CC BY
138
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ♦ п атоморфология ♦
УДК 639.3.091: 616.98
Патолого-морфологические изменения и патогенез при весенней виремии карпов
Л.И. Грищенко, доктор ветеринарных наук ([email protected])
Федеральное государственное бюджетное учреждение высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (МГАВМиБ) (Москва).
Представлены патолого-анатомические и гистологические изменения при весенней виремии карпов (ВВК), раскрыты морфологические аспекты патогенеза, даны рекомендации по диагностике болезни.
Ключевые слова: весенняя виремия карпов, гистологические изменения, клинические признаки, патогенез, патолого-анатомические изменения, патомор-фологическая диагностика
Сокращения: ВВК (SVC) — весенняя виремия карпов (spring viremia of carp), Г-Э — гематоксилин-эозин, ИФА — иммуноферментный анализ, МФА — метод флуоресцирующих антител, ОТ-ПЦР — полимераз-ная цепная реакция с обратной транскрипцией
Введение
Весенняя виремия карпов (весенняя вирусная болезнь, SVC) — вирусная болезнь карповых рыб, вызываемая вирусом Rhabdovirus carpió рода Vesiculovirus; распространена в России, большинстве европейских стран, зарегистрирована в Северной и Южной Америке, Юго-Восточной Азии и наносит существенный ущерб рыбоводству. В настоящее время достаточно полно изучены морфологические и биологические свойства возбудителя, разработаны лабораторные методы диагностики, а также способы профилактики болезни. Однако ряд вопросов патогенного воздействия вируса на организм рыб остается не выясненным.
Цель исследований
Изучить патоморфологические изменения при ВВК и раскрыть основные стороны патогенеза болезни.
Материалы и методы
Материал собран в неблагополучных по ВВК рыбхозах Центрального региона России от естественно больных годовиков и двухлеток карпа на разных стадиях развития болезни. Проводили эпизоотологическое обследование неблагополучных прудов, анализ симптоматики, патолого-анатомических изменений, данных вирусологических и бактериологических исследований. Патматериал для гистологических исследований фиксировали в 5.. .10%-м растворе нейтрального формалина и в жидкости Карнуа.
Парафиновые срезы для обзорных исследований окрашивали Г-Э. Для уточнения сущности патологических процессов применяли специальные методики окраски: на соединительную ткань—по Ван Гизону, Маллори и хромотропом по Н.З. Слинченко; на жир — суданом III, на фибрин — по Н.З. Слинченко, на вирусные тельца-включения — йод-эозином по Трубиной.
Результаты
Эпизоотологические данные. Заболевание протекало в форме энзоотии и редко эпизоотии с охватом около 40 % особей и сопровождалось гибелью 20...40 % заболевших рыб в стаде. К ВВК наиболее восприимчивы карп, пестрый и белый толстолобики, белый амур. Тяжелее всех переболевали годовики и двухлетки карпа.
Вспышки болезни регистрировали в основном весной при температуре воды 10.17 0С. Заболевание возникало после пересадки годовиков из зимовальных прудов в нагульные, продолжалось 1.1,5 месяца и при повышении температуры воды до 20 0С постепенно прекращалось. Постоянно выделяли вирус из крови, печени, почек, селезенки и реже из мышечной ткани, головного мозга и других органов больных рыб.
Симптомы болезни и патолого-анатомические изменения. Заболевание проявлялось вначале в виде острой вспышки с ярко выраженными клинико-анатомически-ми признаками, затем переходило в стадию подострого и реже хронического течения и характеризовалось постепенным прекращением гибели рыб и ослаблением степени выраженности симптомов болезни.
Больные рыбы обычно скапливались на мелководных участках пруда, плавали по кругу или штопорообразно, переставали брать корм. При внешнем осмотре у них обнаруживали точечные или пятнистые покраснения на брюшке, в основании грудных и брюшных плавников, пучеглазие, очаговое или диффузное ерошение чешуи (ле-пидортоз), увеличение брюшка и его флюктуацию, гипер-
Рис. 3. Гистопрепарат. Скелетные мышцы, серозный Рис. 1. Карп с ВВК. Покраснения на коже, диффузное Рис. 2. Макропрепарат. Точечные кровоизлияния отек, слабая клеточная инфильтрация. ерошение чешуи на печени (стрелка), анемия жабр Окраска Г-Э, х200
Л.И. Грищенко
Рис. 4. Гистопрепарат. Скелетные мышцы: Рис. 5. Гистопрепарат. Печень: кровоизлияния Рис. 6. Гистопрепарат. Печень: обширный очаг фрагментарный некроз волокна (стрелка). и очаговый некроз паренхимы (стрелка). некроза паренхимы (стрелка). Окраска Г-Э, х400 Окраска Г-Э, х250 Окраска Г-Э, х250
гидратацию и размягчение скелетных мышц (рис. 1). У единичных рыб отмечали потемнение кожи, цианоз или анемию жабр. Ни разу не обнаружили язв на коже.
При вскрытии в брюшной полости отмечали скопление прозрачного, желтоватого, иногда с примесью крови серозного экссудата, отек серозных оболочек внутренних органов и брюшины. Печень была набухшая, бледная, дряблой консистенции, пятнисто гиперемирована, с наличием точечных кровоизлияний (рис. 2). Селезенка незначительно увеличена в объеме, темно-вишневого цвета, у единичных экземпляров встречались сероватые узелки. Почки обычно набухшие, дряблые, отечные. Кишечник пустой, нередко с признаками катара и точечными кровоизлияниями на слизистой.
Гистологические изменения. Основные микроскопические изменения были сосредоточены в коже, скелетных мышцах, паренхиматозных органах и гемопоэтической ткани, реже — в кишечнике, сердце и головном мозге.
В коже и скелетных мышцах при тяжелом течении болезни постоянно обнаруживали острый серозно-геморра-гический дерматит, который проявлялся отеком подкожной клетчатки и межмышечной соединительной ткани, диссоциацией мышечных волокон, отслоением эпидермиса, диапедезными кровоизлияниями с небольшим количеством лейкоцитарного инфильтрата. Многие мышечные волокна были в состоянии колликвационно-го некроза, проявляющегося фрагментарным распадом волокон с образованием в саркоплазме крупных пустот (рис. 3, 4). В случаях более легкого течения болезни некроз мышечных волокон был слабо выражен.
В печени в начальных стадиях болезни преобладали явления застойной гиперемии и периваскулярные лейкоцитарные инфильтраты, а затем развивались признаки острого гепатита, дистрофические и некротические изменения паренхимы. Они характеризовались застойной гиперемией си-нусоидов, фибриноидным перерождением сосудистых стенок, диапедезными мелко- или крупноочаговыми кровоизлияниями. Печеночные клетки в состоянии зернистой и гидропической дистрофии, рассеянного или очагового некроза; увеличены в размере, округлой или полигональной формы с признаками кариопикноза и плазмоцитоли-за. Нередко процесс заканчивался образованием разлитых или четко очерченных фокусов ареактивного некроза паренхимы (рис. 5, 6). Иногда отмечали дистрофию и некроз эпителия желчных протоков. При окраске срезов йод-эозином вирусные тельца-включения не обнаружены.
Селезенка была неравномерно кровенаполнена, в одних случаях нафарширована эритроцитами, в других малокровна. В ранних стадиях болезни отмечали гиперплазию лим-
фоидной и ретикулярной ткани; в случаях тяжелого течения, наоборот, — дистрофию и распад гемобластических элементов. По ходу тяжей поджелудочной железа в печени и селезенке наблюдали перигландулярный отек, инфильтрацию островков лейкоцитами, а также дистрофию и распад зимоцитов.
В почках постоянно обнаруживали тяжелые дистрофические и некротические изменения в гемопоэтической ткани и структурах мочевыделительной системы. Количество гемопоэтической ткани резко уменьшено, ткань опустошена за счет дистрофии и распада гемобластичес-ких элементов. Эпителий мочевых канальцев очагово отслоен от мембран, в состоянии зернистой дистрофии и некроза (рис. 7). В просвете канальцев зернистые цилиндры, а в отдельных из них некротический нефроз. У 40.. .50 % больных рыб ярко выражена гиалиново-капельная дистрофия эпителия средних отделов нефронов, которая хорошо выявляется в виде цитоплазматических эозино-фильных капель при окраске срезов йод- эозином, хромот-ропом по Н.З. Слинченко и немного хуже при окраске Г-Э (рис. 8). В сосудистых клубочках — серозный гломе-рулит, переходящий затем в продуктивную форму. В начальных стадиях и в случаях более легкого течения болезни на фоне слабо выраженных изменений в мочевых канальцах отмечали гиперплазию гемопоэтической ткани с преобладанием в ней гемобластических элементов.
В сердце преобладали признаки эпикардита и реже миокардита, выражающегося разрыхлением компактного слоя миокарда и утолщением эпикарда за счет воспалительного отека и инфильтрации его лейкоцитами (рис. 9).
В слизистой оболочке среднего отдела кишечника у 15.20 % рыб отмечено катаральное воспаление и очаговый некроз слизистой оболочки (рис. 10).
В головном мозге у единичных рыб отмечены застойная гиперемия сосудов мозгового вещества, периваскуляр-ный и перицеллюлярный отек, а также гиперхроматоз в отдельных нейронах (рис. 11).
Обсуждение результатов и заключение
Проведенные исследования показали, что при ВВК ведущее место занимает серозно-геморрагический дермато-миозит, вирусный гепатит и нефрозо-нефрит с выраженным альтеративным компонентом, что согласуется с более ранними данными литературы [1, 3, 4]. Применение комплекса методических приемов позволили нам выявить некоторые особенности проявления болезни и более глубоко изучить ее патогенез.
Нами впервые выявлены многочисленные эозинофиль-ные включения в цитоплазме эпителия мочевых каналь-
Патолого-морфологические изменения и патогенез при весенней виремии карпов
Рис. 10. Гистопрепарат. Кишечник: катаральный энтерит и очаговый некроз слизистой оболочки (стрелка). Окраска Г-Э, х 100
Рис. 7. Гистопрепарат. Почки: распад клеток Рис. 8. Гистопрепарат. Почки: гиалиново-капельная гемопоэтической ткани и некроз эпителия канальца. дистрофия эпителия мочевого канальца (стрелка). Окраска Г-Э, х250 Окраска йод-эозином, х750
цев, которые не описаны при других инфекциях рыб. В литературе имеется только одно сообщение об обнаружении гиалиноподобных масс в просвете канальцев при экспериментальном заражении карпов ВВК [5]. Поэтому мы, как и указанный автор, рассматриваем эти изменения как гиалиново-капельную дистрофию эпителия мочевых канальцев, характерную для данной инфекции.
Полученные результаты в сочетании с данными вирусологических исследований показывают, что основным патогенетическим фактором, обусловливающим структурные изменения при ВВК, является пантропное действие высоких концентраций данного вируса на клеточные элементы вышеуказанных органов. Вирус, проникая в кровь, разносится по всем органам и тканям и вызывает септицемию. Размножаясь в эндотелии сосудов, клетках гемопоэтической ткани почек и селезенки, а также в гепатоцитах, он вызывает тяжелые некротические изменения в поражаемых органах. Нарушения порозности сосудистых стенок микроциркуляторного русла за счет повреждения эдотелия, а по нашим данным, и фибриноидное перерождение стенок, приводят к экссудации, многочисленным кровоизлияниям, воспалительному отеку подкожной клетчатки и скелетных мышц, экзофтальму, брюшной водянке, асциту и перитониту. Дистрофические и некротические процессы в гемопоэтической ткани провоцируют развитие гемолитической анемии и иммунодефицита, что создает благоприятные условия для размножения вторичной микрофлоры и осложнению болезни бактериальной инфекцией.
В случаях более легкого течения ВВК выживание заболевших рыб обеспечивается за счет активизации защитных механизмов, выражающихся морфологически гиперплазией гемопоэтической ткани в почках и селезенке, что в конечном итоге приводит к формированию иммунитета, наличие которого при ВВК доказано эпизоото-логическими наблюдениями и экспериментально [2].
В целом, клинико-анатомическая картина при ВВК достаточно характерна и должна более широко использоваться при предварительной диагностике болезни. Наибольшее диагностическое значение имеют следующие патоморфологические изменения: дермато-миозит, брюшная водянка и серозный перитонит, ерошение чешуи (лепидортоз), экзофтальм, ярко выраженный геморраги-
}
Рис. 9. Гистопрепарат. Сердце: эпикардит (прямая скобка — эпикард) , кровоизлияние и клеточная инфильтрация эпикарда. Окраска Г-Э, х100
Рис. 11. Гистопрепарат. Продолговатый мозг: в отдельных местах периваскулярный и пери-целлюлярный отек (стрелки). Окраска Г-Э, х 200
ческии синдром, множественные кровоизлияния на коже и внутренних органах, очаговые некрозы в печени и почках, а также наличие гиалиново-капельной дистрофии в эпителии мочевых канальцев. Из эпизоотологических данных важное значение имеет сезонность болезни, а также восприимчивость к ней растительноядных рыб (толстолобика, белого амура).
Окончательный диагноз следует ставить на основании лабораторных исследований: выделения вируса из паренхиматозных органов (печени, почек и селезенки) и головного мозга с использованием перевиваемых культур клеток, а также экспрессных методов — МФА, ИФА, ОТ-ПЦР и др. Библиография
1. Рудиков, Н.И. Весенняя вирусная болезнь рыб / Н.И. Рудиков, Л.И. Грищенко, К.А. Лобунцов // Бюллетень ВНИИ экспериментальной ветеринарии. Болезни рыб и водная токсикология. — 1975. — Вып. 20. — С.16—19.
2. Рудиков, Н.И. Вирусы и вирусные болезни рыб / Рудиков Н.И. // Инфекционные болезни рыб. Итоги науки техники. Ихтиология. — М.: ВИНИТИ, 1985. — Т. 1. — С. 6-92.
3. Ahne, W. Spring viremia of carp (SVC): Review / W. Ahne, H.V. Bjoklund, S. Essbauer, N. Fijan // Disease of Aquatic organisms. — 2002. — V. 52. — P. 261-272.
4. Fijan, N. Spring viremia of carp and other Disease and Agents of Warm-water Fish / N Fijan // Fish Disease and Disorders.: Viral, Bacterial and Fundal Infections. — Cab. Internacional, 1999. — V. 3. — P. 177-244
6. Negele, R.D. Histhopathological changes in some organs of experimental infected carp fingerlings wish Rhab-dovirus carpio (sammery) / R.D. Negele // Bull. Off. Int. Epiz. — 1977. — V. 87. — N. 5-6. — Р. 449-450.
SUMMARY L.I. Grishenko
Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Biotechnology named after K.I. Skryabin (Moscow).
Pathomorphological Changes and Pathogenesis in Fish Infected by Spring Viremia of Carp. Pathologo-anatomical and histological changes of carp with spring viremia (SVC) are represented, the morphological aspects of pathogenesis are opened, recommendations regarding diagnostics of disease are given.
