CC BY
56
6. PiBic Й. Ф. Кшьюст методи хроматpграфiчноro визначення iндивiдуальних лшдав i жирних кислот в бiологiчному матерiалi / Й. Ф. PiBic, Р.С. Федорук // Львiв: SPOCOM .2010.- 109 с.
References
Taranov, G. F. (1986). Korma i kormlenie pchel / Rosselkhozizdat.- Moscow, 160. (in Russian). Manning, R. (2001). Fatty acids in pollen a revive of their importance for honey bees / Bee World. 82 (2), 60-75.
Dobson, H. E. M. (1988). Survey of pollen and pollenkitt lipids — chemical cues to flower
visitors. American journal of botany. 75, 180- 182. Bogdanov, S. (2003). Quality and Standards of Pollen and Beeswax / Apiacta. 38, №4, 334-341. Louvo, J. (1977). Scientific and practical aspects of feeding bees. / the XXVI International
Congress of beekeeping. - Adelaide, Australia. 367-371. Rivis, J. F., Fedoruk, R. S. (2010). Kilkisni metody hromatografichnogo vyznachennya indyvidualnyh lipidiv I girnyh kislot v biologichnomu materiali / Lviv: SPOLOM, 109. (in Ukrainian).
Стаття надшшла до редакци 15.04.2016
УДК 615.451.2
Капрельянц Л. В., д. т. н., професор ([email protected])
Труфкат Л. В., к. т. н., доцент ([email protected]) Крупицька Л. О., астрант ([email protected]) ©
Одеська национальна академия харчових технологий, м. Одеса, Украгна
ПОЖИВНЕ СЕРЕДОВИЩЕ ДЛЯ П1ДРАХУНКУ К1ЛЬКОСТ1 ЖИТТеЗДАТНИХ КЛ1ТИН Б1Ф1ДОБАКТЕР1Й У ПРОДУКТАХ ХАРЧУВАННЯ ТА ПРЕПАРАТАХ ПРОБ1ОТИЧНОГО ПРИЗНАЧЕННЯ.
В данш експериментальнш роботг дослгджено можливгсть використання соево-лактозного натвр1дкого середовища з р1зним вмгстом соевог сироватки для тдрахунку кглькостг життездатних клтин бгфгдобактерШ. За результатами дослгджень були вгдгбрат зразки лактозного середовища з додаванням вгд 3 - 5 % соевог сироватки, ям можна рекомендувати для контролю кглькостг клтин бгфгдобактергй вгдповгдно у продуктах та бгологгчно-активних препаратах пробютичного призначення, що використовуються в медицин для корекцгг та профтактики дисбактергозгв.
Ключов1 слова: Bifidobacterium, культивування, ктьюсний тдрахунок, поживне середовище, соева сироватка.
УДК 615.451.2
Капрельянц Л. В., д.т.н., профессор, Труфкати Л. В., кт.н., доцент, Крупицкая Л. А., аспирант
Одесская национальная академия пищевых технологий, г. Одесса, Украина
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОДСЧЕТА КОЛИЧЕСТВА ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ КЛЕТОК БИФИДОБАКТЕРИЙ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ И ПРЕПАРАТАХ ПРОБИОТИЧЕСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ
В данной экспериментальной работе исследована возможность использования соево-лактозной полужидкой среды с различным содержанием соевой сыворотки для подсчета количества жизнеспособных клеток бифидобактерий. По результатам исследований были отобраны образцы лактозной среды с добавлением от 3 - 5 %о соевой сыворотки, которые можно рекомендовать использовать как для контроля количества жизнеспособных бифидобактерий в продуктах питания, так для контроля биологически активных препаратов, используемых в медицине для коррекции и профилактики дисбактериозов.
© Капрельянц Л. В., Труфкат Л. В., Крупицька Л. О., 2016
70
Ключевые слова: Bifidobacterium, культивирование, количественный подсчет, питательную среду, соевая сыворотка.
UDC 615.451.2
Kaprelyants L. V., Doctor of Technical Sciences, Professor,
Trufkaki L. V., PhD, Assistant Professor, Krupitskaya L. A., graduate student.
Odessa National Academy of Food Technologies, Odessa, Ukraine
THE NUTRIENT MEDIUM FOR COUNTING THE NUMBER OF VIABLE CELLS OF BIFIDOBACTERIA IN FOOD PRODUCTS AND PROBIOTIC DRUG USE
In this experimental work we explored the possibility of using soybean-lactase semi liquid medium with different contents of soybean whey to count the number viable cells of bifidobacteria. According to the research, we were selected samples lactose medium with the addition of 3 - 5 %. It was recommended to use for control the amount for viable bifidobacteria in food and for control the biologically active supplements used in medicine for the prevention and correction of dysbacteriosis.
Key words: Bifidobacterium, cultivation, quantitative count, nutrient medium, soy
whey.
Вступ. Майже у 90 % населення Укра!ни вщзначет порушення кшькюного та яшсдаго складу шлунково-кишково! мшрофлори, що позначаються термшами «дисбактерюз» або «дисбюз» ГЛ.
Дисбактерюзами страждають пащети практично Bcix стацiонарiв i амбулаторних служб, жителi еколопчно несприятливих репошв, порушення нормально! мшрофлори яких формуються в результат! впливу на оргашзм фiзичних, xiMi4rnx, радiацiйних та шших факторiв Г21.
Для вщновлення порушено! мiкрофлори людини використовують рiзноманiтнi прийоми, перш за все, введения у великих шлькостях антагонiстичниx штамiв бактерiй - представнишв нормально! мшрофлори у складi пробiотичниx препаратiв або функщональних продуктiв. Найменшими побiчними ефектами при !х тривалому застосуваннi володдать пробiотики, до складу яких входять бiфiдобактерi!. Бiфiдобактерi! е ефективним бюкоректором, що володiе багатофакторним регулюючим i стимулюючим впливом на оргашзм Г31.
Вiдомо, що максимальний позитивний ефект на оргашзм людини виявляють препарати i продукти харчування, що мютять живi бiфiдобактерi! у кiлькостi ввд 108 КУО/см3 i бiльше. Саме кшьшсний вмiст життездатних бiфiдобактерiй е основним показником якост препаратов i продуктiв харчування пробiотичного призначення Г41.
1снують методи мiкробiологiчного контролю продуктов лiкувально-профiлактичного призначення за кшьшстю життездатних клiтин бiфiдобактерiй, якi засноваш на посiвi дослiджуваиого матерiалу методом послвдовних десятикратних розведень в ряд пробiрок зi спещальним поживним середовищем. При цьому використовують кукурудзяно-лактозне середовище (КЛС), тiоглiколеве середовище
Г51. . ... . .
Вимоги до безпеки пробютичних препаратов i продуктiв диктуе иеобxiдиiсть розробки нових, ефективних, недорогих виробничих поживних середовищ для кшьшсдаго пiдраxуику бiфiдобактерiй. Проблеми розширення асортименту пробiотичииx продуктiв пов'язаш з великою коикуреидiею в умовах iитеисивиого розвитку сегменту фуикцiоиальииx продуктов харчування. Це питання можливо виршити завдяки урахування появи нових потреб i иеобxiдиостi !х задоволення, при цьому важливе зниження собiвартостi та збшьшення доступиостi продукцi!.
За результатами попередшх результатiв дослiджеиия, було запропоновано замiиити кукурудзяний екстракт соевою сироваткою, через те, що вона багата бiфiдогенними фактороми, окрiм того е джерелом харчових волокон та iзофлавiиiв, тому сама по собi е стимулятором росту бiфiдобактерiй Г6].
71
Завдяки замш початково1' с^овини кyкypyдзяно-лaктозного сеpедовищa (КСЛ) - кyкypyдзяного екстpaктy на соeвy сиpовaткy - зменшyвaлись витpaти на пpиготyвaиня поживного сеpедовищa, та збiльшyвaлaсь бiомaсa кyльтивовaниx мiкpооpгaнiзмiв, що значно впливало на собiвapтiсть пpодyктy та мало екомiчний ефект. Попеpеднi показники дaниx по накопиченню бiомaси бiфiдобaктеpiй на сеpедовищi iз додавання соeвоï сиpовaтки, що опyблiковaнi y попеpеднiй стaттi, 6ули вищими, шж на сеpедовищi КСЛ, тому з цшлю збiльшення економiчного ефекту пpодyктy, зaпpопоновaно дослiдити можливiсть викоpистaння соeво-лaктозного сеpедовищa не тiльки для накопичення вpожaю бiфiдобaктеpiй, а й для ïx кiлькiсного пiдpaxyнкy у пpепapaтax та пpодyктax xapчyвaння.
Метою роботи було удосконалення складу поживного сеpедовищa для кшьшсного пiдpaxyнкy життeздaтниx клiтин бiфiдобaктеpiй у пpодyктax xapчyвaння та бiологiчно-aктивниx пpепapaтax пpобiотичного пpизнaчення.
Об'екти дослщження. У pоботi викоpистовyвaли музейн кyльтypи BгfidoЪacterгum Ъгfгdum, BгfidoЪacterгum longum, BгfidoЪacterгum adоlescentгs, ям e нaйбiльш пош^еними пpобiотичними мiкpооpгaнiзмaми, що викоpистовyють в пpомисловомy мaсштaбi. З метою ощнки кшькостг бiфiдобaктеpiй у пpепapaтax та пpодyктax xapчyвaння викоpистовyвaли класичне нamвpiдке поживне сеpедовище (кyкypyдзяно-лaктозне сеpедовище) та нaпiвpiдке лактозне сеpедовище з додаванням piзноï масово1' частки соeвоï с^оватки.
Мaтерiaлi та методи.
Вiдомий метод визначення кiлькостi бiфiдобaктеpiй Гpyнтyeться на пpиготyвaннi послiдовниx десятикpaтниx pозведень зpaзкiв, як дослiджyються, та на пpиготyвaннi нaпiвpiдкого поживного сеpедовищa для визначення кшькосп життeздaтниx бaктеpiй pодy BгfгdoЪacterгum. Для того, щоб пiдpaxyвaти xapaктеpнi колони у склaдi експеpиментaльного лактозного сеpедовищa з piзною кiлькiстю соeвоï сиpовaтки збiльшyвaли кiлькiсть aгap-aгapy ввд 2,5 г до 17 г на 1 лир поживного сеpедовищa.
Готували добовi кyльтypи дpyгого пасажу B. Ъгfldum, B. longum, B. adülescentis, як культивували на piдкомy соeво-лaктозномy сеpедовищi з додаванням 3% соeвоï сиpовaтки. Теpмостaтyвaння пpоводили ^и темпеpaтypi (37±1) °С пpотягом 24 годин ввдбувалося накопичення клiтин у титда не менше нiж 1109 КУО/см3.
Пpиготовaне нaпiвpiдке поживне сеpедовище з додаванням соeвоï сиpовaтки ввд 1 - 6% iз значенням aктивноï кислотности pH=6,8-7,0 ед. pH стеpильно pозливaли по 9 см3 в два pяди пpобipок.
З пеpшого pозведения культ-yp B. Ъгfldum, B. longum, B. аdlescentгs. готували послвдовш десятинам pозведения до 10-го pозведеиня з таким pозpaxyнком, щоб останнш з ниx не мютив бiфiдобaктеpiй. 1з зpоблеииx pозведеиь кyльтyp, що дослiджyвaлись, здiйсиювaли висiв 1см3 в два пapaлельиi pяди пpобipок iз свiжопpиготовaиним нaпiвpiдким поживним сеpедовищем з додаванням соeвоï сиpовaтки ввд 1 - 6 %. Культивування бiфiдобaктеpiй пpоводили пpотягом 72 год ^и темпеpaтypi (37±1) °С. Кyкypyдзяно-лaктозне сеpедовище (КЛС) викоpистовyвaли у якост контpолю.
Облiк pезyльтaтiв здшснювали за наявшстю в останньому pозведеинi xapaктеpниx колошй у виглядi комет. За шнцевий pезyльтaт aнaлiзy пpиймaли сеpеднe apифметичне значення, яке отpимaли у двоx пapaлельниx pядax (таб. 1).
Додатково доводили мiкpоскопiю iзольовaниx колошй з встановленням моpфологiчииx ознак.
На доугому етaпi дослiджеиь соeво-лaктозного сеpедовищa пpоводили визначення концентpaцiï бiфiдобaктеpiй в ^об^т^ному пpепapaтi викоpистовyвaли «Бiфiдyмбaктеpии» у фоpмi лiофiлiзaтy з piзним сроком пpидaтностi. Дослiджеиня пpоводили у веpеснi мiсяцi поточного pокy. Отpимaно pезyльтaти кшьшсть життeздaтниx клiтии бiфiдобaктеpiй, яш виpaжaли у колониeyтвоpюючиx одииицяx в 1см3 (КУО/см3) та титpовaноï кислотност - у гpaдyсax Теpнеpa (°Т) на соeво-лактозному й кyкypyдзяно-лaктозномy поживииx сеpедовищax (таб. 2).
72
Активнють кислоутворення культур бiфiдобактерiй визначали титрометричним методом в контрольному i експериментальних середовищах. Титровану кислотнiсть вичислили по формула
°Т = А • К • 10, де
А — шлькють мiлiлiтрiв 0,1 М, яку використовували для титрування 10 см культурально! рiдини;
К — поправка до титру 0,1 М розчину натрiя гiдроксида;
°Т — умовна величина, яка виражена в градусах Тернера.
Результати.
Шсля 72 годин культивування у напiврiдкому поживному середовищi з додаванням 3 % соево! сироватки дослiднi культури бiфiдобактерiй ^утворювали наступну кiлькiсть колонiеутворюучих одиниць: B. bifidum - 5 10 КУО/см, B. adolescentis - 6109 КУО/см3, B. longum - 11010 КУО/см3, що максимально наближувалися до значень у контрольному зразку: B. bifidum - 4109 КУОЕ/см3, B. cidolescentis - 5 109 КУО/см3, B. longum - 9109 КУО/см3. З пiдвищенням масово1 частки соево! сироватки вiд 4% до 5 % кшькють життездатних клiтин збiльшувалася
9 3*9 3 9 ^ 3 .
вiдповiдно: B. bifidum - 610 КУО/см i 710 КУО/см, B. adolescentis - 710 КУО/см i 8109 КУО/см3, B. longum - 3 1010 КУО/см3 i 410 КУО/см . Колонiеутворюючi одиницi мали вигляд комет або зерен з утворенням верхньо! стерильно! зони, що характерно для бактерш роду Bifidobacterium (табл. 1).
В останньому зразку експериментального середовища (6 % соево! сироватки) вже за першу добу культивування показники кшькосп колошеутворюючих одиниць усiх штамiв роду Bifidobacterium перевищували показники iнших зразшв запропонованих середовищ: B. bifidum - 5 1010 КУО/см3, B. adolescentis -9109 КУО/см3, B. longum - 5 1010 КУО/см3.
Таблица 1
Вплив масовоТ частки соевот сироватки на ркт i розвиток бактерiй роду Bifidobacterium ^ у напiврiдкому лактозному середовищь_
Назва штаму Масова частка соево! сироватки, % Час культивування, год
24год 48год 72год
B. bifidum Показники росту мiкроорганiзмiв, КУО/см3
1% 3105 5106 7107
2% 5105 8107 2108
3% 6106 8108 5109
4% 4-10' 9109 6109
5% 1108 8109 7109
6% 6109 11010 2-101и
Контроль (КСЛ) 2106 6108 4109
B. adolescentis Показники росту мiкроорганiзмiв, КУО/см3
1% 4105 6106 8107
2% 7105 6107 4108
3% 6106 8108 6109
4% 1107 3109 7109
5% 3108 7109 8109
6% 5108 8109 9109
Контроль (КСЛ) 4106 4108 5109
B. longum Показники росту мiкроорганiзмiв, КУО/см3
1% 5105 7-10° 6107
2% 9105 8107 6108
3% 8106 7108 11010
4% 6108 8109 3 1010
5% 8109 21010 4-1010
6% 6109 31010 5 1010
Контроль (КСЛ) 6106 6108 9109
73
При подальшому культивуванш кшьшсть клгтин бiфiдобактерiй збшьшувалася, але не значно вiдрiзнялася ввд показникiв в зразках середовища з додаванням 5 % соево! сироватки, а вже на третю добу культивування - була нижчою. Крiм того на другу i третю добу культивування показники залишалися незмшними, отже це можна пояснити, що бактерп вичерпали поживнi речовини середовища протягом першо! доби культивування, i надалi не були здатнi активно розвиватися i накопичувати бiомасу, тобто знаходилися в стацiонарнiй фаза та переходили до фази вщмирання.
Колони мали вигляд довгих тяжiв або комет. При анаеробних умовах (заливали маслом поверхню напiврiдкого середовища) рют був рiвномiрним по всьому об'ему пробiрки, у випадку вiдсутностi маслянисто! плiвки, яка утворювала б анаеробш умови, колонi! бiфiдобактерiй знаходились ближче до дна пробiрки.
В мазках культивованих мiкроорганiзмiв, що виросли на запропонованих зразках напiврiдких середовищ, у« препарати при мiкроскопi! мали типову для бiфiдобактерiй морфологiю паличок i розташовувалися у виглядi пучкiв, а також у виглядi окремих особин, при фарбуванш за методом Грама - фарбувалися як грампозитивнi. Сторонш мiкроорганiзми не виявлялися.
При визначенш концентрацi! бiфiдобактерiй в пробiотичному препарат «Б!ф!думбактерин» у формi лiофiлiзату з рiзним строком придатносп було виявлено, що всi експериментальнi зразки нашврвдкого поживного соево-лактозного середовища незначною мiрою вiдрiзнялися вiд контролю, проте мали бшьш висок! показники колонiеутворюючих одиниць та титровано! кислотнють (таб. 2).
Таблица 2
Визначення моказнишв росту бiфiдобактерiй та титровано'1 кислотностi
<^фщумбактерину» на рiзних поживних середовищах
СЛС КЛС
Назва препарату, строк придатносп Кшьюстъ соево! сироватки в СЛС,% § « м 2 н2 ккс ^О й-ЭЙ § Титрована кнслотшсть, °Т § « м 5Г3 2 Н 2 ккс ■ й о й.эй 5 Титрована кнслотшсть, °Т
«Жфщумбактерин» Придатний до 01.16 3 4109 60
4 5109 62 3109 58
5 6109 63
«Жфщумбактерин» Придатний до 10.15 3 2109 55
4 3109 56 2109 53
5 4109 56
Титрована кислотнють мае важливе значення для пробютичного ефекту та вказуе на здатшсть до метаболiзму культивованих органiзмiв. Титрована кислотнють середовища у в«х зразках з додаванням соево! сироватки була вищою, шж у контрольному зразку з КСЛ, про що св!дчить яшсть середовища. Проте прослвдковувалось зниження кислотности та зменшення кшькосп клгтин у препаратi, у якому строк зберiгання до жовтня 2015 року, що можно пов'язати !з зниженням якосп препарату через те, що вш добрав до строку придатносп.
Висновки. В результат! узагальнення даних експерименту була встановлена можливють використовувати 3 -5 % соево! сироватки у лактозному середовищ! для контролю кшькосп життездатних б!фвдобактерш у продуктах харчування та бюлопчно-активних препарапв, що використовуються в медицин! для корекцн та профшактики дисбактерюз!в.
Результати мшробюлопчних дослщження показали, що при культивуванш б!фщобактерш на запропонованому натврщкому лактозному середовищ! з додаванням соево! сироватки морфолопчш та культуральш властивосп б!фвдобактерш вах культур
74
вщповщали видам Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium adolescentis.
Можна рекомендувати натврщке поживне середовище з додаванням 3% соево! сироватки для контролю кiлькостi клiтин бiфiдобактерi у функцiональних продуктах харчування, а з 4 5 % соево! сироватки для контролю бюлопчно-активних препаратах про бютичного призначення.
Лiтература
1. Бондаренко В. М., Воробьев А. А. Дисбиозы и препараты с пробиотической функцией. // Журн. микробиол. - 2004. - № 1. - С. 8492.
2. Бондаренко В. М., Грачева Н. М., Мацулевич Т. В. Дисбактериозы кишечника у взрослых. // КМК Scientific Press. - Москва, 2003. - С. 224.
3. Патент РФ №99107061/13, Способ количественной оценки содержания бифидобактерий в смешанных культурах микроорганизмов / Шендеров Б. А.; Степанчук Ю. Б., Изобретения. - 2000.
4. Пребиотики: химия, технология, применение. / Л. В. Капрельянц. - Киев: ЭнтерПринт, 2015. - 252с.
5. Методические указания МУК 4.2.577-96. Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов: Методичкские указания. - М.: Информационно-издательский центр Минздрава России, 1998. - 95 с.
6. Капрельянц Л. В., Труфкап Л. В., Крупицька Л. О. Поживне середовище для культивування бактерш роду Bifidobacterium на основi рослинно! сировини. // Науковий вюник ЛНУВМБТ iменi С. З. Гжицького. Т.3. - №4 (64). - 2015. - С. 47- 54.
References
Bondarenko, V. M., Vorobev, A. A. (2004). Disbiozyi i preparatyi s probioticheskoy funktsiey. //
Zhurn. mikrobiol. 1, 84-92. (in Russian). Bondarenko, V. M., Gracheva, N. M., Matsulevich, T. V. (2003). Disbakteriozyi kishechnika u
vzroslyih. // KMK Scientific Press. - Moskva, 224. (in Russian). Patent RF #99107061/13, Sposob kolichestvennoy otsenki soderzhaniya bifidobakteriy v smeshannyih kulturah mikroorganizmov/ Shenderov B. A.; Stepanchuk Yu. B., Izobreteniya. - 2000. (in Russian). Kaprelyants, L. V. (2015). Prebiotiki: himiya, tehnologiya, primenenie. Kiev: EnterPrint, 252. (in Russian).
Metodicheskie ukazaniya MUK 4.2.577-96. Metodyi mikrobiologicheskogo kontrolya produktov detskogo, lechebnogo pitaniya i ih komponentov: Metodichkskie ukazaniya. - M.: Informatsionno-izdatelskiy tsentr Minzdrava Rossii, 1998. - 95 s. (in Russian). Kaprel'yants, L. V., Trufkati, L. V., Krupyts'ka, L. O. (2015). Pozhyvne seredovyshche dlya kul'tyvuvannya bakteriy rodu Bifidobacterium na osnovi roslynnoyi syrovyny. // Naukovyy visnyk LNUVMBT imeni S.Z. Hzhyts'koho. T.3. - 4 (64), 47- 54. (in Ukrainian).
Стаття надшшла доредакцп 1.04.2016
УДК 66.061.34
Коляновська Л. М., к. т. н. ([email protected]) ©
Втницький национальный аграрный утверситет, м. Втниця, Украгна
П1ДВИЩЕННЯ ЯКОСТ1 РОСЛИННИХ ОЛ1Й ПРИ ЕКСТРАГУВАНН1 ЕТИЛОВИМ СПИРТОМ З 1НТЕНСИФ1КАЩСЮ НАДВИСОКОЧАСТОТНОЮ
ЕНЕРГ1СЮ
В рослинних ол1ях е необхгдт для життедгяльностг людини кислоти лтолева с1мейства ю-6 та лтоленова сгмейства ю-3, яю не синтезуються в органгзмг людини. Важливим фактором харчовог цтностг рослинних олш е юльюсть та стввгдношення цих кислот. Як свгдчать дослгдження в галузг медицини на УкраШ стввгдношення та юльюсть даних елемент1в в 3 рази менше необх1дног норми для повноцтного харчування. Перш за все, це пов 'язано 1з обмежетстю асортименту олш в повсякденному рацгонг та обмежетстю купажованих олш. Соняшникова олгя, що
© Коляновська Л. М., 2016
75
