CC BY
6
уменьшение их поперечных размеров вследствие вытеснения влаги из структуры геля. В ходе работы была проведена модификация таких гелей гиалуроновой кислотой, альгинатом натрия и ПЭГ-400. Наилучший вла-гоудерживающий эффект наблюдался после обработки коллагеновых гелей раствором альгината натрия, однако только гиалуроновая кислота могла быть введена в структуру геля до его желирования и не препятствовала процессам фибриллообразования.
Инъекционная форма альгинатного геля была получена путем смешивания раствора альгината натрия с раствором CaSO4 в глицерине. Такие гели имели удовлетворительное время желирования, не теряли влагу при сжатии и в течение длительного времени сохраняли тампонирующее действие.
Контрольные эксперименты in vivo на модели обожженного глаза показали существенное превосходство коллагеновых гелей в качестве тампонирующего офтальмологического средства. Несмотря на более слабые механические свойства, коллагеновые гели способствовали сохранению тканей глаза, а также имели выраженное противовоспалительное действие.
АНАЛИЗ СОВРЕМЕННЫХ ПУБЛИКАЦИЙ О НОВЫХ МЕТОДАХ ГЕННОЙ ТЕРАПИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПОСЛЕДСТВИЙ ИНФАРКТА МИОКАРДА
Э.Т. Дегирменджи, С.С. Хилько
Институт «Медицинская академия
им. С.И. Георгиевского», ФГАОУ ВО КФУ
им. В.И. Вернадского, Симферополь, Россия
e-mail: evelinadegirmenji@yandex.ru
Ключевые слова: инфаркт миокарда, метод AAV9, CircTRRAP, действие CDR132L
Введение. В основе последствий инфаркта миокарда (ИМ) лежит критическая потеря сократимости миокарда вследствие замены его поврежденного участка фибро-бластами. В настоящее время попытки восстановления поврежденных тканей предпринимаются учеными с использованием генной терапии.
Цель исследования. Провести анализ литературных данных, посвященных изучению новым методам генной терапии для лечения последствий ИМ.
Методы. Для достижения поставленной цели проведен систематический поиск и анализ резельтатов публикаций и онлайн ресурсов за период с 2020 по 2022год. Все публикации были индексированы из баз PubMed, e-Library, Scholar.
Результаты. Ученые исследовали [2], что CircTRRAP экспрессируется в огромном количестве после гипоксии в кардиомиоцитах. Его подавление способствует росту клеток и ингибирует апоптоз, воспаление, окислительный стресс в клетках.
По данным исследователей из Китая [3] сверхэкспрессия гена Ndufsl с помощью метода AAV9, облегчает сердечную дисфункцию и миокардиальный фиброз в фазе заживления инфаркта миокарда. Это лечение может существенно улучшить качество жизни пациентов.
Также определили [4], что сверхэкспрссия гена Snhg1 способствует пролиферации кардиомиоцитов, ангиогенезу и ингибирует апоптоз клеток после ИМ. Snhg1 способен образовать петлю положительной обратной связи с c-Myc, что позволяет поддержать активацию передачи сигналов PI3K/Akt.
Исследователи провели первое клиническое испытание [5], которое продемонстрировало ингибирующее действие CDR132L на mir-132. Результаты показали дозозависимое, статистически значимое снижение mir-132 в плазме. Испытание антисмыслового препарата обнадеживает, т. к. у пациентов с сердечной недостаточностью состояние улучшилось.
Проведенный анализ литературы подтверждает необходимость в дальнейших исследованиях по изучению действия генов в устранении последствий ИМ.
Выводы. Выявлена возможность геннотерапевтиче-ской коррекции постинфарктных изменений миокарда. Для оценки клинической и экономической эффективности генной терапии для лечения последствий инфаркта миокарда необходимо проведение экспериментальных и рандомизированных многоцентровых исследований.
Литература:
1. Yuan Zhang et al. Cardiovasc Ther (2022).
2. Qi B., Song, L., Hu, L.et al. Exp Mol Med (2022).
3. Mengsha Li et al. Theranostics (2021).
4. Yorg Taubel, Wilfried Hauke et al. European Heart Journal (2021).
ПЕРИНАТАЛЬНЫЕ МСК В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ ДЕТЕЙ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ПЕЧЕНИ
А.В. Дегтярева1, В.В. Зубков1, М.Х. Исаева1, Е.А. Филиппова1, М.Б. Албегова1, А.А. Буров1, И.В. Дубровина1, К.В. Горюнов1, Ю.А. Шевцова1, Д.Н. Силачев1, Г.Т. Сухих1
1 НМИЦ акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова, Москва, Россия
2 Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова, Москва, Россия
e-mail: a_degtyareva@oparina4.ru
Ключевые слова: мультипотентные мезенхимальные стро-мальные клетки, Криглер-Найяр, билиарная атрезия, печеночный холангит, гепатопротекция.
Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (МСК) являются альтернативным методом для лечения метаболических нарушений печени. В ряде работ было показано, что МСК избирательно накапливаются в печени при внутривенном введении [1], могут дифференцироваться в гепатоциты и участвовать в регенерации при различных патологиях [2].
В рамках терапии синдрома Криглера-Найяра I типа ребенку провели трансплантацию аллогенных МСК, выделенных из пуповины человека. Целью данного лечения являлось уменьшение продолжительности фототерапии при сдерживании уровня билирубина в сыворотке крови.
Фототерапия была начата ребенку в возрасте 5 сут жизни, когда уровень билирубина составил 340 мкмоль/л. Однако уровень билирубина продолжал варьировать от 329 до 407 мкмоль/л. В связи с чем, на 2 месяце жизни было принято решение о трансплантации МСК, на фоне которой отмечалось значительное снижение продолжительности фототерапии до 2 ч в день. В течение всего периода наблюдения, составляющего 2 года, ребенку провели 6 трансплантаций МСК. Отмечено, что эффект сохранялся в течение 2-3 мес. Побочных эффектов от трансплантации при этом выявлено не было.
МСК также показали свою эффективность для терапии последствий операции Касаи. Это процедура удаления поврежденных вследствие билиарной атрезии желчных протоков и создание анастомоза между печенью и двенадцатиперстной кишкой. Однако, операция связана с последствиями, наиболее распространенными из которых является печеночный холангит из-за инвазии микрофлоры кишечника.
У 2х детей с БА после процедуры Касаи развился тяжелый рецидивирующий холангит, который требовал пересадки печени в обоих случаях, в связи с нарастающей печеночной дисфункцией. На фоне терапии МСК в обоих случаях удалось остановить воспалительноый процесс и восстановить функциональную активность печени. На данный момент от начала терапии МСК дети находятся под наблюдением на протяжении 3 лет 9 месяцев и 2 лет 6 месяцев. На протяжении всего периода мониторинга у обоих пациентов не обнаружено рецидива холан-гита, нарушений в функции печени не выявлено, показания к проведению трансплантации печени отсутствуют.
Таким образом, МСК являются эффективным средством терапии для печеночных патологий.
Литература:
1. Gholamrezanezhad A., Mirpour S., Bagheri M. et al. Nucl. Med.
Biol. 2011. V. 38. P. 961.
2. Zhang, Z.D., Lin H., Shi M. et al. J. Gastroenterol. Hepatol. 2012.
V. 27 (Suppl-2). P. 112.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГЕНОМНЫХ И КЛЕТОЧНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ ДЛЯ ВЫЯСНЕНИЯ КЛИНИЧЕСКОГО ЗНАЧЕНИЯ МУТАЦИЙ В ГЕНАХ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРТРОФИЧЕСКОЙ КАРДИОМИОПАТИЕЙ
Е.В. Дементьева, С.В. Павлова, А.Е. Шульгина, К.А. Проняева, С.М. Закиян
ФГБНУ ФИЦ Институт цитологии и генетики Сибирского отделения РАН, Новосибирск, Россия
e-mail: dementyeva@bionet.nsc.ru
Ключевые слова: гипертрофическая кардиомиопатия, клиническое значение мутаций, индуцированные плюрипотент-ные стволовые клетки, система CRISPR/Cas, кардиомиоцит.
Внедрение методов секвенирования нового поколения в клиническую практику для проведения генетического анализа пациентов с гипертрофической кардиомиопа-тией (ГКМП) приводит к выявлению все большего числа мутаций в генах, ассоциированных с данным заболеванием. Однако не для всех обнаруженных генетических вариантов в настоящее время установлено их клиническое значение. Заключение о клиническом значении мутаций основывается преимущественно на популяционно-гене-тических данных и результатах анализа in silico. Новые перспективы для оценки клинического значения генетических вариантов открывают методы редактирования нуклеотидных последовательностей, в частности система CRISPR/Cas, которые позволяют вносить и/или исправлять исследуемые мутации. Редактирование индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) и их последующая направленная дифференцировка дают возможность получать кардиомиоциты, различающиеся наличием и/или отсутствием только одной мутации, и оценивать ее влияние на развитие заболевания.
В ходе секвенирования клинического экзома пациентов с ГКМП нами были обнаружены две мутации
с неясным клиническим значением: р.Аэп515Се! в гене MYBPC3 и р.М^659!!е в гене MYH7. Кардиомиоциты, полученные при направленной дифференцировке ИПСК пациентов с данными мутациями, демонстрировали увеличенный размер, нарушения в осцилляции ионов кальция и повышение уровня экспрессии регуляторных генов кар-диомиоцитов и генов саркомерных белков. Тем не менее остается неясным, являются ли обнаруженные признаки ГКМП следствием влияния мутаций р.Аэп515Се! в гене MYBPC3 и р.М^659!!е в гене MYH7. Мы прим. ли систему СП!8РП/Саз9 для внесения данных мутаций в ИПСК здорового донора. В докладе будут представлены результаты редактирования генов MYBPC3 и MYH7 в ИПСК здорового донора, характеристика линий ИПСК с внесенными мутациями и анализ кардиомиоцитов, полученных в результате дифференцировки ИПСК с внесенной в ген MYBPC3 мутацией р.Аэп515Се!. Работа поддержана грантом РНФ № 22-15-00271.
БРОНХИАЛЬНЫЕ И ЛЕГОЧНЫЕ ОРГАНОИДЫ ИЗ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК КАК МОДЕЛЬ ДЛЯ ПЕРСОНАЛИЗИРОВАННОЙ ДИАГНОСТИКИ И ТЕРАПИИ МУКОВИСЦИДОЗА
А.Г. Демченко1, Е.В. Кондратьева1, В.Ю. Табаков1, Е.Л. Амелина2, А.В. Лавров1, С.А. Смирнихина1
1 ФГБНУ Медико-генетический научный центр им. Н.П. Бочкова, Москва, Россия
2 ФГУ НИИ Пульмонологии ФМБА, Москва, Россия
e-mail: demchenkoann@yandex.ru
Ключевые слова: индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, органоиды, муковисцидоз, CFTR
Бронхиальные (БО) и легочные органоиды (ЛО), полученные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека (чИПСК), могут быть применены в персонализированной диагностики и терапии муковисцидоза. Муковисцидоз обусловлен мутациями в гене CFTR, и в более чем 50% вызван мутацией F508del. В результате мутаций нарушается транспорт ионов хлора и натрия через канал CFTR в клеточной мембране. Проводимость CFTR-канала in vitro оценивают форсколиновым тестом. Целью работы было получить и охарактеризовать бронхиальные и легочные органоиды из чИПСК здорового донора и донора с муковисцидозом с гомозиготной мутацией F508del, а также оценить пригодность полученных органоидов, для функционального теста проводимости CFTR-канала.
Дифференцировку чИПСК [1, 2] в БО и ЛО проводили по опубликованным протоколам с модификацией некоторых этапов [3, 4]. Характеризацию БО и ЛО на экспрессию маркеров клеток легкого проводили методами иммуноцитохимического окрашивания, проточной цитофлуориметрии и конфокальной микроскопии. Функциональный анализ CFTR-канала в органоидах проводили методом форсколин-индуцированным набуханием (ФИС). Изображения анализировали в программном обеспечении ilastik и CellProfiler.
Получены бронхиальные и легочные органоиды из чИПСК здорового донора и донора с гомозиготной мутацией F508del в гене CFTR. БО экспрессируют маркеры ба-зальных, бокаловидных и крупных секреторных клеток. ЛО, помимо вышеперечисленных маркеров, экспрессируют маркеры альвеолоцитов 1 и 2 типов. В обоих типах органоидов, полученных из чИПСК здорового донора, подтверждена экспрессия гена CFTR. При ФИС, БО и ЛО из чИПСК
