CC BY
15
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVIII, № 2, 2022
резистентности к ИТК, поскольку этиопатология ХМЛ до конца не изучена.
Цель. Используя метод секвенирования следующего поколения (NGS) определить BCR-ABL-независимые биомаркеры резистентности к ИТК у пациентов с ХМЛ.
Материалы и методы. В исследование включены образцы крови 24 пациентов с резистентным течением ХМЛ (12 мужчин и 12 женщин) в возрасте от 26 до 72 лет (Ме=43). В качестве контрольной группы использовались образцы крови 5 пациентов, ответивших на лечение ИТК (3 мужчины и 2 женщины) в возрасте от 33 до 72 лет (Ме=54). Отсутствие мутаций в гене BCR-ABL у пациентов с резистентным течением ХМЛ подтверждалось прямым секвенированием по Сэнгеру. Наличие резистентности к терапии оценивали по критериям ELN 2021. Пациентам было проведено NGS исследование миелоидной панели, включающей 116 генов, со средней глубиной прочтения 1000х на приборе MiSeq (Illumina). Клиническая значимость мутаций определялась по базам данных COSMIC, ClinVar и VarSome.
Результаты. У всех исследуемых пациентов выявлены генетические аномалии: в среднем по 5 мутаций (от 1 до 10 у одного пациента). Суммарно выявлено 110 мутаций: из них 78 миссенс-мутаций, 1 - нонсенс-мутация, 25 - синонимичных мутаций, 4 варианта со сдвигом рамки считывания, а также 2 мутации в области интрона гена BCR. 101 (92%) мутация имеет неясную клиническую значимость. Наиболее часто аномалии встречались в опухолевом супрессоре NF1 (10), генах-регуляторах процесса транскрипции TET2 (10) и ATRX (7), гене когезинового комплекса STAG2 (6), гене эпигенетической регуляции ASXL1 (6). У двух пациентов обнаруживалась патогенная мутация в гене ASXL1 (р. G646Wfs*12), ассоциированная со снижением восприимчивости к терапии ИТК. Несмотря на то, что мутации в генах NF1 и
ATRX чаще других встречаются у резистентных к терапии пациентов с неблагоприятным течением заболевания, в нашем исследовании эти мутации отмечались у пациентов, ответивших на лечение. У одного пациента было выявлено сочетание двух патогенных мутаций в генах DNMT3A и RUNX1. Большой молекулярный ответ у данного пациента не был достигнут в течение четырех лет терапии, а в дальнейшем развился бластный криз. Отмечается, что мутации в гене RUNX1 встречаются у больных с резистентной формой ХФ ХМЛ и ассоциированы с неблагоприятным течением заболевания. Несмотря на важную роль метода NGS в определении патогенных мутаций, влияющих на резистентность к ИТК, необходимо искать дополнительные маркеры. Так наличие мутаций в некодирующей области гена ВС^ может влиять на его регуляцию экспрессии. Вместе с этим, как известно, регуляторами экспрессии генов, связанных с патогенезом ХМЛ, являются также микроРНК. МикроРНК - короткие некодирующие последовательности РНК, регулирующие экспрессию генов на посттранскрипционном уровне. В литературе упоминается, что микроРНК регулируют экспрессию генов сигнальных путей, участвующих в клеточной пролиферации, апоптозе и подавлении опухолей.
Выводы. У пациентов с резистентным течением ХМЛ наиболее часто выявляются методом NGS мутации в генах №1, ТЕТ2, ATRX, STAG2 и АБХЬ1. При этом мутации в генах DNMT3A и RUNX1 ассоциируются с развитием бластной трансформации. Сочетание полученных результатов исследования с применением NGS и изучения влияния микроРНК является перспективной областью исследования не только для поиска новых диагностических маркеров, но и оценки прогрессии заболевания, ответа на лечение и для разработки инновационных схем терапии.
И.Ф. Лесниченко, С.В. Грицаев, И.И. Кострома, ААЖернякова, С.С. Бессмельцев, С.И. Капустин
ИССЛЕДОВАНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ МАТРИКСНОИ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗЫ-9 В ПЛАЗМЕ АСПИРАТОВ КОСТНОГО МОЗГА БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ ПРИ АУТОЛОГИЧНОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агенства, Санкт-Петербург
Введение. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ауто-ТГСК) значимо улучшает результаты лечения больных множественной миеломой (ММ). Вместе с тем нередки случаи развития раннего рецидива и отсутствия улучшения качества ответа.
Цель работы. Определить прогностический потенциал уровня матриксной металлопротеиназы-9 (ММП-9) в плазме аспиратов костного мозга (ПАКМ) больных ММ при выполнении ауто-ТГСК.
Материалы и методы. Исследован уровень ММП-9 в ПАКМ 71 больного ММ. Аспират заготавливали до и после ауто-ТГСК. Медиана периода наблюдения за больными составила 100 (30-270) дней. Использована иммуноферментная тест-система Human MMP-9 immunoassay (США).
Результаты. Содержание ММП-9 было выявлено во всех ис-
следованных пробах и варьировало от 0,512 до 19,132 нг/мл. Различия в концентрации ММП-9 до и после ауто- ТГСК было значимым: 4,088±0,546 нг/мл и 5,729±0,725 нг/мл соответственно; р=0,045. В то же время у 9 больных без прогрессии заболевания в течение 11 месяцев (медиана) диапазон показателей ММП-9 до ауто-ТГСК был значимо выше, чем у 4 больных с прогрессией ММ: 2,228-19,132 и 0,512-1,692 нг/мл соответственно; р=0,017. При этом двое больных из группы с низкими значениями ММП-9 умерли через 6 и 11 месяцев после ауто-ТГСК от осложнений, связанных с прогрессией заболевания.
Выводы. Не исключена связь концентрации ММП-9 в костном мозге с активностью ММ, что позволяет рассматривать уровень ММП-9 как потенциальный предиктор эффективности высокодозной терапии с поддержкой ауто-ТГСК.
А.А. Лялюхина, О.А. Майорова, К.С. Момотюк, Е.А. Ватагина
АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ АНАЛИЗА КРОВИ ПРИ РУТИННОМ ОБСЛЕДОВАНИИ ДОНОРОВ КРОВИ И КОМПОНЕНТОВ ПЕРЕД ДОНАЦИЕЙ
ГБУЗ «Центр крови имени О.К. Гаврилова Департамента здравоохранения города Москвы», Москва
Введение Анемия является одной из наиболее частых причин временного отвода от донорства крови и ее компонентов. С целью предотвращения развития железодефицитных состояний у доноров в обязательном порядке перед донацией прово-
дится предварительное исследование показателей общего анализа крови с целью оценки состояния здоровья, необходимого для осуществления донорской функции. По данным литературы повышение показателя анизоцитоза RDW можно рассматри-
всероссийская научно-практическая конференция с международным участием
«актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии», посвященная 90-летию российского научно-исследовательского института гематологии и трансфузиологии
Санкт-Петербург 30 июня - 1 июля 2022 г.
вать как раннии признак анемии даже в отсутствии отклонении других показателей в анализе крови. В качестве альтернативы биохимическим показателям обмена железа, использующимся для уточнения диагноза анемии, а также как подтверждение развития железодефицитного состояния в нашем исследовании были использованы ретикулоцитарные параметры, которые исследуются при использовании гематологических анализаторов последнего поколения.
Цель. Определить возможность использования показателя анизоцитоза RDW, как раннего вспомогательного маркера развития железодефицита у доноров и оценить его диагностическую значимость.
Материалы и методы Исследования капиллярной крови проводились на автоматическом гематологическои анализаторе Sysmex XN 1000. Всего было отобрано 43 донора, которые были распределены в 2 группы.
Результаты В первую группу были включены 22 человека с нормальными показателями общего анализа крови, у всех доноров было незначительное превышение RDW>15%, в 32% случаев было выявлено повышенное содержание гемоглобина в ретикулоцитах >36,4пг, в 50% - повышение дельта-гемоглобина >4,4пг. Полученные ретикулоцитарные показатели позволили исключить железодефицитные состояния у лиц данной группы. Во второй группе, в которую был включен 21 донор с признаками нормохромной нормоцитарной анемии, показатель анизоцитоза RDW, дельта-гемоглобин и Ret-He (содержание ге-
моглобина в ретикулоцитах) находились в пределах нормы. По данным зарубежной литературы Ret-He<28пг является основным показателем железодефицитного эритропоэза. В нашем исследовании параметр Ret-He>28пг свидетельствует о нормальном насыщении гемоглобином ретикулоцитов. Ретикуло-цитарные параметры в пределах нормы свидетельствуют об эффективном эритропоэзе и возможности продолжать участвовать в донорстве через определенный временной интервал.
Выводы В службе крови достаточно часто возникают вопросы об отводах доноров в связи с развитием анемии. Поэтому оценка ранних диагностических маркеров развития железоде-фицитных состояний необходима для дальнейшей тактики работы с донорами и сохранения донорского контингента. В ходе исследования мы пришли к выводу, что отклонения показателя RDW для ранней диагностики железодефицита среди донорского контингента желательно рассматривать в совокупности с другими показателями анализа крови. Измерение содержания Ret-He отражает фактический метаболизм железа в эритропоэ-зе и позволяет оценить качество будущих эритроцитов, поэтому нарушения в обмене железа могут быть выявлены гораздо раньше, чем при определении содержания гемоглобина в эритроцитах. Необходимо дальнейшее углубленное исследование по данному вопросу с целью определения возможной комбинации отклонения параметров для более раннего выявления изменений в здоровье доноров.
Е.А. Мамаева, М.В. Фирсова, М.В. Соловьев, А.В. Абакумова, А.А. Старцев, Э.А. Макунина, Т.П. Данилина, А.М. Ковригина, Л.П. Менделеева
ОСОБЕННОСТИ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ ПЛАЗМОКЛЕТОЧНОЙ МИЕЛОМЫ У ПАЦИЕНТОВ С КОСТНЫМИ ПЛАЗМОЦИТОМАМИ И ЭКСПРЕССИЕЙ ЦИКЛИНА D1
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства Здравоохранения Российской Федерации, Москва
Введение. Циклин D1 - это белок-продукт онкогена, усиливающий пролиферативную активность клетки. Наиболее изученным механизмом гиперэкспрессии циклина D1 при плазмоклеточной миеломе (ПМ) является перенос гена CCND1 под влияние сильного 5' энхансера IGH в результате t(11;14) (q13;q32). При иммуногистохимическом исследовании экспрессия циклина D1 в плазматических клетках костного мозга определяется в 16-47% случаев. Прогностическое значение экспрессии циклина D1 при ПМ продолжает изучаться. Особый интерес представляет изучение влияния экспрессии циклина D1 на клиническое течение ПМ, осложненной костными плазмоци-томами.
Цель. Определить клинико-лабораторные особенности течения ПМ при экспрессии циклина Dl в субстрате костной плаз-моцитомы.
Материалы и методы. В ретроспективное исследование включено 12 пациентов с впервые выявленной ПМ (3 мужчин, 9 женщин) в возрасте от 36 до 64 лет (медиана 55 лет), у которых в субстрате костной плазмоцитомы определялась экспрессия циклина D1. Диагноз ПМ установлен в соответствии с критериями IMWG (2014). Всем пациентам проводились иммунохими-ческое исследование белков сыворотки и мочи с определением концентрации свободных легких цепей иммуноглобулинов, цитологическое исследование костного мозга, низкодозная КТ костей скелета. Гистологическое и иммуногистохимическое исследования трепанобиоптата костного мозга выполнено у 58,3 % больных. Иммуногистохимическое исследование биоптатов костных плазмоцитом и трепанобиоптатов костного мозга проведено с использованием иммуностейнера Leica Bond-Max, реакций с антителом к CCND1 (клон SPA4, Cell Marque). Экспрессия CCND1 считалась положительной при выявлении 5% и более
позитивных клеток в поле зрения. Микроскопия гистологических и иммуногистохимических препаратов проводилась на световом микроскопе Leica 3000.
Результаты. Субстрат костной плазмоцитомы во всех случаях был представлен зрелыми плазматическими клетками, в ряде случаев с наличием единичных двухъядерных форм. При гистологическом исследовании трепанобиоптатов костного мозга в 85,7% выявлен субстрат ПМ. Среди элементов миелопо-эза интерстициально и в виде многочисленных мелких скоплений располагались зрелые плазматические клетки. При имму-ногистохимическом исследовании трепанобиоптатов костного мозга во всех случаях в опухолевых клетках определялась экспрессия циклина D1. Уровень секреции парапротеина в этой когорте больных относительно невысок - 7,4 г/л (следовые значения - 22 г/л). В 41,6 % случаев отмечена секреция только свободных легких цепей иммуноглобулинов. Течение заболевания не характеризовалось глубокой анемией (гемоглобин 127 г/л) и гиперкальциемией (2,48 ммоль/л). У 1 пациента диагностирована миеломная нефропатия. По системе стадирования ISS регистрировались преимущественно начальные стадии заболевания: у 75 % больных диагностирована I стадия, у 25 % больных - II стадия. При оценке состояния костной системы выявлено от 1 до 5 костных плазмоцитом (медиана 2). Чаще всего костные плазмоцитомы локализовались в позвонках, линейные размеры не превышали 6 см.
Выводы. Экспрессия циклина D1 в субстрате костной плаз-моцитомы коррелирует с низким уровнем секреции парапроте-ина, частой секрецией только свободных легких цепей иммуноглобулинов и начальными стадиями заболевания по системе стадирования ISS.
