CC BY
88
УДК 615.072/322:635.781
Т. А. Тангиева (соиск.)1, А. А. Маркарян (д.фарм.н., проф., зав. каф.)1, Т. Д. Даргаева (д.фарм.н., проф., гл.научн.сотр.)2, К. А. Пупыкина (д.фарм.н., проф.)3
КАЧЕСТВЕННАЯ И КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ САХАРОВ В СЫРЬЕ ПЕТРУШКИ КУДРЯВОЙ
1 Первый Московский государственный университет им. И. М. Сеченова, кафедра фармации 119991, г. Москва, ул. Большая Пироговская, д.2, стр.4; тел.8 (495) 6562585 2Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений,
отдел стандартизации и сертификации 117216, г. Москва, ул. Грина, 7; тел. 8(495)3827377 3Башкирский государственный медицинский университет, кафедра фармакогнозии 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3; тел. 8(347)2712285, e-mail: pupykinak@pochta.ru
T. A. Tangieva1, A. A. Markaryan1, T. D. Dargaeva2, K. A. Pupykina3
QUALITATIVE AND QUANTITATIVE ESTIMATION OF SUGAR CONTENT IN PETROSELINUM CRISPUM
1 First Moscow Sechenov State University 2, Bolshaya Pirogovskaya Str, constr. 4, 119991, Moscow, Russia; ph. 8(495) 6562585 2All-Russian Research Institute of Medicinal and Aromatic Plants 7, Greena Str., 117216, Moscow, Russia; ph. 8 (495) 3827377 3Bashkir State Medical University 3, Lenina Str., 450000, Ufa, Russia; ph.8(347)2724173, e-mail: pupykinak@pochta.ru
Представлены сведения по идентификации моносахаридов, содержащихся в свежих и высушенных корнях петрушки кудрявой, а также определено количественное содержание восстанавливающих сахаров после кислотного гидролиза. Для качественной оценки свободных моносахаридов использовали 50% водно-спиртовое извлечение для высушенного сырья петрушки и 90% извлечение для свежего сырья, которые анализировали методом хроматографии в тонком слое сорбента. Как в свежем, так и в высушенном сырье петрушки кудрявой идентифицированы сахара — глюкоза, фруктоза, рамноза и арабиноза. Для количественной оценки сахаров в сырье петрушки проводили экстракцию поли-сахаридного комплекса водой, осаждали полисахариды этиловым спиртом, проводили гидролиз с образованием окрашенного комплекса свободных моносахаридов с пикриновой кислотой в щелочной среде. Предложено использовать в качестве аналитической длину волны 466 нм и проводить определение суммы моносахаридов после гидролиза полисахаридов в пересчете на глюкозу, которое должно составлять не менее 1.0% для свежего сырья, не менее 0.75% — для высушенного сырья.
Ключевые слова: гидролиз полисахаридов; качественный состав; количественное определение; корни; моносахариды; петрушка кудрявая, хроматография в тонком слое сорбента.
The aim of the study was to identify the free monosaccharides contained in fresh, so and in dry radices Petroselinum crispum, as well as quantification of reducing sugars after acid hydrolysis. For qualitative estimation of free monosaccharides used 50% water-alcohol extraction for dry material of the Petroselini and 90% extraction for fresh raw material, analysed method to chromatographies in fine layer of the sorbent. In fresh and in dry raw material Petroselinum crispum it is identified sugars - a glucose, fructose, ramnose and arabinose. For quantitative estimation sugars in raw material of the Petroselini conducted the extraction of polysaccharides complex from material by water, precipitated polysaccharides by ethanol, conducted hydrolysis with forming the painted complex free monosaccharides with acidi picrinici in alkaline ambience. It is offered to use as analytical wavelength 466 nm and conduct the determination of the amount monosaccharides after hydrolysis polysaccharides in recalculation on glucose, which must form not less 1.0% for fresh material, not less 0.75% — for dry raw material.
Key words: hydrolysis polysaccharides; qualitative composition; quantitative determination; monosaccharides; Petroselinum crispum; radices; chromatography in fine layer of the sorbent.
Дата поступления 08.06.14
Петрушка кудрявая (Petroselinum crispum Mill.) находит разнообразное применение в медицинской практике. Биологическая активность растения зависит от действия комплекса органических и неорганических соединений, содержащихся в них. В этом комплексе наиболее важная роль принадлежит фенольным соединениям (флавоноиды, дубильные вещества, фенолкарбоновые кислоты), витаминам, терпеноидным соединениям эфирного масла, восстанавливающим сахарам и некоторым другим компонентам 3. В современной фармацевтической практике существует множество методик анализа монокомпонентных лекарственных форм, получаемых из синтетического сырья, однако, необходимо осуществлять разработку методик, направленных на стандартизацию поликомпонентных средств растительного происхождения, с целью введения их в фармацевтическую практику.
Цель исследования — идентификация свободных моносахаридов, содержащихся в лекарственном растительном сырье петрушки кудрявой, а также определение количественного содержания восстанавливающих сахаров после кислотного гидролиза.
Материалы и методы исследования
Для идентификации моносахаридов в сырье петрушки использовали 50% водно-спиртовое извлечение сухих корней петрушки кудрявой (1:10) и 90% водно-спиртовое извлечение из грубоизмельченного свежего сырья (1:14). В качестве раствора сравнения использовали 0.05% растворы сахаров (глюкозы, фруктозы, арабинозы и рамнозы) в 50% этиловом спирте. В качестве неподвижной фазы использовали пластины Kieselgel 40 F254; Мегск, Darmstadt. На линию старта наносили по 20 мкл исследуемого раствора и раствора стандартного образца (СО) и хроматографировали восходящим способом в системе растворителей вода : метанол : кислота уксусная конц. : хлористый этилен в соотношении 10:15:25:50. Длина пробега фронта растворителей 15 см. Пластину высушивали на воздухе до отсутствия запахов растворителей и опрыскивали детектирующим реагентом: тимол-серная кислота конц.-спирт этиловый 95% в соотношении 0.5:5:95; нагревали при температуре 100—105 oC в течение 10 мин 4. Количественное определение свободных моносахаров после гидролиза полисахаридов проводили методом спектрофотометрии после образования окрашенных комплексов
моносахаридов с пикриновои кислотои в щелочной среде и последующим измерением оптической плотности при длине волны 466±2 нм 1,2.
Результаты и их обсуждение
Результаты исследования качественного состава моносахаров, содержащихся в корнях петрушки кудрявой, представлены на рис. 1 и 2.
Rf = 0,53 ZRf = 0,48 Rf = 0,48
*Rf = 0,45 _Rf = 0,45 ® f
_Rf = 0,36
Rf = 0,53
-Rf = 0,35
.......t......t......H......H.......I.......
Рис. 1. Хроматограмма сахаров: 1 — извлечение из свежего сырья петрушки; СО: 2 — глюкозы; 3 — фруктозы; 4 — рамнозы; 5 — арабинозы
#Rf = 0,54
_Rf = 0,48 Rf = 0,48
jRf = 0,44 #Rf = 0,45 • f
_Rf = 0,35 J
Rf = 0,53
-Rf = 0,35
Рис. 2. Хроматограмма сахаров: 1 — извлечение из высушенного сырья петрушки; СО: 2 — глюкозы;
3 — фруктозы; 4 — рамнозы; 5 — арабинозы
5
5
На хроматограммах испытуемых растворов петрушки кудрявой отмечены 4 красно-фиолетовые зоны с около 0.45 (глюкоза); 0.48 (фруктоза); 0.35 (рамноза); 0.53 (араби-ноза), с около 0.25 (фиолетовая); 0.77 (фиолетовая); 0.87 (фиолетовая). Сравнение значений зон адсорбции в анализируемых растворах с таковыми у свидетелей стандартных образцов сахаров позволяют идентифицировать следующие сахара — глюкозу, фруктозу, рамнозу и арабинозу, которые присутствуют как в свежем, так и в высушенном сырье петрушки кудрявой.
Для количественной оценки сахаров в корнях петрушки кудрявой проводили экстракцию полисахаридного комплекса из сырья водой, его осаждение спиртом этиловым, гидролиз при кипячении с 10% раствором кислоты серной, образование окрашенного комплекса продуктов гидролиза (моносахаридов) с пикриновой кислотой в щелочной среде и последующее измерение оптической плотности. В ходе разработки методики были изучены следующие параметры: измельченность сырья, время экстракции, время гидролиза, время образования и устойчивости комплекса. В результате было установлено, что оптимальным является использование сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито диаметром отверстий 2 мм (для высушенного сырья) или грубоизмельченного (для свежего сырья), при однократной экстракции в течение 60 мин при соотношении сырья и экстрагента 1:100; время гидролиза и время устойчивости комплекса 60 мин. Для подтверждения образования окрашенного комплекса моносахаридов с раствором пикриновой кислоты в сырье были сняты спектры поглощения окрашенных в красный цвет комплексов моносахаридов с пикриновой кислотой сырья и раствора глюкозы (СО). Спектр поглощения снимали на спектрофотометре «ОвЮ» в интервале длин волн от 440 до 500 нм. Согласно полученным данным, продукты взаимодействия извлечения из свежего и высушенного сырья петрушки с пикриновой кислотой имеют спектральные кривые, идентичные спектральной кривой комплекса глюкозы с пикриновой кислотой (рис. 3, 4).
А
1.0- 1
0.8
0.6- //-ч \
/ \ \ 4
0.4
0.2- - ——■—
0.0-
Рис. 3. Спектры поглощения комплекса извлечения из свежего сырья петрушки кудрявой с пикриновой кислотой (1) и комплекса глюкозы СО (2) с пикриновой кислотой в щелочной среде
Л
1,0-
0.8 Г\
0,60.4 К\
0,2- -—-—
0,0- I I I 1
Рис. 4. Спектры поглощения комплекса извлечения из высушенного сырья петрушки кудрявой с пикриновой кислотой (1) и комплекса глюкозы СО (2) с пикриновой кислотой в щелочной среде
Полученные окрашенные комплексы имеют тот же максимум поглощения при длине волны 466±2 нм, что и комплекс глюкозы с пикриновой кислотой. Предложено проводить определение суммы моносахаридов после гидролиза полисахаридов в пересчете на глюкозу при аналитической длине волны 466 нм. В качестве раствора сравнения использовали очищенную воду. Содержание моносахаридов в пересчете на глюкозу в процентах вычисляли по формуле:
Б • т • 5 • 250 • 50 • 50-100-100
V —_2_•
Бо • 250 • 50 • т •Ю • 2 • (100 - Ж)'
где О — оптическая плотность испытуемого раствора;
Оо — оптическая плотность глюкозы СО; то — масса глюкозы СО, г; т — масса навески сырья, г; Ш — потеря в массе при высушивании сырья, %.
Результаты исследования количественного определения сахаров в сырье петрушки кудрявой представлены в табл. 1.
Таблица 1
Результаты количественного определения моносахаридов в корнях петрушки кудрявой
Таким образом, содержание моносахаридов в сырье петрушки должно составлять не менее 1.0% для свежего сырья, не менее 0.75% — для высушенного сырья.
Номер Содержание моносахаридов, в %
образца свежее сырье высушенное сырье
1 1.74 0.78
2 1.81 0.92
3 1.85 1.05
4 1.26 1.07
5 1.05 0.86
Литература
1. Беляков К. В., Попов Д. М. // Фармация.-1999.- №1. С.23.
2. Болотова В. Ц., Саканян Е. И., Лесиовская Е. Е., Пастушенков Л. В. // Растительные ресурсы.-2001.- Т.37, вып.3.- С.109.
3. Патудин А. В., Терешина Н. С., Мищенко В. С. и др. Биологически активные вещества гомеопатического лекарственного сырья.- М.:Знак.-2009.- 588 с.
4. Сбежнева В. Г., Козлов И. Е. / Материалы 46-й Региональной конференции по фармации и фармакологии.- Пятигорск, 1991.- С.95.
References
1. Belyakov K. V., Popov D. M. Kolichestvennoe opredelenie polisakharidov v list'yakh mat'-i-machekhi (Tussilago farfara L.) [Quantitative determination of polysaccharides in the leaves (Tussilago farfara L.)]. Farmatsiya, 1999, no. 1, p. 23-25.
2. Bolotova V. C., Sakanyan E. I., Lesiovskaya E. E., Pastushenkov L. V. Spektrofotometricheskii metod opredeleniya soderzhaniya polisakhari-dov v list'yakh v list'yakh Tilia cordata Mill [Spectrophotometric method for determination of polysaccharides in leaves of Tilia cordata Mill]. Rastitel'nye resursy [Plant resources], 2001, v.37, is. 3, p.109-112.
3. Patudin A. V., Tereshina N. S., Mishhenko V. S. i dr. Biologicheski aktivnye veshchestva gomeo-paticheskogo lekarstvennogo syr'ya [Biologically active substances of the homeopathic medicinal raw materials]. Moscow, Znak Publ., 2009, 588 p.
4. Sbezhneva V. G., Kozlov I. E. Analiz polisakharidov [Analysis of polysaccharides] Psoc. 46th Regional conference on pharmacy and pharmacology [Materialy 46-i Regional'noi konferentsii po farmatsii i farmakologii]. Pyatigorsk, 1991, p. 95.
