CC BY
44
занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражали в %. Статистическую обработку данных проводили в программе Б1ай$йса 7.0.
Результаты исследования. В культуре нормального эндотелия экспрессия коннексина 37 составила 8,4±0,3%. Под действием пептида КБй площадь экспрессии достоверно не изменялась. При этом в контрольной культуре эндотелиоци-тов, полученной от пациентов с атеросклерозом, площадь экспрессии коннексина 37 была в 3,6 раза ниже, чем в нормальном эндотелии. Пептид КБР способствовал повышению
экспрессии коннексина 37 в 1,6 раза в культуре, пораженной атеросклерозом. В контрольной культуре эндотелия, взятого у пациента с рестенозом, площадь экспрессии коннексина 37 была в 6,2 раза ниже, чем в нормальном эндотелии. Под действием пептида КБй этот показатель возрастал в 2,3 раза.
Заключение. Одним из важнейших молекулярных аспектов вазопротекторного действия пептида КБй является его способность восстанавливать взаимодействие между эндотелиоцитами, нарушающееся при атеросклерозе и рестенозе.
ПЕПТИД KED НОРМАЛИЗУЕТ ЭКСПРЕССИЮ ФАКТОРА ВИЛЛЕБРАНДА В ЭНДОТЕЛИИ СОСУДОВ ПРИ АТЕРОСКЛЕРОЗЕ И РЕСТЕНОЗЕ
И.И. БОЛОТОВ, К.Л. КОЗЛОВ Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Фактор Виллебранда (vWF) синтезируется в эндотелии и стимулирует тромбообразование. Фактор Виллебранда способствует прикреплению рецепторов тромбоцитов к коллагену и фибронектину сосудов, а также друг к другу и усиливает адгезию и агрегацию тромбоцитов. Повышенные уровни vWF являются индикатором повреждения эндотелия при сердечно-сосудистых заболеваниях, в том числе при атеросклерозе и рестенозе. Пептид KED успешно применяют при атеросклерозе в сочетании со стандартной терапией для улучшения мозгового кровообращения и при эректильной дисфункции. Несмотря на перспективы применения пептида KED при различной патологии сосудов, молекулярные аспекты его действия до сих пор не изучены.
Цель работы. Изучение влияния пептида KED на экспрессию vWF в эндотелии сосудов в норме, при атеросклерозе и рестенозе.
Материалы и методы исследования. Материал аорты без патологических изменений получен от эмбриона человека (21 неделя гестации) в НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта. Ткань аорты человека при атеросклерозе и рестенозе (диаметр 0,2 см, 4 фрагмента) получена при операции аор-токоронарного шунтирования у пациентов пожилого возраста. Операции проводили в клинике сердечно-сосудистой хирургии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (Санкт-Петербург). Культуры эндотелиоци-тов выращивали в среде, содержащей 87,5% M199, 10% эмбриональной бычьей сыворотки, 1,5% НЕРЕБ, 1% PES, L-глутамин. Клетки культивировали до 3-го пассажа. Все культуры были разделены на группы: 1 - контрольная (добавление физраствора в культуральную среду), 2 -с добавлением пептида KED в концентрации 20 нг/мл. Синтез vWF возрастает под влиянием вазопрессина при повреждении эндотелия, ассоциированном с различ-
ными сердечно-сосудистыми заболеваниями, как было показано в исследовании Montoro-Garcia S. et al. (2014). В работе использовали первичные моноклональные антитела к vWF (1:200, Dako) и вторичные антитела, конъ-югированные с флуорохромом Alexa Fluor 568 (1:1000, Abcam). Ядра клеток докрашивали Hoechst 33258 (Sigma). Конфокальную микроскопию клеток проводили в инвертированном микроскопе Olympus BX40. Для анализа результатов использовали программу «ВидеоТест-Морфология 5.2». В каждом случае анализировали 5 полей зрения при х200. Площадь экспрессии рассчитывали, как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражали в %. Статистическую обработку проводили в программе Statistica 7.0.
Результаты исследования. Контрольное значение площади экспрессии vWF в культуре нормального эпителия составило 2,1±0,2%. В культуре эндотелия в норме экспрессия vWF под действием пептида KED не изменялась. В контрольных культурах эндотелия, полученных от пациентов с атеросклерозом и рестенозом, площадь экспрессии vWF была соответственно в 3,2 раза и 4,8 раза выше, чем в нормальном эндотелии. Это согласуется с данными литературы. Пептид KED способствовал уменьшению экспрессии vWF в культурах с атеросклерозом и рестенозом соответственно в 2,2 и 2,3 раза.
Заключение. Пептид KED, снижая экспрессию фактора Виллебранда в эндотелии, повышенную при атеросклерозе и рестенозе, способствует снижению адгезии тромбоцитов и уменьшению вероятности образования атеросклеротических бляшек. Принимая во внимание эффективность этого трипептида у пациентов с атеро-склеротическим поражением нижних конечностей, можно сделать вывод о перспективности его дальнейшего исследования при сердечно-сосудистых заболеваниях.
САХАРНЫЙ ДИАБЕТ 2-ГО ТИПА И ИШЕМИЧЕСКАЯ БОЛЕЗНЬ СЕРДЦА. БЕЗНАДЕЖНЫЙ СОЮЗ?
О.В. БУДНИКОВА
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук» «Научно-исследовательский институт
кардиологии», Томск, Россия
Одним из социально значимых заболеваний явля- ческие исследования показали, что сахарный диабет ется сахарный диабет 2-го типа (СД2). Крупные клини- повышает риск развития ССЗ: ишемической болезни
сердца (в т.ч. инфаркта миокарда), церебрального ише-мического инсульта, атеросклероза магистральных сосудов, тромбоза артерий и вен, хронической сердечной недостаточности и ухудшает прогноз при этих патологиях. Сократимость миокарда представляет базисную характеристику насосной функции сердца, и ее определение при патологии представляет значительный интерес. В литературе неоднократно описывается снижение сократительной активности миокарда на фоне СД2, однако последние исследования in vivo на ишемизированном миокарде экспериментальной модели вносят сомнения в неопровержимость этого утверждения.
Цель. Изучить сократительную активность изолированных фрагментов миокарда пациентов с ишеми-ческой болезнью сердца при её моновариантном развитии и ассоциации с сахарным диабетом 2-го типа.
Материал и методы. В исследование вошли 35 пациентов мужского пола (средний возраст 50,6± 2,4 лет) с подтвержденным диагнозом - хроническая ишемическая болезнь сердца (III-IV ФК по NYHA), стенокардия напряжения II-IV ФК, с мультисосудистым поражением коронарных артерий. Всем пациентам проводилась операция аортокоронарного шунтирования и они дали согласие на участие в исследовании. Критериями включения в основную группу было наличие верифицированного СД 2-го типа. Эту группу составили 21 пациент с СД2, стаж диабета составлял 1-3 года. Значение гликированного гемоглобина в группе составляло 7,6%. У 14 пациентов на основе клинико-лабораторных исследований не было диагностировано нарушение углеводного обмена, эти пациенты составили группу сравнения. Для исследования сократительной активности (изометрический режим) были использованы мышечные полоски из ушка правого предсердия, иссекаемого при подклю-
чении аппарата искуственного кровообращения. Диаметр мышечных полосок составил 0,5-0,7 мм. Исследуемые образцы, помещенные в оксигенированный раствор Кребса-Хензеляйта на установке Standard system for musde investigator SH Heidelberg Germany при 36,5°С стимулировали при базовой частоте 0,5 Гц. В качестве тестового воздействия на мышцы использовали тест «Post-rest». При его выполнении кратковременно, на 4-60 сек., прекращали электрическую стимуляцию мышц.
Результаты. При моновариантном развитии ИБС сила инотропного ответа на выполнении теста «Postrest» оставалась практически на уровне базовых значений. При этом увеличение длительности периода покоя не влияло на амплитуду инотропного ответа. У пациентов с ИБС, отягощенной СД, сокращение мышечных полосок после выполнения теста «Post-rest» превышало базовые значения инотропной активности. Кроме того, наблюдалась отчетливая зависимость увеличения амплитуды инотропного ответа от длительности периода покоя. Так, после 4 секундного периода покоя, потенциация инотропного ответа составляла 17%, а после 60 секундного периода покоя была статистически значимо(р<0,05) выше и составляла уже 62%.
Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о том, что при сочетанном развитии ИБС и СД2 на ранних стадиях развития патологии проявляется кардиопротективный эффект этих заболеваний. Улучшение сократимости проявляется в потенциа-ции инотропного ответа миокарда после периодов покоя, что является положительным свойством,ха-рактеризующим сократительный резерв миокарда. В предыдущих исследованиях была показана корреляция данного эффекта с сохранением уровня каль-ций-транспортирующих белков саркоплазматического ретикулума кардиомиоцитов.
ПОВЫШЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ТРОПОНИНА-1 В СЛЮНЕ ПАЦИЕНТОВ С ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ СЕРДЦА КОРРЕЛИРУЕТ СО СТАДИЕЙ РАЗВИТИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ
В.А. БУНИН \ К.Л. КОЗЛОВ \ Н.С. ЛИНЬКОВА Е.М. ПАЛЬЦЕВА 3 1Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии, Санкт-Петербург, Россия 2Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия 3Российский научный центр хирургии им. акад. Б.В. Петровского, Москва, Россия
Введение. Тропонины являются специфичными маркерами повреждения миокарда и предикторами развития сердечно-сосудистой патологии. В работе Kaess В.М. et а1. (2017) было показано, что в европейской популяции лиц среднего и пожилого возраста экспрессия тропонина-1 в ткани миокарда возрастает при атеросклерозе в сочетании с ишемической болезнью сердца (ИБС) в 99% случаев. При этом уровень экспрессии тропонина-1 зависит от пола и возраста пациентов. В настоящее время для диагностики и оценки эффективности лечения сердечно-сосудистой патологии предлагается использовать периферические ткани. В связи с этим целью работы стало изучение концентрации тропонина-1 в слюне лиц пожи-
лого возраста с ИБС на различных стадиях развития этого заболевания.
Материалы и методы исследования. Материал слюны у здоровых доноров (без сердечно-сосудистой патологии, 34 человека) и пациентов с ИБС 1-й (17 человек), 2-й (20 человек) и 3-й стадией ИБС (15 человек) был получен в Клинике сердечно-сосудистой хирургии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (Санкт-Петербург) от лиц пожилого возраста (68±2,3 года). Пациенты дали письменное согласие на участие в исследовании. Пробу слюны в количестве 5 мл забирали в утренние часы. За 1 час до забора материала пациенты не принимали пищу и не проводили гигиену полости рта. Непосредственно перед
