CC BY
13
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 2, 2021
личеством опухолевых клеток в образце и высоким поликло-нальным фоном. Также у троих пациентов было обнаружено по три перестройки. В двух случаях все три перестройки были продуктивными (семейства VH3 и VH4), и количество мутаций относительно герминального гена было высоким. Анализ истории болезни показал, что в одном из этих случаев наблюдается одновременное наличие двух опухолевых заболеваний - ХЛЛ и ЛКМ. Оба эти случая были классифицированы как M-CLL. В третьем случае наблюдался основной клон (91%) с продуктивной перестройкой немутированного гена ЮНУ3-53 и 2 небольших немутированных клона (<5%) с ЮНУ1-69 (продуктивная) и ЮНУ3-74 (непродуктивная).
Выводы. Наше исследование показало эффективность использования технологии NGS для определения мутационного статуса генов ЮНУ для случаев, когда исследование по Сэнгеру оказалось неинформативным. Мы обнаружили, что в случаях с двумя перестройками с генами одного семейства ЮНУ чаще встречаются варианты семейства VН3 (77,7%), варианты без мутаций ЮНУ также встречаются чаще. Несмотря на то, что в настоящее время метод секвенирования по Сэнгеру более удобен для данного рутинного анализа, для значительного числа сложных случаев исследование при помощи NGS позволит уточнить диагноз пациента и назначить соответствующее лечение.
К.И. Зарубина, Е.Н. Паровичникова, В.Л. Сурин, О.С. Пшеничникова, О.А. Гаврилина, Г.А. Исинова, В.В. Троицкая, А.Н. Соколов, Т.Н. Обухова, Е.Е. Никулина, А.Б. Судариков, В.Г. Савченко
СИНДРОМ ЛИ-ФРАУМЕНИ У ВЗРОСЛЫХ БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ ЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. Синдром Ли-Фраумени (СЛФ) - редкое доминантно наследуемое заболевание, характеризующееся предрасположенностью к опухолям различной природы, в том числе, к опухолям кроветворной ткани. Пациентам с СЛФ и их родственникам требуются генетическое консультирование с последующим наблюдением и выбор оптимальной терапевтической тактики в случае развития онкологического заболевания.
Цель. Оценить мутационный статус гена TP53 у больных de novo Ph-негативным (В- и Т-клеточным) и Ph-позитивным ОЛЛ, лечение которым проводили по протоколам российской исследовательской группы (ОЛЛ-2009, ОЛЛ-2012, ОЛЛ-2016) в ФГБУ «НМИЦ гематологии» МЗ и региональных клиниках, участниках многоцентровых исследований.
Материалы и методы. Исследование мутаций гена TP53 было выполнено 180 больным: de novo Ph-негативным В-клеточным ОЛЛ (n=89), Т-клеточным ОЛЛ (n=64), Ph-позитивным В-клеточным ОЛЛ (n=27). Группа с Ph-негативным ОЛЛ (В- и Т-клеточным) составила 153 больных (85 мужчин и 68 женщин от 16 до 72 лет, медиана возраста - 3о лет): 109 пациентов, включенные в исследование с ноября 2016 г. по январь 2020 г., получали лечение по протоколу ОЛЛ-2016, 44 больным лечение проводили по протоколу ОЛЛ-2009 с марта 2009 г. по август 2016 г. Медиана наблюдения составила 19 мес. (0,57-131,3). В группу с Ph-позитивным В-ОЛЛ включено 27 пациентов (17 женщин и 10 мужчин от 23 до 78 лет, медиана возраста 33 года), им проводили лечение по протоколам ОЛЛ-2009 (n=2) в сочетании с ингибиторами тирозинкиназ (ИТК) и ОЛЛ-2012 (n=23), двое больных получали терапию по другим протоколам. Медиана наблюдения составила 26 мес. (6,6-123,6).
Результаты. Мутации гена TP53 были обнаружены у 7,8% (n=14) больных de novo ОЛЛ. Для доказательства герминального характера мутаций и подтверждения СЛФ статус гена
ТР53 оценивали в ремиссии на образцах костного мозга и периферической крови, на образцах костного мозга после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) и в тканях некроветворного происхождения. Всего в анализ было включено 5 больных (из 14, у которых были обнаружены мутации), не опухолевый биологический материал которых был доступен для исследования. Терминальный характер мутаций, свидетельствующий о наличии СЛФ, был подтвержден у 4 из 5 (В-клеточный ОЛЛ п=3, Т-клеточный ОЛЛ п=1) обследованных пациентов. Достижение ремиссии на стандартных протоколах химиотерапии было констатировано у 3 из 4 больных. Рецидивов за период наблюдения диагностировано не было. Двое больных на настоящий момент живы и находятся в полной ремиссии заболевания. Судьба одной больной, которой была выполнена алло-ТГСК, неизвестна. Только в одном случае отмечалась рефрактерность к стандартной терапии, поэтому лечение по протоколу ОЛЛ-2009 было прекращено и был начат протокол лечения рефрактерных форм ОЛЛ (блинатумомаб в сочетании с сорафенибом) в связи с наличием мутации FLT3-ITD. Была достигнута ремиссия заболевания с последующим выполнением алло-ТГСК от неродственного частично совместимого донора. На сроке +6 месяцев было констатировано отторжение трансплантата, и была выполнена повторная алло-ТГСК от того же донора. Однако, через 9 месяцев пациент умер от инфекционных осложнений вследствие повторного отторжения трансплантата.
Выводы. Гематологические злокачественные новообразования в ряде случаев могут быть обусловлены наследственной предрасположенностью. Практическим выводом работы является наблюдение, что основная часть мутаций гена ТР53 у больных Р^негативным В-клеточным ОЛЛ носит терминальный характер и ассоциирована с синдромом Ли-Фраумени.
А.Н. Зельцер, С.В. Морданов, Ю.В. Шатохин, Е.В. Бурнашева, Е.А. Бурцева, А.А. Мацуга
КЛИНИЧЕСКИЙ СЛУЧАЙ РЕДКОЙ КОМПЛЕКСНОЙ ВАРИАНТНОЙ ХРОМОСОМНОЙ ТРАНСЛОКАЦИИ У ПАЦИЕНТА С ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Ростов-на-Дону
Введение. Хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ) - неопластическое заболевание, для которого специфические генетические и цитогенетические изменения играют важ-
ную роль в патогенезе, прогнозе и лечении заболевания. Клональная гемопоэтическая стволовая клетка, с которой ассоциируется ХМЛ, возникает из-за реципрокной трансло-
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
кации t(9;22)(q34;q11) между длинными плечами хромосом 9 и 22, обычно известной как филадельфийская (Ph) хромосома. Согласно данным литературы, в 2-10% случаев заболевания ХМЛ слитный ген bCR-ABl образуется в результате так называемой вариантной или сложной транслокации. В настоящее время считается, что вариантная транслокация может затронуть любую хромосому, помимо хромосом 9 и 22. В большинстве случаев вариантная транслокация t(V;9;22) обнаруживается цитогенетическим методом. Чаще всего при этом дериватная хромосома 9 - der(9)t(9;22) участвует в перестройке с другой хромосомой. У большинства пациентов вариантные транслокации обычно наблюдаются на начальном этапе заболевания в хронической фазе и не обнаруживаются как новые цитогенетические отклонения во время течения заболевания. В данном сообщении описано редкое сочетание комплексных хромосомных перестроек - двухсторонней и вариантной трехсторонней Ph-позитивной транслокации 46,XX,t(6;9)(p21;q34),t(9;11;22)(q34;q13;q11.2) у пациента с ХМЛ.
Материалы и методы. Цитогенетический анализ с использованием GTG-бэндинга проводили на нестимулиро-ванной 24-часовой культуре образца аспирата костного мозга в соответствии со стандартными процедурами. Оценивали не менее 20 метафаз. FISH-исследование проводили с использованием зонда LSI BCR/ABL1 Dual Color, Dual Fusion Translocation Probe (Abbott). Проанализировано 200 интерфазных ядер аспирата костного мозга.
Результаты. Пациентка Т., 1955г. рождения, диагноз ХМЛ, хроническая фаза, установлен в ноябре 2017г. (в возрасте 62 лет). Диагноз подтвержден результатами моле-кулярно-генетического исследования крови от 23.11.17г.: выявлена экспрессия химерного гена bcr-abl - 86,671%; FISH-исследованием костного мозга: nucish(ABLx3),(BCRx3),(ABL 1conBCRx1), Ph-хромосома обнаружена в 98% интерфазных ядер. При стандартном цитогенетическом исследование костного мозга - результат не информативен. С февраля 2018 г. начат прием иматиниба 400 мг в сутки. На фоне терапии через 3 месяца от начала лечения достигнут частич-
ный гематологический ответ. Учитывая низкую комплаент-ность пациентки, доза иматиниба увеличена до 600 мг. При молекулярно-генетическом исследовании от 22.11.2018 и
18.04.2019 г. экспрессия гена Ьсг-аЬ1 составила 18,215 % и 12,220% соответственно. С ноября 2019 г. иматиниб отменен, начат прием гидроксикарабамида. В феврале 2020 г. консультирована гематологом РостГМУ При обследовании в общем анализ крови от 25.02.2020г.: гемоглобин 90 г/л, лейкоциты 107,2х109/л (эозинофилы 3%, промиелоциты 2%, миелоци-ты 17%, юные 15%, п/я 21%, с/я 39%, лимфоциты 2%, моноциты 1%, базофилы - 0%), тромбоциты - 698х109/л. При объективном осмотре спленомегалия пальпаторно не определялась. Экспрессия химерного гена Ьсг-аЬ1 от 4.03.2020 г. составила 30,546%. При исследовании костного мозга
04.03.2020 г. в миелограмме выявлены бласты 3%, проми-елоциты 8,9%, базофилы 1%. Результат цитогенетического исследования показал сочетание двухсторонней и трехсторонней транслокации варианта Р^позитивного комплекса 46ДХД6;9)(р21^34), ^9;11;22)^34^13^11.2) во всех мета-фазных пластинах. Результат FISH-исследования: nucish(AB Lх3),(BCRх3),(ABL1conBCRх1), Р^хромосома обнаружена в 100% интерфазных ядер. Пациентка переведена на терапию дазатинибом в дозе 100 мг в сутки. Через 1 месяц терапии достигнут полный гематологический ответ, через 4 месяца -экспрессия гена Ьсг-аЬ1 снизилась и составила 0,46%.
Выводы. Появление дополнительных хромосомных аберраций (ДХА), связанных с развитием ХМЛ, свидетельствует о клональной эволюции и клинически является предвестником прогрессии заболевания. Наличие ДХА в Ph положительных клетках в дебюте заболевания требует более частого цитогенетического мониторинга, а в случае неудачи терапии иматинибом предпочтение отдается смене ИТК, а не повышению дозы иматиниба. Возможно, выявление данной цитогенетической аномалии у нашей пациентки при выполнении всех необходимых лабораторных исследований на этапе диагностики ХМЛ привело к более тщательному наблюдению и своевременной смене терапии.
Е.А. Зеркаленкова, С.А. Лебедева, А.Н. Борковская, О.И. Солдаткина, Е.В. Михайлова, С.А. Кашпор, А.А. Масчан, М.А. Масчан, Г.А. Новичкова, А.М. Попов, Ю.В. Ольшанская
ОСТРЫЕ ЛЕЙКОЗЫ С ПЕРЕСТРОЙКАМИ ГЕНА КМТ2А У ДЕТЕЙ - ИНИЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА И МОНИТОРИНГ МИНИМАЛЬНОЙ ОСТАТОЧНОЙ БОЛЕЗНИ
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г.Москва
Введение. Перестройки гена гистоновой лизин-N-метилтрансферазы 2A (KMT2A) считаются первичными генетическими событиями в ряде острых лейкозов (ОЛ) и особенно распространены у детей. С одной стороны, для них показана высокая клиническая значимость как в определении прогноза заболевания, так и для определения минимальной остаточной болезни (МОБ). С другой стороны, они демонстрируют значительную гетерогенность: для KMT2A известно более 90 партнеров и различные локализации точек разрыва. Эти характеристики затрудняют инициальную молекулярную диагностику и мониторинг МОБ у KMT2A-ассоциированных ОЛ.
Цель. Охарактеризовать молекулярный профиль ОЛ с перестройками гена KMT2A у детей в Российской Федерации.
Материалы и методы. В исследование было включено 570 пациентов (274 мальчика, 296 девочек) с KMT2A-положительными ОЛ в возрасте от рождения до 18 лет включительно (медиана возраста 2 года) за период с сентября 2009 года по март 2021 года. Всем пациентам проводили стандартное кариотипирование, флуоресцентную гибридизацию in situ (FISH), а также ПЦР на 8 основных перестроек
KMT2A. Неизвестные перестройки анализировали высок-производительным секвенированием - длинной инвертированной ПЦР с подготовкой библиотек NEBNext UltralI (NEB, Великобритания), якорной мультиплексной ПЦР (ArcherDX, CO, США) или кастомизированной КМТ2А-таргетной панелью (Illumina, CA, США). Полученные последовательности использовали для мониторинга МОБ методом ПЦР с пациент-специфической парой праймеров. Данные ПЦР сравнивали с МОБ, определенной методом иммунофенотипирова-ния (ИФТ). ИФТ производили с помощью сухих реагентов Duraclone (Beckman Coulter, США) в двух комбинациях антител: CFU (для определения миелоидных клеток на разных стадиях дифференцировки) и LAIP (для выявления клеток с лейкоз-ассоциированным иммунофенотипом).
Результаты. Перестройки KMT2A наиболее часто встречались у детей первого года жизни (n=165, 28,9%). Преобладающим диагнозом в исследованной когорте был мие-лоидный (n=287, 50,4%), реже лимфобластный ОЛ (n=257, 45,1%). Наиболее частыми вариантами в каждой группе были острый моноцитарный лейкоз (n=154, 68,1% ОМЛ) и В1-ОЛЛ (n=135, 64,0% ОЛЛ) соответственно. Перестройки
