CC BY
9
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
67
МСК также показали свою эффективность для терапии последствий операции Касаи. Это процедура удаления поврежденных вследствие билиарной атрезии желчных протоков и создание анастомоза между печенью и двенадцатиперстной кишкой. Однако, операция связана с последствиями, наиболее распространенными из которых является печеночный холангит из-за инвазии микрофлоры кишечника.
У 2х детей с БА после процедуры Касаи развился тяжелый рецидивирующий холангит, который требовал пересадки печени в обоих случаях, в связи с нарастающей печеночной дисфункцией. На фоне терапии МСК в обоих случаях удалось остановить воспалительноый процесс и восстановить функциональную активность печени. На данный момент от начала терапии МСК дети находятся под наблюдением на протяжении 3 лет 9 месяцев и 2 лет 6 месяцев. На протяжении всего периода мониторинга у обоих пациентов не обнаружено рецидива холан-гита, нарушений в функции печени не выявлено, показания к проведению трансплантации печени отсутствуют.
Таким образом, МСК являются эффективным средством терапии для печеночных патологий.
Литература:
1. Gholamrezanezhad A., Mirpour S., Bagheri M. et al. Nucl. Med.
Biol. 2011. V. 38. P. 961.
2. Zhang, Z.D., Lin H., Shi M. et al. J. Gastroenterol. Hepatol. 2012.
V. 27 (Suppl-2). P. 112.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГЕНОМНЫХ И КЛЕТОЧНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ ДЛЯ ВЫЯСНЕНИЯ КЛИНИЧЕСКОГО ЗНАЧЕНИЯ МУТАЦИЙ В ГЕНАХ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРТРОФИЧЕСКОЙ КАРДИОМИОПАТИЕЙ
Е.В. Дементьева, С.В. Павлова, А.Е. Шульгина, К.А. Проняева, С.М. Закиян
ФГБНУ ФИЦ Институт цитологии и генетики Сибирского отделения РАН, Новосибирск, Россия
e-mail: dementyeva@bionet.nsc.ru
Ключевые слова: гипертрофическая кардиомиопатия, клиническое значение мутаций, индуцированные плюрипотент-ные стволовые клетки, система CRISPR/Cas, кардиомиоцит.
Внедрение методов секвенирования нового поколения в клиническую практику для проведения генетического анализа пациентов с гипертрофической кардиомиопа-тией (ГКМП) приводит к выявлению все большего числа мутаций в генах, ассоциированных с данным заболеванием. Однако не для всех обнаруженных генетических вариантов в настоящее время установлено их клиническое значение. Заключение о клиническом значении мутаций основывается преимущественно на популяционно-гене-тических данных и результатах анализа in silico. Новые перспективы для оценки клинического значения генетических вариантов открывают методы редактирования нуклеотидных последовательностей, в частности система CRISPR/Cas, которые позволяют вносить и/или исправлять исследуемые мутации. Редактирование индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) и их последующая направленная дифференцировка дают возможность получать кардиомиоциты, различающиеся наличием и/или отсутствием только одной мутации, и оценивать ее влияние на развитие заболевания.
В ходе секвенирования клинического экзома пациентов с ГКМП нами были обнаружены две мутации
с неясным клиническим значением: р.Аэп515Се! в гене MYBPC3 и р.М^659!!е в гене MYH7. Кардиомиоциты, полученные при направленной дифференцировке ИПСК пациентов с данными мутациями, демонстрировали увеличенный размер, нарушения в осцилляции ионов кальция и повышение уровня экспрессии регуляторных генов кар-диомиоцитов и генов саркомерных белков. Тем не менее остается неясным, являются ли обнаруженные признаки ГКМП следствием влияния мутаций р.Аэп515Се! в гене MYBPC3 и р.М^659!!е в гене MYH7. Мы прим. ли систему СП!8РП/Саз9 для внесения данных мутаций в ИПСК здорового донора. В докладе будут представлены результаты редактирования генов MYBPC3 и MYH7 в ИПСК здорового донора, характеристика линий ИПСК с внесенными мутациями и анализ кардиомиоцитов, полученных в результате дифференцировки ИПСК с внесенной в ген MYBPC3 мутацией р.Аэп515Се!. Работа поддержана грантом РНФ № 22-15-00271.
БРОНХИАЛЬНЫЕ И ЛЕГОЧНЫЕ ОРГАНОИДЫ ИЗ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК КАК МОДЕЛЬ ДЛЯ ПЕРСОНАЛИЗИРОВАННОЙ ДИАГНОСТИКИ И ТЕРАПИИ МУКОВИСЦИДОЗА
А.Г. Демченко1, Е.В. Кондратьева1, В.Ю. Табаков1, Е.Л. Амелина2, А.В. Лавров1, С.А. Смирнихина1
1 ФГБНУ Медико-генетический научный центр им. Н.П. Бочкова, Москва, Россия
2 ФГУ НИИ Пульмонологии ФМБА, Москва, Россия
e-mail: demchenkoann@yandex.ru
Ключевые слова: индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, органоиды, муковисцидоз, CFTR
Бронхиальные (БО) и легочные органоиды (ЛО), полученные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека (чИПСК), могут быть применены в персонализированной диагностики и терапии муковисцидоза. Муковисцидоз обусловлен мутациями в гене CFTR, и в более чем 50% вызван мутацией F508del. В результате мутаций нарушается транспорт ионов хлора и натрия через канал CFTR в клеточной мембране. Проводимость CFTR-канала in vitro оценивают форсколиновым тестом. Целью работы было получить и охарактеризовать бронхиальные и легочные органоиды из чИПСК здорового донора и донора с муковисцидозом с гомозиготной мутацией F508del, а также оценить пригодность полученных органоидов, для функционального теста проводимости CFTR-канала.
Дифференцировку чИПСК [1, 2] в БО и ЛО проводили по опубликованным протоколам с модификацией некоторых этапов [3, 4]. Характеризацию БО и ЛО на экспрессию маркеров клеток легкого проводили методами иммуноцитохимического окрашивания, проточной цитофлуориметрии и конфокальной микроскопии. Функциональный анализ CFTR-канала в органоидах проводили методом форсколин-индуцированным набуханием (ФИС). Изображения анализировали в программном обеспечении ilastik и CellProfiler.
Получены бронхиальные и легочные органоиды из чИПСК здорового донора и донора с гомозиготной мутацией F508del в гене CFTR. БО экспрессируют маркеры ба-зальных, бокаловидных и крупных секреторных клеток. ЛО, помимо вышеперечисленных маркеров, экспрессируют маркеры альвеолоцитов 1 и 2 типов. В обоих типах органоидов, полученных из чИПСК здорового донора, подтверждена экспрессия гена CFTR. При ФИС, БО и ЛО из чИПСК
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
