CC BY
22
УДК 661.158:615.015
Кушшр I. М., канд.с.-г. наук (igorku70@gmail.com) © Державный науково-дослгдний контрольный тститут ветеринарных npenapamie
та кормових добавок, м. Львiв
ФАРМАКОЛОГ1ЧНА ОЦ1НКА Ш'СКЦШНИХ ПРЕПАРАТ1В ЗА ПРОВЕДЕННЯ ПОВТОРНО! СТЕРИЛ1ЗАЩ
У стaттi наведет результати з вивчення впливу рiзних температурних режимiв на зниження рiвня бактертних ендотокситв у готових лЫарських препаратах. Виявлено, що при повторнт стерилiзaцií води для т'екцт та iзотонiчного розчину натрт хлориду, при температурних режимах 121 °С упродовж 15 хв. та 134 °С упродовж 20 хв. знижувався рiвень ендотокситв. Встановлено високу ефективтсть стерилiзaцií готових лтарських препaрaтiв за температури 134 °С упродовж 20 хв. Так, вмкт бактертних ендотокситв у до^джуванихрозчинах для т'екцт знижувався у 25рaзiв.
Ключовi слова: вода для т'екцт, повторна стерилiзaцiя, бактертн ендотоксини, ЛАЛ-тест, ткубування.
Вступ. Контроль стерильних лжарських 3aco6ÍB (ЛЗ) для парентерального застосування на бактершш ендотоксини е одшею з актуальних проблем сучасного виробництва препараив [1]. Ендотоксини (лшополшахариди (ЛПС)) можуть мютитися у сировиш, яка використовуеться для виготовлення ЛЗ, в системах отримання i подачi води, на поверхнях технолопчного обладнання, в повiтрi виробничих примщень, на одязi i руках обслуговуючого персоналу [2, 3]. На зовшшнш стшщ одше! грамнегативно! бактери нараховуеться до 3,5 млн. молекул ЛПС, а тсля ii руйнування вс вони залишаються в розчиш [2, 4]. Виходячи з цього, готовi стерильш ЛЗ повиннi вiдповiдати вимогам Державно! фармакопе! Укра!ни (ДФУ) за вмютом бактерiйних ендотоксинiв [5]. За цих умов ДФУ регламентовано максимально допустиму кшьюсть ендотоксину на кiлограм маси тша за годину i вона становить 5 мiжнародних одиниць (МО) [6, 7].
Препарати, що не вщповщають вимогам ДФУ та нормативно! документацп за вмютом бактерiйних ендотокситв тдлягають утилiзацii. Саме тому метою нашо! роботи було вивчення впливу повторно! стерилiзацii готових лiкарських засобiв на зниження концентрацп ендотоксинiв.
Матерiали i методи. Робота проводилась спшьно з лабораторiею бiологiчного контролю корпораци Артерiум АТ "Галичфарм". Вивчення впливу стерилiзацii на зниження концентрацп бактершних ендотоксинiв проводили на iзотонiчному розчиш натрш хлориду та водi для ш'екцш. У данi розчини вносили вщповщш концентрацп ендотоксину Esherichia coli 0113:Н10. Для постановки ЛАЛ-тесту використовували набори реактивiв "Associates of Cape Cod Inc." (США). 1нкубацш реакцшно! сумiшi проводили за температури 37±1 °С упродовж 60±2 хв. у сухопов^ряному термоблоцi "PYROTHERM" (фiрма
© Кушшр I. М., 2011
"OPULUS", Угорщина). Визначення бактершних ендотоксишв проводили методами А та В, вщповщно до вимог фармакопейних статей [5, 6].
Результати дослщження. Згщно з вимогами фармакопейних статей та нормативно! документаци, рiвень бактерiйних ендотоксинiв у водi для ш'екцш повинен становити менше 0,25 МО/мл, а для iзотонiчного розчину натрiю хлориду — менше 0,5 МО/мл. Проте, досягнути такого рiвня бактерiйних ендотоксинiв при виробництвi препараив не зажди вдаеться. Власне тому нами було вивчено вплив стерилiзаци на зниження кшькост ендотоксинiв у водi для iн'екцiй при автоклавуванш за температури 121 °С упродовж 15 хв. У препарати вносили рiзнi концентраци стандартного бактерiйного ендотоксину E. coli О 133:Н10. Концентращю бактерiйних ендотоксинiв визначали до i пiсля автоклавування. Результати дослiджень наведено у таблиц 1.
Таблиця 1
Кшьккть ендотоксишв^ у вод1 для ш'екцш шсля стерил1зацй'_
Концентрац1я БЕ до стерил1зацп, МО/мл Розведення Концентращя БЕ шсля стерил1заци, МО/мл Утворення гелю, +/- Зниження БЕ, рази
130000 1 2080000 <130000 - 1
1 208000 <13000 - 10
1 20800 >1300 +
13000 1 208000 <13000 - 1
1 20800 <1300 - 10
1 2080 >130 +
1300 1 20800 <1300 - 1
1 2080 <130 - 10
1 208 >13 +
Як видно з даних, наведених у таблицi 1, пiсля стерилiзацil (автоклавування за температури 121 °С упродовж 15 хв.) води для ш'екцш, контамшовано! рiзною концентрацiею БЕ E. coli О 133:Н10 вщ 130000 до 1300 МО, у вЫх випадках проходило зниження рiвня ендотоксинiв у 10 разiв.
Проте такий рiвень БЕ е надто високим, властиво тому ми провели повторну стерилiзацiю за температури 132° С упродовж 20 хв. Результати дослщжень наведеш у таблицi 2.
Таблиця 2
Концентращя ендотоксишв у вод1 для iн'cкцiй п1сля повторно'' стерил1зацй'
Концентращя БЕ до повторно! стерил1зацп, МО/мл Розведення Концентращя БЕ шсля повторно! стерил1зацп, МО/мл Утворення гелю, +/- Зниження БЕ, рази
1300 МО/мл 1: 20800 <1300 - 1
1: 2080 <130 - 10
1:1664 <104 - 12,5
1:823 <52 - 25
130 МО/мл 1: 2080 <130 - 1
1: 208 <13 - 10
1:166,4 <10,4 - 12,5
1:82,3 <5,2 - 25
1:41,6 >2,6 +
Як видно з даних, наведених у таблиц 2, тсля повторно! CTepHni3a^i' (автоклавування за температури 132°С упродовж 20 хв.) води для ш'екцш виявили зниження концентраци ендотоксину у 25 разiв.
У подальшому нами було проведено визначення концентраци БЕ у iзотонiчному розчинi натрiю хлориду пiсля автоклавування за температури 1210 С упродовж 15 хв.
З щею метою у фiзiологiчний розчин вносили рiзнi концентраци стандартного БЕ Е. coli О 133:Н10. Результати дослщжень наведет у таблицi 3.
Таблиця 3
Концентращя ендотоксишв у потошчному розчиш натр1ю хлориду пiсля
стерилiзацi'l'
Концентращя БЕ до Розведен-ня Концентращя БЕ Утворення Зниження
стерил1зацп, МО/мл шсля стерил1заци, МО/мл) гелю, +/- БЕ, рази
100000 МО/мл 1: 1600000 <100000 - 1
1: 160000 <10000 - 10
1: 16000 >1000 +
10000 МО/мл 1: 160000 <10000 - 1
1: 16000 <1000 - 10
1: 1600 >100 +
1000 МО/мл 1: 16000 <1000 - 1
1: 1600 <100 - 10
1: 160 >10 +
Як видно з даних, наведених у таблищ 3, тсля стерилiзащi iзотонiчного розчину натрш хлориду (автоклавування за температури 121 °С упродовж 15 хв.) спостер^аеться зниження концентраци ендотоксинiв, як i у випадку iз водою для iн'eкцiй у 10 разiв.
Пiсля цього ми провели повторну стерилiзацiю розчину за температури 132 °С впродовж 20 хв. Результати дослщжень наведет у таблищ 4.
Таблиця 4
Р1вень ендотоксишв у iзотонiчному розчиш натр1ю хлориду пiсля повторно*!
стерилiзацi'l
Концентрация БЕ до Розведення Концентращя БЕ Утворення Зниження
стерил1зацп, МО/мл тсля стерил1зацп, МО/мл гелю, +/- БЕ, рази
10000 МО/мл 1: 160000 <10000 - 1
1: 16000 <1000 - 10
1:8000 <500 - 20
1:6400 <400 - 25
1: 1600 >100 +
1000 МО/мл 1: 16000 <1000 - 1
1: 1600 <100 - 10
1:800 <50 - 20
1:640 <40 - 25
1: 160 >10 +
Як видно з даних, наведених у таблищ 4, тсля повторно! стерилiзацii iзотонiчного розчину натрш хлориду встановили зниження концентраци ендотоксишв у 25 разiв.
Отже, при повторнш стерилiзащi води для ш'екцш та iзотонiчного розчину натрш хлориду за температури 132 °С впродовж 20 хв., у препаратах знижувалась концентращя бактерiйних ендотоксинiв.
Наступним етапом дослщження стала повторна стерилiзацiя готових ЛЗ, що не вiдповiдали показникам якост за вмiстом бактерiйних ендотоксинiв за темпераратури 121 °С впродовж 15 хв. та 134 °С упродовж 20 хв. Для цього використали воду для iн'eкцiй, яка мктила БЕ та була розфасована у ампулах, об'емом 2 та 200 см3. Результати дослщжень наведено у таблищ 5.
Таблиця 5
Вплив повторно! стернлiзащ'l на кiлькiсть БЕ у водi для ш'екцш, МО/см3
Фасування, 3 см Норма Готовий л1карський зааб Повторна стерил1зацш, температура/час
121°С - 15 хв. 134°С - 20 хв.
2 < 0,25 > 0,25 >0,25 < 0,25
200 < 0,25 > 0,25 >0,25 < 0,25
Як видно з даних наведених у таблищ 5, при повторнш стерилiзащi води для ш'екцш у ампулах по 2 см3 та флаконах по 200 см3, iз застосуванням температурного режиму 121 °С упродовж 15 хв. вмют БЕ не знижувався до межi допустимо! норми, а тсля повторно! стерилiзащi за температури 132 °С упродовж 20 хв. цей показник знаходився в межах декларованих показниюв якоси.
У подальшому ми вивчили вплив рiзних умов повторно! стерилiзацi! на вмiст бактерiйних ендотоксинiв у iзотонiчному розчинi натрiю хлориду, який за даним показником не вщповщав вимогам НД. Визначення впливу повторно! стерилiзацi! на рiвень БЕ у iзотонiчному розчинi натрiю хлориду, виготовлених у ампулах по 5, 10 см3 та флаконах 200 см3 подано у таблищ 6.
Таблиця 6
Вплив повторно!' стернлпащ!' на кшьккть БЕ у розчинах натр1ю хлориду,
МО/см3
Фасування, см3 Норма Готовий л1карський зааб Повторна стерил1зацш, температура/час
121°С - 15 хв. 134°С - 20 хв.
5 < 0,5 > 0,5 >0,5 < 0,5
10 < 0,5 > 0,5 >0,5 < 0,5
200 < 0,5 > 0,5 >0,5 < 0,5
Результати дослщжень, наведеш в таблищ 6, вказують на те, що повторна стерилiзацiя за температури 134 °С упродовж 20 хв. знижуе вмiст БЕ i пщвищуе якiсть препарату.
Висновки. 1. Стерилiзацiя готового лiкарського засобу у рекомендованих режимах не знижуе концентрацi! бактершних ендотоксинiв у достатнiй мiрi.
2. Повторна стерилiзацiя ЛЗ, за температури 134 °С упродовж 20 хв. знижуе вмют бактерiйних ендотоксинiв нижче ГВЕ i пiдвищуе якiсть препарату.
Перспективи подальших дослщжень. Впровадження у лабораторну практику методу визначення бактершних ендотоксишв у стерильних лшарських засобах для парентерального застосування.
Л1тература
1. Ситников А. Г. ЛАЛ-тест. Современные подходы к определению пирогенности / А. Г. Ситников, Л. А. Травина, В. Л. Багирова. — М. — 1997. — 96 с.
2. ЛАЛ-тест (Сборник статей, лекций и практических рекомендаций) / ЛАЛ-центр. — 2008. — 114 с.
3. Коцюмбас I. Я. Проблема визначення ендотоксишв, як основно! причини трогенност / 1.Я. Коцюмбас, Г.Ю. Тесляр, А.О. Костюк [та ш.] // Ветеринарна медицина Укра!ни. — 2001. — № 8. — С. 34-36.
4. Cooper J.F. // In: Nuclear Medicine (Ed. Hencin R.E., Boles M.A., et al. Mosby, 1996). / Chapter 34. «Microbiological Purity: Tests for Endotoxins and Sterility». — P. 421-428.
5. Коцюмбас I. Я., Кушшр I.M., Качмарчик Н.В. Альтернативш тдходи до визначення трогенност лжарських засобiв // Укра!нська ААН, науково-техшчний бюлетень 1нституту бюлогп тварин, ДНДК1 ветпрепаратiв, випуск 10.— №4. — С. 511-514.
6. Державна фармакопея Украши / Державне пщприемство «Науково-експертний фармакопейний центр». — 1-е вид. — Доповнення 1. — Харюв: ДП «Науково-експертний фармакопейний центр», 2004. — 520 с.
7. Державна фармакопея Украши/ Державне пщприемство «Науково-експертний фармакопейний центр». — 1-е вид. — Доповнення 2. — Харюв: ДП «Науково-експертний фармакопейний центр», 2008. — 620 с.
Summary
Kushnir I.M., candidate of agricultural sciences, igorku70@gmail.com State Scientific-Research Control Institute of Veterinary Medical Products and Fodder
Additives Lviv
PHARMACOLOGICAL EVALUATION OF INJECTED PREPARATIONS FOR
RESTERILISATION CONDUCT
The article presents the results on studying the impact of different temperature regimes on reduction of bacterial endotoxin level in finished medicines. It was found that in the re-sterilize water for injection and isotonic sodium chloride solution, the temperature range 121 °C for 15 min. and 134 °C within 20 min. decreased levels of endotoxin. There had been installed high efficiency sterilization of finished medical products at a temperature of 134 °C within 20 min. Thus, the content of bacterial endotoxins in the studied injection decreased in 25 times.
Key words: water for injections, repeated sterilization bacterial endotoxin, LAL-test, incubation.
Рецензент - д.вет.н., проф. Гуфрш Д.Ф.
