CC BY
9
VВсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ -ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»
в группе больных с количеством бластных клеток >5 % экспрессия этих генов была повышена (р <0,01). Сопоставление экспрессии генов VEGF и VEGFR в группах больных МДС с различным риском развития заболевания также показало постепенное повышение экспрессии только для генов VEGF-А и VEGFR2.
Выводы. Экспрессия генов УЕвР-А, УЕвР-С, УЕвР-О и их рецепторов УЕСРЯ1, УЕСРЯ2 и УЕвРЯЗ в крови больных МДС повышена по сравнению со здоровыми донорами. В крови здоровых доноров могут быть наиболее ак-
Санкт-Петербург 26-27 апреля 2019 г.
тивны 2 независимые сигнальные системы УЕвР-А/УЕвРИ и УЕвР-С/УЕвРЯЗ. У больных МДС вследствие активации экспрессии VEGFR2 и появления экспрессии VEGF-D могут включаться дополнительные сигнальные системы: УЕвР-А, УЕвР-С, УЕвР-О/УЕвРЯЗ и УЕвР-О/ УЕвРЯЗ. С увеличением стадии прогрессии заболевания наблюдалось повышение экспрессии только для генов VEGF-А и VEGFR2, что указывает на возможную роль этой сигнальной системы в развитии МДС.
Х.Я. Каримов, Мохаммад Дин А., К. Т. Бобоев
Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Министерства здравоохранения Республики Узбекистан, г. Ташкент.
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ МИКРОЧИПОВ В ИССЛЕДОВАНИИ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ХИМЕРНЫХ ОНКОГЕНОВ ОПУХОЛЕВЫХ КРОВЕТВОРНЫХ КЛЕТОК
Введение. Поиск новых диагностических и прогностических маркеров и дальнейшее совершенствование диагностических методов у пациентов с различными видами острых лейкозов являются важными направлениями повышения эффективности диагностики и мониторинга терапии лейкемии. Впервые в республике внедрена новая технология биологического микрочипирования для определенных хромосомных транслокаций и химерных онкогенов опухолевых кроветворных клеток. Чувствительность данной технологии составляет 1:10~<000 (1 опухолевую клетку среди 10000 нормальных клеток), специфичность анализа составляет не менее 95 %.
Цель. Оценить эффективность технологии биологического микрочипа для диагностики острого лейкоза.
Материалы и методы. Материалом для исследований явились образцы крови 40 больных (520 исследований) с клинически установленным диагнозом острый лейкоз, наблюдавшихся в НИИ гематологии и переливания крови Министерства здравоохранения Республики Узбекистан. Предварительный диагноз острый лейкоз установлен на основании данных кли-нико-лабораторных (морфологического и цитохимического) исследований крови и костного мозга.
Анализ хромосомных транслокаций и генных мутаций опухолевых клеток на биочипе
включал следующие этапы: изоляция РНК из лейкоцитов периферической крови, проведение двухэтапной "гнездной" (nested) ПЦР, введение флуоресцентной метки в продукт ПЦР второго этапа с помощью флуоресцентно меченных праймеров, гибридизация меченого продукта ПЦР на биочипе, анализ изображения на приборе с программным обеспечением Imageware. Для исследования был выбран набор «ЛК-биочип», состоящий из 13 наиболее значимых химерных онкогенов при остром лимфобластном лейкозе (ОЛЛ): t(12;21) ETV6-RUNX1, t(1;19) TCF3-PBX1, t(9;22) BCR-ABL1, t(4;11) MLL-AF4, и при остром миелобластном лейкозе (ОМЛ): t(15;17) PML-RARA, t(8;21) RUNX1-RUNX1T1, inv(16) CBFB-MYH11, t(9;11) MLL-MLLT3, t(10;11) MLL-MLLT10.
Результаты. Из 40 больных у 13 были выявлены различные мутации, что позволило генетически точно верифицировать диагноз «острый лейкоз». У 5 больных были выявлены структурные перестройки гена AML/ETO t(8;21). Данный химерный ген сам по себе не способен вызвать лейкоз, поэтому для полного подтверждения диагноза необходимо исследовать дополнительные (вторичные) мутации. У 4 больных были выявлены структурные перестройки гена MLL/AF10 t(10;11), в результате данной транслокации появляется онкобе-лок UPN9610I. У 4 больных были выявлены структурные перестройки гена BCR/ABL t(9;22).
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 2, 2019
Результаты анализа биологического микро-чипирования был подтвержден путем исследований химерного онкогена t(9;22) BCR/ABL p190 в ПЦР. При этом результаты тестирования контрольных и диагностических образцов показали полное совпадение. Все остальные образцы, возможно, содержали другие соматические мутации, которые возможно идентифицировать с помощью других молекулярных методов (ПЦР, FISH иммунофенотипирование, секвенирование и т.д.), что подтверждает гетерогенность соматических мутаций опухолевых клеток при ОЛ.
Выводы. Применение технологии биологического микрочипа с использованием набора «ЛК-биочип» является наиболее высокопродуктивной технологией исследования специфических химерных онкогенов опухолевых кроветворных клеток, заметно сокращающей время анализа, по сравнению с другими методами, снижающей его себестоимость, и, самое главное, позволяющей одномоментно анализировать не менее 13 «горячих» химерных онкогенов у больных острыми лейкозами.
Х.Я. Каримов, Б. Р. Алланазарова, Ю. Ю. Ассесорова, Н. Р. Латипова, К. Т. Бобоев
Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Министерства здравоохранения Республики Узбекистан, г. Ташкент.
ЗНАЧЕНИЕ КЛАССИЧЕСКОГО ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА В СЛУЧАЕ ОСТРОГО ЛИМФОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА С ПЕРВИЧНО-РЕЗИСТЕНТНЫМ ТЕЧЕНИЕМ ЗАБОЛЕВАНИЯ
Введение. Генетический анализ бластных клеток с использованием ОТО-бэндинга хромосом является важным методом исследования, поскольку позволяет оценивать состояние всего кариотипа и выявлять количественные и структурные хромосомные изменения, возникающие при острых лейкозах. Особое значение стандартный цитогенетический метод исследования имеет для идентификации редких реаранжировок, а также спонтанных перестроек с неизвестными локусами разрывов хромосом, являющихся следствием нестабильности генома, способных определять вариант течения заболевания. В настоящей работе мы продемонстрировали возможности цитоге-нетического исследования с использованием метода ОТО-бэндинга для оценки кариотипа больной с ОЛЛ, у которой была выявлена новая, клональная, не описанная ранее транслокация с участием 2-й и 22-й хромосом.
Материалы и методы. Исследование кариотипа больной с диагнозом острый лимфобласт-ный лейкоз, было выполнено стандартным цитогенетическим анализом с использованием метода ОТО-бэндинга. Биологическим материалом для цитогенетического исследования был костный мозг (2,0 мл), полученный при стернальной пункции до начала проведения курса полихимиотерапии по протоколу Нурег-Суаё Блок А. Дифференцированная сегментация хромосом составляла 350 бэндов на кариотип.
Всего было проанализировано 30 метафазных пластинок.
Результаты. Диагноз острый лимфобласт-ный лейкоз был установлен на основании данных гемограммы, миелограммы и цитохимического исследования. У больной отмечалось первично-резистентное течение заболевания с тяжелым состоянием, прогрессией и летальным исходом через полтора месяца после постановки диагноза.
Стандартный цитогенетический анализ показал, что 100 % бластных клеток пациентки содержали дериваты хромосом 2 и 22. В деривате хромосомы 22 в области длинного плеча был обнаружен добавочный фрагмент с тем-ноокрашенными бэндами. Локус соединения добавочного фрагмента с хромосомой 22 находился в регионе 22q13. Дериват хромосомы 2 характеризовался утратой концевого фрагмента р-плеча и появлением в данном регионе более короткого и светлоокрашенного терминального участка. Локус разрыва на хромосоме 2 идентифицировался в области р22. Таким образом, у больной ОЛЛ методом ОТО-бендинга была установлена новая, не описанная ранее, хромосомная реаранжировка — "Ъ(2;22)(р22; q13). Изначально тяжелое течение и первично-резистентная форма заболевания, а также ранняя смерть больной, возможно, свидетельствуют о неблагоприятном прогностическом значении данной транслокации.
