп+балантиди» (дослвдна група). При форму-ванш досл1дно1 групи враховували штенсившсть шва-3iï (II) гельмштами i найпроспшими, яку визначали методом McMaster (Vasil'eva, 1995). Так, шльшсть ооцист балантидiй в 1 г калу становила 752,9 ± 64,7, еймерш - 639,1 ± 49,4, яець аскариав - 626,3 ± 26,1 eкзeмплярiв.
Вiдбiр матeрiалу для дослiджeння проводили вди-ввдуально i3 прямоï кишки в стерильш пeнiцилiновi флакони. Час вiд моменту забору проб до моменту дослвджень не перевищував 2-х годин. Для проведения бактeрiологiчних дослiджeнь наважку вмiсту ма-сою 1 г ретельно розтирали в стeрильнiй ступщ з 9 мл стерильного буферного розчину. З основного розве-дення виготовляли наступнi, починаючи з 102 та до 1012. Висiв суспензп в кiлькостi 0,05-0,1-1,0 мл роби-ли на Schaedler-arap, ентерокок-агар, жовтково-сольовий агар, кров'яний агар, вкмут-сульфгт-агар, середовища Ендо i Плоскiрева, агар Сабуро.
Антилiзоцимну активнiсть (АЛА) визначали за мь кробiологiчним методом, розробленим О. В. Бухарь ним та ствавторами (Buharin, et al., 1984). АКА визначали методом шнетичного титрування комплемен-
Таблиця 1
Показники амтилiзоциммоï та антикомплементарно'1 активностi обл^атних амаероб1в, видiленихi з дистального ввддшу кишечнику поросят, уражених чмппапою нематодозно-протозоозною iнвазicю, М ± m, n = 8
ту з вимiрюванням (як мiри активностi комплементу) максимально1 швидкостi лiзису сeнсибiлiзованих еритроципв барана (Brudastov, 1992).
Одeржаиi результати пщдавали статистичнiй об-робцi, яку проводили методом варiацiйноï статистики з визначенням сeрeднiх значень величин i середньо1' похибки. Вiрогiднiсть вiдмiнностeй м1ж сeрeднiми значеннями п!д час проведення аналiзу оцiнювали, використовуючи критeрiï Стьюдента (t). Вiдмiннiсть мiж величинами вважали вiрогiдною, коли ймов!р-нiсть рiзницi становила р < 0,05.
Результати та ïx обговорення
Встановлено, що продукти життедiяльностi киш-кових паразилв поросят впливають на так! чинники персистенцп мiкроорганiзмiв всeрeдинi макрооргань зму, як антилiзоцимна та антикомплементарна активтсть. Дослiджeння антилiзоцимноï активностi облта-тних анаeробiв, видiлeних з дистального вщщлу кишечнику iнвазованих поросят, показало (табл. 1), що вона знижуеться, пор!вняно з контролем, на 42,1% у Bifidobacterium spp. (р < 0,01), на 14,3% - у Prevotella spp. i на 66,7% - у Clostridium spр. (р < 0,001).
Мжрооргатзми
Антитзоцимна активтсть, мкг/мл OD
Контроль
Дослщ
Антикомплементарна активтсть, антиСН5о_
Контроль
Дослщ
Bifidobacterium spp.
1,9 ± 0,18
1,1 ± 0,10**
0,3 ± 0,04
0,1 ± 0,02**
Bacteroides spp.
1,2 ± 0,10
1,7 ± 0,14*
3,8 ± 0,32
6,1 ± 0,56**
Prevotella spp.
1,4 ± 0,12
1,2 ± 0,10
0,2 ±0,01
0,6 ± 0,03***
Clostridium spр.
0,3 ± 0,02
0,1 ± 0,01***
0,1 ± 0,01
0,2 ± 0,01***
Eubacterium spp.
0,6 ± 0,07
1,6 ± 0,13***
1,2 ± 0,03
4,3 ± 0,36***
Propionibacterium spp.
0,2 ± 0,01
0,4 ± 0,05**
2,4 ± 0,16
7,2 ± 0,66***
Peptostreptoc
i spp.
0,4 ± 0,03
0,5 ± 0,02*
0,3 ± 0,03
0,9 ± 0,04***
Fusobacterium spp.
0,3 ± 0,02
1,1 ± 0,10**
1,1 ± 0,08
3,9 ± 0,34***
Примтка: * - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001
У вах шших облтатних анаeробiв, яш були досль джеш, цей показник був вищим, пор!вняно !з контролем, в 1,42 раза у Bacteroides spp. (р < 0,05), 2,67 раза - у Eubacterium spp. (р < 0,001), 2,0 раза - у Propionibacterium spp. (р < 0,01), 1,25 раза - у Peptostreptococcus spp. (р < 0,05) i в 3,67раза - у Fusobacterium spp. (р < 0,01).
Вивчення антикомплементарно1' активносп показало, що вона властива вам облгатним анаеробним мшрооргашзмам, яш були !зольоваш з дистального в!дд!лу кишечнику поросят. Встановлено, що продукти життед!яльносп кишкових паразипв зумовили в!ропдне зростання антикомплементарно1' активносп у Prevotella spp. (р < 0,01), Clostridium spр. (р < 0,001), Eubacterium spp. (р < 0,001), Propionibacterium spp. (р < 0,001), Peptostreptococcus spp. (р < 0,001), Fusobacterium spp. (р < 0,001) i лише у Bacteroides spp. вказаний показник був в!ропдно нижчим (р < 0,001) пор!вняно з контролем.
Персистентш властивосп були виявлеш нами й серед мезофшьних аеробних i факультативно анаеро-
бних мжрооргашзм!в (МАФАнМ), !зольованих !з дистального вщд!лу кишечнику поросят (табл. 2).
За ди продукпв життед!яльносп кишкових пара-зилв в!ропдно зростала антил!зоцимна активтсть E. coli лакт. «+>> гем «-» (р < 0,05), Klebsiella spp. (р < 0,001), Citrobacter spp. (р < 0,01), Enterococcus spp. (р < 0,05), Staphylococcus spp. (р < 0,001), Candida spp. (р < 0,001). Проте у таких мшрооргашзм!в, як Lactobacillus spp., Streptococcus spp. антил!зоцимна активтсть знизилася, пор!вняно з контролем, вщповь дно на 38,5% (р < 0,05) та 50,0% (р < 0,01).
Для уах МАФАнМ, видшених !з дистального ввд-д!лу кишечнику поросят, уражених змшаною нематодозно-протозоозною шваз!ею, характерним було зростання антикомплементарно1' активносп, проте в!ропдно вищою, пор!вняно з контролем, р!зниця була у Lactobacillus spp. (р < 0,05), E. coli лакт. «+» гем «-» (р < 0,01), E. coli лакт. «-» гем «+» (р < 0,001), Klebsiella spp. (р < 0,05), Enterobacter spp. (р<0,001), Enterococcus spp. (р < 0,001) i Streptococcus spp. (р < 0,001).
Таблиця 2
Показники антилiзоцимноï та антикомплементарно'1 активностi МАФАнМ видшених i3 дистального вiддiлу кишечнику поросят, уражених чмншапою нематодозно-протозоозною iнвазicю, M±m, n=8
Анштзоцимна актившсть, мкг/мл Антикомплементарна актившсть,
Мжрооргашзми OD анти СН50
Контроль Дослвд Контроль Дослщ
Lactobacillus spp. 2,6 ± 0,32 1,6 ± 0,20* 1,3 ± 0,12 1,9 ± 0,20*
E. coli лакт. «+» гем «-» 1,2 ± 0,12 1,8 ± 0,20* 2,8 ± 0,14 3,9 ± 0,28**
E. coli лакт. «-» гем «+» 1,5 ± 0,18 1,6 ± 0,12 2,0 ± 0,16 8,6 ± 0,68***
Klebsiella spp. 0,4 ± 0,05 2,4 ± 0,28*** 3,4 ± 0,34 4,8 ± 0,38*
Enterobacter spp. 1,9 ± 0,16 2,2 ± 0,26 0,9 ± 0,05 5,7 ± 0,52***
Citrobacter spp. 0,8 ± 0,06 1,6 ± 0,20** 0,6 ± 0,03 0,7 ± 0,06
Enterococcus spp. 0,8 ± 0,06 1,2 ± 0,12* 0,5 ± 0,06 1,3 ± 0,04***
Streptococcus spp. 0,6 ± 0,06 0,3 ± 0,02** 0,2 ± 0,02 1,5 ± 0,10***
Staphylococcus spp. 0,1 ± 0,02 0,9 ± 0,04*** 2,1 ± 0,16 2,6 ± 0,18
Candida spp. 0,6 ± 0,07 1,4 ± 0,10*** 1,5 ± 0,14 1,8 ± 0,16
Примтка: * - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001
Висновки
1. Продукты життедшльносп кишкових паразитов поросят, знижують антил1зоцимну актившсть таких облтатних анаероб1в, як Bifidobacterium spp. на 42,1% (р < 0,01), Prevotella spp. - на 14,3%, Clostridium spр. - на 66,7% (р < 0,001). З МАФАнМ на 38,5% (р<0,05) у Lactobacillus spp. i на 50,0% (р < 0,01) - у Streptococcus spp. та сприяють ïï зрос-танню, порiвняно i3 контролем, у Bacteroides spp. (р < 0,05), Eubacterium spp. (р < 0,001), Propionibacterium spp. (р < 0,01), Peptostreptococcus spp. (р < 0,05), Fusobacterium spp. (р < 0,01), E. coli лакт. «+» гем «-» (р < 0,05), Klebsiella spp. (р < 0,001), Citrobacter spp. (р < 0,01), Enterococcus spp. (р < 0,05), Staphylococcus spp. (р < 0,001), Candida spp. (р < 0,001).
2. За впливу дп кишкових паразипв та продук-тш ïx життeдiяльностi антикомплементарна актившсть вiрогiдно зростала у Prevotella spp. (р < 0,01), Clostridium spр. (р < 0,001), Eubacterium spp. (р < 0,001), Propionibacterium spp. (р < 0,001), Peptostreptococcus spp. (р < 0,001), Fusobacterium spp. (р<0,001), Lactobacillus spp. (р < 0,05), E. coli лакт. «+» гем «-» (р < 0,01), E. coli лакт. «-» гем «+» (р < 0,001), Klebsiella spp. (р < 0,05), Enterobacter spp. (р < 0,001), Enterococcus spp. (р < 0,001), Streptococcus spp. (р < 0,001) i лише у Bacteroides spp. вона була вiрогiд-но нижчою (р < 0,001) порiвняно з контролем.
Бiблiографiчнi посилання
Bondarenko, V.M. (2000). Obshhij analiz predstavlenij o patogennyh i uslovno-patogennyh bakterijah. Zhurnal
mikrobiologii, jepidemiologii i immunologii. 4, 20-26 (in Russian).
Brudastov, Ju.A., Valyshev, A.V., Brudastov, A.N. (1996). Antikomplementarnaja aktivnost' proizvodstvennogo shtamma Bacillus cereus IP 5832 i jenterobakterij pri ih sovmestnom kul'tivirovanii. Zhurn. mikrobiol. 3, 91-93 (in Russian).
Buharin, O.O. (1994). Biomedicinskie aspekty persistencii bakterij. Zhurn. mikrobiol. 4, 4-13 (in Russian).
Buharin, O.V., Nemceva, N.V., Anan'ina, G.E., Sidorov, V.V. (1984). Antilizocimnaja aktivnost' vnutrikletochno parazitirujushhih bakterijrin. Faktory estestvennogo immuniteta pri razlichnyh fiziologicheskih i patologicheskih sostojanijah. Tezisy dokladov k VIII zonal'noj nauchnoj konferencii. Cheljabinsk. 9, 180 (in Russian).
Brudastov, Ju.A. (1992). Antikomplementarnaja aktivnost' bakterij. Avtoref. dis. kand. med. nauk. Cheljabinsk (in Russian).
Vasil'eva, Z.G. (1995). Metody gel'mintologicheskih issledovanij. M.: Medgiz (in Russian).
Masljanko, R.P., Bozhyk, L.Ja. (2011). Rol' umovno-patogennoi' mikroflory v infekcijnij patologii' kyshechnyka. Naukovyj visnyk LNUVMBT imeni S.Z. G'zhyc'kogo. 13, 2(48), 185-191 (in Ukrainian)
Menkus, O.V. (2012). Vyvchennja antykomplementarnoi' aktyvnosti mikroorganizmiv u hvoryh z zahvorjuvannjamy dyhal'nyh shljahiv. Visnyk problem biologii' i medycyny. 2, 1(92), 116-119 (in Ukrainian).
Стаття надiйшла до редакцИ' 15.10.2016
