ПОИСК АНТАГОНИСТОВ РЕЦЕПТОРА NR 3C 4 Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

© Коллектив авторов, 2014 УДК 615.277.3.03: 616.65-006.6].012.1:577.2

ПОИСК АНТАГОНИСТОВ РЕЦЕПТОРА NR3C4

М.И. Брылев1, Г.В. Раменская1, доктор фармацевтических наук, профессор, Д.С. Лоторев1, кандидат химических наук, Е.С. Мухачева1, кандидат биологических наук, Н.Б. Кузнецова1, кандидат химических наук, Л.А. Павлова1, кандидат фармацевтических наук, А.Ю. Лизунов2, Н.А. Пелевин3, кандидат химических наук

'НИИ фармации Первого МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, Российская Федерация, '1999', Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2; 2Московский физико-технический институт (Государственный университет), Российская Федерация, '41700, Московская область, г. Долгопрудный, Институтский пер., 9; 3Курский государственный университет, Российская Федерация, 305000, г. Курск, ул. Радищева, 33

Е-mail: [email protected]

Введение. Одним из основных видов гормонотерапии в лечении рака предстательной железы является применение антагонистов рецептора NR3C4 (nuclear receptor subfamily 3, group C, member 4). Они блокируют связывание мужских половых гормонов с клеточными рецепторами, препятствуя проявлению биологических эффектов данных гормонов в клетках предстательной железы, и таким образом останавливают рост опухоли. В качестве потенциальных блокаторов рецептора NR3C4 перспективны соединения — производные аминокислот, так как данные вещества не являются ксенобиотиками и, следовательно, менее токсичны.

Цель работы. Поиск потенциальных блокаторов рецептора NR3C4 путем проведения молекулярного моделирования с последующим синтезом наиболее перспективных соединений и выявлением у них антагонистической активности in vitro.

Материал и методы. Молекулярное моделирование связывания веществ с рецептором NR3C4 (докинг) и оценку энергии связывания проводили с использованием программы Algocomb. ADME/Т-свойства потенциальных антагонистов рецептора NR3C4 прогнозировали при помощи программы Accelrys Discovery Studio. Цитотоксичность синтезированных соединений исследовали на клетках AR-UAS-blaGripTite™ 293методом флюоресцентной микроскопии. Синтез соединений осуществляли жидкофазным способом. Антагонистическую активность у синтезированных образцов исследовали на клетках культуры AR-UAS-blaGripTite™ 293 (Invitrogen K1698) с применением коммерческого набора LiveBLAzer™-FRETB/G (Invitrogen-K1095).

Результаты. Проведен поиск соединений — потенциальных блокаторов рецептора NR3C4. Выполнено молекулярное моделирование связывания веществ с рецептором NR3C. Рассчитаны ADME/Т-свойства перспективных антагонистов рецептора. Вследствие малого размера активного сайта рецептора расчеты проведены среди производных N-ацилированных аминокислот. Синтезировано 16 наиболее перспективных по расчетным оценкам образцов. Определены аффинность и цитотоксичность у синтезированных образцов in vitro. Антагонистическая активность для наиболее аффинных и малотоксичных соединений выявлена на клетках AR-UAS-blaGripTite™ 293.

Заключение. Образцы 2-(1-нафтил)этиловый эфир-1-[(3-фторфенил)ацетил]-L-пролина, 2-(1-нафтил)этиловый эфир-1-[(4-хлорфенил)ацетил]-L-пролина, 2-(1-нафтил)этиловый эфир-1-[(4-метилфенил)ацетил]-L-пролина являются перспективными антагонистами рецептора NR3C4

Ключевые слова: рецептор NR3C4, молекулярное моделирование, N-ацилированные аминокислоты, антагонистическая активность

SEARCH FOR ANTAGONISTS OF NR3C4 RECEPTOR M.I. Brylev1, G.V. Ramenskaya1, D.S. Lotorev1, E.S. Mukhacheva1, N.B. Kuznetsova1, L.A. Pavlova1, A.U. Lizunov2, N.A. Pelevin3

1Sechenov First Moscow State Medical University, Russian Federation, 119991, Moscow, Trubetskaya street, 8/2;

2Moscow Institute of Physics and Technology (State University), Russian Federation, 141700, Moscow region, Dolgoprudny, Institutskiy per., 9;

3Kursk State University, Russian Federation, 305000, Kursk, Radishcheva street, 33

Introduction. One of the main types of a hormonal therapy in the treatment of the cancer of the prostate gland is the antagonists of the NR3C4 (nuclear receptor subfamily 3, group C, member 4) receptor. It blocks binding of man's hormones with receptors site, intercepting of the appearance of biological action of this hormones in cells of prostate gland and thus stop of tumor grows. The derivatives of amino acids are used as the potential blocker of the NR3C4 receptor. These compounds aren't xenobiotics therefore and less toxic.

The aim of the study. The searches of compounds being capable of potential blocker of the NR3C4 receptor by means of the molecular modeling. There were synthesized the most perspective samples and their antagonistic activity in vitro were educe.

Methods. Was made the molecular modeling of binding compounds with the NR3C4 receptor (docking) and estimation energy of binding by means of software Aglocomb. Were forecast the ADME/T-properties of potential antagonists of the NR3C4 receptor using software Accelrys Discovery Studio. The cytotoxicity of the researched compounds was explored in the AR-UAS-blaGripTite™ 293 cells by the method

28 №3, 2014 Молекулярная медицина

of fluorescence microscopy. The synthesis of compounds was made liquid — phase method. The antagonistic activity of the researched compounds was explored in the AR-UAS-blaGripTite™ 293 (Invitrogen K1698) using the LiveBLAzer™-FRETB/G (Invitrogen-K1095) commercial kit.

Results. The searches of compounds being capable of potential blocker of NR3C4 receptor. There was performed the molecular modeling of binding substances with NR3C4 receptor. The properties of perspective antagonists of the receptor have been calculated. Because of the small size of the active site of the receptor there calculations were made among of N-acyl derivatives of the amino acids. There were synthesized 16 samples the most perspective in terms of presumptive assessments. The affinity and cytotoxicity of the synthesized samples were evaluated in vitro. The antagonistic activity for the most affinity and low-toxic compounds was revealed on the AR-UAS-blaGripTite™ 293 cells.

Conclusions. The most perspective antagonists of' NR3C4 receptor are samples of 2-(1-naphthyl)-ethyl ester-1-[(3-fluorophenyl)acetyl]-L-proline, 2-(1-naphthyl)-ethyl ester-1-[(4-methylphenyl)acetyl]-L-proline and 2-(1-naphthyl)-ethyl ester-1-[(4-chlorophenyl)acetyl]-L-proline.

Key words: NR3C4 receptor, molecular modeling, N-acyl amino acids, the antagonistic activity

ВВЕДЕНИЕ

Рак предстательной железы (РПЖ) относится к наиболее часто выявляемым опухолям среди онкологических заболеваний мужчин. В структуре онкологической заболеваемости в ряде стран РПЖ занимает 3-е место (после рака легкого и желудка). В России заболеваемость РПЖ находится на 1-м месте по уровню прироста среди онкологических заболеваний у мужчин [1, 2].

По данным многочисленных исследований, среди всех гормонально зависимых опухолей РПЖ является наиболее чувствительным к гормональной терапии. Один из основных видов гормонотерапии при РПЖ — применение антагонистов рецептора NR3C4 (nuclear receptor subfamily 3, group C, member 4). Они блокируют связывание мужских половых гормонов с клеточными рецепторами, препятствуя проявлению биологических эффектов данных гормонов в клетках предстательной железы, и, таким образом, останавливают рост опухоли [3].

Целью данной работы был поиск потенциальных блокаторов рецептора NR3C4 путем проведения молекулярного моделирования с последующим синтезом наиболее перспективных (по расчетным оценкам) соединений и выявлением у них антагонистической активности in vitro.

В качестве потенциальных блокаторов рецептора NR3C4 рассматривались производные аминокислот, так как данные вещества не являются ксенобиотиками и, следовательно, менее токсичны.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Современные методы молекулярного моделирования активных соединений, основанные на информации о строении и биологических свойствах мишени, позволяют провести расчеты, направленные на получение структур соединений — потенциальных блокаторов рецептора NR3C4.

Для молекулярного моделирования связывания веществ с рецептором NR3C4 (докинга) и оценки энергии связывания использовалась программа Algocomb. При проведении молекулярного моделирования атомы белка рецептора считались неподвижными, пространственная конфигурация (конформация) ли-

ганда изменялась так, чтобы обеспечить наилучшее расположение в активном центре рецептора и наибольшую энергию связывания.

Метод докинга позволяет оценить качество связывания вещества с заданной конформацией белка. Общепринятым источником данных о конформациях белка является база данных структур белок-лигандных комплексов Protein Data Bank (PDB) (http://www.rcsb. org/pdb/). Как было показано [4], выбор конформа-ции белка для докинга существенно влияет на результаты расчетов.

ADME/Т-свойства (растворимость соединения, пассивное всасывание в кишечнике, связывание с белками плазмы крови, коэффициент липофильно-сти соединения, LD50) потенциальных антагонистов рецептора NR3C4 прогнозировали с помощью программы Accelrys Discovery Studio. Синтез соединений осуществляли жидкофазным способом.

Содержание основного вещества в синтезированных образцах доводили до уровня выше 95% с помощью обратнофазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на флеш-хроматографе PuriFlash 450 (InterChim) при градиентном элюиро-вании.

Спектры ЯМР 'Н и ЯМР 13С синтезированных образцов снимали на спектрометрах Brucker AM 300 и Brucker Evans II 600, химические сдвиги измеряли относительно сигнала растворителя (DMCO-d6, 5H 2,5 м.д., 5С 39,5 м.д.). Содержание целевого вещества и подтверждение его молекулярной массы определяли методом ВЭЖХ-МС на жидкостном хроматомасс-спектрометре Acquity UPLC H-class LC (Waters) со спектрофотометрическим (Х=220 нм) и масс-спектрометрическим (SQ-ESI, позитивная ионизация, диапазон сканирования 95—700 Да) детекторами.

Аффинность синтезированных образцов определяли по снижению поляризации флюоресценции, согласно протоколу PolarScreen (Green Protocol). В качестве положительного контроля использовали антагонист рецептора NR3C4 ципротерона ацетат в концентрации 10 мкМ. Поляризацию флюоресценции измеряли на анализаторе Victor 2030 (Perkin Elmer) при длине волны возбуждения 485 нм, эмиссии 535 нм.

Молекулярная медицина

29

Статистическую обработку результатов проводили по непараметрическим тестам Манна—Уитни. Образцы считали аффинными при статистически достоверном понижении уровня поляризации флюоресценции относительно базового уровня поляризации флюоресценции комплекса рецептора.

Цитотоксичность синтезированных соединений исследовали на клетках АЯ-иАБ-Ыа ОйрТИе™ 293 методом флюоресцентной микроскопии.

Антагонистическую активность у синтезированных образцов исследовали на клетках культуры АЯ-иАБ-Ыа ОфТИе™ 293 (¡пи^еп К1698) с применением коммерческого набора ЫуеВЬА2ег™-РКБТ В/О (Invitrogen-K1095), по усилению специфической флюоресценции в клетках при связывании лигандов-антагонистов с рецептором N^0^ В качестве контрольного антагониста использовали ципротерона ацетат. Флюоресценцию регистрировали методом конфокальной микроскопии.

Критерием оценки антагонистической активности исследуемых веществ являлось соотношение интенсивности флюоресценции клеток АЯ-иАБ-Ыа

Рис. 1. Структура комплекса 1ХЫЫ: рецептор НК3С4 в комплексе с селективным модулятором бицикло-1Н-изоиндол-1,3(2Н)-дионом

ТИПЫ СОЕДИНЕНИИ, ПО КОТОРЫМ ПРОВОДИЛОСЬ МОЛЕКУЛЯРНОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ

Амиды N-ацилированных аминокислот Эфиры N-ацилированных аминокислот

R'NH^O \ ^OH R'O^O R'O^O

А R'NH „ ^'«^NR" ^ \—' O NHR'' ¿NR" 6R''

Транс-3-гидрокси- L-треонин L-пролин L-пролин D-пролин

GripTite™ 293, окрашенных субстратом CCF4-AM, в процентах от значения соотношения интенсивности флюоресценции клеток контроля.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

На 1-м этапе молекулярного моделирования осуществлялся выбор конформации белка рецептора NR3C4 в соответствии со следующими критериями: структура белка должна быть расшифрована с хорошей точностью; белок должен быть в комплексе с лигандом — селективным модулятором рецептора NR3C4.

Из приблизительно 60 структур комплексов рецептора NR3C4, представленных в PDB, для докинга была выбрана конформация белка из комплекса с индексом 1XNN. В качестве основного режима расчета выбран докинг в комплекс 1XNN с учетом молекул воды в сайте связывания (рис. 1).

Взаимодействие лиганд-рецептор или ингибитор-фермент включает следующие основные стадии: образование комплекса, возможное протонирование комплекса, перенос электронной плотности между лигандом и рецептором, изменение электронно-конформационного состояния рецептора, последующий каскад молекулярных событий, приводящий к формированию биоотклика.

Обычно расчетными методами моделируют 1-ю стадию — образование комплекса белок — лиганд. Для этого, как правило, используют выбор конформации лиганда, дающей максимальное по модулю значение расчетной энергии связывания лиганда с рецептором.

Помимо образования эффективного лиганд-рецепторного комплекса, необходимо, чтобы лиганд рецептора NR3C4 обладал дополнительными физико-химическими свойствами, позволяющими ему эффективно достигать белка-мишени в организме, а также низкой токсичностью. Чтобы прогнозировать эти свойства, для отобранных на основе расчетов докинга веществ — потенциальных лигандов рецептора NR3C4 — проводились дополнительные расчеты ADME/Т-свойств по программе Accelrys Discovery Studio.

Молекулярное моделирование проводилось среди примерно 10 тыс. соединений. Наиболее перспективные (по расчетным оценкам) соединения относились к 2 типам (табл. 1):

Таблица 1

30

№3, 2°14 Молекулярная медицина

Таблица 2

СИНТЕЗИРОВАННЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И ИХ РАСЧЕТНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ*

Молекулярная медицина №3, 2014 31

1-й — амиды ^ацилированных аминокислот на основе 3-гидрокси-Ь-пролина и Ь-треонина, 2-й — эфиры N-ацилированных аминокислот на основе Ь-пролина и D-пролина (табл. 1).

Соединения с лучшими оценками связывания и наилучшим расположением в сайте рецептора были синтезированы. В табл. 2 представлены синтезированные соединения и их расчетные характеристики.

Амиды ^ацилированных аминокислот были синтезированы по представленной на схеме (рис. 2).

Гидрохлорид метилового эфира аминокислоты получали пропусканием хлористого водорода через суспензию аминокислоты в метиловом спирте по методике [5]. Метиловый эфир ацилировали в присутствии 1-гидроксибензотриазола и 1-этил-(3'-(3-диметиламино)пропил)карбодиимида. Полученный метиловый эфир ^ацилированной аминокислоты гидролизовали до кислоты водным раствором ги-дроксида лития в соответствии с методикой [6]. Амид ^ацилированной аминокислоты получали в присутствии 1-гидроксибензотриазола и 1-этил-(3'-(3-диметиламино)пропил)карбодиимида по аналогии с методикой [7].

Схема синтеза эфиров ^ацилированных аминокислот представлена на рис. 3.

Исходную аминокислоту бокировали по типовой методике [8]. Полученную В ОС-защищенную аминокислоту подвергали этерификации соответствующим спиртом в соответствии с методикой [9]. Бути-локсикарбонильную защиту удаляли по методике [8]. ^ацилирование эфира аминокислоты проводили с

H<V° Месшна °

г

X -

Г "ГШ,

R-COOH DIEA EDC1 НОИ

+на

i>ihl:oh но о а)1нна [

HJ4—к DIEA

EDCT Е"НГТ, .О HOBt

R "NHR"

к инк-

Рис. 2. Схема синтеза амидов N-ацилированных аминокислот

НО^О

но^о к—он R'O.^.O

DCC-DMAP

CF,COOH

R'O^O

О"

R"-C ООН CDI, DMF

R'O, „О

О™"

Рис. 3. Общая схема синтеза эфиров N-ацилированных аминокислот

помощью карбонилдиимидазола по аналогии с методикой [8].

Для оценки аффинности использовали метод на основе поляризации флюоресценции с применением набора PolarScreen Assay (Invitrogen P3018), содержащего рекомбинантный «слитый» белок, включающий шарнирную область и лигандсвязывающий домен рецептора NR3C4, полностью идентичные человеческим. В качестве контроля использовали ципротеро-на ацетат.

По результатам исследования были отобраны следующие наиболее аффинные образцы: 2-(1-нафтил) этиловый эфир 1-[(3-фторфенил)ацетил]-Ь-пролина (соединение 10 в табл. 2), 2-(1-нафтил) этиловый эфир 1-[(4-хлорфенил)ацетил]-Ь-пролина (соединение 11), 2-(1-нафтил) этиловый эфир 1-[(4-метил-фенил)ацетил]-Ь-пролина (соединение 12). Данные вещества в концентрации 10 мкМ понижали поляризацию флюоресценции на 49—63 mP (ципротерона ацетат в аналогичной концентрации снижал поляризацию флюоресценции на 159 mP).

Для данных образцов проводили дальнейшую оценку специфической антагонистической активности с предварительной оценкой их неспецифической цитотоксичности на клетках AR-UAS-bla GripTite™ 293 методом флюоресцентной микроскопии с окраской пропидия йодидом. Количество жизнеспособных клеток после инкубации в течение 18 ч с исследуемыми веществами в концентрации 10 мкм составляло >90%. Таким образом, образцы 2-(1-на-фтил) этиловый эфир 1-[(3-фторфенил)ацетил]-Ь-пролина (соединение 10 в табл. 2), 2-(1-нафтил) этиловый эфир 1-[(4-хлорфенил)ацетил]-Ь-пролина (соединение 11), 2-(1-на-фтил) этиловый эфир 1-[(4-ме-тилфенил)ацетил]-Ь-пролина (соединение 12) оказались малотоксичными веществами.

Определение антагонистической активности образцов к рецептору NR3C4 проводили по их способности вызывать специфические клеточные сигналы при связывании с рецептором внутри клеток AR-UAS-bla GripTite™ 293 с регистрацией сигнала методом конфокальной микроскопии.

В присутствии всех исследуемых образцов интенсивность специфической флюоресценции увеличилась в 4 раза по отношению к показателю для контрольных клеток без добавления антагонистов.

Антагонистическую ак-

тивность на клетках культуры AR-UAS-bla GripTite™ 293 проявили образцы 2-(1-нафтил) эти-

lHHLiOH

jz^^o 2>шна

К' NHR

32

№3, 2014 Молекулярная медицина

ловый эфир 1-[(3-фторфенил)ацетил]-Ь-пролина (соединение 10 в табл. 2), 2-(1-нафтил) этиловый эфир 1-[(4-хлорфенил)ацетил]-Ь-пролина (соединение 11), 2-(1-нафтил) этиловый эфир 1-[(4-метил-фенил)ацетил]-Ь-пролина (соединение 12).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В работе описан поиск антагонистов рецептора NR3C4 с использованием методов молекулярного моделирования. С помощью программы А^осошЬ проведено молекулярное моделирование связывания веществ с рецептором NR3C4. Для данных соединений выполнен расчет ADME/Т-свойств по программе

ЛИТЕРАТУРА/РЕРЕРЕМОЕБ

Accelrys Discovery Studio. В результате молекулярного моделирования выявлены 2 типа наиболее перспективных соединений производных аминокислот. Синтезировано и исследовано 16 наиболее перспективных по расчетным оценкам соединений.

По результатам исследования биологической активности in vitro образцы 2-(1-нафтил) этиловый эфир 1-[(3-фторфенил)ацетил]-Е-пролина, 2-(1-на-фтил) этиловый эфир 1-[(4-хлорфенил)ацетил]-Е-пролина, 2-(1-нафтил) этиловый эфир 1-[(4-метилфе-нил)ацетил]-Е-пролина оказались малотоксичными и проявили антагонистическую активность к рецептору NR3C4.

1. Чиссов В.И., Старинский В.В., Петрова Г.В. Состояние онкологической помощи населению России в 2010 году. М., ФГУ «МНИОИ им. П.А. Герцена Минздравсоцразвития России», 2011. -112 с.

[Chissov V.I., Starinskij V.V., Petrova G.V. Statusof cancercare in Russiain 2010. M.: Moscow P.A. Gertsen Research Institute of Oncology, 2011; рр. 112 (in Russian)]

2. Березин П.Г., Милованов В.В., Иванников А.А. Октреотид-лонг в лечении больных кастрационно-рефрактерным раком предстательной железы. Онкология. Журнал им. П.А. Герцена. 2013; 1: 47-50.

[Berezin P.G., Milovanov V.V., Ivannikov A.A. Octreotide-long in patientscastration-refractory prostate cancer. Onkologiya. Zhurnalimeni P.A. Gerzena. 2013; 1: 47-50 (in Russian)]

3. Kinkade C., Castillo-Martin M. et al. Target-

ing AKT/mTOR and ERK MAPK signaling inhibits hormone-refractory prostate cancer in a preclinical mouse model. J. Clin. Invest. 2008; 9: 3051-64.

Лизунов А.Ю. Влияние выбора трехмерной структуры белка на результаты виртуального скрининга на примере белка каспаза-7. Электронный научный журнал «Молекулярные технологии», ISSN 1996-5362. 2010; 4; Публикация 13. [Lizunov A.Ju. Impact of the choiceof three-dimensional structure of the protein results of virtual screening as an example protein caspase-7. Electronic scientific journal «Molecular Technologies», ISSN 19965362. 2010; 4; Publication 13 (in Russian)] Ostrowski J., Kuhns J., Lupisella J. et al. Pharmacological and X-Ray Structural Characterization of a Novel Selective Androgen Receptor Modulator: Potent Hy-peranabolic Stimulation of Skeletal Muscle with Hypostimulation of Prostate in Rats.

Endocrinol. 2007; 1: 4-12. Sheng X., Pyun H.-J., Chaudhary K. et al. Discovery of novel phosphonate derivatives as hepatitis C virus NS3 protease inhibitors. Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters. 2009; 13: 3453-7. Wohlrab A., Lamer R., Van Nieuwenhze M. Total Synthesis of Plusbacin А3: A Depsipep-tide Antibiotic Active Against Vancomycin-Resistant Bacteria. J. of the American Chemical Society. 2007; 14: 4175-9. Гершкович А.А., Киберев В.К. Синтез Пептидов. Реагенты и методы. Киев., Наукова Думка, 1987. - 123 с. [Gershkovich A.A., Kiberev V.K. Synthesis ofpeptides. Reagents and Methods. Kiev: Naukova Dumka; 1987 (in Russian)] Choi C., Li J.-H., Vaal M. et al. Use of parallel-synthesis combinatorial libraries for rapid identification of potent FKBP12 inhibitors. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 200; 10: 1421-8.

Поступила 12 сентября 2013 г.

Новости науки

МАММОГРАФИЯ НЕ СНИЖАЕТ РИСК ЗАБОЛЕВАНИЯ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

К печальному выводу пришли ученые после 25-летнего исследования женщин, которые регулярно проходили скрининговые обследования для выявления ранних стадий рака молочной железы. Почти 90 тыс. женщин в возрасте от 40 до 59 лет обследовали для оценки информативности и ценности обычной маммографии. За эти 25 лет количество женщин, умерших от рака молочной железы, осталось таким же, как и в предыдущие десятилетия. Обнаружение при маммографии рака не означает, что он может быть излечен, в то же время в некоторых случаях излечение возможно, когда рак диагностируется визуально врачом или при самодиагностике. Кроме того, неоднозначно можно расценить значение гипердиаг-

ностики и ненужного лечения. Примерно 22% случаев описанных при маммографии как рак, не были злокачественной опухолью и не ухудшали состояние женщин, не влияли на продолжительность их жизни. В феврале результаты исследований были опубликованы в журнале BMJ (British Medical Journal). «Большинство случаев рака можно обнаружить на маммограмме. Но польза этого обнаружения спорна, — заявил профессор A. Miller из Торонто, — чем более развиты медицина и способы лечения, тем менее важна стадия, на которой опухоль обнаружена». Кроме того, у 424 женщин результаты скрининга были ложноположительными.

Scientific American, 2014. — Feb 12, http://www. scientificamerican.com/author/livescience46/BMJ. — 2014;

Vol 11. - 348-366 doi: http://dx.doi.org/10.1136/bmj.

g366 (Published 11 February, 2014).

Молекулярная медицина

33