Научная статья на тему 'Пептид KED нормализует экспрессию фактора Виллебранда в эндотелии сосудов при атеросклерозе и рестенозе'

Пептид KED нормализует экспрессию фактора Виллебранда в эндотелии сосудов при атеросклерозе и рестенозе Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
207
19
Читать
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Болотов И. И., Козлов К. Л.

Введение. Фактор Виллебранда (vWF) синтезируется в эндотелии и стимулирует тромбообразование. Фактор Виллебранда способствует прикреплению рецепторов тромбоцитов к коллагену и фибронектину сосудов, а также друг к другу и усиливает адгезию и агрегацию тромбоцитов. Повышенные уровни vWF являются индикатором повреждения эндотелия при сердечно-сосудистых заболеваниях, в том числе при атеросклерозе и рестенозе. Пептид KED успешно применяют при атеросклерозе в сочетании со стандартной терапией для улучшения мозгового кровообращения и при эректильной дисфункции. Несмотря на перспективы применения пептида KED при различной патологии сосудов, молекулярные аспекты его действия до сих пор не изучены. Цель работы. Изучение влияния пептида KED на экспрессию vWF в эндотелии сосудов в норме, при атеросклерозе и рестенозе. Материалы и методы исследования. Материал аорты без патологических изменений получен от эмбриона человека (21 неделя гестации) в НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта. Ткань аорты человека при атеросклерозе и рестенозе (диаметр 0,2 см, 4 фрагмента) получена при операции аортокоронарного шунтирования у пациентов пожилого возраста. Операции проводили в клинике сердечно-сосудистой хирургии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (Санкт-Петербург). Культуры эндотелиоцитов выращивали в среде, содержащей 87,5% M199, 10% эмбриональной бычьей сыворотки, 1,5% НЕРЕS, 1% PES, L-глутамин. Клетки культивировали до 3-го пассажа. Все культуры были разделены на группы: 1 контрольная (добавление физраствора в культуральную среду), 2 с добавлением пептида KED в концентрации 20 нг/мл. Синтез vWF возрастает под влиянием вазопрессина при повреждении эндотелия, ассоциированном с различными сердечно-сосудистыми заболеваниями, как было показано в исследовании Мontoro-Garc^a S. et al. (2014). В работе использовали первичные моноклональные антитела к vWF (1:200, Dako) и вторичные антитела, конъюгированные с флуорохромом Alexa Fluor 568 (1:1000, Abcam). Ядра клеток докрашивали Hoechst 33258 (Sigma). Конфокальную микроскопию клеток проводили в инвертированном микроскопе Olympus BX40. Для анализа результатов использовали программу «ВидеоТест-Морфология 5.2». В каждом случае анализировали 5 полей зрения при х200. Площадь экспрессии рассчитывали, как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражали в %. Статистическую обработку проводили в программе Statistica 7.0. Результаты исследования. Контрольное значение площади экспрессии vWF в культуре нормального эпителия составило 2,1±0,2%. В культуре эндотелия в норме экспрессия vWF под действием пептида KED не изменялась. В контрольных культурах эндотелия, полученных от пациентов с атеросклерозом и рестенозом, площадь экспрессии vWF была соответственно в 3,2 раза и 4,8 раза выше, чем в нормальном эндотелии. Это согласуется с данными литературы. Пептид KED способствовал уменьшению экспрессии vWF в культурах с атеросклерозом и рестенозом соответственно в 2,2 и 2,3 раза. Заключение. Пептид KED, снижая экспрессию фактора Виллебранда в эндотелии, повышенную при атеросклерозе и рестенозе, способствует снижению адгезии тромбоцитов и уменьшению вероятности образования атеросклеротических бляшек. Принимая во внимание эффективность этого трипептида у пациентов с атеросклеротическим поражением нижних конечностей, можно сделать вывод о перспективности его дальнейшего исследования при сердечно-сосудистых заболеваниях.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
Предварительный просмотр
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «Пептид KED нормализует экспрессию фактора Виллебранда в эндотелии сосудов при атеросклерозе и рестенозе»

Тезисы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ДИСЛИПИДЕМИЙ И АТЕРОСКЛЕРОЗА» с конкурсом молодых ученых

занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражали в %. Статистическую обработку данных проводили в программе Б1ай$йса 7.0.

Результаты исследования. В культуре нормального эндотелия экспрессия коннексина 37 составила 8,4±0,3%. Под действием пептида КБй площадь экспрессии достоверно не изменялась. При этом в контрольной культуре эндотелиоци-тов, полученной от пациентов с атеросклерозом, площадь экспрессии коннексина 37 была в 3,6 раза ниже, чем в нормальном эндотелии. Пептид КБР способствовал повышению

экспрессии коннексина 37 в 1,6 раза в культуре, пораженной атеросклерозом. В контрольной культуре эндотелия, взятого у пациента с рестенозом, площадь экспрессии коннексина 37 была в 6,2 раза ниже, чем в нормальном эндотелии. Под действием пептида КБй этот показатель возрастал в 2,3 раза.

Заключение. Одним из важнейших молекулярных аспектов вазопротекторного действия пептида КБй является его способность восстанавливать взаимодействие между эндотелиоцитами, нарушающееся при атеросклерозе и рестенозе.

ПЕПТИД KED НОРМАЛИЗУЕТ ЭКСПРЕССИЮ ФАКТОРА ВИЛЛЕБРАНДА В ЭНДОТЕЛИИ СОСУДОВ ПРИ АТЕРОСКЛЕРОЗЕ И РЕСТЕНОЗЕ

И.И. БОЛОТОВ, К.Л. КОЗЛОВ Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Фактор Виллебранда (vWF) синтезируется в эндотелии и стимулирует тромбообразование. Фактор Виллебранда способствует прикреплению рецепторов тромбоцитов к коллагену и фибронектину сосудов, а также друг к другу и усиливает адгезию и агрегацию тромбоцитов. Повышенные уровни vWF являются индикатором повреждения эндотелия при сердечно-сосудистых заболеваниях, в том числе при атеросклерозе и рестенозе. Пептид KED успешно применяют при атеросклерозе в сочетании со стандартной терапией для улучшения мозгового кровообращения и при эректильной дисфункции. Несмотря на перспективы применения пептида KED при различной патологии сосудов, молекулярные аспекты его действия до сих пор не изучены.

Цель работы. Изучение влияния пептида KED на экспрессию vWF в эндотелии сосудов в норме, при атеросклерозе и рестенозе.

Материалы и методы исследования. Материал аорты без патологических изменений получен от эмбриона человека (21 неделя гестации) в НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта. Ткань аорты человека при атеросклерозе и рестенозе (диаметр 0,2 см, 4 фрагмента) получена при операции аор-токоронарного шунтирования у пациентов пожилого возраста. Операции проводили в клинике сердечно-сосудистой хирургии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (Санкт-Петербург). Культуры эндотелиоци-тов выращивали в среде, содержащей 87,5% M199, 10% эмбриональной бычьей сыворотки, 1,5% НЕРЕБ, 1% PES, L-глутамин. Клетки культивировали до 3-го пассажа. Все культуры были разделены на группы: 1 - контрольная (добавление физраствора в культуральную среду), 2 -с добавлением пептида KED в концентрации 20 нг/мл. Синтез vWF возрастает под влиянием вазопрессина при повреждении эндотелия, ассоциированном с различ-

ными сердечно-сосудистыми заболеваниями, как было показано в исследовании Montoro-Garcia S. et al. (2014). В работе использовали первичные моноклональные антитела к vWF (1:200, Dako) и вторичные антитела, конъ-югированные с флуорохромом Alexa Fluor 568 (1:1000, Abcam). Ядра клеток докрашивали Hoechst 33258 (Sigma). Конфокальную микроскопию клеток проводили в инвертированном микроскопе Olympus BX40. Для анализа результатов использовали программу «ВидеоТест-Морфология 5.2». В каждом случае анализировали 5 полей зрения при х200. Площадь экспрессии рассчитывали, как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражали в %. Статистическую обработку проводили в программе Statistica 7.0.

Результаты исследования. Контрольное значение площади экспрессии vWF в культуре нормального эпителия составило 2,1±0,2%. В культуре эндотелия в норме экспрессия vWF под действием пептида KED не изменялась. В контрольных культурах эндотелия, полученных от пациентов с атеросклерозом и рестенозом, площадь экспрессии vWF была соответственно в 3,2 раза и 4,8 раза выше, чем в нормальном эндотелии. Это согласуется с данными литературы. Пептид KED способствовал уменьшению экспрессии vWF в культурах с атеросклерозом и рестенозом соответственно в 2,2 и 2,3 раза.

Заключение. Пептид KED, снижая экспрессию фактора Виллебранда в эндотелии, повышенную при атеросклерозе и рестенозе, способствует снижению адгезии тромбоцитов и уменьшению вероятности образования атеросклеротических бляшек. Принимая во внимание эффективность этого трипептида у пациентов с атеро-склеротическим поражением нижних конечностей, можно сделать вывод о перспективности его дальнейшего исследования при сердечно-сосудистых заболеваниях.

САХАРНЫЙ ДИАБЕТ 2-ГО ТИПА И ИШЕМИЧЕСКАЯ БОЛЕЗНЬ СЕРДЦА. БЕЗНАДЕЖНЫЙ СОЮЗ?

О.В. БУДНИКОВА

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук» «Научно-исследовательский институт

кардиологии», Томск, Россия

Одним из социально значимых заболеваний явля- ческие исследования показали, что сахарный диабет ется сахарный диабет 2-го типа (СД2). Крупные клини- повышает риск развития ССЗ: ишемической болезни

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.