CC BY
4
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
ных ГСК и на ЛСК при других миелопролиферативных заболеваниях (МПЗ). M.Bocchia и соавт. (2020 г.) было выявлено, что у 70% пациентов с ХМЛ CD26+ ЛСК обнаруживаются и на фоне терапии ИТК, как в ПК, так и в КМ, вне зависимости от продолжительности лечения и глубины молекулярного ответа (МО).
Цель. Оценить концентрацию CD26+ ЛСК в ПК и в КМ у пациентов в дебюте ХМЛ, на ранних этапах терапии ИТК и у пациентов с глубоким МО.
Материалы и методы. Выявление CD26+ ЛСК в ПК и в КМ осуществлялось при помощи наборов моноклональных антител анти^26-РЕ, CD45-APC-Cy7, CD34-APC и CD38-FITC. Анализ проводился на проточном цитометре CytoFlex (Beckman Coulter). С августа 2020 по март 2021 года было обследовано 130 пациентов. У пациентов с ХМЛ с длительностью терапии ИТК менее 12 месяцев (мес.) забор образцов (ПК/КМ) проводился в момент диагностики (n=20/8), через 3 мес. (n=11/6), 6 мес. (n=8/0), 9 мес. (n=4/0) и 12 мес. (n=7/0) терапии. У пациентов с длительностью терапии ИТК более 12 мес. и уровнем BCR/ABL1>0,01% (n=16) забор ПК выполнялся однократно. Пациенты с ХМЛ с глубоким МО были разделены на 2 группы: пациенты, получающие терапию иТк и пациенты в ремиссии без лечения (РБЛ). В первой группе у пациентов выполнялся забор ПК (n=47) и КМ (n=10), во второй группе — только ПК (n=24). В контрольную группу были включены пациенты с другими МПЗ: ПМФ (n=1), ОМЛ (n=2), ХММЛ (n=1), Ph+ОМЛ (n=1); с вторичным тромбоцитозом и с гиперэозинофильным синдромом (n=2), с Ph+ОЛЛ (n=1) и пациенты с хМл с атипичными типами транскрипта BCR/ ABL (n=2).
Результаты. У пациентов с ХМЛ в дебюте заболевания
медиана (Ме) BCR/ABL составила 81,2% (13,8%-187%), через 3 мес. терапии ИТК — 3% (0%-41,1%), через 6 мес. — 0,7% (0%-17,5%), через 9 мес. — 0,00058% (0%-0,06%) и через 12 мес. — 0,16% (0%-1,6%). CD26+ ЛСК в ПК и в КМ были обнаружены у всех пациентов в дебюте ХМЛ. Ме CD26+ ЛСК в ПК составила 32,1/мкл (0-345,7), в КМ — 82,3/мкл (12,5-236,4). Через 3 мес. терапии CD26+ ЛСК были выявлены в КМ только у 1 пациента (5,7/мкл). На сроках терапии ИТК 6, 9 и 12 мес. ни у одного пациента СD26+ ЛСК выявлены не были ни в ПК, ни в КМ. В группе пациентов без глубокого МО с длительностью терапии ИТК >12 мес., CD26+ ЛСК в ПК выявлялись только у пациентов с ХМЛ, резистентных к нескольким линиям терапии ИТК и с BCR/ABL1>1%. Ме CD26+ЛСК составила 0,1/мкл (0,1-2,9). Ни у кого из пациентов с ХМЛ с глубоким МО, как получающих терапию ИТК, так и в РБЛ, ни в ПК, ни в КМ не были обнаружены CD26+ ЛСК. В контрольной группе CD26+ ЛСК в ПК были выявлены у 1 пациента с Ph+ ОЛЛ (BCR/ABL р190) и у 1 пациента с ХМЛ (BCR/ABL р190).
Выводы. Выявлено, что у 100% пациентов с ХМЛ в дебюте заболевания в ПК и в КМ, выявляются CD26+ ЛСК. Однако установлено, что уже на ранних сроках терапии, при определяемом уровне BCR/ABLl, CD26+ ЛСК не обнаруживаются. Интересным фактом является также и то, что у пациентов с глубоким МО ни в ПК, ни в КМ CD26+ ЛСК не выявляются, что противоречит результатам зарубежных исследований (E.Abruzzese и соавт., 2018; М.ВоссЫа и соавт., 2020; 0.1Шап и соавт., 2020). Планируется продолжение исследования динамики CD26+ ЛСК на фоне терапии ИТК и изучение роли CD26+ ЛСК в развитии молекулярного рецидива после отмены терапии ИТК.
С.Я. Думпис1, Б.В. Бидерман2, Е.Б. Ликольд2, А.Б. Судариков2
ПРИМЕНЕНИЕ СЕКВЕНИРОВАНИЯ НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ ДЛЯ АНАЛИЗА ГЕНОВ IGHV У БОЛЬНЫХ ХЛЛ С ОЛИГОКЛОНАЛЬНЫМИ ПЕРЕСТРОЙКАМИ
1Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Московский Физико-
Технический Институт (Государственный Университет)», г. Москва 2Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. Мутационный статус генов ЮНУ и стереотипность В-клеточного рецептора являются ключевыми прогностическими факторами при хроническом лимфоци-тарном лейкозе (ХЛЛ). Пациенты с мутированными генами ЮНУ (М-^Щ характеризуются индолентным течением заболевания с существенно более высокой средней продолжительностью жизни, по сравнению с пациентами с генами ЮНУ без мутаций (и-^Щ. Тем не менее, существующая рутинная лабораторная методика определения мутационного статуса ЮНУ, основанная на методе секвенирования по Сэн-геру, не дает результатов для некоторых пациентов. В случаях с более, чем одной клональной перестройкой в опухолевых клетках прочитать последовательность можно только для перестроек, образованных с генами ЮНУ из разных семейств. Однако, около 4% пациентов имеют две клональные перестройки, образованные при участии генов ЮНУ одного семейства. Кроме того, чувствительность секвенирования по Сэнгеру бывает недостаточной для проведения анализа на ранних стадиях заболевания или в начале рецидива.
Цель. Оценить возможность и целесообразность определения мутационного статуса генов ЮНУ с помощью рутинной лабораторной технологии секвенирования следующего поколения (NGS) в сложных случаях.
Материалы и методы. В исследование был включен материал 26 пациентов с ХЛЛ для которых секвенирование по Сэнгеру оказалось нерезультативным. Амплификацию локу-са ЮНУ проводили с использованием двух мультиплексных
систем на основе праймеров, рекомендованных Европейской Инициативой Изучения ХЛЛ (ERIC). Подготовку библиотек для секвенирования осуществляли набором Nextera XT (Illumina, USA) согласно рекомендациям производителя. Секвенирование проводили на генетическом анализаторе MiSeq (Illumina, USA). Результаты анализировали с помощью свободного программного обеспечения MiXCR software (MiLaboratory, Россия). Определение мутационного статуса генов IGHV и стереотипности рецептора проводили c использованием баз данных IMGT/V-QUEST и ARRest согласно рекомендациям ERIC.
Результаты. У 20 пациентов были обнаружены по две клональные перестройки, в 18 случаях эти пары были с использованием одного семейства IGHV (у 14 - VH3, у 4 - VH1). У одного пациента были перестройки генов IGHV1-69 и IGHV7-4 (в обычных условиях они амплифицируются с одного прай-мера) и у одного - IGHV1-69 и IGHV3-73. В 19 случаях только одна перестройка была продуктивной, у одного пациента -обе. Мутационный статус во всех данных перестройках не отличался. Таким образом, мы определили вариант U-CLL для 16 пациентов и M-CLL для 4. Кроме того, среди пациентов с U-CLL мы обнаружили двух со стереотипными рецепторами CLL#2 и одного с CLL#1, отличающимися наиболее агрессивным течением заболевания.
У трех пациентов было выявлено по одной продуктивной клональной перестройке. Вероятно, неудача секвенирова-ния по Сэнгеру в этих случаях была связана с небольшим ко-
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 2, 2021
личеством опухолевых клеток в образце и высоким поликло-нальным фоном. Также у троих пациентов было обнаружено по три перестройки. В двух случаях все три перестройки были продуктивными (семейства VH3 и VH4), и количество мутаций относительно герминального гена было высоким. Анализ истории болезни показал, что в одном из этих случаев наблюдается одновременное наличие двух опухолевых заболеваний - ХЛЛ и ЛКМ. Оба эти случая были классифицированы как M-CLL. В третьем случае наблюдался основной клон (91%) с продуктивной перестройкой немутированного гена ЮНУ3-53 и 2 небольших немутированных клона (<5%) с ЮНУ1-69 (продуктивная) и ЮНУ3-74 (непродуктивная).
Выводы. Наше исследование показало эффективность использования технологии NGS для определения мутационного статуса генов ЮНУ для случаев, когда исследование по Сэнгеру оказалось неинформативным. Мы обнаружили, что в случаях с двумя перестройками с генами одного семейства ЮНУ чаще встречаются варианты семейства VН3 (77,7%), варианты без мутаций ЮНУ также встречаются чаще. Несмотря на то, что в настоящее время метод секвенирования по Сэнгеру более удобен для данного рутинного анализа, для значительного числа сложных случаев исследование при помощи NGS позволит уточнить диагноз пациента и назначить соответствующее лечение.
К.И. Зарубина, Е.Н. Паровичникова, В.Л. Сурин, О.С. Пшеничникова, О.А. Гаврилина, Г.А. Исинова, В.В. Троицкая, А.Н. Соколов, Т.Н. Обухова, Е.Е. Никулина, А.Б. Судариков, В.Г. Савченко
СИНДРОМ ЛИ-ФРАУМЕНИ У ВЗРОСЛЫХ БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ ЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. Синдром Ли-Фраумени (СЛФ) - редкое доминантно наследуемое заболевание, характеризующееся предрасположенностью к опухолям различной природы, в том числе, к опухолям кроветворной ткани. Пациентам с СЛФ и их родственникам требуются генетическое консультирование с последующим наблюдением и выбор оптимальной терапевтической тактики в случае развития онкологического заболевания.
Цель. Оценить мутационный статус гена TP53 у больных de novo Ph-негативным (В- и Т-клеточным) и Ph-позитивным ОЛЛ, лечение которым проводили по протоколам российской исследовательской группы (ОЛЛ-2009, ОЛЛ-2012, ОЛЛ-2016) в ФГБУ «НМИЦ гематологии» МЗ и региональных клиниках, участниках многоцентровых исследований.
Материалы и методы. Исследование мутаций гена TP53 было выполнено 180 больным: de novo Ph-негативным В-клеточным ОЛЛ (n=89), Т-клеточным ОЛЛ (n=64), Ph-позитивным В-клеточным ОЛЛ (n=27). Группа с Ph-негативным ОЛЛ (В- и Т-клеточным) составила 153 больных (85 мужчин и 68 женщин от 16 до 72 лет, медиана возраста - 3о лет): 109 пациентов, включенные в исследование с ноября 2016 г. по январь 2020 г., получали лечение по протоколу ОЛЛ-2016, 44 больным лечение проводили по протоколу ОЛЛ-2009 с марта 2009 г. по август 2016 г. Медиана наблюдения составила 19 мес. (0,57-131,3). В группу с Ph-позитивным В-ОЛЛ включено 27 пациентов (17 женщин и 10 мужчин от 23 до 78 лет, медиана возраста 33 года), им проводили лечение по протоколам ОЛЛ-2009 (n=2) в сочетании с ингибиторами тирозинкиназ (ИТК) и ОЛЛ-2012 (n=23), двое больных получали терапию по другим протоколам. Медиана наблюдения составила 26 мес. (6,6-123,6).
Результаты. Мутации гена TP53 были обнаружены у 7,8% (n=14) больных de novo ОЛЛ. Для доказательства герминального характера мутаций и подтверждения СЛФ статус гена
ТР53 оценивали в ремиссии на образцах костного мозга и периферической крови, на образцах костного мозга после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) и в тканях некроветворного происхождения. Всего в анализ было включено 5 больных (из 14, у которых были обнаружены мутации), не опухолевый биологический материал которых был доступен для исследования. Терминальный характер мутаций, свидетельствующий о наличии СЛФ, был подтвержден у 4 из 5 (В-клеточный ОЛЛ п=3, Т-клеточный ОЛЛ п=1) обследованных пациентов. Достижение ремиссии на стандартных протоколах химиотерапии было констатировано у 3 из 4 больных. Рецидивов за период наблюдения диагностировано не было. Двое больных на настоящий момент живы и находятся в полной ремиссии заболевания. Судьба одной больной, которой была выполнена алло-ТГСК, неизвестна. Только в одном случае отмечалась рефрактерность к стандартной терапии, поэтому лечение по протоколу ОЛЛ-2009 было прекращено и был начат протокол лечения рефрактерных форм ОЛЛ (блинатумомаб в сочетании с сорафенибом) в связи с наличием мутации FLT3-ITD. Была достигнута ремиссия заболевания с последующим выполнением алло-ТГСК от неродственного частично совместимого донора. На сроке +6 месяцев было констатировано отторжение трансплантата, и была выполнена повторная алло-ТГСК от того же донора. Однако, через 9 месяцев пациент умер от инфекционных осложнений вследствие повторного отторжения трансплантата.
Выводы. Гематологические злокачественные новообразования в ряде случаев могут быть обусловлены наследственной предрасположенностью. Практическим выводом работы является наблюдение, что основная часть мутаций гена ТР53 у больных Р^негативным В-клеточным ОЛЛ носит терминальный характер и ассоциирована с синдромом Ли-Фраумени.
А.Н. Зельцер, С.В. Морданов, Ю.В. Шатохин, Е.В. Бурнашева, Е.А. Бурцева, А.А. Мацуга
КЛИНИЧЕСКИЙ СЛУЧАЙ РЕДКОЙ КОМПЛЕКСНОЙ ВАРИАНТНОЙ ХРОМОСОМНОЙ ТРАНСЛОКАЦИИ У ПАЦИЕНТА С ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Ростов-на-Дону
Введение. Хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ) - неопластическое заболевание, для которого специфические генетические и цитогенетические изменения играют важ-
ную роль в патогенезе, прогнозе и лечении заболевания. Клональная гемопоэтическая стволовая клетка, с которой ассоциируется ХМЛ, возникает из-за реципрокной трансло-
