CC BY
12
всероссийская научно-практическая конференция с международным участием
«актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии», посвященная 90-летию российского научно-исследовательского института гематологии и трансфузиологии
Санкт-Петербург 30 июня - 1 июля 2022 г.
ГСК в периферической крови отмечался на 8-й день мобилизации - Ме количества СБ34+ клеток составила 220 (26-470) в мкл. Уровень лейкоцитов в периферической крови на 8-й день составлял от 9,0 до 43,2 х 109/л (Ме - 18,4 х 109/л). Первый день афереза состоялся на 8-й день мобилизации у 17 (94,4%) пациентов. За 1-й день достаточное количество ГСК было заготовлено у 83,3 % (п=15) пациентов - от 2,8 до 14,6х106/кг СБ34+ клеток (медиана 5,8 х106/кг). У 22,2 % (п=4) пациентов, которым потребовалось проведение 2-го сеанса афереза суммарно заготовлено от 2,14 до 8,54х106/кг СБ34+ клеток (медиана 7,34х106/кг). Не было зарегистрировано ни одного случая «пустого сбора». В период мобилизации не было отмечено случаев
гематологической токсичности глубже 1-й степени. Минимальный уровень нейтрофилов - 3,4х 109/л, тромбоцитов - 170х 109/л. Проявлений гепатотоксичности, нефротоксичности, а также инфекционных и геморрагических осложнений не отмечалось. Гипертермия, связанная с введением гемцитабина (max 38,1°С) отмечена у 2-х пациентов. Длительность койко-дня при проведении мобилизации составила от 9 до 11 дней (Ме - 9).
Выводы. Персонифицированный выбор различных режимов мобилизации при ЛПН представляется важной и перспективной задачей при трансплантации ГСК направленной на снижение частоты «пустых сборов», сокращение затрат на заготовку и снижение рисков развития осложнений.
Е.О. Куневич1, С.В. Волошин1,2, И.С. Мартынкевич1, С.Ю. Линников1, А.Ю. Кувшинов1,
М.А. Михалева1, С.В. Сидоркевич1 ЧАСТОТА ВСТРЕЧАЕМОСТИ И ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ МУТАЦИЙ ГЕНА EZH2 У
БОЛЬНЫХ ФОЛЛИКУЛЯРНОЙ ЛИМФОМОЙ
гФГБУРоссийский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА, Санкт-Петербург 2ФГБВОУ ВО Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова МО РФ, Санкт-Петербург
Введение. Фолликулярная лимфома (ФЛ) является одним из наиболее частых гистологических вариантов лимфом (11%) в структуре лимфопролиферативных новообразований (ЛПН). Это клональное заболевание, возникающее из клеток герминативного центра лимфатических фолликулов, основополагающими событиями которого, помимо сверхэкспрессии гена В^2, являются мутации в генах эпигенетической регуляции транскрипции (в том числе в гене EZH2), выявляемые с частотой от 5% до 80%. Было продемонстрировано, что мутации гена EZH2 обуславливают благоприятное течение заболевания у пациентов с ФЛ. Мутации гена EZH2 могут служить возможным предиктором эффективности иммунохимиотерапии (ИХТ) и одной из потенциальных мишеней таргетного терапевтического воздействия при ФЛ.
Цель. Целью работы является определение прогностической значимости мутаций гена EZH2, их влияние на эффективность ИХТ и выживаемость больных ФЛ.
Материалы и методы. В исследование включено 160 пациентов старше 18 лет с морфологически подтвержденной ФЛ. Соотношение М:Ж составило 1:1,58, средний возраст - 60,6±13,92 лет. За период наблюдения (медиана 1,7 (1-67,5) месяцев) у 152 пациентов появились или присутствовали в дебюте заболевания GELF-критерии. В 55,1% (п=88) случаев отмечался 2-ой цитологический тип ФЛ. Поражение костного мозга выявлено у 49,6 % больных (п=79), медиана объема поражения составила 18,2 (5-95) %. По данным ИГХ-исследования медиана индекса пролиферативной активности Ю-67 составила 33,8 (0-90) %. В независимости от статуса мутации EZH2 (секвенирование 16 и 18 экзонов) все пациенты получили в качестве терапии 1 линии ИХТ с включением анти-СБ20-моноклональных антител
(RCHOP, RB, GB). ИХТ по протоколу R-CHOP являлась вариантом выбора у 52,7 % (n=84) пациентов, по протоколу RB - у 31,3 % (n=50), ритуксимаб в монорежиме - у 8,4 % (n=13), обинутузу-маб с бендамустином (GB) - у 3,8 % (n=6) пациентов, остальные режимы ИХТ (R-CVP, G-CVP, FCR, RChl) применялись у 4,6% (n=7) больных.
Результаты. Молекулярно-генетическое исследование выполнено 28 пациентам. Перестройки гена BCL2 по данным FISH исследования отмечены у 37,1 % (n=13/35) пациентов, BCL6 - у 3,6 % (n=1/28), del17p/TP53 выявлена у 1 больного (3,6 %, n=1/28). По данным стандартного цитогенетического исследования изменения кариотипа выявлены у 14,3 % (n=4/28) больных, среди которых del20q, +18, +1q. Мутации гена EZH2 методом секвенирования по Сэнгеру не были выявлены ни у одного из 28 обследуемых пациентов (0/28), при использовании метода NGS (высокочувствительное секвенирование нового поколения) мутация гена EZH2 (Y646F) была обнаружена у 1 больного - 3,6 % (1/28). Пациенты, получавшие терапию R-CHOP, в 63,8 % (n=54/85) случаев достигли полного ответа (ПО), время до достижения ПО составило 9,6 мес. Из пациентов, получивших терапию по протоколу RB, у половины (50 %, n=25/50) констатирован ПО, время до ПО составило 7,1 мес.
Выводы. Частота мутаций гена EZH2 составила 3,6 % (n=1/28), что существенно ниже ранее опубликованных литературных данных (15-25 %). Оценка «реальной» частоты встречаемости мутаций гена EZH2 в отечественной когорте больных ФЛ и её влияние на особенности клинического течения заболевания, а также эффективность используемых в настоящее время режимов ИХТ требует продолжения работы, накопления данных и их дальнейшего анализа.
Д.В. Кустова, Е.В. Мотыко, А.Н. Кириенко, М.П. Бакай, Е.В. Ефремова, С.В. Волошин, В.А. Шуваев,
С.В. Сидоркевич, И.С. Мартынкевич
ПЕРСПЕКТИВЫ ПРИМЕНЕНИЯ СЕКВЕНИРОВАНИЯ СЛЕДУЮЩЕГО ПОКОЛЕНИЯ В ОПРЕДЕЛЕНИИ BCR-ABL-НЕЗАВИСИМЫХ МЕХАНИЗМОВ РАЗВИТИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ
К ТЕРАПИИ ИТК У ПАЦИЕНТОВ С ХМЛ
ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург
Введение. Хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ) - ми-елопролиферативное заболевание, характеризующиеся наличием реципрокной транслокации (филадельфийской хромосомы), в результате которой образуется химерный ген BCR-ABL. Продуктом химерного гена является белок, обладающей ти-розинкиназной активностью. Синтез этого белка влияет на
усиление пролиферации опухолевых клеток с блокированием их апоптоза. Хотя ингибиторы тирозинкиназы (ИТК) успешно применяются для лечения ХМЛ, у части пациентов развивается резистентность к лечению. В основном устойчивость возникает из-за мутаций в тирозинкиназном домене гена BCR-ABL. Однако все еще остается много случаев с неизвестными причинами
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVIII, № 2, 2022
резистентности к ИТК, поскольку этиопатология ХМЛ до конца не изучена.
Цель. Используя метод секвенирования следующего поколения (NGS) определить BCR-ABL-независимые биомаркеры резистентности к ИТК у пациентов с ХМЛ.
Материалы и методы. В исследование включены образцы крови 24 пациентов с резистентным течением ХМЛ (12 мужчин и 12 женщин) в возрасте от 26 до 72 лет (Ме=43). В качестве контрольной группы использовались образцы крови 5 пациентов, ответивших на лечение ИТК (3 мужчины и 2 женщины) в возрасте от 33 до 72 лет (Ме=54). Отсутствие мутаций в гене BCR-ABL у пациентов с резистентным течением ХМЛ подтверждалось прямым секвенированием по Сэнгеру. Наличие резистентности к терапии оценивали по критериям ELN 2021. Пациентам было проведено NGS исследование миелоидной панели, включающей 116 генов, со средней глубиной прочтения 1000х на приборе MiSeq (Illumina). Клиническая значимость мутаций определялась по базам данных COSMIC, ClinVar и VarSome.
Результаты. У всех исследуемых пациентов выявлены генетические аномалии: в среднем по 5 мутаций (от 1 до 10 у одного пациента). Суммарно выявлено 110 мутаций: из них 78 миссенс-мутаций, 1 - нонсенс-мутация, 25 - синонимичных мутаций, 4 варианта со сдвигом рамки считывания, а также 2 мутации в области интрона гена BCR. 101 (92%) мутация имеет неясную клиническую значимость. Наиболее часто аномалии встречались в опухолевом супрессоре NF1 (10), генах-регуляторах процесса транскрипции TET2 (10) и ATRX (7), гене когезинового комплекса STAG2 (6), гене эпигенетической регуляции ASXL1 (6). У двух пациентов обнаруживалась патогенная мутация в гене ASXL1 (р. G646Wfs*12), ассоциированная со снижением восприимчивости к терапии ИТК. Несмотря на то, что мутации в генах NF1 и
ATRX чаще других встречаются у резистентных к терапии пациентов с неблагоприятным течением заболевания, в нашем исследовании эти мутации отмечались у пациентов, ответивших на лечение. У одного пациента было выявлено сочетание двух патогенных мутаций в генах DNMT3A и RUNX1. Большой молекулярный ответ у данного пациента не был достигнут в течение четырех лет терапии, а в дальнейшем развился бластный криз. Отмечается, что мутации в гене RUNX1 встречаются у больных с резистентной формой ХФ ХМЛ и ассоциированы с неблагоприятным течением заболевания. Несмотря на важную роль метода NGS в определении патогенных мутаций, влияющих на резистентность к ИТК, необходимо искать дополнительные маркеры. Так наличие мутаций в некодирующей области гена ВС^ может влиять на его регуляцию экспрессии. Вместе с этим, как известно, регуляторами экспрессии генов, связанных с патогенезом ХМЛ, являются также микроРНК. МикроРНК - короткие некодирующие последовательности РНК, регулирующие экспрессию генов на посттранскрипционном уровне. В литературе упоминается, что микроРНК регулируют экспрессию генов сигнальных путей, участвующих в клеточной пролиферации, апоптозе и подавлении опухолей.
Выводы. У пациентов с резистентным течением ХМЛ наиболее часто выявляются методом NGS мутации в генах №1, ТЕТ2, ATRX, STAG2 и АБХЬ1. При этом мутации в генах DNMT3A и RUNX1 ассоциируются с развитием бластной трансформации. Сочетание полученных результатов исследования с применением NGS и изучения влияния микроРНК является перспективной областью исследования не только для поиска новых диагностических маркеров, но и оценки прогрессии заболевания, ответа на лечение и для разработки инновационных схем терапии.
И.Ф. Лесниченко, С.В. Грицаев, И.И. Кострома, ААЖернякова, С.С. Бессмельцев, С.И. Капустин
ИССЛЕДОВАНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ МАТРИКСНОИ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗЫ-9 В ПЛАЗМЕ АСПИРАТОВ КОСТНОГО МОЗГА БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ ПРИ АУТОЛОГИЧНОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агенства, Санкт-Петербург
Введение. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ауто-ТГСК) значимо улучшает результаты лечения больных множественной миеломой (ММ). Вместе с тем нередки случаи развития раннего рецидива и отсутствия улучшения качества ответа.
Цель работы. Определить прогностический потенциал уровня матриксной металлопротеиназы-9 (ММП-9) в плазме аспиратов костного мозга (ПАКМ) больных ММ при выполнении ауто-ТГСК.
Материалы и методы. Исследован уровень ММП-9 в ПАКМ 71 больного ММ. Аспират заготавливали до и после ауто-ТГСК. Медиана периода наблюдения за больными составила 100 (30-270) дней. Использована иммуноферментная тест-система Human MMP-9 immunoassay (США).
Результаты. Содержание ММП-9 было выявлено во всех ис-
следованных пробах и варьировало от 0,512 до 19,132 нг/мл. Различия в концентрации ММП-9 до и после ауто- ТГСК было значимым: 4,088±0,546 нг/мл и 5,729±0,725 нг/мл соответственно; р=0,045. В то же время у 9 больных без прогрессии заболевания в течение 11 месяцев (медиана) диапазон показателей ММП-9 до ауто-ТГСК был значимо выше, чем у 4 больных с прогрессией ММ: 2,228-19,132 и 0,512-1,692 нг/мл соответственно; р=0,017. При этом двое больных из группы с низкими значениями ММП-9 умерли через 6 и 11 месяцев после ауто-ТГСК от осложнений, связанных с прогрессией заболевания.
Выводы. Не исключена связь концентрации ММП-9 в костном мозге с активностью ММ, что позволяет рассматривать уровень ММП-9 как потенциальный предиктор эффективности высокодозной терапии с поддержкой ауто-ТГСК.
А.А. Лялюхина, О.А. Майорова, К.С. Момотюк, Е.А. Ватагина
АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ АНАЛИЗА КРОВИ ПРИ РУТИННОМ ОБСЛЕДОВАНИИ ДОНОРОВ КРОВИ И КОМПОНЕНТОВ ПЕРЕД ДОНАЦИЕЙ
ГБУЗ «Центр крови имени О.К. Гаврилова Департамента здравоохранения города Москвы», Москва
Введение Анемия является одной из наиболее частых причин временного отвода от донорства крови и ее компонентов. С целью предотвращения развития железодефицитных состояний у доноров в обязательном порядке перед донацией прово-
дится предварительное исследование показателей общего анализа крови с целью оценки состояния здоровья, необходимого для осуществления донорской функции. По данным литературы повышение показателя анизоцитоза RDW можно рассматри-
