CC BY
11
VВсероссийская научно-практическая конференция с международным участием
«ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ - Санкт-Петербург ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»_26-27 апреля 2019 г.
А. Д. Золотарёв, А. С. Поляков, Д. К. Жоголев С. Н. Колюбаева, Я. А. Носков
Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова», Министерства обороны Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
ВЫЯВЛЕНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ БИОТРАНСФОРМАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИСХОДОВ ТЕРАПИИ ПРИ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ НОВООБРАЗОВАНИЯХ
Введение. Развитие биотехнологий привело к существенному прогрессу в терапии новообразований, заключающемуся в реализации принципиально новых подходов к созданию противоопухолевых препаратов, на молекулярном уровне воздействующих на многие звенья патогенеза и иммунной системы. Однако эффективность как препаратов традиционной, так и таргетной и иммунотерапии напрямую зависит еще и от особенностей их распределения и метаболизма в организме больного. Цитохром Р450 — суперсемейство ферментов (монооксидаз), которые участвуют в биотрансформации ксенобиотиков и катализируют 70-80 % реакций, протекающих во всех стадиях лекарственного метаболизма. Наиболее важными для биотрансформации лекарств являются цитохромы СТР1А1, СYP2A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP2E1, CYP3A4, CYP3A5, осуществляющие метаболизм около 90 % лекарственных препаратов, в том числе и противоопухолевых средств, при этом в метаболизме может принимать участие один или несколько цитохромов. Мутации в этих генах в виде полиморфизма нуклеотидов приводит к изменению активности ферментов, и снижению эффективности химиопрепаратов, применяемых в терапии миелопролиферативных новообразований (МПН).
Цель. Определить генотип нескольких изо-ферментов цитохрома Р450 у пациента с РЬ-негативным МПН и вторичным острым мие-лоидным лейкозом (ОМЛ) и проанализировать влияние на возникновение резистентности к терапии.
Материалы и методы. У пациента с резистентным к противоопухолевой терапии вторичным ОМЛ исследовали полиморфизмы генов: CYP2C9: 430 С>Т; CYP2C9: А.>С; СYP3A4*1A/1B: А392в; CYP3A5: С6986А; СУР2а9: 0681А; CYP4F2: ОТ. Исследована проба крови с нормальным абсолютным содержанием созревающих и зрелых нейтрофилов (4,2х10*9/л) и неконтролируемым бластозом (57,6х10*9/л). Выделение ДНК и приготовление
реакционных смесей проводили с помощью наборов фирмы «ДНК-Технология, Россия» и «Ли-тех», Россия. Амплификацию ДНК и получение результатов осуществляли с помощью прибора DT-прайм («ДНК-Технология»). Выявление цито-генетических маркеров осуществляли методом дифференциальной окраски хромосом.
Результаты. В 2016 г. пациенту К., 69 лет, при первичном обследовании по поводу Ph-негативного миелопролиферативного новообразования (МПН) установлен диагноз: атипичный хронический миелоидный лейкоз (аХМЛ), а позднее — первичный миелофиброз (ПМФ) высокого генетического риска (обнаружена мутация ASXL1). На разных этапах проводилась циторедуктивная монотерапия гидроксимо-чевиной, иматинибом, дазатинибом, руксоли-тинибом, затем — комбинированная терапия руксолитинибом и гидроксимочевиной, однако устойчивый гематологический ответ без токсичности достигнут только при совместном назначении руксолитиниба и цепэгинтерфе-рона альфа-2ь. В 2018 г., после 18 месяцев сохранения полного гематологического ответа, выявлена трансформация заболевания с развитием вторичного ОМЛ. Установлен кариотип: 45, ХУ, inv(3)(q23q26),-7 в 80 % клеток периферической крови. Проведено 2 курса терапии децитабином, 2 курса терапии цитарабина арабинозидом (малые дозы Ara-C), 2 курса полихимиотерапии азацитидином, идарубицином и цитарабина арабинозидом (Aza-Ida-Ara-C), попытка редукции бластоза меркаптопурином. Констатирована полирезистентность к проводимой терапии. Выявлена мутация в гене CYP2C19 (СТ) и возможно являвшаяся одной из причин развития полирезистентности к противоопухолевой терапии.
Выводы. При исследовании методом ПЦР образца крови пациента с Ph-негативным МПН и трансформацией в ОМЛ выявлены гетеро-и гомозиготные мутации генов CYP2C19(АG) и СYP3A4 (GG). Возможно, что эти мутации (CYP2C19 и СYP3A4) ответственны за метаболизм противоопухолевых препаратов, так
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 2, 2019
как приводят к снижению функциональной активности ферментов, ими кодируемых. Полученные результаты имеют значение для понимания причин формирования резистентности как к стандартным методам циторедуктивной терапии в хронической фазе МПН (ответ получен только при комбинированном лечении), так и к нескольким линиям индукционной терапии
при трансформации в ОМЛ (ответ не достигнут). По нашему мнению, исследование генов биотрансформации лекарственных препаратов является одним из перспективных направлений совершенствования прогнозирования исходов и планирования противоопухолевой терапии при гемобластозах.
Н. Н. Калитин1, Н. С. Кострица2, Г. А. Дудина3, А. Ф. Карамышева1
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н. Н. Блохина» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
2 Федеральное государственное бюджетное учреждение высшего образования «Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова», г. Москва
3 Государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Московский клинический научно-практический центр им. А. С. Логинова» Департамента здравоохранения г. Москвы
ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ ФАКТОРОВ РОСТА ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ VEGF И ИХ РЕЦЕПТОРОВ VEGFR У ПАЦИЕНТОВ С МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКИМИ СИНДРОМАМИ
Введение. Миелодиспластические синдромы (МДС) представляют собой гетерогенную группу клональных гематологических опухолей, объединяемых общим происхождением из стволовой гемопоэтической клетки. МДС характеризуются неэффективным гемопоэзом, являющимся следствием избыточного апоптоза созревающих гемопоэтических клеток костного мозга. Установлено, что ключевую роль в возникновении патологического клона при МДС играют драйверные онкогенные мутации и эпигенетические изменения, включающие гиперметилирование ДНК, деметилирование гистонов и корегуляцию транскрипции. Однако, несмотря на прогресс в понимании биологии этого заболевания и разработку методов патогенетической терапии, лечение пациентов с МДС остается нерешенной проблемой. Факторы роста эндотелия сосудов (УЕСР) — известные регуляторы нормального ангиогенеза и неоан-гиогенеза при злокачественной трансформации. Показано, что рецепторы этих факторов роста (УЕСРЯ1, УЕСРН.2 и УЕСРЯЗ) могут быть экспрес-сированы также и в клетках злокачественных опухолей, и тогда их взаимодействие с УЕСР способствует пролиферации клеток при опухолях и гемобластозах. Роль указанных биологических молекул в патогенезе МДС исследована недостаточно и исследования в этой области содержат противоречивые данные.
Цель. Исследование возможной роли факторов роста УЕСР и их рецепторов УЕСРЯ в патогенезе миелодиспластических синдромов (МДС).
Материалы и методы. В работе были исследованы образцы периферической крови 55 больных МДС и 15 здоровых доноров. Были сформированы группы больных МДС, различающиеся по содержанию бластных клеток, а также по степени риска развития заболевания (низкого, промежуточного-1, проме-жуточного-2 и высокого риска). В отдельную группу были выделены больные с синдромом 5q-. В выделенной из образцов крови моно-нуклеарной фракции клеток методом поли-меразной цепной реакции в реальной времени (Real-Time PCR) была исследована экспрессия генов VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D и их рецепторов VEGFR1, VEGFR2 и VEGFR3. Сравнивали данные по экспрессии генов в разных группах больных МДС.
Результаты. Средние значения экспрессии всех исследованных генов VEGF и их рецепторов VEGFR в крови больных МДС были повышены по сравнению с экспрессией в крови здоровых доноров и отличались значительной вариабельностью. В крови здоровых доноров отсутствовала экспрессия VEGF-D, а экспрессия VEGFR2 была крайне низкой. Статистически достоверные отличия экспрессии генов между группами больных МДС и здоровых доноров были получены для VEGF-А и VEGFR2 (р < 0,01). При сравнении экспрессии генов VEGF и VEGFR в группах больных МДС с содержанием бластных клеток больше или меньше 5 % статистически достоверные отличия также были найдены только для генов VEGF-А и VEGFR2:
