CC BY
8
192
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
в группах по шкалам KOOS и ВАШ (р > 0,05), и её отсутствие при анализе KSS (р > 0,05). В 1 группе клинические результаты значимо хуже по шкалам KOOS и ВАШ за счёт большего количества интраоперационных переломов в зоне остеотомии и меньшей величины валь-гусной коррекции. Однако, количество переломов и величина вальгусной коррекции не имеют статистически значимой разницы (р > 0,05). При введении SVF регенерация хрящевой ткани наблюдается статистически значительно чаще, чем с PRP (р > 0,05), что может увеличивать сроки выживаемости результатов ВТО.
АДАПТАЦИЯ ТЕХНОЛОГИИ
ТРАНС-СПЛАЙСИНГА ДЛЯ СОЗДАНИЯ
КЛЕТОЧНЫХ МОДЕЛЕЙ
А.Л. Примак1, Н.А. Басалова1 2,
М.Н. Скрябина1, А.Е. Толстолужинская1 2,
А.Ю. Ефименко1, 2, М.Н. Карагяур1, 2
1 Факультет фундаментальной медицины, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
2 Институт Регенеративной медицины, Медицинский научно-образовательный центр, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: primak.msu@mail.ru
Ключевые слова: клеточные модели, транс-сплайсинг,
пре-транс-РНК.
Экспериментальные клеточные модели являются удобным инструментом для установления функции отдельных молекул, механизмов работы сигнальных и метаболических каскадов, а также для выяснения патогенеза широкого спектра заболеваний и идентификации новых терапевтических мишеней. Генетические технологии (редактирование генома, «генная терапия» ex vivo и транс-сплайсинг) позволяют моделировать все более тонкие изменения в структуре генома и белков, и создавать модельные объекты, максимально приближенные к первичным клеткам.
Транс-сплайсинг представляет собой природный механизм сплайсинга нескольких пре-мРНК в единую зрелую мРНК. Данный механизм впервые был открыт у простейших рода Trypanosoma, которые с помощью данного механизма регулируют экспрессию собственных генов. К преимуществам данного подхода относятся небольшой размер генетической конструкции, кодирующей ПТР, высокая эффективность его доставки, а также высокая степень согласованности/конкордантности образования специфического продукта транс-сплайсинга с экспрессией целевого гена, что позволяет имитировать результат редактирования гена в его природном контексте при значительно большей эффективности. Технология транссплайсинга позволяет моделировать любые модификации кодирующей части целевых генов от точечных замен и замен отдельных экзонов до масштабных вставок и мечения целевых белков. В то же время, транс-сплайсинг по своей эффективности уступает цис-сплайсингу и нередко приводит к образованию сплайс форм мРНК, нехарактерных для физиологического сплайсинга, а, следовательно, к образованию новых не физиологичных форм белков.
Согласно данным литературы, оптимизация дизайна пре-транс-РНК (ПТР), дополнение его siRNA/shRNA к цис-формам РНК и новыми snRNA, направляющими процессы сплайсинга, позволяют значительно увеличить эффективность и специфичность механизма транс-сплайсинга. В данной работе нами была изучена возможность применения транс-сплайсинга для создания генетически
модифицированной линии клеток нейробластомы 1\1еиго2а, экспрессирующей изоформу рецептора урокиназного активатора плазминогена uPAR, неспособную взаимодействовать с белком внеклеточного матрикса витронек-тином. Мы предполагаем, что полученная клеточная модель может быть использована для изучения механизмов функционирования и внутриклеточной сигнализации Р1аиг в процессах нейритогенеза, навигации и роста нервного волокна. Для улучшения эффективности транс-сплайсинга нами была проведена оптимизация пре-транс-РНК.
Изучение механизмов транс-сплайсинга и его оптимизация может повысить эффективность создания клеточных моделей на основе трудно модифицируемых типов клеток, а также ключом к разработке новейших эффективных методов терапии/коррекции наследственных заболеваний, в том числе в рамках зрелого организма.
Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 22-15-00125.
МОДЕЛИРОВАНИЕ ГИПЕРТРОФИЧЕСКОЙ КАРДИОМИОПАТИЯ С ПОМОЩЬЮ НАПРАВЛЕННОЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ИПСК С МУТАЦИЕЙ P.ASN515DEL В ГЕНЕ MYBPC3 В КАРДИОМИОЦИТЫ IN VITRO
К.А. Проняева1, Л.Ш. Шаяхметова1 2, Е.В. Дементьева1, С.В. Павлова1
1 ФГБНУ ФИЦ Институт цитологии и генетики Сибирского отделения РАН, Новосибирск, Россия
2 Новосибирский национальный исследовательский государственный университет, Новосибирск, Россия
e-mail: ks_pronyaeva@mail.ru
Ключевые слова: гипертрофическая кардиомиопатия, клиническое значение мутаций, индуцированные плюрипотент-ные стволовые клетки, кардиомиоцит.
Гипертрофическая кардиомиопатия (ГКМП) является распространённой сердечно-сосудистой патологией, приводящей к прогрессирующей сердечной недостаточности, аритмиям, а также увеличивающей риск внезапной сердечной смерти. ГКМП характеризуется структурными изменениями миокарда, которые приводят к диастоличе-ским дисфункциям. Более 1000 различных мутаций в генах, в основном кодирующих саркомерные белки, могут быть ответственны за развитие наследственной формы данного заболевания. Однако не для всех выявленных мутаций доказана их способность вызывать ГКМП, а так же лишь для ограниченного их числа понятен механизм действия. Изучение взаимосвязи между мутациями в сар-комерных белках и нарушением структуры кардиомиоци-тов, а также их электрической стабильности ограничено сложностью получения образцов сердечной ткани.
Целью данного исследования ставилось создание клеточной модели гипетрофической кардиомиопатии с помощью направленной дифференцировки индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) с де-лецией p.Asn515del в гене MYBPC3 в кардиомиоциты.
Ранее в лаборатории были получены ИПСК пациента HCM14 (ICGi029-A, Европейский реестр стволовых клеток человека). Так же были получены изогенные линии с мутацией p.Asn515del в гене MYBPC3 в геноме условно здорового пациента К7(ICGi022-A). ИПСК трех линий пациента НСМ14, трех линий с внесёнными мутациями ^-515del, линии изогенного контроля К7 и условно здоровых пациентов К6 (ICGi021-A) и К9 были запущены
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
