Петрушка кудрявая как потенциальный источник ценных биологически активных веществ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 615.072/322:635.781

© Т.А. Тангиева, А.А. Маркарян, Т.Д. Даргаева, 2014

Т.А. Тангиева1, А.А. Маркарян1, Т.Д. Даргаева2 ПЕТРУШКА КУДРЯВАЯ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЙ ИСТОЧНИК ЦЕННЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

'ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России, г. Москва 2ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений» РАСХН, г. Москва

Петрушка кудрявая является перспективным растением, поскольку содержит ценные биологически активные вещества, оказывающие разностороннее действие на организм человека. С использованием инструментальных методов анализа (высокоэффективная жидкостная хроматография, спектрофотометрия) более подробно изучен фенольный комплекс сырья петрушки кудрявой и установлено присутствие в ней флавоноидов, оксикоричных кислот, кумаринов, витаминов. Определено количественное содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-глюкозид, которое должно быть не менее 1,6%.

Ключевые слова: петрушка кудрявая, высокоэффективная хроматография, спектрофотометрия, количественное определение флавоноидов, лютеолин-7-глюкозид.

T.A. Tangiyeva, A.A. Markaryan, T.D. Dargaeva PETROSELINUM CRISPUM AS A POTENTIAL SOURCE OF VALUABLE BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES

The Petroselinum crispum Mill. is a perspective plant since it contains valuable biologically active substances, having a many-sided effect on human organism. With the use of instrumental methods of analysis (high-perfomance liquid chromatography, spectrophotometry) we have studied in detail phenolic complex of curly parsley raw material and the presence of flavonoids, oxycorics acids, cumarins, and vitamins in it was established. The quantitative content of the amount of flavonoids was determined expressed as lyuteolin-7-glucozid to be not less than 1.6%.

Key words: Petroselinum crispum Mill., high-perfomance liquid chromatography, spectrophotometry, quantitation of flavo-noids, luteolin-7-glucoside.

Петрушка кудрявая (Petroselinum сп8риш МШ) - травянистое растение семейства зонтичных (Ар1асеае). Родиной петрушки является Средиземноморье, иногда в диком виде встречается в Южной Европе. Люди в основном используют ее в пищевых и лечебных целях. Петрушку рекомендуют включать в пищевой рацион, особенно в зимне-весенний период, когда организм испытывает недостаток витаминов. Также полезна петрушка при отеках, так как оказывает выраженное мочегонное действие, выводит из организма соли мочевой кислоты, что особенно важно при таких заболеваниях, как подагра и полиартрит. Семена петрушки оказывают спазмолитическое действие и могут применяться при спазмах желчевыводящих путей и кишечника. Сырье петрушки содержит ценные биологически активные вещества - витамины, эфирные масла, фенольные соединения (флавоноиды, оксикоричные кислоты и др.) [3]. Кроме того, экспериментально установлено, что петрушка кудрявая богата природными антиок-сидантами (витамин С, Р-каротин, фенольные соединения, аминокислоты, микроэлементы), которые обеспечивают антиоксидантную защиту организма человека.

Изучение комплекса фенольных соединений петрушки кудрявой, обеспечивающих разнообразный фармакологический эффект сырья, является актуальной задачей.

Целью исследования является качественный анализ фенольных соединений, содержащихся в лекарственном растительном сырье петрушки кудрявой, а также разработка методики их количественного определения.

Материал и методы

Объектами исследования служили корни и листья петрушки, собранные на опытных участках в Московской области в 2013 году. Фенольные соединения из сырья извлекали экстракцией этиловым спиртом 70% (для высушенного сырья) или 90% для свежесобранного сырья при нагревании на водяной бане. Сухое сырьё измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито диаметром отверстий 2 мм. Свежее сырьё грубо измельчали ножом. Изучение качественного состава фенольных соединений сырья петрушки кудрявой проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы «GILSON» с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы Муль-тихром для Windows. В качестве подвижной фазы использована система: метанол-вода-конц. кислота фосфорная (в соотношении 400:600:5). В качестве неподвижной фазы была использована металлическая колонка размером 4,6x250 мм Kromasil C 18, размер частиц 5 микрон. Объем пробы - 20 мкл. Анализ проводили при комнатной температуре. Ско-

рость подачи элюента 0,8 мл/мин. Детектирование проводили с помощью УФ-детектора GILSON при длине волны 254 нм.

Количественное определение суммы флавоноидов проводили методом дифференциальной спектрофотометрии в пересчете на лютеолин-7-глюкозид [1]. Статистическую обработку данных (Р= 95%) проводили в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XI издания с использованием критерия Стьюдента [2].

Результаты и обсуждение Для достоверного подтверждения качественного состава фенольного комплекса сы-

рья петрушки применяли метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Параллельно готовили серию 0,05% растворов сравнения стандартных образцов в 70% спирте этиловом: апигенина, рутина, кверцетина, витексина, кемпферола, лютео-лин-7-глюкозида; танина, эпикатехина, кате-хина, о-метоксикумарина, дигидрокумарина; кумаровой, галловой, хлорогеновой, неохло-рогеновой, изохлорогеновой, аскорбиновой, цикориевой кислот. Идентификацию проводили путем сопоставления времени удерживания компонентов смеси и растворов сравнения (рис.1-2).

тУ 200-

0--'

10

Ю

Я !

Рис.

15 20 25 30 35 40 мин о , ц у £ м ад

а б

1. Хроматограмма ВЭЖХ извлечения из листьев петрушки кудрявой: а - свежих и б - высушенных

) 3 ] и 15 30 35 40 45 50 55 ыин 0 1 1 6 11Н||НВВ]13»ЯЗ|Л»и31)|14««9ЛЯ

а б

Рис. 2. Хроматограмма ВЭЖХ извлечения из корней петрушки кудрявой: а - свежих и б - высушенных

На основании проведенных исследований с использованием растворов сравнения по времени удерживания идентифицировано 15 веществ. Причем, качественный состав высушенного и свежего сырья (листьев и корней петрушки) близок. Различия в содержании отдельных компонентов могут быть объяснены изменением химического состава сырья в процессе хранения (табл. 1).

Для выбора стандартного образца, на который можно проводить пересчет количественного содержания суммы флавоноидов, сравнивались УФ-спектры растворов рутина, лютеолин-7-глюкозида, кверцетина, наринге-нина (рис. 3).

В качестве стандарта выбран раствор СО лютеолин-7-глюкозида. Максимум поглощения его комплекса с алюминия хлори-

дом совпадает с таковым извлечения из сырья (рис.4).

400

(пт}

Рис. 3. УФ-спектры комплексов СО флавоноидов с алюминия хлоридом: 1 - нарингенина; 2 - лютеолин-7-глюкозида; 3 - рутина, 4 - кверцетина

Для количественного определения суммы флавоноидов в сырье петрушки кудрявой методом дифференциальной УФ-спектро-фотометрии разработана следующая методика: аналитическую пробу сырья измельчают

до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями 2 мм.

Таблица 1

Биологически активные соединения, идентифицированные в сырье петрушки кудрявой

Идентифицированные соединения В свежем сырье В высу сы ленном рье

корни листья корни листья

Аскорбиновая кислота + + + +

Галловая кислота + + + +

Катехин + + - +

о-Кумаровая кислота + + + +

Изоферуловая кислота + + + -

Хлорогеновая кислота + - + +

Неохлорогеновая кислота - + + +

Цикоревая кислота - - + +

Дигидрокумарин + - + -

о-Метоксикумарин + + - +

Апигенин + + + +

Рутин + + + +

Кверцетин - + + +

Кемпферол + + + -

Витексин + - + -

Лютеолин-7-глюкозид - + + -

Эпикатехин - - - +

Танин - - + -

\

X

V

Рис.4. УФ-спектр извлечения суммы флавоноидов из сырья петрушки

Около 0,500 г (точная навеска) высушенного сырья петрушки (трава и корни) или 1,000 г (точная навеска) свежесобранного сырья помещают в колбу вместимостью 100 мл, приливают 15 мл спирта этилового 70% или 90% соответственно, закрывают колбу пробкой и взвешивают с точностью до 0,01 г, перемешивают 5 мин и нагревают с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 1 ч при периодическом помешивании. После охлаждения под струей воды смесь перемешивают, колбу закрывают пробкой и взвешивают. Потерю в массе доводят до исходной растворителем. Дают отстояться в течение 10 мин, а затем декантируют жидкость через бумажный складчатый фильтр «синяя лента» в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора 70% или 90% спиртом до метки и перемешивают (раствор А). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида, доводят объем раствора спиртом соответствующей концентрации до метки и перемешивают (раствор Б). Через 40 мин измеряют оптиче-

скую плотность раствора с алюминия хлоридом на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 390±5 нм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1,0 мл раствора А, 2 капли кислоты уксусной, разбавленной и доведенный спиртом до метки.

Параллельно в тех же условиях измеряют оптическую плотность раствора комплекса СО лютеолин-7-глюкозида с алюминия хлоридом. На основании полученных данных рассчитывали удельный показатель поглощения, который для лютеолин-7-глюкозида составил 401.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-глюкозид в процентах (X) вычисляют по формуле:

^ D•25•25•100

X = —т%-, где

£,1/о • m -1 -100

1см

Б - оптическая плотность испытуемого раствора;

т - навеска сырья петрушки, взятая для анализа;

1см - удельный показатель поглощения комплекса лютеолин-7-глюкозида с алюминия хлоридом при 390±5 нм, равный 401.

Содержание суммы флавоноидов и результаты статистической обработки данных в свежем сырье петрушки представлены в табл. 2 и 3.

Таблица 2

Результаты количественного определения суммы флавоноидов в свежем сырье петрушки кудрявой (трава и корни)

№ анализа Содержание суммы флавоноидов, %

1 1,735

2 1,743

3 1,751

4 1,784

5 1,792

Таблица 3

Статистическая обработка результатов аналитической методики в свежем сырье петрушки кудрявой

Статистические характеристики Результаты, %

Наименьшее значение 1,735

Наибольшее значение 1,792

Среднее значение 1,761

Стандартное отклонение 0,0254

Коэффициент вариации 0,000648

Доверительный интервал (при Р=95%) 1,761±0,0316

Относительная ошибка определения ±1,79

Ошибка единичного определения с 95% вероятностью методики количественного определения флавоноидов в пересчете на лю-теолин-7-глюкозид в свежем сырье петрушки не превышает 1,79% (табл.3).

Содержание суммы флавоноидов и результаты статистической обработки в сухом сырье петрушки кудрявой приведены в табл. 4, 5.

Таблица 4

Результаты количественного определения суммы флавоноидов

№ образца Содержание суммы флавоноидов, %

1 1,85

2 1,86

3 1,87

4 1,84

5 1,83

Таблица 5

Статистическая обработка результатов аналитической методики в сухом сырье петрушки кудрявой

Статистические характеристики, % Результаты, %

Наименьшее значение 1,83

Наибольшее значение 1,87

Среднее значение 1,85

Стандартное отклонение 0,025

Коэффициент вариации 0,0158

Доверительный интервал (при Р=95%) 1,85±0,0196

Относительная ошибка определения, % ±1,06

Ошибка единичного определения c 95% вероятностью методики количественного определения флавоноидов в пересчете на лю-

теолин-7-глюкозид в сухом сырье петрушки не превышает 1,06% (табл. 5).

Таким образом, содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-глюкозид в свежем сырье петрушки кудрявой составляет 1,76±1,79%, а в сухом 1,85±1,06%. Мы предлагаем считать показатель содержания суммы флавоноидов не менее 1,6% (надземная и подземная части).

Выводы

1. Проведена качественная оценка и идентификация фенольных соединений в сырье петрушки кудрявой - обнаружены флаво-ноиды, оксикоричные кислоты, кумарины, витамины.

2. Апробирована методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-глюкозид в свежем и сухом сырье петрушки кудрявой методом дифференциальной спектрофотометрии.

Сведения об авторах статьи: Тангиева Танзила Алиевна - соискатель кафедры фармации ГБОУ ВПО МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России. Адрес: 119991, г. Москва, ул. Большая Пироговская, 2, стр.4. Тел/факс (495) 656-25-85.

Маркарян Артём Александрович - д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой фармации ГБОУ ВПО МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России. Адрес: 119991, г. Москва, ул. Большая Пироговская, 2, стр. 4. Тел/факс (495) 656-25-85. E-mail: [email protected].

Даргаева Тамара Дарижаповна - д.фарм.н., профессор, главный научный сотрудник отдела стандартизации и сертификации ГНУ ВИЛАР. Адрес: 117216, г. Москва, ул. Грина, 7, стр.1. Тел./факс: (495) 382-73-77. E-mail: [email protected].

ЛИТЕРАТУРА

Беликов, В.В. Унифицированная методика определения флавоноидов для стандартизации фитохимических препаратов / В.В. Беликов, Т.В. Точкова, Н.Т. Колесник // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока: тез. докл. Всерос. научной конференции. - Томск, 1989. - Вып. 2. - С. 21-22.

Государственная фармакопея СССР 11-е издание: вып. 1. Общие методы анализа. - М.: Медицина, 1987. - 336 с. Патудин А.В., Терешина Н.С., Мищенко В.С. [и др.]. Биологически активные вещества гомеопатического лекарственного сырья. - М.: Знак, 2009. - С.314-315.

1

УДК 616-035.1

© И.И. Хидиятов, Р.Ф. Адиев, И.М. Насибуллин, Л.Г. Булыгин, Н.Р. Ария, Р.З. Нуриманов, 2014

И.И. Хидиятов, Р.Ф. Адиев, И.М. Насибуллин, Л.Г. Булыгин, Н.Р. Ария, Р.З. Нуриманов

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ПОВЯЗКИ «ПЕМАФОМ» И ПОЛИВАЛЕНТНОГО ПИОБАКТЕРИОФАГА «СЕКСТАФАГ» ПРИ ЛЕЧЕНИИ ХРОНИЧЕСКОЙ АНАЛЬНОЙ ТРЕЩИНЫ

ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Уфа

Настоящими экспериментальными исследованиями показана эффективность заживления послеоперационных ран после иссечения хронической анальной трещины (ХАТ) при применении ранозаживляющей повязки «Пемафом» и антибактериального поливалентного пиобактериофага «Секстафаг».

Модель анальной трещины была создана на 48 половозрелых беспородных белых крысах линии «Вистар» по методике В.С. Грошилина. После образования ХАТ часть животных (п=6) выводились из опыта на 30-е сутки. Проводилось иссечение краёв экспериментальной трещины единым блоком, которые подвергались гистологическим исследованиям с целью морфологической идентификации.

Морфологическими исследованиями было установлено, что на 7-е сутки после лечения повязкой «Пемафом» и пиобак-териофагом «Секстафаг» в основной группе отмечалось более быстрое снижение экссудативной реакции с формированием грануляционной ткани. На 14-е сутки в основной и группе сравнения отмечались слабовыраженные склеротические изменения с активацией фибробластов и макрофагов. В то же время в группе сравнения сохранялась картина слабовыраженного хронического воспаления. Сроки полного заживления послеоперационной раны в основной группе составили 16±0,51 суток, а в группе сравнения - 19±0,42 суток.

Ключевые слова: хроническая анальная трещина, эксперимент, морфологическое исследование.