CC BY
78
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ♦ Патологическая морфология ♦
УДК 619: 616.98:578.825.1
Гистологические изменения при герпесвирусной инфекции осетровых рыб
Л.И. Гоищенко1, доктор ветеринарных наук (ihtiopatolog@mail.ru), ЭЛ. Елеев1, соискатель (ruel@bk.ru), Е.А. Заботкина2, кандидат биологических наук (zabel@ibiw.yaroslavl.ru)
1 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии — МВА имени К.И. Скрябина» (ФГБОУ ВО МГАВМиБ — МВА им. К.И. Скрябина) (Москва).
2 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Институт биологии внутренних вод им. И.Д. Папанина» РАН (Борок).
В статье приведены гистологические изменения осетровых рыб при ГВИОС, раскрыты морфологические аспекты патогенеза.
Сокращения: ГВИОС — герпесвирусная инфекция осетров, Г-Э — гематоксилин и эозин, ИБВВ — институт биологии внутренних вод РАН, ВНИИВВиМ— Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии, SbSHV—sibe-rian sturgeon herpesvirus (герпесвирус сибирского осетра)
Введение
Впервые герпесвирус от осетровых рыб был выделен в 80-х годах XX в. в Северной Америке [8]. В России ГВИОС диагностирована в 2006 г. в ряде осетровых хозяйств; характеризуется высоким процентом заболеваемости и сопровождается гибелью разновозрастной молоди сибирского осетра. За прошедшие годы исследованы биологические, физико-химические, молекулярные свойства вируса, доказана его этиологическая роль в заболевании [4, 5, 7]. Однако патогенное действие вируса на организм осетровых рыб изучено недостаточно. Нами проведены опыты по экспериментальному воспроизведению болезни, подробно описана клинико-анатомическая картина, собран патологический материал для гистологических исследований [2, 3].
Цель исследований
Изучить гистологические изменения при герпесвирусной болезни осетровых рыб.
Материалы и методы
Исследования выполнены на кафедре мелкого животноводства ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, в ИБВВ и в ГНУ ВНИ-ИВВиМ.
Материалом служили сеголетки сибирского осетра (33 экз.), гибрида русского и сибирского осетров (20 экз.), зараженные герпесвирусом в лабораторных условиях,
jb -
о
и ZZrr
Рис. 1. Гистопрепарат. Кожа. Утол- Рис. 2. Гистопрепарат. Кожа. Очаги щение эпидермиса, крупные узелки гиперплазии эпидермиса. Окраска (бляшки) Окраска Г-Э. Ок. 7. об. 10 Г-Э. Ок. 7. об. 40
а также сеголетки (10 экз.) сибирского осетра, взятые из хозяйства, неблагополучного по ГВИОС.
Опыты по заражению рыб проводили в аквариумах методом ванн согласно методическим указаниям [6]. Для заражения использовали герпесвирус — 8Ь8ЫУ, штамм эк1/0406 и изолят 8176/0311, выделенные из покровных тканей больных осетров. Для реизоляции и определения титра вируса использовали постоянную линию клеток 880-2 и WSS-2. Кроме того, для определения локализации вируса в ИБВВ провели электронно-микроскопическое исследование проб органов от 5 экз. подопытных и 3 экз. контрольных рыб.
Всего гистологическим исследованиям подвергнут пат-материал, полученный от 63 экз. рыб. Материал фиксировали в 10%-м буферном растворе формалина. Готовили парафиновые и целлоидиновые срезы по общепринятой методике, окрашивали их Г-Э. При постановке опытов в аквариумах определяли содержание в воде кислорода, диоксида углерода, соединений азота и фосфора с помощью стандартных тестов.
Результаты
Заболевание воспроизведено во всех опытах, но тяжесть течения и проявления болезни зависела от вида и возраста подопытных рыб. Первые симптомы у сеголетков сибирского осетра возрастом до 2 мес наблюдали через 6.. .10 суток, у гибрида русского и сибирского осетров возрастом 6 мес—через 21 сутки. Заболеваемость и гибель составили: у сеголетков сибирского осетра — 100 %, у гибрида русского и сибирского — 25 %.
Клинические проявления. Симптомы болезни характеризовались нарушением поведения рыб и поражением наружных покровов. Больные рыбы отказывались от кор-
Рис. 3. Гистопрепарат. Кожа и мышцы. Гипертрофия слизистых клеток десквамация эпидермиса. Окраска Г-Э. Ок. 7, об. 40
Рис. 4. Гистопрепарат. Боковая жучка. Очаг десквамации эпидермиса. Окраска Г-Э. Ок. 7. об. 10
Гистологические изменения при герпесвирусной инфекции осетровых рыб
Рис. 5. Эпителиальная клетка эпидер- Рис. 6. Гистопрепарат. Печень. Дефор-
миса кожи, инфицированная SbSHV, мация, вакуольная дистрофия гепа-
под электронным микроскопом тоцитов. Окраска Г-Э. Ок. 7, об. 90 (капсиды указаны стрелками)
Рис 7.
Гистопрепарат. Почки. Гиалиново-капельная дистрофия эпителиальных клеток мочевых канальцев. Окраска Г-Э. Ок. 7, об. 90
ма, были истощены, плавали на боку и спине, приобретали в аквариуме вертикальное положение.
При внешнем осмотре отмечали гиперемию кожных покровов, точечные кровоизлияния, бледный налет на грудных, брюшных плавниках, бляшки (узелки) на хвостовом плавнике, некротические поражения плавников, изъязвления вершины жучек, выпячивание и покраснение ануса. При осложнении болезни сапролегниозом и флексибактериозом обнаруживали крупные очаги некроза на хвостовом стебле и плавниках, в которых выявляли микроскопически миксобактерии или гифы гриба из группы сапролегния.
Патолого-анатомические изменения. При вскрытии у больных рыб наблюдали следующие изменения: жабры гиперемированы, темно-красного цвета; на серозной оболочке брюшной полости точечные кровоизлияния; печень бледная, рыхлая, желчный пузырь переполнен желчью; селезенка со светлыми пятнами; почки бледные, истончены; желудок и кишечник без видимых изменений.
Гистологические изменения. У экспериментально зараженных рыб основные микроскопические изменения обнаружены в срезах кожи и плавников. Они проявлялись увеличением размера узелковых образований (бляшек) на коже в области хвостового стебля за счет гиперпластического разроста эпидермиса, состоящего из малодифферен-цированных эпителиальных клеток (рис 1, 2).
Узелки четко ограничены, в их центре содержится гомогенная масса, окруженная многослойным эпителием. Некоторые узелки слущиваются с образованием оголенных участков кожи. Слизистые клетки сильно переполнены слизью, увеличены в размере, видны разрывы наружной части оболочки и выделение слизи наружу (рис. 3).
Во многих местах наблюдали десквамацию и распад эпидермиса вплоть до оголения жучек (рис. 4), дер-матомиозит, проявляющийся воспалительным отеком, эритродиапедезом и инфильтрацией лейкоцитами подкожной клетчатки и мускулатуры. На плавниках обнаруживали гидропическую дистрофию, десквамацию и очаговый некроз эпидермиса.
При электронно-микроскопическом исследовании у экспериментально зараженных рыб выявлены капсиды вируса герпеса в ядрах эпителиальных клеток эпидермиса (рис. 5), а также обнаружена вакуолизация цитоплазмы клеток.
В печени — зернистая и вакуольная дистрофия гепа-тоцитов, выражающаяся их деформацией и увеличением размера, вакуолизацией цитоплазмы, в единичных гепатоцитах отмечен кариопикноз (рис. 6).
В почках вблизи клубочков выявлялись очаги гиперплазии гемопоэтической ткани. В ряде случаев четко выражена зернистая и гиалиново-капельная дистрофия эпителия мочевых канальцев, которая проявляется скоплением многочисленных эозинофильных капель в цитоплазме клеток (рис. 7). В других органах гистологические изменения были менее выражены или отсутствовали.
У спонтанно больных рыб микрокартина сходна с выше описанной, но она часто затушевана более выраженным серозно-геморрагическим дерматомиозитом, вызванным флексибактериозом или сапролегниозом, осложняющим основное заболевание [1].
Обсуждение и заключение
Проведенные исследования показывают, что герпесвирус-ная инфекция вызывает у осетровых рыб существенные патолого-анатомические и гистологические изменения в кожных покровах и во внутренних органах, то есть носит системный характер. В целом, микроскопическая картина при данной инфекции достаточно характерна. Она отличается различными поражениями кожи в виде увеличения размера и преобразования имеющихся «бляшек» в крупные гиперпластические очажки, слизистой дистрофии, очагового некроза и десквамации эпидермиса; дистрофическими и некротическими изменениями печени, а также четко выраженной гиалиново-капельной дистрофией нефроцитов. Однако при осложнении флексибак-териозом и сапролегниозом микрокартина может затушевываться характерными для них изменениями. Поэтому окончательный диагноз на ГВИОС должен подтверждаться данными лабораторных вирусологических исследований. Полученные результаты позволяют рассматривать ГВИОС как самостоятельную нозологическую единицу и могут быть использованы как для ее клинической и пато-лого-морфологической диагностики, так и для расшифровки патогенеза болезни. Библиография
1. Грищенко, Л.И. Патолого-морфологические изменения при флексибактериозе осетровых рыб / Грищенко Л.И., Елеев Э.Л. // Расширенные материалы IV международной конференции «Проблемы иммунологии, патологии, охраны здоровья рыб и других гидробионтов». — Борок-Москва, 24-27 сентября, 2015. — с. 388-393.
2. Елеев, Э.Л. Патоморфологические изменения при герпесвирусной инфекции осетровых рыб / Э.Л. Елеев, Л.И. Грищенко, Е.А. Заботкина // Расширенные материалы IV международной конференции «Проблемы иммунологии, патологии, охраны здоровья рыб и других гидробионтов». — Борок-Москва, 24-27 сентября, 2015. — с. 512-516.
3. Елеев, Э.Л. Клинические признаки и патолого-анатомические изменения при экспериментальной герпесвирусной инфекции гибрида русского (Acipenser gueldenstaedtii Brandt) и сибирского (Acipenser baerii) осетров / Э.Л. Елеев, Л.И. Грищенко и др. // РВЖ. СХЖ. — 2014. — №1. — С.19-21.
4. Щелкунов, И.С. Герпесвирусная болезнь осетровых рыб в России / И.С. Щелкунов, Т.И. Щелкунова, А.И. Щелкунов и др. // РВЖ. СХЖ. — 2007. — №1. — С.10-12.
5. Щелкунов, А.И. Герпесвирусная болезнь сибирского осетра / А.И. Щелкунов, И.С. Щелкунов // Ветеринария, — 2010. — №1. — С.18 ?21
6. Щелкунов, И.С. Методические рекомендации по диагностике герпесвирусной болезни сибирского осетра / И.С. Щелкунов, А.И. Щелкунов, Т.И. Щелкунова, В.И. Балышева. — М., 2009. — 10 с.
7. Shchelkunov, I.S. First detection of a viral agent causing disease in farmed sturgeon in Russia / I.S. Shchelkunov, T.I. Shchelkunova, Y.P. Kolbassova et al. // Dis. Aquat. Org. — 2009. — Vol. 86. — No. 3. — P. 193?203.
8. Watson, L.R. Characteristics and pathogenicity of a novel herpesvirus isolated from adult and subadult white sturgeon Acipenser transmontanus / L.R. Watson, S.C. Yun, J.M. Groff, R.P. Hedrick // Dis. Aquat. Org. — 1995. — Vol. 22. — P. 199-210.
SUMMARY
L.I. Grishenko1, E.L. Eleev1, E.A. Zabotkina2
1 Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Biotechnology — MVA named after K.I. Scryabin (FGBOU VO MGAVMIB — MVA named after K.I. Scryabin) (Moscow).
2 Institut for Biology of Inland Waters named after I.D. Papanin (Borok).
Histological Changes in Sturgeon Fishes Infected by Herpes Virus. Histological changes of sturgeon fishes with herpes viral infection are represented in the article, the morphological aspects of pathogenesis are opened.
