CC BY
10
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 2, 2019
как приводят к снижению функциональной активности ферментов, ими кодируемых. Полученные результаты имеют значение для понимания причин формирования резистентности как к стандартным методам циторедуктивной терапии в хронической фазе МПН (ответ получен только при комбинированном лечении), так и к нескольким линиям индукционной терапии
при трансформации в ОМЛ (ответ не достигнут). По нашему мнению, исследование генов биотрансформации лекарственных препаратов является одним из перспективных направлений совершенствования прогнозирования исходов и планирования противоопухолевой терапии при гемобластозах.
Н. Н. Калитин1, Н. С. Кострица2, Г. А. Дудина3, А. Ф. Карамышева1
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н. Н. Блохина» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
2 Федеральное государственное бюджетное учреждение высшего образования «Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова», г. Москва
3 Государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Московский клинический научно-практический центр им. А. С. Логинова» Департамента здравоохранения г. Москвы
ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ ФАКТОРОВ РОСТА ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ VEGF И ИХ РЕЦЕПТОРОВ VEGFR У ПАЦИЕНТОВ С МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКИМИ СИНДРОМАМИ
Введение. Миелодиспластические синдромы (МДС) представляют собой гетерогенную группу клональных гематологических опухолей, объединяемых общим происхождением из стволовой гемопоэтической клетки. МДС характеризуются неэффективным гемопоэзом, являющимся следствием избыточного апоптоза созревающих гемопоэтических клеток костного мозга. Установлено, что ключевую роль в возникновении патологического клона при МДС играют драйверные онкогенные мутации и эпигенетические изменения, включающие гиперметилирование ДНК, деметилирование гистонов и корегуляцию транскрипции. Однако, несмотря на прогресс в понимании биологии этого заболевания и разработку методов патогенетической терапии, лечение пациентов с МДС остается нерешенной проблемой. Факторы роста эндотелия сосудов (УЕСР) — известные регуляторы нормального ангиогенеза и неоан-гиогенеза при злокачественной трансформации. Показано, что рецепторы этих факторов роста (УЕСРЯ1, УЕСРН.2 и УЕСРЯЗ) могут быть экспрес-сированы также и в клетках злокачественных опухолей, и тогда их взаимодействие с УЕСР способствует пролиферации клеток при опухолях и гемобластозах. Роль указанных биологических молекул в патогенезе МДС исследована недостаточно и исследования в этой области содержат противоречивые данные.
Цель. Исследование возможной роли факторов роста УЕСР и их рецепторов УЕСРЯ в патогенезе миелодиспластических синдромов (МДС).
Материалы и методы. В работе были исследованы образцы периферической крови 55 больных МДС и 15 здоровых доноров. Были сформированы группы больных МДС, различающиеся по содержанию бластных клеток, а также по степени риска развития заболевания (низкого, промежуточного-1, проме-жуточного-2 и высокого риска). В отдельную группу были выделены больные с синдромом 5q-. В выделенной из образцов крови моно-нуклеарной фракции клеток методом поли-меразной цепной реакции в реальной времени (Real-Time PCR) была исследована экспрессия генов VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D и их рецепторов VEGFR1, VEGFR2 и VEGFR3. Сравнивали данные по экспрессии генов в разных группах больных МДС.
Результаты. Средние значения экспрессии всех исследованных генов VEGF и их рецепторов VEGFR в крови больных МДС были повышены по сравнению с экспрессией в крови здоровых доноров и отличались значительной вариабельностью. В крови здоровых доноров отсутствовала экспрессия VEGF-D, а экспрессия VEGFR2 была крайне низкой. Статистически достоверные отличия экспрессии генов между группами больных МДС и здоровых доноров были получены для VEGF-А и VEGFR2 (р < 0,01). При сравнении экспрессии генов VEGF и VEGFR в группах больных МДС с содержанием бластных клеток больше или меньше 5 % статистически достоверные отличия также были найдены только для генов VEGF-А и VEGFR2:
VВсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ -ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»
в группе больных с количеством бластных клеток >5 % экспрессия этих генов была повышена (р <0,01). Сопоставление экспрессии генов VEGF и VEGFR в группах больных МДС с различным риском развития заболевания также показало постепенное повышение экспрессии только для генов VEGF-А и VEGFR2.
Выводы. Экспрессия генов УЕвР-А, УЕвР-С, УЕвР-О и их рецепторов УЕСРЯ1, УЕСРЯ2 и УЕвРЯЗ в крови больных МДС повышена по сравнению со здоровыми донорами. В крови здоровых доноров могут быть наиболее ак-
Санкт-Петербург 26-27 апреля 2019 г.
тивны 2 независимые сигнальные системы УЕвР-А/УЕвРИ и УЕвР-С/УЕвРЯЗ. У больных МДС вследствие активации экспрессии VEGFR2 и появления экспрессии VEGF-D могут включаться дополнительные сигнальные системы: УЕвР-А, УЕвР-С, УЕвР-О/УЕвРЯЗ и УЕвР-О/ УЕвРЯЗ. С увеличением стадии прогрессии заболевания наблюдалось повышение экспрессии только для генов VEGF-А и VEGFR2, что указывает на возможную роль этой сигнальной системы в развитии МДС.
Х.Я. Каримов, Мохаммад Дин А., К. Т. Бобоев
Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Министерства здравоохранения Республики Узбекистан, г. Ташкент.
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ МИКРОЧИПОВ В ИССЛЕДОВАНИИ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ХИМЕРНЫХ ОНКОГЕНОВ ОПУХОЛЕВЫХ КРОВЕТВОРНЫХ КЛЕТОК
Введение. Поиск новых диагностических и прогностических маркеров и дальнейшее совершенствование диагностических методов у пациентов с различными видами острых лейкозов являются важными направлениями повышения эффективности диагностики и мониторинга терапии лейкемии. Впервые в республике внедрена новая технология биологического микрочипирования для определенных хромосомных транслокаций и химерных онкогенов опухолевых кроветворных клеток. Чувствительность данной технологии составляет 1:10~<000 (1 опухолевую клетку среди 10000 нормальных клеток), специфичность анализа составляет не менее 95 %.
Цель. Оценить эффективность технологии биологического микрочипа для диагностики острого лейкоза.
Материалы и методы. Материалом для исследований явились образцы крови 40 больных (520 исследований) с клинически установленным диагнозом острый лейкоз, наблюдавшихся в НИИ гематологии и переливания крови Министерства здравоохранения Республики Узбекистан. Предварительный диагноз острый лейкоз установлен на основании данных кли-нико-лабораторных (морфологического и цитохимического) исследований крови и костного мозга.
Анализ хромосомных транслокаций и генных мутаций опухолевых клеток на биочипе
включал следующие этапы: изоляция РНК из лейкоцитов периферической крови, проведение двухэтапной "гнездной" (nested) ПЦР, введение флуоресцентной метки в продукт ПЦР второго этапа с помощью флуоресцентно меченных праймеров, гибридизация меченого продукта ПЦР на биочипе, анализ изображения на приборе с программным обеспечением Imageware. Для исследования был выбран набор «ЛК-биочип», состоящий из 13 наиболее значимых химерных онкогенов при остром лимфобластном лейкозе (ОЛЛ): t(12;21) ETV6-RUNX1, t(1;19) TCF3-PBX1, t(9;22) BCR-ABL1, t(4;11) MLL-AF4, и при остром миелобластном лейкозе (ОМЛ): t(15;17) PML-RARA, t(8;21) RUNX1-RUNX1T1, inv(16) CBFB-MYH11, t(9;11) MLL-MLLT3, t(10;11) MLL-MLLT10.
Результаты. Из 40 больных у 13 были выявлены различные мутации, что позволило генетически точно верифицировать диагноз «острый лейкоз». У 5 больных были выявлены структурные перестройки гена AML/ETO t(8;21). Данный химерный ген сам по себе не способен вызвать лейкоз, поэтому для полного подтверждения диагноза необходимо исследовать дополнительные (вторичные) мутации. У 4 больных были выявлены структурные перестройки гена MLL/AF10 t(10;11), в результате данной транслокации появляется онкобе-лок UPN9610I. У 4 больных были выявлены структурные перестройки гена BCR/ABL t(9;22).
