CC BY
12
VВсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ -ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»
и спленомегалии, быстрым усилением фиброза костного мозга до остеосклероза выявлены мутации в генах CBL (Glu366Lys, COSM6840675 и Arg246Ter, COSM4387952) и TET2 (Pro29Arg, COSM5020249) в дополнение к обнаруженным ранее JAK2 и ASXL1 (Tyr591Ter, COSM1681609). Прогрессия ПМФ с развитием нейтропении IV степени, тромбоцитопении тяжелой степени отмечена у пациента № 5 с мутациями JAK2 и ASXL1 (Arg1068Ter, COSM41715) и аберрацией неясного значения Pro278Leu в гене GNAS. Постепенное нарастание бластемии в периферической крови, остеосклероз костного мозга наблюдаются у пациента № 6 с мутацией 2 типа в гене CALR, а также дополнительными дефектами в генах ASXL1 (Gly646fsTer12, COSM914346), GNAS (Arg844His, COSM94388), PDGFRA (Ile989Val, rs145019788). Трансфор-
Санкт-Петербург 26-27 апреля 2019 г.
мация ПМФ в ОМЛ констатирована у пациента № 7 с мутацией типа 1 в гене CALR и мутацией ASXL1 ^еи6915БТег25) и выявленными при помощи N05 неблагоприятными аномалиями генов ЮШ (Л^1325ег, С05М28748) и DNMT3A (РЬе734Ьеи, С05М1169640).
Выводы. Таким образом, результаты, полученные с помощью N05, позволяют расширить представления об особенностях молекуляр-но-генетического профиля новообразования у конкретного пациента. Сопоставление перечня обнаруженных мутаций с различным характером течения МПН говорит о важной прогностической роли дополнительных генетических аберраций. Целесообразным видится внедрение расширенных миелоидных панелей N05 уже на этапе первичной диагностики МПН.
А. С. Поляков, Я. А. Носков, Ю. В. Никитин, С. Н. Колюбаева, Д. К. Жоголев, А. Д. Золотарёв, Д. В. Гуров
Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова», Министерства обороны Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
ПЕРСПЕКТИВЫ РЕАЛИЗАЦИИ ИНДИВИДУАЛИЗИРОВАННЫХ ПОДХОДОВ В ВЫБОРЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ТЕРАПИИ НА ОСНОВЕ ИЗУЧЕНИЯ ХИМИОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БЛАСТНЫХ КЛЕТОК
Введение: Концепция пациент-специфичного подхода к терапии не является новым подходом в современной медицине. В рутинной практике этими принципами руководствуются прежде всего при выборе антибактериальных, противовирусных, антимикотических препаратов. Тогда как попытки индивидуализированного выбора противоопухолевой терапии, основанные на определении хими-очувствительности злокачественных клеток, пока рассматриваются только в качестве перспективного метода. Сложности в практическом применении наработок клеточной онкологии основаны на трудностях в получении достаточного количества однородных опухолевых клеток из солидных новообразований, гетерогенностью опухолей как в рамках одной нозологической формы у различных пациентов, так и в пределах одного новообразования, невозможностью получения дополнительного биопсийного материала в терапевтических целях. С этих позиций наиболее перспективным направлением в плане скорейшего внедрения в практическую медицину является
онкогематология. При таких заболеваниях как миелодиспластический синдром (МДС) или острые миелоидные лейкозы (ОМЛ), когда достаточное для экспериментального изучения количество однородных опухолевых (бластных) клеток может быть получено из костномозговых пунктатов или даже периферической крови, экспериментальные исследования хи-миочувствительности in vitro могут способствовать обоснованному индивидуальному выбору и улучшению исходов терапии.
Цель. Оценить возможность обоснования выбора терапии на основе изучения геноток-сичности лекарственных препаратов при резистентном ОМЛ.
Материалы и методы. Бластные клетки периферической крови пациента с полирезистентным ОМЛ отсортировывали на сортере MoFlo Astrios EQ (Beckman Coulter) в 2 пробирки со сложной средой для культивирования, в одну из которых сразу добавляли противоопухолевый препарат (опробован только децитабин). После культивирования (24 часа) сравнивали количество жизнеспособных клеток в пробе
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 2, 2019
и контроле (по маркировке свободной ДНК). В другом эксперименте полученные от больного бластные клетки культивировали с ППС (24 часа), а после выделения в пробы и контроль добавляли различные водорастворимые противоопухолевые препараты (в моно-варианте и в различных сочетаниях), оценивали гено-токсичность с применением микроядерного теста (МЯТ).
Результаты. В ограниченных по перечню исследуемых лекарственных препаратов экспериментах, была показана высокая геноток-сичность децитабина (по оценке количества жизнеспособных отсортированных клеток), а также даунорубицина и, особенно, даунору-бицина в сочетании с интерфероном-альфа (по оценке в МЯТ).
К сожалению, в описанном случае ОМЛ, результаты оценки химиочувствительности не были использованы в выборе терапии пациенту в связи с развитием тяжелых инфекционных осложнений и наступлением летального исхода. Однако полученный опыт в ближайшее время планируется использовать при планировании терапии в перспективной локальной практике, а с накоплением и обобщением данных и, возможно, рекомендовать к распространению. С позиций оценки точности метода, наибольшей прецизионностью обладают методики исследования однородных —
«чистых» клеточных суспензий, полученных при проточно-цитометрической сортировке бластных клеток с аберрантным фенотипом. Однако низкая доступность оборудования для сортировки, а также выявленное на практике снижение жизнеспособности отсортированных клеток, значительно ограничивают возможности их дальнейшей культивации и изучения без применения сложных много-цитокиновых сред и создания особых физических условий. При этом метод сортировки может быть использован для оценки качества культуральных методов выделения бластных клеток. Оказалось, что культуральный метод выделения обладает достаточной специфичностью, а выделенные бластные клетки ОМЛ остаются достаточно жизнеспособными и для определения генотоксичности лекарственных препаратов, и для создания экспериментальных клеточных линий.
Выводы. Адаптированные к локальным возможностям и апробированные нами методы определения генотоксичности как с применением микроядерного теста, так и подсчета «живых» клеток при проточно-цитометриче-ском анализе, обладают сопоставимой специфичностью и чувствительностью и могут рассматриваться в качестве перспективных методов определения химиочувствительности бластных клеток при миелоидных лейкозах.
А. С. Поляков, Я. А. Носков, О. Р. Петрова, С. Н. Колюбаева, Д. К. Жоголев, А. Д. Золотарёв
Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова», Министерства обороны Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
ПРИМЕРЫ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИСХОДОВ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ: МУТАЦИИ ГЕНА ASXL1
Введение. Отвечающие современным требованиям точность диагностики и прогнозирования исходов онкогематологических заболеваний могут быть достигнуты только при комплексном анализе всех клинических, инструментальных и лабораторных данных. При этом, при некоторых миелопролиферативных новообразованиях (МПН), только обнаружение определенных генетических аномалий может иметь решающее диагностическое и прогностическое значение даже при субклиническом течении заболевания. К этим случаям можно отнести обнаружение различных болезнь-специфичных, болезнь-модифицирущих, эпигенети-
ческих мутаций, дополнительных хромосомных аберраций или мутаций химерных генов. Среди РЬ-негативных МПН, наибольшее количество таких данных накоплено в отношении первичного миелофиброза (ПМФ), что нашло отражение в нескольких уже общепринятых шкалах стратификации риска (DIPSS+, MIPSS, GIPSS) и продолжает обсуждаться.
Цель. Проанализировать 2 случая ПМФ с выявленным высоким генетическим риском (ASXL1+).
Материалы и методы. Случай 1: мужчина, на момент установки диагноза ПМФ в префи-бротической стадии — 67 лет. Характерных для
