ПАТОГЕНЕЗ И ДИАГНОСТИКА ИММУНОПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ: Аутоиммунные заболевания Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Медицинская Иммунология 2004, Т. 6, №3-4 © 2004, СПб РО РААКИ

ПАТОГЕНЕЗ И ДИАГНОСТИКА ИММУНОПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ

АУТОИММУННЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ

АУТОИММУННЫЕ РЕАКЦИИ ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПАРОДОНТА У СПОРТСМЕНОВ

Антонова И.Н.. Косицкая Л.С., Розанов Н.Н.

СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия; НИИ экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург, Россия

Воспалительные заболевания пародонта (ВЗП) тесно связаны с местными аутоиммунными процессами в ротовой полости (Орехова Л.Ю., 1997). Известно, что у спортсменов в период интенсивных тренировок, свойственных современному спорту, возрастает число ВЗП вследствие снижения местной иммунной защиты. Остается неясным вопрос о роли аутоиммунных процессов при развитии ВЗП.

Цель настоящего исследования - определить показатели развития аутоиммунных реакций при воспалительных заболеваниях пародонта у спортсменов.

Обследовано 14 высококвалифицированных спортсменов (мастеров спорта), имеющих хронический генерализованный гингивит. У 6 спортсменов были установлены явления перетренированное™. Определяли появление в слюне обследуемых антигена десны как показатель деструкции этой ткани, антитела к этому антигену (в тесте РТПГА и РПГА), циркулирующие иммунные комплексы (осаждение ПЭГ), уровень субпопуляций лимфоцитов, контролирующих иммунные реакции (ИФА).

Результаты: в ротовой жидкости спортсменов, больных ВЗП, обнаружен антиген, свойственный ткани пародонта, и антитела к этому антигену. У спортсменов в состоянии перетренированности уровень антигена был выше, чем в сравниваемой группе (5,2±1,0 ступени против 2,6±1,0 ступени; р<0,05). Однако частота и уровень аутоантител и ЦИК были снижены, составляя 2,4±0,5 титра против 6,0±2,0 титра и 0,01±0,004 ЕД и 0,02±0,005 ЕД (р<0,05; 1=1,66).

Это показывает, что при перетренированности деструктивные процессы в пародонте выражены больше, а иммунный ответ на аутоантигены снижен. Указанное явление может быть обусловлено уменьшением содержания в крови Т-лимфоцитов (СБЗ^) и повышением числа СБ95+-лимфоцитов, регулирующих развитие аутоиммунных процессов. Вместе с тем, при перетренированности сохраняются признаки воспалительной реакции - тенденция к повышению уровня СБ25+-лимфоцитов (32,1±3,9% против 26,3±2,19 и 24,1± 1,5 в контроле), и также имеет место существенный подъем относительного числа естественных киллеров (СБ16+ - с 16,0±2,3% в контроле до 32,0±2,5% при перетренированности).

Представленные данные показывают, что перетрени-рованиость негативно сказывается на состоянии иммун-

ной системы. Можно полагать, что местная аутоиммунная реакция, в том числе при перетренированности, носит защитный характер.

К ВОПРОСУ О ДИАГНОСТИЧЕСКОМ ЗНАЧЕНИИ ДЕТЕКЦИИ АУТОАНТИТЕЛ

Базарный В.В.. Амон Е.П., Афонькина Н.С., Бердюгина О.В., Лесняк О.М., Петрович Н.С.

Уральская государственная медицинская академия, Свердловская областная клиническая больница № 1, Екатеринбургский консультативно -диагностический центр, Россия

Выявление аутоантител является, как известно, одним из лабораторных признаков аутоиммунного процесса. Однако не все авторы признают высокую клиническую ценность данного факта. С этой целью нами были определены уровень «носительства» аутоантител среди здоровых лиц и диагностическое значение определения некоторых аутоантител при различных заболеваниях (системная красная волчанка, аутоиммунный тиреоидит, аутоиммунный гепатит, ревматоидный артрит с явлениями системного васкулита). Клинический диагноз в каждом случае был установлен на основании стандартных критериев.

Всего обследовано 158 пациентов и 23 практически здоровых донора. Определяли следующий набор аутоантител - антинуклеарные, антинейтрофильные цитоплазматические, антитиреоидные, антикардиолипиновые методом твердофазного гетерогенного ИФА.

Уровень носительства аутоантител среди здоровых составил от 0% (антитела к нативной ДНК и ЛЫСА) до 8% (антитела к денатурированной ДНК). Наибольшее число «серопозитивных» лиц выявлено в группе женщин старше 50 лет. Наличие и титр аутоантител у пациентов в различных группах зависели от нозологической формы и характеризовались определенной специфичностью. Кроме того, нами установлена ассоциация отдельных антител с нарушениями коагуляционного гемостаза (антинейтрофильные цитоплазматические), гестозом (анти-ТПО у эутиреоидных женщин) и активностью воспалительного процесса иммунного генеза. Информативной представляется детекция антител не только в крови, но и в выпотных жидкостях.

Клиническое значение отдельных видов аутоантител довольно хорошо охарактеризовано для пациентов с конкретными аутоиммунными расстройствами, что находит отражение в показателе диагностической чувствительности. Нами на основании полученных данных были рассчитаны показатели диагностической специфичности, которые составили в различных группах 65 - 95% для различных видов антител.

Таким образом, «носительство» аутоантител различной специфичности достаточно распространено в популяции. Вероятно, это отражает участие аутоиммунных механизмов в поддержании антигенного гомеостаза. Вместе с тем, аутоантитела являются достаточно специфичным маркером аутоагрессивных заболеваний, хотя степень этой специфичности различна. Установлена связь между наличием аутоантител и некоторыми клинико-патогенетическими особенностями течения патологического процесса.

ФАКТОР НЕКРОЗА ОПУХОЛИ-а ПРИ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

Батян Г.М.. Бурская Е.В.

Белорусская медицинская академия последипломного образования, Минск, Беларусь

Фактор некроза опухоли-ос (TNF-a) играет ключевую роль в развитии аутоиммунных заболеваний, вовлекаясь в процессы деструкции хрящевой и костной ткани при ювенальном ревматоидном артрите (ЮРА), в процессы моделирования соединительной ткани при системной склеродермии (ССД), влияя на степень активности и прогрессирования системной красной волчанки (СКВ).

Цель работы: изучить продукцию TNF-a мононукле-арами периферической крови (МПК) при ЮРА, ССД и СКВ у детей.

Материалы и методы. Обследовано 32 ребенка с диагнозом СКВ, 54 ребенка с ЮРА и 29 детей с диагнозом ССД. Контрольную группу составили 70 практически здоровых детей в возрасте от 4-х до 18 лет.

Иммунологическое исследование включало определение спонтанной и индуцированной митогенами продукции TNF-a. В качестве стимулятора использовали липо-полисахарид (ЛПС) в конечной концентрации 5 мкг/мл («Sigma», L 4524, ФРГ).

Определение концентрации TNF-a в полученных супернатантах и сыворотках крови обследованных детей проводилось иммуноферментным методом с использованием диагностических наборов IMMUNOTECH. Исследуемые образцы инкубировались в лунках микропланшета, покрытых моноклональными антителами к TNF-a. Детекция результатов проводилась на многоканальном фотометре «Labsystems» (Финляндия) при длине волны 405 или 450 нм. Чувствительность тест-системы составила 10 пг/мл.

Результаты. В сыворотке детей, больных ССД, TNF-а не обнаруживался в 100% случаев, при аналогичном показателе в группе здоровых детей и детей с СКВ 44,1 и 41,6% соответственно. Кроме того, в группе детей с ССД установлено резкое снижение спонтанной и индуцированной продукции TNF-a по сравнению с контролем более чем в 5 раз. Достоверная корреляционная связь (г=0,97, р<0,05) между продукцией интерлейкина-ip и TNF-a МПК, установленная у детей с ССД, свидетельствует о дисбалансе монокинов при данном заболевании.

Аналогичный характер выявленных изменений в продукции TNF-a установлен и при СКВ, однако в меньшей степени. Достоверное снижение изучаемого показателя наблюдалось при анализе индуцированной продукции (93,1+34,0 пг/мл р<0,05), причем отмечалось угнетение митоген-индуцированной продукции по сравнению со спонтанной.

При ЮРА выявлено достоверное увеличение спонтанной продукции ТОТ-а в супернатантах культур клеток периферической крови по сравнению с контролем.

Таким образом, при ССД установлены значительные изменения в продукции ТОТ-а МПК, характеризующиеся достоверным снижением как спонтанной, так и мито-ген-индуцированной продукции ТЫР-а. При СКВ четко прослеживается снижение индуцибелыюй продукции ТОТ-а, тогда как при ЮРА показатель спонтанной продукции достоверно увеличен.

Заключение. Выявленные изменения, указывающие на дисбаланс цитокиновой сети при аутоиммунных заболеваниях, могут быть использованы в качестве дополнительных иммунологических критериев их ранней диагностики.

СОСТОЯНИЕ МЕТАБОЛИЗМА И ФЕНОТИПИЧЕСКИЙ СОСТАВ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ У ЖЕНЩИН БОЛЬНЫХ АУТОИММУННЫМ ТИРЕОИДИТОМ

Белоусова С.В.. Кадричева С.Г., Савченко А.А., Манчук В.Т.

ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия

Аутоиммунный тиреоидит (АИТ) является классическим органоспецифическим аутоиммунным заболеванием. В патогенезе АИТ взаимодействуют генетические и сре-довые факторы. Предрасположенность к аутоиммунной реакции на тиреоидные антигены обусловлена генетической недостаточностью специфических Т-супрессоров. Ослабление ограничивающего действия этих клеток на активность специфических аутореактивных Т-хелперов сопровождается продукцией В-лимфоцитами антитиреоид-ных аутоантител и реализацией антитиреоидных эффектов цитотоксических Т-клеток. Таким образом, в реализации генетической предрасположенности основная роль принадлежит функциональной активности иммуноцитов. В свою очередь, уровень функциональных проявлений лимфоцитов определяется метаболической системой клеток. В связи с этим целью работы является выявить особенности фенотипического состава и метаболизма лимфоцитов крови больных аутоиммунным тиреоидитом.

Обследовано 70 женщин, больных АИТ, и 60 относительно здоровых в возрасте 20-45 лет. Диагноз устанавливался на основании клинических данных, результатов гормонального анализа, наличия антител к ткани щитовидной железы и ультразвукового обследования железы.

Определение фенотипического состава лимфоцитов проводили методом непрямой иммунофлуоресценции с помощью моноклональных антител (ООО «Сорбент», г.Москва). Для дополнительной характеристики Т-кле-точпого звена иммунной системы вычисляли иммуноре-гуляторный индекс (С04+/СБ8Т) и индекс активации Т-лимфоцитов (НЬА-ВК+/С019Т).

Определение активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах проводили биолюминесцентными методами. Определяли активность следующих ферментов: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ), аэробная и анаэробная реакции лактатдегидрогеназы (ЛДГ), НАД+-и НАДН-зависимые реакции малатдегидрогеназы (МДГ и НАДНМДГ), малик-фермент (НАДФМДГ), НАДФ+-и НАДФН-зависимые реакции глутаматдегидрогеназы (НАДФГДГ и НАДФНГДГ), НАД+- и НАДН-зависимые

реакции глутаматдегидрогеназы (НАДГДГ и НАДНГДГ), НАД- и НАДФ-зависимых изоцитратдегидрогсназ (НА-ДИЦДГ и НАДФИЦДГ) и глутатиоиредуктазы (ГР). Активность дегидрогеназ выражали в ферментативных единицах на 104 клеток (IE = 1 мкмоль/мин).

Достоверность различий между независимыми выборками оценивали по непараметрическому критерию Манна-Уитни.

При исследовании фенотипического состава лимфоцитов крови установлено, что у больных АИТ снижено относительное содержание CD8+-, HLA-DR+-iuieTOK, а также относительное и абсолютное количество CD19+-лимфоцитов. При этом у пациентов с АИТ повышается величины иммупорегуляторного индекса, индекса активации Т-лимфоцитов. У больных женщин повышение величины индекса активации Т-лимфоцитов характеризует повышение относительного содержания активированных Т-лимфоцитов при снижении уровня В-лимфо-цитов. Кроме того, снижение содержания клеточной фракции Т-супрессоров/киллеров соответственно привело к повышению величины иммупорегуляторного индекса. Следовательно, при относительно невыраженном изменении фенотипического состава лимфоцитов крови у больных отмечается активация Т-клеточного иммунитета. Можно предположить, что подобное состояние клеточного звена иммунной системы определяется аутоиммунными процессами при отсутствии изменений со стороны тиреоидного статуса.

Обнаружено, что в лимфоцитах женщин с АИТ снижены уровни активности анаэробной и аэробной реакций ЛДГ, МДГ при повышении активности НАДФГДГ. Выявленные изменения активности анаэробной и аэробной реакций ЛДГ указывают на сдвиг реакции в сторону образования лактата из пирувата. В данной реакции происходит окисление НАДН в НАД+, необходимого для непрерывного протекания реакций гликолиза. В то же время уменьшается количество пирувата, превращающегося в ацетил-коэнзим А, который является субстратом цикла трикарбоновых кислот в митохондриях. По-видимому, этим вызвано снижение активности одного из ключевых ферментов цикла Кребса - МДГ, что характеризует снижение скорости протекания реакций трикарбонового цикла в целом. Таким образом, в лимфоцитах женщин с АИТ выявлено только подавление анаэробных и аэробных окислительных процессов. Вероятно, это свидетельствует об истощении субстратного пула в лимфоцитах больных АИТ либо о недостаточной стимуляции метаболизма клеток извне.

АНТИГЕН МИОКАРДА И АУТОИММУННАЯ РЕАКЦИЯ НА НЕГО ПРИ СТРЕССОРНОЙ КАРДИОМИОПАТИИ У СПОРТСМЕНОВ

Василенко B.C.. Левин М.Я., Антонова И.Н., Косицкая Л.С.

Государственная педиатрическая медицинская академия, Государственный медицинский университет им. И.П. Павлова, НИИ экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург, Россия

При деструкции тканей человека в кровь могут поступать антигены поврежденных органов. В частности, при патологии сердца в крови может быть обнаружен анти-

ген миокарда, а также миоглобин и ферменты, что может служить диагностическим критерием повреждения миокарда. Выход изолированного антигена из клеток и тканей может вызывать аутоиммунную реакцию. Повышению аутоантигеиносги может способствовать денатурация антигена при развитии повреждения или наличии патологического процесса.

Физические нагрузки, свойственные современному спорту, если они чрезмерны, могут сопровождаться повреждением миокарда, приводящим к его деструкции.

Цель настоящего исследования: установить возможность обнаружения в крови спортсменов антигена миокарда, связи обнаружения антигена с ЭКГ-ггризнаками стрессорной кардиомионатии и выявлением аутоиммунной реакции на антигены миокарда.

Обследовано 80 спортсменов вышей квалификации (мастера спорта) в ходе интенсивного тренировочного и соревновательного периода.

В крови обследуемых определяли присутствие тканевого антигена миокарда, антител к ним методом РТПГА и РПГА, сенсибилизацию лимфоцитов к антигену миокарда в РТМЛ в плоских пилоскопических капиллярах в присутствии антигена (ИТМ,%).

Установлено, что в 63,2% случаев в крови спортсменов может быть обнаружен антиген сердечной мышцы, в 74,3% случаев антиген был обнаружен при наличии ЭКГ-признаков стрессорной кардиомионатии, при отсутствии нарушений ЭКГ антиген был обнаружен в 53,4% случаев. Это может указывать, что повреждения миокарда у спортсменов могут возникать ранее изменений реполяризации на ЭКГ или на ЭКГ не выявляться.

В 39,5% случаев в крови спортсменов были обнаружены антитела к миокарду. При наличии ЭКГ-изменепий антитела обнаружены чаще, чем при их отсутствии - в 47,1% случаев против 33,3%. В 30,7% случаев у спортсменов имела место клеточная сенсибилизация на присутствие антигена миокарда. Однако при наличии стрессорной кардиомионатии по ЭКГ-признакам сенсибилизация была выявлена реже - 21,4 против 37,8% случаев. Можно полагать, что клеточная иммунореактивность при стрессорной кардиомиопатии снижена, что подтверждается снижением способности иммунокомпстентных клеток спортсменов со стессорной кардиомиопатией реагировать на ФГА, установленную при дополнительном исследовании в РТМЛ.

Полученные данные показывают, что в крови высококвалифицированных спортсменов в ходе интенсивных тренировочных и соревновательных нагрузок может быть обнаружен антиген поврежденного миокарда. Наличие антигена коррелирует с выявленными ЭКГ-при-знаками стрессорной кардиомиопатии, однако антиген может быть обнаружен и при отсутствии изменений, выявляемых по ЭКГ. Это показывает, что повреждение миокарда у спортсменов выявляется до клинических ЭКГ-проявлений и этот критерий может быть использован в качестве дополнительного теста деструктивных процессов в миокарде.

Выявление признаков гуморальной и клеточной аутоиммунной реакции на антиген миокарда свидетельствует об аутоантигенности тканей поврежденного миокарда. Выявление антигена миокарда при интенсивных тренировках в РТПГА может быть использовано для регламентации уровня физических нагрузок и профилактики срес-сорной кардиомионатии у спортсменов.

ИССЛЕДОВАНИЕ УРОВНЕЙ АНТИТИРЕОИДНЫХ АНТИТЕЛ У ПАЦИЕНТОВ С РЕЦИДИВОМ ДИФФУЗНОГО ТОКСИЧЕСКОГО ЗОБА И СОПУТСТВУЮЩЕЙ ЭНДОКРИННОЙ ОФТАЛЬМОПАТИЕЙ

Гарбуз Н.А.. Дрыгина Л.Б., Алхутова Н.А., Калинина Н.М.

Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины МЧС России, Санкт- Петербург, Россия

Введение. Существует предположение, что причиной возникновения эндокринной офтальмопатии (ЭОП) при диффузном токсическом зобе (ДТЗ) является перекрестное реагирование антител к компонентам ткани щитовидной железы с тканями орбиты. Действительно, в фиб-робластах орбиты больных с ДТЗ и ЭОП установлено наличие РНК, кодирующей внеклеточную часть рецептора тиреотропного гормона (ТТГ). При обследовании у таких пациентов отмечается высокий уровень антител к рецептору ТТГ, который снижается на фоне тиреостати-ческой терапии.

Для других антитиреоидных антител также описаны возможные патогенетические механизмы, приводящие к изменениям в тканях глаза. Так, например, считается, что антитела к тиреоглобулину (ТГ) в виде иммунных комплексов оседают в тканях глаза и участвуют в развитии ин-фильтративных изменений. Однако в единичных публикациях высказывается предположение о возможной про-тективной роли высокого уровня антител к ТГ в отношении развития ЭОП.

В связи с этим, нам показалось интересным исследовать уровни антител к ТГ, тиреопероксидазе (ТПО) и рецептору ТТГ у больных с рецидивом ДТЗ и ЭОП.

Материалы и методы. Было обследовано 16 женщин с диагнозом «ДТЗ, рецидив. ЭОП 0-3 степени» в возрасте от 24 до 56 лет. Клинические симптомы тиреотоксикоза подтверждали определением уровней Т4свободного (Т4 св) и ТТГ. Степень ЭОП оценивали по классификации В.Г.Баранова (1977г.). Клинические проявления эндокринной офтальмопатии имели место у 12 пациентов (75%). Из них у 2 человек (12,5%) наблюдалась третья, тяжелая степень ЭОП.

Забор венозной крови для определения антител к ТГ, ТПО и рецептору ТТГ проводился утром (08.00-10.00), натощак. Количественное определение в сыворотке крови антител к ТГ и ТПО осуществляли на иммунохеми-люминесцентном анализаторе «IMMULITE-2000» (DPC, США). Определение антител к рецептору ТТГ проводили методом рецепторного связывания с ферментной меткой на наборах фирмы «MEDIPAN DIAGNOSTIC», Германия. Нормальные уровни антител к ТГ - менее 40 Ед/ мл, антител к ТПО - менее 35 Ед/мл, антител к рецептору ТТГ - менее 1МЕ/мл. Чувствительность и коэффициенты вариации для антител к ТГ - 20 Ед/мл и 2,7%, для антител к ТПО - 10 Ед/мл и 4,3%, для антител к рецептору ТТГ - 1 МЕ/л и 10%.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием программ «Ехе1-2000» и «Statistica 6.0». Для обнаружения связи между стадией ЭОП и уровнями антител к ТГ, ТПО и рецептору ТТГ использовали непараметрические меры связи Гамма. Силу связей оценивали по величине коэффициента корреляции: более 0,7 -сильная, от 0,3 до 0,7 - умеренная, менее 0,3 - слабая. Направленность связей оценивали по знаку коэффициента корреляции.

Результаты и обсуждение. В сыворотке крови пациентов обследуемой группы были выявлены антитела к ТГ, ТПО и рецептору ТТГ в различных сочетаниях. У 8 пациентов (50%) обнаружены антитела к ТГ в концентрации от 77 до 996 Ед/мл. Антитела к ТПО определялись в 12 случаях (75%), и диапазон их концентрации составил от 363 до 2065 Ед/мл. У всех пациентов обследуемой группы (100%) в сыворотке крови были выявлены антитела к рецептору ТТГ. Уровень антител к рецептору ТТГ варьировал у разных пациентов от 2,3 до 14,3 МЕ/л и у восьми из них (50%) превышал 10 МЕ/л. Этот факт подтверждает высокую значимость антител к рецептору ТТГ в развитии ДТЗ.

Был проведён корреляционный анализ между выраженностью клинической симптоматики ЭОП и наличием антител к компонентам тиреоидной ткани. Не обнаружено достоверной корреляционной связи между уровнем антител к ТПО и степенью ЭОП. Выявлено, что степень тяжести ЭОП положительно коррелирует с уровнем антител к рецептору ТТГ ( =0,68, р< 0,05). Этот факт согласуется с данными литературы и подтверждает значимость антител к рецептору ТТГ в развитии ЭОП при ДТЗ. Показана достоверная умеренная по силе отрицательная связь между степенью ЭОП и уровнем антител к ТГ ( = -0,65, р< 0,05), что свидетельствует о протективной роли этих антител в отношении ЭОП.

Выводы:

- антитела к рецептору ТТГ являются высокоспецифичным показателем для ДТЗ и выявляются в 100% случаев рецидива заболевания

- у больных с рецидивом ДТЗ степень ЭОП зависит от уровня антител к рецептору ТТГ;

- высокий уровень антител к ТГ является благоприятным признаком в отношении выраженности ЭОП при ДТЗ. При этом механизм протективного действия этих антител требует дальнейшего изучения.

ЗАКОНОМЕРНОСТИ РАЗВИТИЯ АНЕМИИ У БОЛЬНЫХ С ДЕБЮТОМ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА

Герцог О.А.. Коненкова Л.П., Зонова Е.В., Королев М.А., Сизиков А.Э., Сенников С.В., Козлов В.А.

ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, Россия.

Анемия, сопровождающая РА, относится к так называемой анемии хронических заболеваний. Именно она является причиной слабости, легкой утомляемости, головокружения, а у людей с коронарным и церебральным атеросклерозом причиной соответствующих ишемических расстройств.

Изучение основных механизмов ее развития в настоящее время привлекает внимание многих исследователей. Ревматоидный артрит часто служит моделью для ее изучения. Целью данного исследования явилось изучение закономерностей развития анемического состояния у больных с дебютом ревматоидного артрита.

Обследовано 20 пациентов с дебютом РА до назначения «базисной» противовоспалительной терапии (14 женщин и 6 мужчин в возрасте от17 до 63 лет). Пациенты были разделены на две группы: с наличием анемии (п=9) и без нее (п= 11). Сравнение групп проводилось по следующим параметрам: лабораторные и клиничес-

кие показатели активности заболевания, показатели иммунного статуса и уровень цитокинов в сыворотке крови. Выявлено, что пациенты с анемией имеют более высокую клиническую и лабораторную активность. В группе с анемией достоверно выше были следующие показатели: СОЭ (р=0,003), фибриноген (р=0,008), титр ревматоидного фактора (р=0,007), СРП (р=0,02), продукты деградации фибрина (РКФМ) (р=0,03), время утренней скованности (р=0,015). Способность к фагоцитозу гранулоцитами и моноцитами была выше у пациентов с анемией, но показатель активности моноцитов был достоверно ниже (р=0,03). При оценке уровня цитокинов было показано значительное увеличение уровня IЬ-12 и №Ы-у у больных с анемией (р=0,05) и (р=0,04) соответственно. Таким образом, данное исследование подтверждает, что развитие анемии при ревматоидном артрите сопряжено с высокой лабораторной и клинической активностью основного заболевания. Известно, что ключевыми негативными регуляторами эритропоэза при ревматоидном артрите являются 1Ь-1(3 и ТОТ-а, но результаты проведенного исследования позволяют считать, что в дебюте заболевания немаловажную роль играют 1Ь-12 и 1П\[-у.

ВСТРЕЧАЕМОСТЬ ОРГАНОСПЕЦИФИЧЕСКИХ АУТОАНТИТЕЛ У ПАЦИЕНТОВ С ЗАДЕРЖКОЙ ПОЛОВОГО РАЗВИТИЯ И ГИПОГОНАДИЗМОМ

Гладкова Н.А.*. Тихомирова Т.А., Прозорова М.В.**, Тотолян Арег А.,

Шавловский М.М.*, Ворохобина Н.В*.

Центр по молекулярной медицине М3 РФ при СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова;

* Кафедра генетики МАЛО;

**СП6ГУЗ диагностический центр (медикогенетический)

Антитела к стероидпродуцирующим клеткам надпочечников (АСПК) являются маркером первичной надпочечниковой недостаточности либо высокого риска ее развития, а также маркером первичного аутоиммунного ги-погонадизма. Они направлены против ферментов стеро-идогенеза: 21- и 17-гидроксилазы, 20,21-десмолазы. Антитела к эндомизию (АЭА) являются иммунологическим маркером целиакии, которая, по данным литературы, может сочетаться с задержкой полового развития и бесплодием.

Цель исследования: изучить содержание антител к стероидпродуцирующим клеткам надпочечников и антител к эндомизию у мужчин фертильного возраста с различными формами гипогонадизма.

Материалы и методы. Нами было обследовано 58 пациентов мужского пола: 8 с гипергонадотропным гипого-надизмом, 28 с гипогонадотропным гипогонадизмом, 2 с нарушением сперматогенеза и бесплодием при нормогонадотропном гипогонадизме и 22 с задержкой полового развития. У пациентов всех групп диагноз был подтвержден лабораторными методами, в том числе цитогенетическим (кариотипирование всех пациентов), радиоим-мунным (определение тестостерона, фолликулостимулирующего, лютеинизирующего гормонов). Для проведения дифференциального диагноза между задержкой полового развития, вторичным и третичным гипогонадизмом проведены одно- и трехдневные пробы с хорионическим

гонадотропином и эндоназальная проба с аналогом гона-дотропин-рилизинг гормона бусерилином. В качестве контроля использовалась сыворотка 20 здоровых доноров мужского пола.

Для выявления АЭА и АСПК использовался метод непрямой иммунофлюоресценции. В лунки предметного стекла с криосрезами соответствующего субстрата (АЭА - пуповина человека, АСПК - надпочечник человека) вносилась сыворотка больных в стандартных разведениях (1/5 и 1/10 соответственно) и инкубировалась в течение 30 мин. После отмывки в фосфатносолевом буфере (0,01М, pH 7,2) в течение 10 мин в лунки предметного стекла вносились диагностические флуоресцирующие иммуноглобулины против ^А (либо ^в) человека, меченные флуоресцеин-5-изоти-оцианатом (ГУ НИИЭМ имени Н.Ф. Гамалеи) и инкубировались в течение 20 мин. После повторной отмывки криосрезы монтировались в глицерин (pH 8,2). Специфическое свечение эндомизия (АЭА) либо стероид-продуцирующих клеток (АСПК) оценивалось с помощью флуоресцентного микроскопа.

Результаты: диагностически значимый титр АСПК был обнаружен у одного пациента с задержкой полового развития. АЭА обнаружены у двух пациентов с задержкой полового развития на фоне муковисцидоза и на фоне сахарного диабета 1 типа, в группах пациентов с гипогонадизмом и в контрольной группе аутоантитела обнаружены не были.

Выводы: мы обнаружили, что около 2% мужчин фертильного возраста с различными формами гипогонадизма имеют аутоантитела к ферментам стероидогенеза. Встречаемость аутоантител к эндомизию, являющихся высокоспецифичным иммунологическим маркером целиакии, среди пациентов с различными формами гипогонадизма (3,5%) превышает встречаемость целиакии в популяции (около 1:400), таким образом, пациентам с поражением гонадостата, особенно в сочетании с поражением других органов и систем, может быть рекомендовано более тщательное комплексное обследование, включая серологический скрининг, для выявления у них этой сочетанной патологии.

СОСТОЯНИЕ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ДИФФУЗНОМ ТОКСИЧЕСКОМ ЗОБЕ В СОЧЕТАНИИ С АУТОИММУННОЙ ОФТАЛЬМОПАТИЕЙ

Гончарова Н.В.. Космачева С.М., Шпак И.Р., Рукша Е.В.

НИИ гематологии и переливания крови, Белорусская медицинская академия последипломного образования, Минск, Беларусь

Известно, что существует тесная связь между диффузным токсическим зобом (ДТЗ) и эндокринной офтальмопатией (ЭО), которая развивается примерно в 90% случаев у больных с ДТЗ. В развитии этих заболеваний основное значение имеет дисбаланс иммунной системы. Поэтому изучение состояния иммунных механизмов, в том числе и клеточного иммунитета, является перспективным в решении вопросов диагностики, профилактики и лечения больных.

Цель работы - изучение субпопуляционных изменений в клеточном звене иммунитета при сочетании ДТЗ с эндокринной офтальмопатией (ЭО).

Материалы и методы. Обследовано 13 больных до лечения и на фоне лечения тиреотропными препаратами после достижения состояния компенсации. Субпопуля-ционный состав Т-лимфоцитов определялся методом лазерной проточной цитометрии с использованием моноклональных антител к CD3, CD8 и CD4. Субпопуляции Т-хелперов определяли по содержанию внутриклеточных цитокинов с помощью антител к IFN-y(Thl) и IL-4 (Th2) в популяции СВ4+-клеток. В работе использовались моноклональные антитела фирмы «Sigma» (США). Аналитическая цитометрия проводилась с помощью двухцветной флуоцитометрии на проточном цитофлюориметре FACScan (Becton Dickinson, США).

Результаты. У больных ДТЗ с ЭО до лечения достоверно снижено содержание общего количества CD3+ лимфоцитов. Отмечается незначительное снижение CD4+ и С08+-клеток по сравнению с контрольной группой здоровых доноров крови. В результате проведенного лечения общее количество Т-лимфоцитов и их субпопуляций практически пе изменяется.

Необходимо отметить резко выраженное снижение Т-хелперных популяций. Так, у больных по сравнению с контролем количество IFN-y -содержащих клеток снижено в 7 раз, а IL-содержащих в 3 раза. Если у доноров соотношение Thl/Th2 составляет 4,9, то у больных - 1,9. Проводимая терапия способствует увеличению содержания Thl в 3 раза и Th2 в 1,5 раза. Соотношение Thl/ Th2 приближается к показателю у здоровых доноров и составляет 4,0.

Заключение. У больных ДТЗ в сочетании с ЭО имеются субпопуляционные сдвиги Т-клеток. Нарушен баланс Т-хелперных клеток за счет резкого снижения содержания Thl. Проведение курса тиреотропной терапии оказывает нормализующее влияние на соотношение ТЫ/ Th2.

ИЗМЕНЕНИЯ В ПОПУЛЯЦИОННОМ И СУБПОПУЛЯЦИОННОМ СОСТАВЕ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК У ДЕТЕЙ С РАЗЛИЧНОЙ ФОРМОЙ ОЖИРЕНИЯ

Гришкевич Н.Ю.. Манчук В.Т., Савченко А.А.

ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия

Целью настоящего исследования явилось изучить особенности состояния клеточного и гуморального иммунитета у детей с конституционально-экзогенной (КЭО) и гипоталамичсской (ГО) формами ожирения.

Обследовано 84 ребенка в возрасте от 7 до 15 лет с различной формой ожирения и 62 практически здоровых ребенка в том же возрастном диапазоне. Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов крови оценивали с помощью метода непрямой иммунофлуоресцен-ции. Дополнительно вычислялись иммунорегуляторный индекс (CD4yCD8+), лейко-Т-клеточный (Лейкоциты/ CD3*), лейко-В-клеточный индекс (Лейкоциты/С019+) и индекс активации Т-лимфоцитов (HLA-DR+/CD72*). Концентрацию иммуноглобулинов классов А, М и G в сыворотке определяли иммуноферментным методом.

В результате проведенных исследований установлено, что у больных детей независимо от формы ожирения снижается относительное содержание общих лимфоцитов, CD3+- и СБ16"-клеток, а также абсолютная и относительная концентрация С08+-лимфоцитов и абсолютный уровень НЬА-ОБГ-лимфоцитов. В обеих группах

больных ожирением детей 7-11 лет статистически достоверно повышены показатели иммунорегуляторного и лейко-Т-клеточного индексов. Только у детей с КЭО выявлено снижение процентного содержания С04+-, НЬА-ОИ+-лимфоцитов и абсолютного уровня СБ16+-клеток, в то время как у детей с ГО эти показатели не отличались от аналогичных у детей контрольной группы. При исследовании показателей гуморального звена иммунной системы у детей с КЭО и ГО младшей возрастной группы выявлено снижение относительного содержания СБ72+-клеток, но повышение лейко-В-клеточного коэффициента. В данной возрастной группе только у детей с КЭО обнаружено снижение уровня ^ А и ^ М. Анализ исследуемых параметров клеточно-гуморального иммунитета у детей с различной формой ожирения в возрасте 7-11 лет обнаружил снижение концентрации Т-лимфоцитов и регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов, что определяет развитие Т-клеточного иммунодепрессивного состояния. Более выражены данные изменения у детей с КЭО. Снижение относительной и абсолютной концентрации В-лимфоцитов и повышение величины лейко-В-клеточного индекса характеризуют недостаточность В-зависимо-го звена иммунной системы у детей данной возрастной группы. Можно предположить, что именно снижение регуляторного влияния Т-лимфоцитов на гуморальный иммунитет у детей с КЭО приводит к понижению концентрации ^А и ^М в сыворотке крови.

Сравнение параметров иммунного статуса у детей с различной формой ожирения в возрасте 12-15 лет позволило обнаружить общие для обеих форм изменения в системе иммунореактивности: снижение абсолютной и относительной концентрации СБЗ+-лимфоцитов, относительного уровня С08+-клеток и абсолютной концентрации С04+-, НЬА-ОГГ- лимфоцитов. Кроме того, у больных как с ГО, так и КЭО установлено повышение лейко-Т-клеточного коэффициента. Особенностью для детей данной возрастной группы с КЭО является снижение таких параметров клеточного иммунитета как абсолютного уровня лейкоцитов, лимфоцитов, абсолютного и относительного содержания ИК-клеток, в то время как у детей с ГО эти показатели не отличались от аналогичных у здоровых детей. Значения некоторых параметров иммунного статуса у детей данной возрастной группы напрямую зависели от формы ожирения. Так, например, наблюдается снижение относительного уровня общих лимфоцитов, Т-хелперов/индукторов и абсолютной концентрации Т-супрессоров/киллеров у детей с КЭО и ГО относительно показателей детей контрольной группы. Однако данные параметры были выше у детей, имеющих гипотала-мическую форму, относительно детей с КЭО. Анализ состояния гуморального звена иммунитета у детей с различной формой ожирения данной возрастной группы обнаружил снижение абсолютного и относительного уровня С072+-лимфоцитов, снижение уровня ^ А и ^ М, однако выявлено увеличение лейко-В-клеточного коэффициента и показателя ^ С/С072*.

Таким образом, иммунная система детей с ожирением находится в состоянии напряженного функционирования. Сравнение показателей иммунного статуса у детей с различными по патогенезу формами ожирения обнаружило, что у детей с КЭО 7-11 лет нарушения в иммунной системе наиболее выражены. Так, помимо снижения относительного содержания общих лимфоцитов, общей популяции Т-клеток, ЫК-клеток, а также абсолютной и относительной концентрации Т-супрессоров и аб-

солютного уровня НЬА-ВЫ+-лимфоцитов, выявленных у детей с обеими формами ожирения, и только у обследуемых с КЭО младшего возраста выявлено снижение процентного содержания Т-хелперов, НЬА-БК*-лимфоцитов и абсолютного уровня ЫК-клеток.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПАРАМЕТРОВ АКТИВНОСТИ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ФЕРМЕНТОВ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК ДЛЯ ОЦЕНКИ ТЯЖЕСТИ ОЖИРЕНИЯ У ДЕТЕЙ

Гришкевич Н.Ю.. Савченко А.А., Манчук В.Т.

ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия

Метаболизм клетки является основой любого проявления ее жизнедеятельности, в связи с чем метаболические параметры не могут не отражать ее функциональные возможности. Проведение исследований в этом аспекте представляется чрезвычайно важным, поскольку результаты и их анализ позволит не только констатировать изменения, но и определить глубину происшедшей перестройки, а также выявить компенсаторные возможности иммунокомпетентных клеток в условиях патологии.

Целью исследования явилось изучить активность метаболических ферментов лимфоцитов крови у детей с различной формой и степенью ожирения

В процессе работы обследовано 146 человек: 84 ребенка в возрасте от 7 до 15 лет с различной формой ожирения и 62 практически здоровых ребенка в том же возрастном диапазоне. Определение активности НАД(Ф)-зави-симых дегидрогеназ проводилось биолюминесцентным методом.

При исследовании уровней активности НАД- и НАДФ-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови детей 7-11 лет с КЭО в зависимости от степени патологического процесса обнаружено, что изменения носят неоднородный характер. Так, у детей с первой степенью ожирения статистически достоверно повышается активность Г6ФДГ, в то время, как у детей со второй степенью заболевания активность данного фермента резко снижена относительно группы обследуемых с первой степенью. Статистически достоверное повышение активности Обр.ЛДГ в лимфоцитах крови отмечается у детей со второй степенью КЭО по сравнению с детьми, имеющими первую степень заболевания. Активность НАДФИЦДГ резко снижена у детей со второй степенью ожирения по сравнению с контрольным диапазоном. Кроме того, выявлено, что уровень активности Обр.НАДФГДГ у детей со второй степенью КЭО значительно повышен относительно группы здоровых детей. Уровни активности ГЗФДГ, аэробной ЛДГ, НАДФМДГ, НАДФГДГ, МДГ, НАДГДГ, НА-ДИЦДГ, Обр.МДГ, ГР, Обр.НАДГДГ у детей с первой и второй степенью ожирения не отличаются от уровней контрольного диапазона.

У детей с первой степенью КЭО увеличение активности Г6ФДГ приводит к активации ряда синтетических процессов, а снижение активности данного фермента у детей со второй степенью, наоборот, к их ингибированию. У детей со второй степенью ожирения значительно повышена внутриклеточная активность анаэробной ЛДГ, что позволяет предположить повышенную интенсивность анаэробного дыхания иммунокомпетентных клеток.

Выявленное снижение активности НАДФИЦДГу детей со второй степенью КЭО может быть вызвано недо-

статочным субстратным наполнением вследствие дефицита образованного пирувата, а также большим количеством продукта реакции - а-кетоглутарата. Между тем, при исследовании ферментов, отражающих наработку интермедиатов для пластических процессов, в этой же группе детей обнаружена активация обратной реакции НАДФГДГ, которая характеризует уровень переноса субстратов на реакции аминокислотного обмена. При исследовании активности НАД- и НАДФ-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови у детей 12-15 лет с ГО в зависимости от степени заболевания обнаружено, что у детей со второй степенью ГО внутриклеточная активность Г6ФДГ снижена относительно детей контрольной группы и детей с первой степенью ожирения. Аналогичным образом изменяется активность аэробной ЛДГ у данной группы детей. Снижение активности НАДФМДГ в лимфоцитах крови становится статистически достоверным у детей со второй степенью ожирения. Повышение активности малик-фермента выявлено у детей с третьей степенью ГО, относительно контрольной группы и детей, имеющих вторую степень ожирения. Значительно снижена активность НАДФИЦДГ у детей со второй степенью ожирения, по сравнению с контрольным диапазоном. Однако у детей с третьей степенью заболевания уровень активности данного фермента значительно повышен.

Таким образом, с увеличением степени ожирения у детей 7-11 лет с КЭО метаболизм лимфоцитов характеризуется снижением активности ключевого фермента пен-тозофосфатного цикла - Г6ФДГ, и увеличением уровней реакций, определяющих отток субстратов с цикла Кребса на аминокислотный обмен. У детей с ГО 12-15 лет наиболее выражено нарушение метаболического статуса лимфоцитов при второй степени ожирения, что характеризуется снижением активности Г6ФДГ, малик-фермента и ферментативных реакций, связанных с аэробными процессами.

АУТОИММУННЫЕ РЕАКЦИИ ПРИ ЦЕЛИАКИИ

Гудкова Р.Б.. Парфенов А.И., Крумс Л.М., Потапова В.Б.

ЦНИИ гастроэнтерологии, Москва, Россия

Введение. Целиакия (Ц) является длительно развивающимся хроническим заболеванием тонкой кишки, обусловленным патологическим иммунным ответом на пищевой белок - глиадин с образованием антиглиа-диновых антител. Кроме того, развитие иммунного процесса связано с нарушением структур экстрацеллюляр-ного матрикса (ЭЦМ) слизистой оболочки, что приводит к выработке антител к собственным тканям (аутоантител).

Цель и задачи. Определить антитела к коллагенсодержащим структурам (к эндомизию и к ретикулину) на фоне выработки антиглиадиновых антител. Сопоставить развитие иммунного ответа со структурными изменениями в слизистой оболочке тонкой кишки у больных Ц.

Материалы и методы. В сыворотке крови 67 больных Ц определяли антитела к глиадину (АГА IgA, АГА IgG) (Orgentec -иммуноферментный метод) и антитела к эндомизию (ЭМА) и к ретикулину (АРА) (IMMCO Diagnostics - иммунофлуоресцентный метод). Особенности структурных изменений в собственной пластинке слизистой оболочки тонкой кишки при Ц исследовали методом электронной микроскопии QEOL -1200 ЕХ).

Результаты. Концентрация АГА ^А у всех обследованных (нелеченных) больных была повышена более чем в 3-4 раза по сравнению с пороговыми значениями нормы (23,4 + 2,1 ме/мл). Уровень АГА у тех же больных увеличен в 2-3 раза при нормальных показателях в 28,9 +3,2 ме/мл. У всех больных в сыворотке обнаружены ЭМА в различном титре. У 37 больных титр антител равен 1:40, Этот титр имеет диагностическое значение. У 14 больных титр был более повышен (1:160) и у 16 -титр был высоким (1:1280), что соответствует интенсивности иммунного ответа. АРА выявлялись в низком титре (1:10 и 1:20) в 70% случаев. В собственной пластинке слизистой оболочки тонкой кишки базальная мембрана эпителия в одних участках утолщена и разрыхлена за счет расслоения тонкофибриллярных структур. В других участках базальная мембрана истончена, структуры ее неотчетливы, выявляются участки фрагментации. В местах ее отсутствия эпителиальные клетки контактируют с ЭЦМ, где неравномерно располагаются другие фибриллярные элементы. Коллагеновые фибриллы утолщены, поперечная исчерченность отсутствует. Су-бэпителиально располагаются участки фиброза с плотно упакованными пучками коллагеновых фибрилл. Эн-домизий гладкомышечных клеток неравномерно утолщен, отечен, фибриллярное строение не выражено. Ретикулиновые волокна в виде прямых длинных нитей распределены неравномерно.

Заключение. Выявление антител к глиадину обеспечивает диагностику целиакии. Деструктивно-дистрофические изменения коллагеновых структур слизистой оболочки тонкой кишки у больных целиакией, приводящие к выработке антител к эндомизию и к ретикулину, свидетельствуют об аутоиммунном характере заболевания.

ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ИММУННЫХ РЕАКЦИЙ У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ

Зуннунова С.. Петрова Т.А.

Институт иммунологии АНРУз, Ташкент, Узбекистан

Известно, что ревматоидный артрит (РА) относится к системным ревматическим заболеваниям со сложным аутоиммунным патогенезом.

Одним из ключевых факторов, характеризующих аутоиммунизацию, является активация антигенспецифи-ческого иммунного ответа. В связи с этим, изучение специфических иммунных реакций, протекающих у больных РА, является важным моментом в распознавании патогенеза заболевания.

Целью исследования явилось изучение специфических иммунных реакций у больных РА.

Материалы и методы. Исследования выполнены на лимфоцитах, выделенных из периферической крови больных РА и здоровых лиц (контроль) на градиенте плотности фиколл-верографипе.

Антигенсвязывающие лимфоциты (АСЛ) определяли в реакции непрямого розеткообразования с использованием антигенов головного мозга и синовиальной оболочки (СА) сустава (Гариб ФЛО. и др. 1983).

Результаты и обсуждение. Проведенными исследованиями было установлено, что у больных РА относительное количество АСЛ, специфически реагирующих с антигеном СО, в 5,3 раза превышало аналогичные значения

у здоровых лиц и составило 11,2±0,86 и 2,1±0,2% соответственно (р<0,001).

Важным вопросом изучения иммунных реакций является установление их специфичности. Для этого параллельно с реакций выявления АСЛ, реагирующих с антигеном СА, определяли количество АСЛ, реагирующих с антигеном мозга.

Полученные результаты свидетельствовали о том, что относительное содержание АСЛ к антигену мозга у больных РА составило 2,1 ±0,3%, что было достоверно (р<0,001) ниже, чем с антигеном СО и не превышало значений, полученных у лиц контрольной группы. Это можно расценивать как доказательство специфичности взаимодействия лимфоцитов больных РА с антигеном СО.

Подтверждением специфичности реагирования АСЛ с антигеном СО является также ингибиция розеткообразующих клеток антигеном СО. Предварительная инкубация лимфоцитов больных РА с антигеном СО, а затем выявление АСЛ к антигену СО показывает, что процент ингибиции АСЛ в среднем на группу составил 79,9± 1,2%, а количество АСЛ, выявленных после инкубации с антигеном, составило 2,3±0,3%.

Полученные результаты свидетельствуют о высокой специфичности реакции взаимодействия лимфоцитов с антигеном СО у больных РА, т.к. проведенными исследованиями было показано, что связь с антигеном происходит через специфические рецепторы.

Т.о. установлено, что у больных РА выявляется высокий процент АСЛ, специфически реагирующих с антигеном СО. Доказано, что определение АСЛ является специфичной реакцией для данной патологии и может быть использовано для выявления специфических иммунных реакций при РА и служить дополнительным методом иммунодиагностики РА.

ОСОБЕННОСТИ СОСТОЯНИЯ ЛИМФОЦИТАРНОЙ СИСТЕМЫ У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ

Иванюк М.В.. Данилова Т.Г., Цыганова Л.А.

Медицинская академия, Ярославль, Россия

Целью настоящего исследования явилось изучение состояния лимфоцитарной системы у больных ревматоидным артритом (РА) и выявление взаимосвязей между молекулярными рецепторами лимфоцитов крови СОЗ+,СВ4+, фагоцитарной активностью нейтрофилов (ФАН), уровнями ^А, ^О, и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) крови при этом заболевании.

Были определены молекулярные рецепторы лимфоцитов СОЗ+, СБ4+ иммуноцитохимическим методом (стрентавидин-биотиновым), исследована ФАН со стафилококком штамма 209 с учетом фагоцитарного индекса (ФИ) и фагоцитарного числа (ФЧ), определены уровни ^А, методом одномерной радиальной иммуно-

диффузии в агаровом геле, ЦИК методом преципитации с 3,5% раствором полиэтиленгликоля ПЭГ-тест ОП 280.

Обследовано 20 женщин, страдающих РА среднего возраста 47,6±3,34 лет. Длительность заболевания составляла в среднем 5,8+1,98 лет. Группа сравнения составила 15 здоровых человек.

Серопозитивный вариант заболевания отмечен у 70% пациентов, серонегативпый - у 30%. I степень активности воспалительного процесса выявлена у 4 человек (20%), II степень - у 12 (60%), III степень - у 4 (20%).

У всех больных РА, по сравнению со здоровыми, имело место снижение содержания СБЗ+ лимфоцитов (р<0,01) без изменения содержания СБ4+ лимфоцитов (р>0,05). Определено достоверное снижение ФИ и ФЧ нейтрофилов (р<0,01), выявлено увеличение всех групп иммуноглобулинов и ЦИК крови (р<0,03) по сравнению с нормой.

Определена умеренная обратная корреляционная связь между СБЗ+, с одной стороны, и ФЧ с другой стороны (р<0,04).Определена прямая умеренная корреляция между ^А крови, с одной стороны, и СБЗ+, СБ4+ с другой (р<0,02), а также между ^А крови и ФИ (р<0.03). Выявлена обратная умеренная корреляционная связь между ^С, с одной стороны, и СБЗ+, ФИ с другой (р<0,02), а также аналогичная взаимосвязь между и ФИ (р<0,04).

Таким образом, при РА выявлены дефекты иммунной системы в виде четкого снижения экспрессии молекулярных рецепторов СБЗ+ периферической крови без значительного изменения СБ4+, что свидетельствует о нарушении процессов дифференцировки Т-клеток у пациентов, страдающих данным заболеванием. Имеет место поликлональная активация В-лимфоцитов, что подтверждает аутоиммунный и иммунокомплексный характер РА. Снижение фагоцитарной активности полиморфноядерных лейкоцитов, вероятно, обусловлено функциональной неполноценностью данных клеток.

ЦИТОКИНОВЫЙ СТАТУС И БОЛЕЗНИ ОРГАНОВ ПИЩЕВАРЕНИЯ

Ильченко Л.Ю.. Царегородцева Т.М.,

Серова Т.И., Сухарева Г.В., Клишина М.В., Лазебник Л.Б.

ЦНИИ Гастроэнтерологии, Москва, Россия

Введение. Цитокины (ЦК), формирующие универсальную биологическую коммуникационную систему, регулирующую интенсивность воспалительных, иммунных, метаболических процессов, играют важную роль в развитии и течении болезней органов пищеварения (БОП).

Цель. Сравнительное изучение содержания ЦК, их прогностической ценности при БОП в зависимости от пораженного органа, этиологического фактора, вариантов течения, стадии и проводимой терапии.

Материал и методы. Содержание ЦК (КСФ, 1Ь-1р, -4, -6, -8, -10, -12, ШЫ-а, -у, ТОТ-а) определяли иммуно-ферментным методом в сыворотке крови 1100 больных язвенной болезнью (ЯБ), желчнокаменной болезнью (ЖКБ), глютеновой энтеропатией (Г-Э), хроническим панкреатитом (ХП), хроническим гепатитом (ХГ), циррозом печени (ЦП), неспецифическим язвенным колитом (НЯК), болезнью Крона (БК) и др.

Результаты. При хронических рецидивирующих БОП (ЯБ, ЖКБ, ГЭ) многократное увеличение концентрации КСФ, 1ЫР, 1Ь8, 1Ь-6, 1Ь12, ИФ-у, ТЫР-сс (390-780 пг/мл, при выраженной активности заболеваний до 900- 1100 пг/мл) преобладало на ранних сроках и в разгар обострения. По мере стихания острых явлений и нарастания регенераторно-восстановительных процессов возрастал уровень 1Ь-4, 1Ь-10 (520- 680 пг/мл). При переходе в ремиссию под влиянием проводимой базисной терапии концентрация ЦК снижалась до 50-140 пг/мл, в контроле

< 50 пг/мл. Для хронических прогрессирующих вирусных, аутоиммунных воспалительных ЗОП (ХГ, ЦП, НЯК, БК) характерно стойкое, умеренное (130 -340 пг/мл), относительно монотонное повышение содержания ЦК (преимущественно ТЫР-а, 1РЫ-у, 1Ь-12,1Ь-4). Цитокиновая терапия (рекомбинантными препаратами интерферона - а, моноклональными антителами к ТОТ-а) при хронических прогрессирующих воспалительных БОП приводила к достоверному снижению концентрации провоспалительных, повышению противовоспалительных ЦК с одновременной позитивной динамикой клинико-лабораторных показателей активности заболевания, которые носили временный характер.

Заключение. БОП сопровождаются увеличением содержания ЦК в периферической крови, выраженным в различной степени в зависимости от этиологического фактора, вариантов течения, стадии, активности заболевания, проводимой терапии. Определение цитокиново-го статуса при ЗОП позволяет судить об интенсивности воспалительных, иммунных процессов, их динамике, прогнозе заболевания, эффективности проводимой терапии.

МЕТАБОЛИЗМ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК КРОВИ В ДИНАМИКЕ ЛЕЧЕНИЯ ДИФФУЗНОГО ТОКСИЧЕСКОГО ЗОБА

Кадричева С.Г.1. Мацынина В.П.2,

Савченко А.А.1, Догадин С.А.2

1 ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия;

Эндокринологический центр при ККБ № 1, Красноярск, Россия

Диффузный токсический зоб (ДТЗ) - генетически обусловленное аутоиммунное заболевание. Течение заболевания сопровождается повышенным уровнем тире-оидных гормонов, а также специфическим уровнем ци-токинов и других биологически активных веществ в крови, что не может не отразиться на иммунокомпетентных клетках, обладающих богатым рецепторным аппаратом. В то же время не вызывает сомнений тот факт, что любое воздействие на клетку опосредуется ее метаболической системой, что и определяет уровень ее функциональной активности. При лечении больных ДТЗ тиреоста-тическими препаратами достигается нормализация уровня тиреоидных гормонов. В то же время известно, что данные препараты оказывают иммуносупрессивное действие, в связи с этим, изменения метаболической системы отражают как патогенез заболевания, так и действие лекарственных препаратов. Таким образом, целыо исследования является выявление особенностей метаболизма лимфоцитов крови в динамике лечения женщин с ДТЗ.

Обследовано 30 женщин с ДТЗ в возрасте 20 - 45 лет. Диагноз устанавливался на основании клинических данных, результатов гормонального анализа, наличия антител к ткани щитовидной железы и ультразвукового обследования железы. Больным назначалось стандартное терапевтическое лечение. Исследование метаболических показателей лимфоцитов проводилось до начала лечения, через 1 и 3 месяца после его начала. В качестве контроля обследовано 60 здоровых женщин того же возрастного диапазона. Концентрация гормонов в сыворотке

крови определялась радиоиммупохимическими методами, содержание антител ктиреоидной иероксидазе (АТ-ТПО) - иммуноферментным методом. Определение активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах проводили биолюминесцентными методами. Достоверность различий между независимыми выборками оценивали по непараметрическому критерию Манна-Уитни.

На момент первичного обследования у больных ДТЗ значительно повышен уровень АТ-ТГ10, тиреоидных гормонов (трийодтиронин, Т3 и свободный тироксин, сТ4) при сниженном уровне тиреотропного гормона (ТТГ). Следовательно, больные женщины находятся в состоянии клинического гипертиреоза. Через 1 месяц после начала лечения у пациентов с ДТЗ нормализовался только уровень сТ4, при этом значения концентрации Т3 и сТ4 снижены по сравнению с первоначально выявленными. При обследовании больных женщин через 3 месяца обнаружено, что уровни сТ4 и ТТГ нормализовались, а концентрации Т3 и АТ-ТПО остаются повышенными. В то же время данный момент обследования характеризуется тем, что значения концентраций тиреоидных гормонов снижены, уровень ТТГ повышен по сравнению с таковыми в неле-ченной группе.

Выявленные изменения в динамике лечения больных ДТЗ уровней активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ лимфоцитов крови носят различный характер. Так, уровни активности одних ферментов последовательно однонаправлепно изменяются в динамике лечения, нанример, активность глюкозо-6-фосфатде-гидрогеназы повышена изначально у женщин с ДТЗ, затем в динамике лечения ее уровень повышается, достигая максимума через 3 месяца. Изменения уровней активности других ферментов носят единичный характер, присущий определенному моменту обследования. Так, активность НАД-зависимой изоцитратдегидроге-назы повышается у больных через 1 месяц после начала терапии, а уровень анаэробной реакции лактатдегид-рогеназы повышен только при первичном исследовании. Метаболизм иммунокомпетентных клеток первично выявленных больных ДТЗ до лечения на фоне гипертиреоза характеризуется активацией макромолеку-лярного, липидного синтеза, анаэробного окисления и обмена аминокислот.

В течение трех месяцев в динамике лечения женщин с ДТЗ метаболизм лимфоцитов претерпевает значительные изменения на фойе сохранения некоторых тенденций. Так, на протяжении всего периода сохраняется повышенным уровень макромолекулярного синтеза и аитиокси-дантной способности с их постепенным нарастанием. На всех этапах исследования оставалась высокоэффективной малат-аспартатная челночная система. Также все 3 обследования выявили активацию анаэробного окисления, однако если уровень активности аэробной реакции ЛДГ увеличивается после начала лечения,то активность анаэробной реакции, наоборот - изначально повышенная, постепенно снижается к нормальному уровню. При повышенном уровне аминокислотного обмена, необходимо отметить переключение на преимущественное использование НАДФН вместо НАДН при исследовании через 3 месяца после начала лечения. Активация аэробной энергетики в лимфоцитах женщин с ДТЗ наблюдается только после начала лечения. При этом стимуляция анаболизма липидов выявлена только до лечения в лимфоцитах крови пациентов с ДТЗ.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ДЕМИЕЛИНИЗИРУЮЩЕГО ПРОЦЕССА У ПАЦИЕНТОВ С РАССЕЯННЫМ СКЛЕРОЗОМ И РАССЕЯННЫМ ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТОМ

Калашникова А.А.. Бычкова Н.В., Бисага Г.Н.

Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины МЧС России;

Клиника нервных болезней Военно-медицинской академии, Санкт-Петербург, Россия

Поиск специфических маркеров активности демиели-низирующего процесса ЦНС и разработка соответствующих лабораторных тестов является актуальной задачей и привлекает внимание исследователей различных специальностей. В исследовании была сделана попытка оценки информативности определения антител к основному белку миелина (ОБМ) в сыворотке периферической крови больных рассеянным склерозом (PC) и рассеянным энцефаломиелитом (РЭМ), а также пролиферативной активности лимфоцитов этих больных в реакции бластной трансформации (РБТЛ) при совместном культивировании клеток с ОБМ.

Цель исследования: оценить диагностическую и прогностическую значимость методов определения в сыворотке крови антител к ОБМ и РБТЛ с ОБМ у больных с демиелинизирующими заболеваниями ЦНС.

Материалы и методы исследования: обследовано 34 человека с демиелинизирующими заболеваниями ЦНС (26

- PC, 8 - РЭМ) и 20 здоровых лиц (контрольная группа). Определение сывороточной концентрации антител к ОБМ классов М и G проводился методом ИФА с использованием тест-систем производства «Навина» (Москва). Оценку пролиферативной активности лимфоцитов после 7-ми суточного культивирования клеток (5% С02, 37еС) в присутствии ОБМ (Sigma) в двух концентрациях (2,5 и 10 мкг/ мл) оценивали на проточном цитометре Epics XL.

Анализ полученных результатов проводили в зависимости от диагноза (PC или РЭМ), варианта течения заболевания (ремиттирующий или прогредиентный), тяжести инвалидизации пациентов по шкале Куртцке и активности патологического процесса. Активность определяли по 3-бальной шкале: 0 - ремиссия, стабилизация заболевания или медленное хроническое прогрессирование (накопление неврологического дефицита менее 0,3 баллов в год), 2 - обострение или быстрое хроническое прогрессирование (более 0,7 баллов в год), 1 - подострая стадия обострения или хроническое прогрессирование с накоплением 0,3-0,7 баллов в год.

Результаты исследования: В периферической крови пациентов с PC и РЭМ определен клон активированных лимфоцитов, специфичных к фрагменту 68-82 основного белка миелина, стимуляция которых в РБТЛ приводит к достоверному (р<0,05) повышению пролиферативной активности (и.с.: 1,17±0,1 против 0,65±0,1 в контроле).

Изменение частоты выявления антител к основному белку миелина классов М и G в сыворотке пациентов с де-миелинирующими заболеваниями зависит от активности заболевания: при максимальной активности заболевания (активность 2) IgM определяются у 56% больных, IgG - у 20%; при переходе патологического процесса в подострую стадию или при средней скорости прогрессирования заболевания (активность 1) снижается частота встречаемости IgM (33%), но возрастает частота встречаемости IgG (40%); во время ремиссии или стабилизации заболевания (актив-

ность 0) частота выявления антител обоих классов минимальна (IgM - 29%, IgG - 14%). Определение аутоантител класса М к ОБМ в сыворотке периферической крови является наиболее информативным показателем.

Выявлена статистически достоверная взаимосвязь ОБМ-стимулированной пролиферативной активности лимфоцитов пациентов с PC и РЭМ и частоты встречаемости антител к основному белку миелина классов М и G с активностью заболевания. Определено отсутствие изменений изученных иммунологических параметров в зависимости от диагноза заболевания (PC или РЭМ), варианта течения (прогредиентное или ремиттирующее) или тяжести инвалидизации пациентов.

РОЛЬ ХЕЛИКОБАКТЕРНОЙ ИНФЕКЦИИ В РАЗВИТИИ ПОЗДНИХ ОСЛОЖНЕНИЙ У ДЕТЕЙ С САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ 1 ТИПА

Кратнов А.Е.. Макина О.В.

Ярославская государственная медицинская академия, Россия

Цель: изучить связь развития поздних осложнений у детей с сахарным диабетом 1 типа с наличием хеликобак-тер-ассоциированного гастрита.

Методы: обследовано 66 детей с сахарным диабетом 1 типа (CD) в стадии декомпенсации, в возрасте от 6 до 16 лет (средний возраст 11 лет). Все дети находились на стандартной инсулинотерапии в дозе 0,3-1,2 ЕД/кг массы тела в сутки (средняя доза 0,75 ЕД/кг). Диабетическая нефропатия III стадии (ДН) выявлена в 32,6% случаев, диабетическая ретинопатия III стадии (ДР) - в 8,7%. Помимо клинического обследования, результатов биохимических показателей крови, использовали спонтанный и индуцированный фитогемагглю-тинином и золотистым стафилококком (штамм Р-209) тест с нитросиним тетразолием (НСТ-тест) нейтрофилов и моноцитов, определение миелопероксидазы (МПО) и глутатион-редуктазы в клетках, уровня каталазы и супероксиддисмута-зы, малонового диальдегида, циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в крови. Всем пациентам в условиях стационара была проведена фиброгастродуоденоскопия с множественной биопсией из антрального, фундалыюго отделов желудка и двенадцатиперстной кишки с последующим цитологическим и гистологическим изучением бионтатов. Группу сравнения составили дети с CD без данных осложнений: 67,4 и 91% соответственно.

Результаты: у детей с наличием вышеуказанных осложнений были обнаружены более высокие показатели глюкозы крови (14,5±7,2 > 10,3±4,2 ммоль/л, р=0,02; 19,6±9,3 > 10,8±4,4 ммоль/л, р=0,003), гликированного гемоглобина, креатинина крови и мочи, триглицеридов, холестерина, диастазы мочи и снижение скорости клубочковой фильтрации (СКФ). При фиброгастродуоденоскопии с морфогистологическим исследованием у больных с наличием диабетической нефропатии и ретинопатии чаще выявлялся атрофический гастрит (33,3% > 0%), сопровождающийся увеличением случаев обнаружения умеренной степени обсеменения Helicobacter pylori (H.pylori) слизистой антрального отдела желудка (50% > 33,3%), а также выраженной степени инфильтрации полиморфноядерными лейкоцитами и моноцитами. При изучении иммунологических и цитохимических показателей было выявлено достоверное снижение уровня МПО в моноцитах у пациентов как с диабетической нефропатией (5,3±2,8< 8,1±3,1 ед.

акт., р=0,04),так и с диабетической ретинопатией (1,3+1,9

< 7,4±2,8 ед. акт., р=0,008) на фоне повышения содержания ЦИК (97,8±41,4 > 50,0±34,7 ед. опт. пл., р=0,01; 118,5±102,5 > 62,5±35,7 ед. опт. пл., р=0,01). Ранее у больных с CD 2 типа выявлялось снижение в моноцитах уровня МПО, связанное, вероятно, с истощением фермента на деактивацию хемоаттрактантов для лейкоцитов (С3в-С5а компонентов комплемента, ЦИК). Также обнаружено снижение содержания МПО в фагоцитах у детей с наличием инфекции H.pylori. Не исключено, что снижение уровня МПО в моноцитах у детей с CD 1 типа, сочетающееся с высокой степенью обсеменённости слизистой антрального отдела инфекцией H.pylori, связано с утратой фермента на деактивацию ЦИК, уровень которых повышается вследствие процессинга антигенов H.pylori мукоцитами желудка, и при фагоцитозе которых лейкоцитами развивается «окислительный стресс» с последующими тканевыми повреждениями. Об этом свидетельствует наличие значительной обратной корреляции между содержанием МПО в моноцитах и НСТ-тестом с нейтрофилами, активированными фитогемагглютинином (через СЗ-рецепторы) (г = -0,64; р=0,04).

Выводы: у детей с CD 1 типа наличие поздних осложнений (нефропатии и ретинопатии) ассоциируется с наличием хеликобактерного гастрита, снижением активности МПО в моноцитах на фоне повышенного числа ЦИК.

МЕСТНЫЕ ПРОЯВЛЕНИЯ АУТОИММУННОЙ РЕАКЦИИ ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПАРОДОНТА В СОЧЕТАНИИ С ОСЛОЖНЕННЫМ КАРИЕСОМ

Кудрявцева Т.В.. Орехова Л.Ю., Левин М.Я., Осипова В.А.

Кафедра терапевтической стоматологии и лаборатория клинической иммунологии и аллергологии НПЦ стоматологического факультета СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия

В последнее время установлена вероятность развития аутоиммунных реакций не только при классических аутоиммунных заболеваниях (гемолитическая анемия, системная красная волчанка, ревматоидный артрит), но и при некоторых соматических заболеваниях.

В связи с тем, что при воспалительных заболеваниях пародонта возникают условия, которые могут способствовать развитию аутоиммунной реакции (воздействие инфекционных факторов, деструкция собственных тканей, нарушения функций элементов иммунной системы) целью настоящей работы было определение признаков аутоиммунной реакции по исследованиям ротовой жидкости больных ВЗП.

Ротовая жидкость не только является удобным материалом для исследования, так как добывается неинвазивным путем. Вероятно, что в нее попадают и антигены поврежденных тканей пародонта и антитела, если они образуются при ВЗП.

Было обследовано 80 больных, из которых у половины, помимо осложненного кариеса, были обнаружены признаки гингивита или пародонтита легкой степени тяжести (группа I), у второй половины был осложненный кариес и пародонтит средней и тяжелой степени тяжести (группа II). Контрольную группу составили 20 человек без патологии пародонта и периодонта.

В ротовой жидкости определяли антиген, свойственный ткани пародонта, антитела к этому антигену и присутствие циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

Антиген и антитела выявляли в реакции торможения пассивной гемагглютинации и пассивной гемагглютина-ции при использовании антигенного очищенного экстракта из ткани пародонта и кроличьих иммунных сывороток, подвергнутых истощению. ЦИК определяли общепринятым методом осаждения комплексов полиэтиленгликолем.

В ротовой жидкости больных до лечения был обнаружен антиген - в первой группе в 60% случаев, во второй

- в 71,9% случаев. Через 3 и 6 месяцев после лечения частота обнаружения антигена в I группе снижалась до 52,9%, во II группе оставалась на прежнем уровне.

В ротовой жидкости больных I группы до лечения в 9,7% случаев были обнаружены аутоантитела и столь же часто ЦИК. Во II группе антитела до лечения были обнаружены в 38,9% случаев, а ЦИК - в 19,4%.

После лечения осложненного кариеса, но без противовоспалительных мероприятий ВЗП (I группа) частота обнаружения аутоантител нарастала до 27,8 и 42,1%, во II группе (где проводилось комплексное лечение кариеса и воспалительных заболеваний пародонта) частота обнаружения ауто-антитсл снижалась до 21,1 и 7,4%. Частота выявления ЦИК в обеих группах после лечения оставалась на прежнем уровне.

Полученные данные свидетельствуют, что очаг хронической инфекции в периодонте поддерживает воспаление в пародонте. Лечение только осложненного кариеса при наличии гингивита или пародонтита легкой степени тяжести не обеспечивает прекращения деструкции десны и прекращение патологического процесса. Пациенты с сочетанной патологией пародонта и периодонта нуждаются в комплексном лечении очагов хронической инфекции.

Развитие аутоиммунной реакции не коррелировало с интенсивностью поражения десен. Можно полагать, что аутоиммунный процесс не играет патогенной роли. Антитела и формируемые иммунные комплексы способствуют элиминации продуктов разрушения тканей.

МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА В ИММУНОФЕРМЕНТНОМ МЕТОДЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИРЕОГЛОБУЛИНА

Кузьмина Н.С.. Буркин М.А., Кириллова Г.А., Свиридов В.В., Кузнецова Г.И., Яковлева И.В., Зубков А.В.

ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, Москва, Россия

Тиреоглобулин (ТГ) является одним из основных маркеров нормального функционирования щитовидной железы. Исследование ТГ важно для раннего выявления рецидивов и метастазов высокодифференцированного рака щитовидной железы у оперированных больных и для оценки эффективности радио и йодтерании метастазов рака щитовидной железы. Сочетанное применение инструментальных методов анализа и контроль уровня ТГ в сыворотке крови пациентов в 95% случаев позволяет вовремя диагностировать рецидив заболевания.

Критическими показателями для иммунохимического метода определения тиреоглобулина является его чувствительность и специфичность. Так как главное назначение теста - диагностика рецидивов рака щитовидной железы, то, во-первых, его чувствительность должна составлять не

менее 1 нг/мл, а во-вторых, определению ТГ не должно мешать наличие в образцах сывороток аутоантител к ТГ.

Целью работы являлось создание высокочувствительного теста для определения ТГ на основе моноклональных антител (МкАт).

Работа была основана па использовании панели МкАт к ТГ, полученной в лаборатории гибридом НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН. МкАт (все ^в1 изотина) выделяли из среды культивирования гибридом и асцитной жидкости на сорбентах с белком С или антителами против мышиного Активность препаратов составляла 2 х 105 - 2 х 10°.

Эгштопную специфичность различных МкАт изучали в конкурентном ИФА с использованием конъюгатов МкАт с пероксидазой из корня хрена (ПХ) или биотином (Б). Уровень связывания МкАт-ПХ с ТГ в лунках, в которые не вносили немеченпые антитела, принимали за 100%. Перекрестно-реагирующими считали МкАт, вызывающие > 20% подавления при условии дозозависимого характера этого взаимодействия.

В результате исследований отобрано 5 вариантов МкАт (ШЮЕЗ, 1Е4Е9,1Е6Е9, ЗА5Е4, ЗЕ1Р5), направленных к различным эпитопам молекулы ТГ.

Для создания метода количественного определения ТГ в сэндвич-варианте ИФА проанализированы все возможные комбинации МкАт для адсорбции на твердой фазе и в виде конъюгатов. Наилучшими из них оказались пары ЗА5Р4-В10ЕЗ-ПХ и ЗА5Е4-1Е6Е9-ПХ. Использование этих пар МкАТ позволило проводить детекцию ТГ в образцах сыворотки крови человека в одну стадию с чувствительностью не более 3 нг/мл в диапазоне концентраций 3-200 нг/мл.

С целыо улучшения аналитических параметров теста изучена возможность сочетанного использования моноклональных антител для иммобилизации в лунках полисти-ролового планшета и конъюгата поликлональных аффин-но очищенных Ат к ТГ, меченных пероксидазой из корня хрена для выявления комплекса МкАт-ТГ. При таком варианте одностадийного ИФА время постановки анализа при температуре 37°С также составляло 1 ч, но чувствительность увеличивалась до 1 нг/мл и линейный участок калибровочный кривой зависимости концентрации ТГ в калибровочных пробах от оптической плотности соответствовал диапазону-3-400 нг/мл. Предполагают, что на молекуле ТГ содержится до 40 эпитопов, с любыми из которых могут связаться поликлональные Ат в составе конъюгата. Использование МкАт для сенсибилизации планшетов обеспечивало абсолютную специфичность, а поликлонального конъюгата - высокую чувствительность метода.

Содержание ТГ в сыворотках крови практически здоровых людей (п=40) в среднем составляло 20 нг/мл и не превышало 50 нг/мл; у больных диффузным токсическим зобом (п=10) - 100,0±30,5 нг/мл, у больных со злокачественными новообразованиями (п=8) уровень ТГ варьировал в диапазоне от 200 до 600 нг/мл. Добавление к образцам сыворотки крови с повышенной концентрацией ТГ проб, содержащих высокие значения аутоантител к ТГ (1000 -2000 МЕ/мл) при нормальном уровне ТГ (до 20 нг/ мл), не влияло на результаты анализа тиреоглобулина.

Таким образом, в результате проведенных исследований разработан высокочувствительный иммунофермен-тный метод количественного определения ТГ. Для оценки прогностической значимости теста для контроля за возникновением рецидивов рака щитовидной железы необходимо проведение углубленных клинико-диагности-ческих исследований.

СОСТОЯНИЕ МЕТАБОЛИЗМА И ФЕНОТИПИЧЕСКОГО СОСТАВА ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ У ЖЕНЩИН С ДИФФУЗНЫМ ТОКСИЧЕСКИМ ЗОБОМ

Мапынина В.П.2. Кадричева С.Г.1,

Савченко А.А.1, Догадин С.А.2

1ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия; Эндокринологический центр при ККБ № 1, Красноярск, Россия

Диффузный токсический зоб (ДТЗ, болезнь Грейвса) органоспецифическое аутоиммунное заболевание, протекающее с тиреотоксикозом. К настоящему времени стало практически очевидно, что последним этапом патогенеза ДТЗ является выработка антител, стимулирующих щитовидную железу. К тому же, Т-лимфоциты непосредственно участвуют в цитотоксических процессах и продуцируют низкомолекулярные вещества - лимфокины, опосредующие иммунный ответ. Следовательно, функциональные проявления иммунокомпетентных клеток определяют развитие и характер течения аутоиммунного заболевания. В свою очередь, реализация функциональных проявлений зависит от состояния метаболизма лимфоцитов. Таким образом, целью работы явилось выявить особенности метаболизма и фенотипического состава лимфоцитов крови у больных ДТЗ.

Обследовано 33 женщины впервые выявленных больных ДТЗ и 98 в качестве контроля в возрасте 20 - 45 лет. Диагноз устанавливался на основании клинических данных, результатов гормонального анализа, наличия антител к ткани щитовидной железы и ультразвукового обследования железы. Определение активности НАД(Ф)-зависи-мых дегидрогеназ в лимфоцитах проводили биолюминес-центными методами. Активность дегидрогеназ выражали в ферментативных единицах на 104 клеток (1Е = 1 мкмоль/ мин). Определение фенотипического состава лимфоцитов проводили методом непрямой иммунофлуоресценции с помощью моноклональных антител (ООО «Сорбент», г.Москва). Для дополнительной характеристики Т-клеточ-ного звена иммунной системы вычисляли иммунорегуля-торный индекс (СВ4УСВ8+) и индекс активации Т-лим-фоцитов (НЕА-В11+/СВ19+). Достоверность различий между независимыми выборками оценивали по пепарамет-рическому критерию Манна-Уитни.

Обнаружено, что в лимфоцитах женщин с ДТЗ снижены уровни активности малик-фермента, НАД- и НАДФ-за-висимых изоцитрагдегидрогеназ (НАДИЦДГ и НАД-ФИЦДГ соответственно) при повышении - анаэробной реакции лактатдегидрогеназы (ЛДГ), НАДН-зависимой ма-латдегидрогеназы (НАДНМДГ), НАДФ-, НАДН- и НАДФН-зависимых глутаматдегидрогеназ. Уменьшение активности малик-фермента ведет к снижению уровня НАДФН, необходимого для анаболических реакций липидного обмена. В то же время метаболизм лимфоцитов больных ДТЗ характеризуется подавлением аэробного окисления, на что указывает сниженный уровень лимитирующего фермента цикла Кребса - НАДИЦДГ и вспомогательного

- НАДФИЦДГ. При этом в лимфоцитах больных ДТЗ, по-видимому, компенсаторным является обнаруженная активация анаэробных окислительных процессов (повышение активности анаэробной ЛДГ). Это предположение подтверждает повышенная активность НАДНМДГ, являющегося компонентом челночного механизма. Также в лимфоцитах женщин с ДТЗ интенсифицируется аминокислотный обмен,

о чем свидетельствует повышение уровней активности глу-

таматдегидрогеназ, осуществляющих трансаминирование. Таким образом, в лимфоцитах при ДТЗ затронуты как энергетические, так и пластические процессы: подавление процессов аэробной энергетики, синтеза липидов при активации анаэробных окислительных реакций и аминокислотного обмена. По-видимому, недостаточная активность аэробных энергетических процессов компенсируется активацией анаэробных. При этом активация аминокислотного обмена характеризует интенсификацию белкового синтеза, что может объясняться повышенным уровнем тиреоидных гормонов, так как известно, что они регулируют синтез белка на уровне трансляции непосредственно в ядре.

У больных ДТЗ в крови повышено абсолютное содержание СБЗ+-, СВ4+ и СВ8+-лимфоцитов, относительная и абсолютная концентрация СВ16+-, СВ19+- и НЬА-ВК+-кле-ток. Следовательно, у больных женщин выявляется повышение концентрации всех исследуемых популяций и субпопуляций лимфоцитов крови. Причем параллельное повышение содержания регуляторных субпопуляций Т-лим-фоцитов не приводит к изменению величины иммунорегу-ляторного индекса. Кроме того, повышение концентрации НЬА-ВГ^-клеток определяется увеличением содержания В-лимфоцитов, в связи с чем величина индекса активации Т-лимфоцитов не изменяется. По-видимому, равномерное повышение концентрации различных популяций и субпопуляций лимфоцитов в крови у больных ДТЗ определяется, прежде всего, нарушением тиреоидного статуса и соответствующей гормональной стимуляцией выхода иммунокомпетентных клеток из лимфоидной ткани.

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ И ИНФОРМАТИВНОСТЬ ПОКАЗАТЕЛЕЙ РТМЛ ПРИ РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ

Мирахмедова Н.Н.. Миркамалова Л.И.

Институт иммунологии АН РУз, Ташкент, Узбекистан

Ревматоидный артрит (РА) по частоте распространенности среди воспалительных заболеваний суставов занимает первое место и имеет социальную значимость, так как причиняет большой ущерб обществу. Большинство исследователей относят РА к системным заболеваниям и ведущую роль в его патогенезе отводится иммунным нарушениям, сопровождающимся появлением аутоантител против тканей собственного организма. Иммунологические исследования РА показали количественные изменения большинства показателей иммунного статуса (Мирахмедова Н.Н.,2003).

Целью работы явилось исследование функционального состояния Т-клеточного иммунитета с помощью реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) у больных РА.

Обследовано 46 больных РА (женщины - 77%, мужчины - 23%) в возрасте 20-46 лет. По активности процесса РА I степени был в 37,8%, II - 46,7% и III - в 15,5% случаев, серопозитивный РА составил 57,8%, серонегативный -42,2%. По форме РА в 80% - суставной и в 20% - сустав-но-висцеральный. У больных РА неподвижность суставов

II степени была в 80%, I степени - в 13,3% и III степени -в 6,7% случаев. В качестве контроля обследовано 25 практически здоровых лиц, не страдающих суставными заболеваниями. Общеклинические, лабораторные методы исследования с верификацией диагноза проводили в ревматологическом центре ТашМИ-1 и ТашМИ-2, иммунологические исследования в Институте иммунологии АН РУз.

ТАБЛИЦА. УРОВЕНЬ ПОКАЗАТЕЛЕЙ РТМЛ ПРИ РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ (РА) (ИМ/ИУМ)

Группа обследования Спонт.цит. ИМ/ИУМ Индуциров. ФУМ-Л и цитокины ФСМ-Л ФУМ/ФСМ Сенсиб. к СРВ ИМ/ИУМ и частота,%

Контроль (п=25) 1,10±0,08 0,54±0,06 1,23±0,03 0,92+0,03

-10% +46% -23% 2,00 +8% 4%

РА общ. гр 1,21 ±0,04* 0,71 ±0,02* 1,06±0,02* 0,67±0,03*

(п=46) -21% +29% -6% 4,83 +33% 68%

РА-1 ст 1,14+0,08 0,71 ±0,03* 1,12+0,04* 0,67+0,04*

-14% +29% -12% 2,24 +33% 64%

II. ст 1,17+0,05* 0,71 ±0,03* 1,05±0,03* 0,65+0,02*

-17% +29% -5% 5,80 +35% 67%

III ст 1,22+0,06* 0,71 ±0,04* 0,95±0,06* 0,72±0,04*

-22% +29% +5% >10,0 +28% 71%

РА серопоз. 1,22±0,06* 0,72±0,03* 1,07+0,03* 0,68+0,04*

-22% +28% -7% 4,0 +32% 65%

Серонегат. 1,10±0,07 0,69±0,04* 1,06±0,04* 0,65±0,04*

-10% +31% -6% 5,17 +35% 68%

РА суст 1,13±0,05 0,69±0,02* 1,06+0,03* 0,69±0.03*

-13% +31% -6% 5,17 +31% 64%

висцер 1,33+0,09* 0,77±0,05* 1,03+0,07* 0,58+0,08*

-33% +23% -3% 7,67 +42% 78%

Примечание: ИМ -индекс миграции, ИУМ -индекс угнетения миграции = (1-ИМ) х 100% * - достоверность по отношению к контролю при Р<0,05.

Функциональное состояние 'Г-клеточного иммунитета определяли в замкнутых капиллярах РТМЛ (Мирка-малова Л.И. и соавт.,1994) по КонА-индуцированной продукции цитокинов: фактора угнетающего и фактора стимулирующего миграцию лейкоцитов крови (ФУМ-Л и ФСМ-Л) с использованием оптимальной и субоптималь-ной доз (2,5 и 10 мкг/мл) митогена, исследовали активность спонтанных цитокинов (сФУМ и сФСМ) в сыворотке крови и сенсибилизацию лимфоцитов к С-реактив-иому белку (СЫР). Статистическую обработку полученных данных проводили на персональном компьютере с использованием пакета прикладных программ «ЗТАТСЯАР» с вычислением средних (М,о,т) и 1:-кри-терия Стыодента.

Как видно из таблицы, КонА-индуцированная продукция ФУМ-Л и ФСМ-Л, их соотношение при РА достоверно отличаются от группы контроля. При этом более значительное снижение продукции ФСМ-Л приводит к возрастанию функционального ИРИ в 2,5 раза, появление высокой частоты и степени сенсибилизации к СЯР и нарушению баланса сФУМ и сФСМ в сыворотке крови. Обращает на себя внимание повышение активности спонтанных цитокинов в сыворотке, функционального ИРИ, частоты и степени сенсибилизации при возрастании степени активности РА (от I к III). При серопозитивном РА выявлены более значительные нарушения в балансе спонтанных цитокинов в сыворотке (в 2 раза), а при серонегативном - повышение активности Т-лимфоцитов по КопА-ин-дуцированной продукции ФУМ-Л и функционального ИРИ. При суставно-висцеральной форме РА также возрастает активность спонтанных цитокинов сФСМ с увеличением частоты сенсибилизации к СЯР. Выявлены различия при осложнениях в подвижности суставов. Увеличение функционального ИРИ свидетельствует о усугубле-

нии и выраженности аутоиммунного процесса, что сопровождается и увеличением активности спонтанного сФСМ. Проведенные исследования показали информативность комплекса показателей РТМЛ при диагностике РА, что может помочь в прогнозировании течения заболевания и наблюдении в динамике терапии.

ЦИТОКИНОВЫЙ СТАТУС И МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ ГРАНУЛЕМАТОЗНОГО ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ САРКОИДОЗЕ

Михайлова Л.П.. Макарова О.В, Гончарова Е.В., Гунтупова Л.Д,, Борисов С.Е., Маршицкая М.И.

Научно-исследовательский институт морфологии человека РАМН, Москва, Россия; Научно-исследовательский институт фтизиопулъмонологии ММА им. И.М. Сеченова, Москва, Россия

Морфологические особенности гранулематозного воспаления при саркоидозе в зависимости от цитокинового профиля не изучены.

Проводили оценку цитокинового статуса и морфологических проявлений гранулематозного воспаления у 52 больных саркоидозом. В гистологических срезах биопта-тов лимфатических узлов и легких определяли объемную плотность гранулем, фиброза и размеры гранулем. В сыворотке крови и культуральной жидкости мононуклеаров периферической крови больных саркоидозом методом твердофазного иммуноферментного анализа определяли содержание цитокинов: ТЫР-а, 1Ь-2,1Ь-4,1Ь-6 и 1РЫ-у.

По морфологическим и морфометрическим данным у больных саркоидозом выделены 2 типа тканевых реакций: с минимальным фиброзом и преобладанием фибро-

за, характеризующиеся, соответственно, выраженными и скудными клинико-лабораторными показателями. Тип тканевой реакции с минимальным фиброзом характеризуется высокой объемной плотностью гранулематоза и низкой фиброза, крупными гранулемами и высоким содержанием в них гигантских клеток. Тип тканевой реакции с преобладанием фиброза отличает распространенный фиброз, мелкие размеры гранулем и низкое содержание в них гигантских клеток. По данным исследования цитокинового профиля у больных саркоидозом с минимальным фиброзом в отличие от больных с преобладанием фиброза выявлена более высокая продукция ТОТ-сс, ШЫ-у и 1Ь-2.

Таким образом выявленные морфологические особенности гранулематозного воспаления при саркоидозе определяются уровнем продукции провоспалительных ци-токинов и цитокинов, ответственных за формирование гранулем.

ЦИТОКИНЫ И ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ КИШЕЧНИКА

Москалев А.В.. Голофеевский В.Ю, Ботиева В.И., Осипова О.Н.

Военно-медицинская академия, Северо-Западный окружной медицинский центр, Санкт-Петербург, Военный госпиталь, Моздок, Россия

Введение. Большое количество данных подтверждают, что нарушения иммунного гомеостаза являются одной из ведущих патогенетических причин в патогенезе аутоиммунных воспалительных заболеваний кишечника. Существующая в настоящее время иммуносупрессивпая терапия достаточно эффективно подавляет активность патологического процесса у большого процента больных. Однако 10-15% больных страдают более тяжелой или «рефрактерной» формой заболевания. Данная подгруппа пациентов значительно хуже отвечает на лечение, или же само заболевание течёт более агрессивно. Зачастую, проводимая иммуносупрессивная терапия у таких больных бывает неэффективна, так как является в большей степени эмпирической, чем основана на глубоком понимании патогенеза заболевания.

Цель исследования. Изучить динамику 1Ь-1,1Ь-2,1Ь-8, ТОТа, 1РЫу у больных с хроническими воспалительными заболеваниями кишечника (ХВЗК) в зависимости от сроков заболевания и от активности аутоиммунного процесса.

Материалы и методы. Нами были обследованы 11 больных с хронической активной болезнью Крона (ХАБК), 9 больных с хроническим активным язвенным колитом (ХАЯК) со средними сроками заболевания: 13,5±2,3 года. Также были обследованы 9 чел. с ХАБК и 7 чел. с ХАЯК со средним сроком заболевания - 5,8±1,9 года. Контрольную группу составили 7 чел. без воспалительных заболеваний кишечника. Возраст больных в обеих группах был сопоставим. Уровни цитокиновых профилей изучались с помощью диагностических тест-систем ООО «Протеиновый контур», «Цитокин», Санкт-Петербург.

Результаты. Уровни изучаемых цитокинов обеих групп достоверно превышали показатели контрольной группы (1-я группа: 1Ь-1(3<0,01,1Ь-2<0,01,1Ь-6<0,05,1Ь-8<0,01, ТИР а<0,01,1РЫу<0,01; 2-я группа: 1Ь-1(3<0,05,1Ь-2>0,05,1Ь-6<0,05,1Ь-8<0,05, ТЫРа<0,05,1РЫу<0,05). Уров-

ни цитокинов больных 1-й группы (1Ь-1Р, ТОТ а, 1РЫу) достоверно превышали (р<0,05) показатели 2-й группы. Остальные показатели были не достоверны.

Во 2-й группе 2 больных с ХАБК и 2 человека с ХАЯК имели уровни №N7 и 1Ь-2, превышающие (р<0,001) средние показатели изучаемых цитокинов данной группы.

Заключение. Полученные данные (повышенные уровни провоспалительных цитокинов у больных с ХВЗК) свидетельствовали о более выраженном и активном воспалительном процессе у больных с воспалительными заболеваниями кишечника с длительными сроками заболевания. В группе больных с незначительными сроками заболевания 4 больных имели, видимо, более выраженный дисбаланс соотношения СЭ4/СВ8, приводящий к гиперпродукции 1РЫу и 1Ь-2, что инактивировало действие «супрессивных» цитокинов:ТСР(3, 1Ь-10,1Ь-4 и способствовало пролонгированному течению воспалительных заболеваний кишечника.

Таким образом, при проведении иммуносупрессивной терапии необходимо учитывать сроки заболевания, уровни цитокинов, обеспечивающих поддержание воспалительного процесса кишечника. Целью иммунотерапии должно быть селективное стимулирование регуляторного звена Т-кле гок и селективное угнетение эффекторных Т-лимфоцитов, а лучше и то, и другое, т.е. восстановление критически важного равновесия между двумя звеньями, обеспечивающими гомеостаз.

ОСОБЕННОСТИ АКТИВНОСТИ НАД(Ф)-ЗАВИСИМЫХ ДЕГИДРОГЕНАЗ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ЭНДОКРИННОЙ ОФТАЛЬМОПАТИЕЙ

Новых М.В.2. Кадричева С.Г.1, Савченко А.А.1, Догадин С.А.2

1 ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия; Эндокринологический центр при ККБ № 1, Красноярск, Россия

Эндокринная офтальмопатия (ЭОП) - аутоиммунное заболевание, проявляющееся патологическими изменениями в мягких тканях орбиты со вторичным вовлечением глаза, характеризующееся в разной степени выраженным экзофтальмом и ограничением подвижности глазных яблок; возможны изменения роговицы, диска зрительного нерва, нередко возникает внутриглазная гипертензия. ЭОП диагностируют при диффузном токсическом зобе, при аутоиммунном тиреоидите, а также у людей без признаков заболеваний щитовидной железы (эутиреоидная болезнь Грейвса). В последнее время в связи с развитием новых методов обследования улучшилось понимание этиологии и патогенеза ЭОП, но, тем не менее, четких данных о причине возникновения и последовательности развития глазных симптомов не получено. Однако не вызывает сомнения вовлечение иммунной системы в этиологию и патогенез ЭОП. В свою очередь, функционирование иммунной системы во многом обеспечивается состоянием эффектор-ного звена - иммунокомпетентных клеток. Функциональная активность же лимфоцитов определяется состоянием их метаболизма. К тому же лимфоциты обладают богатым рецепторным аппаратом, что делает их чувствительными к любому изменению внутренней среды. Таким образом, целью работы явилось охарактеризовать состояние метаболизма лимфоцитов крови больных ЭОП.

Обследовано 12 больных ЭОП и 98 относительно здоровых лиц в качестве контроля того же возрастного диапазона. Диагноз устанавливался па основании клинических данных эндокринолога и офтальмолога, ультразвукового обследования щитовидной железы, результатов гормонального анализа, наличия антител к ткани щитовидной железы, также эхографии, компьютерной и маг-нитнорезонапсной томографии орбит. Определение активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах проводили биолюминесцентными методами. Активность дегидрогеназ выражали в ферментативных единицах на 104 клеток (1Е = 1 мкмоль/мин). Достоверность различий между независимыми выборками оценивали по непараметрическому критерию Манна-Уитни.

Характеристика метаболизма лимфоцитов осуществляется по активности ключевых дегидрогеназ, катализирующих окислительно-восстановительные процессы основных метаболических путей клетки. Обнаружено, что в лимфоцитах больных ЭОП повышены уровни активности следующих ферментов: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (ГФ6ДГ), гли-церол-3-фосфатдегидрогеиазы (ГЗФДГ), аэробной и анаэробной реакций лактатдегидрогеназ (ЛДГ), малик-фермента, НАД- и НАДФ-зависимых глутаматдетидрогепаз (НАДГДГ и НАДФГДГ соответственно) и глутатиопредуктазы (ГР). Следовательно, в лимфоцитах больных активирован ненто-зофос.фатпый путь окисления глюкозы, что отражает увеличенная активность Г6ФДГ. В результате этого повышается образование нентозофосфат, необходимых для реакций мак-ромолекулярного синтеза. Повышение интенсивности пеп-тозофосфатного пути снижает поступление глюкозы в гликолиз. Однако одновременное повышение активности аэробной и анаэробной реакций ЛДГ отражает увеличение скорости протекания гликолитического окисления. По-видимому, высокая итепснвность гликолиза поддерживается за счет дополнительного поступления субстрата через глнцерол-3-фос-фатдетидрогеназную реакцию. Следовательно, повышение активности ГЗФДГ указывает на увеличение поступления продуктов липидного катаболизма в гликолиз. В то же время увеличенный уровень активности малик-фермента указывает на интенсификацию синтеза липидов. Также в лимфоцитах пациентов с ЭОП выявлены изменения в аминокислотном обмене. Так, повышение уровней НАДГДГ и НАДФГДГ отражает активирование преобразование глутамата в а-ке-тоглуторат, то есть продукт аминокислотного катаболизма поступает в митохондрии для окисления в цикле трнкарбо-новых кислот. Также в лимфоцитах больных ЭОП выявлено повышение уровня ГР - компонента антиоксидантиой защиты, что отражает высокую пролиферативную и антиоксидан-тную способность клеток. Таким образом, в лимфоцитах больных ЭОП выявлена интенсификация анаэробного окисления, липидного обмена, макромолекуляр] юго синтеза и аминокислотного катаболизма.

АУТОАНТИТЕЛА К ОСТРОВКОВЫМ КЛЕТКАМ И МАРКЕРЫ КОМПЕНСАЦИИ ДИАБЕТА У ПОЖИЛЫХ

Один В.И.1. Вартанян Н.Л.2, Беликова Т.В.3

*Военно-медицинская академия, ‘НИИ гриппа, Городской гериатрический центр, Санкт-Петербург, Россия

В пожилом и старческом возрасте наблюдается развитие латентного (медленнонрогрессиругощего) варианта аутоиммунного диабета тип 1 дебютирующего как сахар-

ный диабет тип 2 (С02), но серологически имеющего маркеры аутоиммунитета, направленного к островкам Лангер-гаиса. Таковыми, в частности, являются аутоантитела к островковым клеткам (1СА). В то же время проспективное наблюдение показывает, что у значительной части 1СА-позитивных больных с клиническим диагнозом СБ2 не развивается инсулинпотребпый диабет. С другой стороны, 1СА определяются и у клинически здоровых лиц, что позволяет предположить иную роль данных аутоантител, в том числе, регуляторную или маркерную в отношении процесса старения. Цель исследования состояла в определении наличия возможной связи между возраст- и диабет-специфическими факторами у больных диабетом геронтов. В рамках исследования было обследовано 84 гериатрических пациента с клиническим диагнозом СВ2.1СА определяли методом непрямой иммунофлюоресценции, используя криостатные срезы поджелудочной железы человека О (I) группы крови. Метаболические параметры компенсации определяли стандартными методами.

Результаты. Из числа обследованных лиц 1СА определялись в 9.5% случаев. Ранг значений титра 1СА составил от 5 до 15 ЩОГ. Возраст 1СА+ не отличался от такового у 1СА-негативных лиц (65,1 и 67,2 лет соотв.). Существенно, что не было различий между группами по возрасту дебюта диабета (59,6 и 58,2 лет у 1СА+ и 1СА- соотв.). Группа 1СА+ имела незначительно более высокий уровень ИМТ (31,3 кг/ м2), чем 1СА- (2,7 кг/м2). При отсутствии различий в уровне тощаковой гликемии между группами (6,8 и 6,9 ммоль/л у 1СА1' и 1СА- соотв.), наблюдался достоверно более высокий уровень гликироваиного гемоглобина А1с в группе 1СА+ (8,0 и 6,7% у 1СА+ и 1СА- соотв., р=0,027). При этом у 1СА+ больных диабетом геронтов отмечался существенно более низкий уровень триглицеридов (1,1 и 1,4 ммоль/л у 1СА+ и 1СА- соотв., р=0,048). Корреляционный анализ Спирмена показал наличие сильной негативной корреляции между уровнем атерогенных липидов и величиной титра 1СА в группе 1СА+ больных, так для коэффициента атерогеннос-ти этот показатель составил -0,802 (р=0,047).

Заключение. У больных СВ2 геронтов наличие 1СА в низком титре сочетается с более благоприятным липидным профилем, несмотря на менее благополучные показатели компенсации углеводного обмена.

ДЕ30КСИРИБ0НУКЛЕ0ПР0ТЕИД - СПЕЦИФИЧЕСКИЙ АНТИГЕН ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ АУТОАНТИТЕЛ У БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКОЙ

Саттарова Л.И.. Ишмухаметова Д.Г., Винтер В.Г., Кулик Н.В.

Межрегиональный клинико-диагностический центр, Казань, Россия;

Казанский государственный университет,

Казань, Россия

Введение. Аутоантитела (ААТ) к антигенам собственного организма играют важную роль в патогенезе аутоиммунных заболеваний человека. В частности, такое аутоиммунное заболевание, как системная красная волчанка (СКВ), сопровождается выработкой ААТ к антигенам клеточного ядра. Диагностическое значение при этом заболевании имеет повышенный уровень ААТ к ДНК и ее комплексу с белками - дезоксирибонуклеопротеину (ДНП).

Считается, что невысокая продукция ААТ в норме является нормальным свойством иммунной системы, а раз-

витие аутоиммунного заболевания обусловлено нарушением регуляции аутоиммунных процессов. Определение уровня ААТ к компонентам клеточного ядра (как лабораторный критерий) вносит существенный вклад в прогнозирование течения заболевания.

Целью исследования явилось определение ААТ к ДНП в сыворотке крови здоровых доноров и больных СКВ с использованием разработанной нами тест-системы на основе иммуноферментного анализа.

Материалы и методы. В качестве антигена использовали выделенный и очищенный нами ДНП из изолированных ядер крупного рогатого скота.

В работе использована сыворотка крови (в разведе-нии1:100) от 60 здоровых доноров и 20 больных СКВ.

Для стандартизации полученных результатов исследований в качестве «стандарта» нами использован образец пуло-вой сыворотки больных СКВ. Параллельно с определением ААТ к ДНП в исследуемых образцах сывороток определяли и ААТ в стандартной сыворотке, что позволило провести количественное сравнение исследуемых образцов сывороток.

Результаты выражали в относительных единицах (отн. ед.) по формуле: ОП492 опыта/ОП492 стандарта.

Убедившись, что в каждом конкретном случае числовые показатели содержания ААТ соответствуют закону нормального распределения, все дальнейшие статистические вычисления проводили по формулам, принятым для этого распределения: среднее арифметическое (М) из 5 повторов, ошибку среднего (т) и коэффициент вариации (Су,%), не превышающий 5-10%.

Основные результаты. Для проведения скринингового исследования необходимо оптимизировать условия проведения иммуноферментного анализа ААТ к ДНП. На первом этапе работы из изолированных ядер ткани крупного рогатого скота был выделен препарат ДНП. Поданным гель-фильтрации на колонке с сефадексом С-200 (деионизованная вода), ДНП представлял собой стабильный комплекс, имеющий следующие характеристики: содержание ДНК -123 мкг/мл, РНК - 10 мкг/мл, ДНК/белок= 1,33. При сорбции ДНП на полистироловые планшеты были использованы 6 буферов различных состава и pH (от 4,5 до 9,0). В результате проведенных исследований сорбцию проводи-

ли из 0.1 М фосфат - 0,05 М цитратного буфера (pH 5,0), в котором ДНП сохранял свое нативное состояние и при этом наблюдались наиболее высокие уровни ответов в ИФА.

Анализ сывороток крови здоровых доноров показал наличие ААТ к ДНП. У 80% доноров этот показатель составил 0,40-0,80 отн.ед. (в среднем 0,62±0,11 отн.ед.). Сыворотки крови больных СКВ имели уровень ААТ к ДНП в 2-10 раз превышающий уровень нормы, что составило 0,91-5,92 отн.ед. (в среднем 2,02±0,33 отн.ед.). Ранее нами были показаны достоверные отличия уровней ААТ к нативной и денатурированной ДНК (нДНК и дДНК) в норме и при СКВ. Однако отличие нормы от СКВ наиболее ярко выражено в отношении ААТ к ДНП. Еще одним подтверждением большей информативности указанного показателя аутоиммунного процесса являются данные, представленные в таблице.

Как следует из данных таблицы, в начальной стадии заболевания у больной СКВ наблюдался повышенный уровень ААТ к дДНК, а содержание ААТ к нД НК не выходило за рамки нормы, а даже было немного снижено. Через год хронического течения заболевания уровень ААТ к нДНК немного повысился, но все же не превышал нормы. Содержание ААТ к дДНК также не превышало порогового уровня нормы. Содержание в сыворотке крови ААТ к ДНП в 5 раз превышало норму. Еще через 6 месяцев, поданным клинических и лабораторных исследований, болезнь прогрессировала, параллельно наблюдалось повышение уровня ААТ ко всем трем антигенам. Особенно ярко это проявилось в отношении ААТ к ДНП (превышение уровня нормы в 10 раз). Высокие показатели уровня ААТ сочетались с тяжестью аутоиммунного заболевания и поражением органов дыхания и сердца. Через 2 месяца после проведенного курса лечения гормональными препаратами состояние больной улучшилось. Уровень ААТ ко всем трем антигенам снизился, но ни в одном случае он не достиг уровня ААТ в норме. Следует отметить, что уровень ААТ к ДНП оставался наиболее высоким (превышение уровня нормы в 7 раз).

Заключение. Таким образом, проведенные исследования позволяют использовать определение уровня ААТ к ДНП в качестве наиболее информативного показателя в лабораторной диагностике СКВ как при постановке диагноза, так и в ходе лечения этого заболевания.

ТАБЛИЦА. УРОВЕНЬ ААТ У БОЛЬНОЙ СКВ В ДИНАМИКЕ РАЗВИТИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ.

Время после установления диагноза Содержание ААТ (отн.ед.) к Диагноз, клинические и лабораторные показатели

цЦНК ДЦНК ДНП

4 месяца 0,65±0,01 (ниже нормы) 1,45±0,02 (выше нормы) СКВ, поражение легких, суставов, сердца, лабораторные показатели указывают на развитие болезни. Лечение гормонами и цитостатиками

16 месяцев 0,83±0,03 (в пределах нормы) 1,14+0,05 (в пределах нормы) 3,35±0,04 (выше нормы в 5 раз) Клинических показателей нет, лабораторные есть, хроническое течение СКВ

22 месяца 1,89+0,08 (выше нормы) 1,87±0,02 (выше нормы) 5,92±0,10 (выше нормы в 10 раз) Обострение процесса, поражение сердца. Лечение цитостатиками и гормонами

24 месяца 1,38+0,03 (выше нормы) 1,29 ±0,01 (выше нормы) 4,49±0,05 (выше нормы в 7 раз) Активность СКВ снизилась

Норма 0,82+0,06 1,08+0,08 0,62+0,11

НЕКОТОРЫЕ СЫВОРОТОЧНЫЕ ЛИПИДЫ ПРИ РАССЕЯННОМ СКЛЕРОЗЕ И СИСТЕМНОЙ СКЛЕРОДЕРМИИ

Султанова И.В.. Идиятуллина Л.З.

Казанский государственный медицинский университет; Казанская государственная медицинская академия, Казань, Россия

Введение. В настоящее время не вызывает сомнения аутоиммунная природа рассеянного склероза (PC) (Насонов Е.Л., 2001). Ряд заболеваний соединительной ткани, таких как системная красная волчанка (СКВ), первичный синдром Шегрсна и системная склеродермия (CCD) имеют сходную с PC клиническую картину (Pender М.P., Chalk J.В., 1989, Султанова И.В. с соавт., 2003). Обнаруженная связь иммунопатологических механизмов с липидозависимыми процессами при PC (Завалишип И.А., Головкин В.И., 2000) позволяет предположить схожесть таковых при PC. и классических аутоиммунных заболеваниях. В связи с этим целью нашей работы явилось сравнение уровня общих фосфолипидов (ОФЛ) и неэстерифи-цированного холестерина (НЭХС) в сыворотке крови больных PC н ССД.

Материалы и методы. Обследовано 33 больных с достоверным диагнозом PC (Poser С.М. et al., 1983), цереброспинальной формой - 23 женщины и 10 мужчин в возрасте от 17 до 53 лет, с длительностью заболевания от 1 до 16 лет. Диагноз во всех случаях подтверждался МРТ; тяжесть состояния по шкале инвалидизации EDSS колебалась от 1,5 до 6 баллов. Группу сравнения составили 28 пациенток с достоверной ССД (Насонова В.А., Бунчук

H.В., 1997) в возрасте от 33 до 72 лет. Большинство больных имели хроническое течение заболевания, стадию II-III, активность I. В качестве контроля использовали образцы сыворотки крови 27 здоровых добровольцев в возрасте от 20 до 67 лет.

Содержание фракции НЭХС и ОФЛ в сыворотке крови больных и здоровых исследовали методом тонкослойной хроматографии (Кейтс М., 1975). Идентификацию осуществляли с помощью стандартов фирмы Supclco, в качестве проявителя использовали серную кислоту, количественное содержание липидов определяли с помощью программы Scion Image.

Результаты. В младшей возрастной группе доноров уровень НЭХС составил 0,71 ±0,31 г/л, в старшей -

I,16±0,3 г/л. Исследование больных PC и ССД выявило снижение НЭХС в сыворотке крови в старших группах (0,81 ±0,26 и 0,69±0,26 г/л соответственно), у молодых пациентов его содержание не отличалось от контроля.

В группе здоровых доноров уровень ОФЛ составил

3,1 ± 1,4 г/л. У больных PC и ССД содержание ОФЛ в крови было достоверно ниже значений контрольной группы (1,25±0,23 и 1,56±0,64 г/л соответственно).

Заключение. Таким образом, при PC и ССД имеется сходное снижение показателей НЭХС и ОФЛ в сыворотке крови, что может указывать на общность возможных липидных нарушений при этих заболеваниях и требует дальнейшего изучения. Работа поддержана грантом РФФИ (№00-04-48224).

СПЕКТР АУТОАНТИТЕЛ ПРИ АУТОИММУННЫХ ЭНДОКРИНОПАТИЯХ

Тихомирова Т.А.. Лапин С.В., Толкачёва Н.Ф*., Тотолян Арег А.

Центр по молекулярной медицине М3 РФ при СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова;

* Детская городская больница им. К.А. Раухфуса № 19, Санкт-Петербург, Россия

Сочетанная эндокринная и аутоиммунная патология может развиваться в рамках аутоиммунных полиэндок-ринных синдромов (полиэндокринопатий). Кроме выделенных в отдельные нозологические формы нолиэндок-рипопатий, встречается множество других сочетаний аутоиммунных и эндокринных заболеваний. Аутоиммунные эндокринологические заболевания характеризуются выработкой аутоапти гел к антигенам-мишеням, расположенным в соответствующих железах внутренней секреции.

Цель работы: установить клинико-лабораторную значимость выявления аутоантител при сочетанной аутоиммунной и эндокринной патологии.

Материалы и методы. Нами было иммунологически обследовано 385 человек с разнообразной аутоиммунной и эндокринной патологией: 262 больных с сахарным диабетом 1 типа (СО 1), 13 больных с целиакией, 20 больных с нарушением полового развития, 17 - с СБ 1 и патологией щитовидной железы, два- с полиэндокринопатия-ми (I и II), один - с болезнью Аддисона и 70 человек группы контроля. У всех больных были проведены исследования необходимого клинического минимума, были проанализированы данные анамнеза, клиническая картина заболевания, назначенное лечение и его эффективность.

Аутоантитела к островковым клеткам поджелудочной железы (1СА), к эндомизию (АЕА), к тиреопероксидазе (ТРО), к стероиднродуцирующим клеткам (АБА), к париетальным клеткам желудка (вРС) определялись методом непрямой иммунофлюоресценции.

Результаты. В группе контроля 1СА, АЕА, АЭА обнаружены не были, таким образом, специфичность методов для выявления этих аутоантител составила 100%. Специфичность для ТРО составила 96%. Было обнаружено, что дети с целиакией, нарушением полового развития, с болезпыо Аддисона имеют высокую встречаемость антител к островковым клеткам, превышающую встречаемость в общей популяции в десятки раз (14,7% против десятых долей процента, по данным литературы).

Также было выявлено, что больные с сочетанием СО

1 и патологии щитовидной железы в 11,8% имеют антитела к париетальным клеткам желудка. Среди детей с целиакией серопозитивными по АЕА оказалось 54%, из 50 детей с сахарным диабетом один имел антитела к эндомизию, среди 17 больных с сочетанием СЭ 1 и патологии щитовидной железы также один больной оказался серопозитивным, при этом все серопозитивные больные имели жалобы на нарушение стула. АОА были выявлены у всех больных с полиэпдокринопатиями, с болезнью Аддисона, а также у одного больного с гипогонадизмом. ТРО были обнаружены у 23,5% больных с сочетанием СБ 1 и патологии щитовидной железы, у 15% больных с нарушением полового развития, у 1 ребенка с целиакией и у 1

- с иолиэндокринопатией I.

Выводы. Больные с такими заболеваниями, как сахарный диабет 1, целиакия, полиэндокринопатии, болезнь

Аддисона являются группами риска по развитию сочетанной аутоиммунной и эндокринной патологии, нуждаются в наблюдении и проведении серологического скрининга.

СООТНОШЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ У БОЛЬНЫХ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНЬЮ ЖЕЛУДКА

Трубипына И.Е.. Царегородцева Т.М., Серова Т.И., Клишина М.В., Губина А.А.

ЦНИИ гастроэнтерологии, Москва, Россия

Цель: выявить возможные взаимоотношения между цитокинами (ЦК) и биогенными аминами (БА) в период деструкции и репарации слизистой оболочки желудка у больных ЯБЖ.

Материал и методы исследования: обследовано 102 больных на пике деструктивных процессов и в период рубцевания язвенного дефекта. ЦК (IL-1(3; 2; 4; 6; 8: TNFa, IFN) определяли иммуноферментным методом, ацетил-холин и холииестеразную активность - Hestrin, серотонин - Sadovanqivad в сыворотке крови и экстрактах слизистой желудка (биоптатах, взятых с края язвенного дефекта и на расстоянии 5-7 см от края).

Результаты исследования: при ЯБ Ж уровень содержания ЦК в сыворотке крови повышен как в период обострения, так и в период ремиссии. Но выявлены некоторые особенности: повышение IL-1 (3; 2; 6; TNF на пике повреждения, a IL-4; IFN - рубцевания. Одновременное определение БА в сыворотке крови показало незначительное повышение серотонина в период обострения и рубцевания, гистамина в период рубцевания, мало выраженное снижение Ах, и повышение холинестеразной активности в период обострения. Изменение содержания БА в ткани отображает фазу заболевания. В период обострения повышен серотонин и ацетилхолин, рубцевания - серотонин и гистамин. Уровень ЦК в ткани менялся незначительно.

Заключение: можно полагать, что первоначальное высвобождение БА в ткани является пусковым моментом для иммунного ответа, который зависит от уровня повышения и особенно, соотношения БА. В сыворотке крови содержание БА жестко контролируется, т.к. они обладают высокой биологической активностью.

ИЗУЧЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ МАРКЕРОВ С095, р53, bcl-2 И К/-67У БОЛЬНЫХ АУТОИММУННОЙ ПАТОЛОГИЕЙ И НОВООБРАЗОВАНИЯМИ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Федосюк А.М.. Казаков С.П., Анфилов С.В., Коржиков А.В., Лапшин И.М., Кушлинский Н.Е..

Главный военный клинический госпиталь им. акад. Н.Н. Бурденко МО РФ, Москва, Россия; Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва, Россия

Введение. Нарушение процессов пролиферации и апоптоза лежат в основе патогенеза развития как аутоиммунных, так и трансформационных процессов в различных органах и тканях человека. Исследование механизмов нарушения этих процессов в тканях щитовидной железы при аутоиммунных заболеваниях и новообразо-

ваниях является одной из актуальных и нерешенных проблем, а само обособленное расположение щитовидной железы как органа делает эти исследования, особенно интересными, позволяющими использовать их, в качестве модели изучения механизмов иммунитета и канцерогенеза.

Цель исследования. Нами на примере (аутоиммунных, злокачественных и доброкачественных) заболеваний щитовидной железы предпринята попытка оценить поверхностно- и внутриклеточные уровни маркеров пролиферации и апоптоза в пораженных этими заболеваниями тканях щитовидной железы.

Материалы и методы. Использовали внутриклеточные маркеры пролиферации - Ki-67, маркеры апоптоза

- р53 фирмы «Dako» (Дания), bcl-2 и поверхностно-кле-точный маркер CD 95 фирмы «Caltag» (США), которые оценивали после предварительной подготовки тканей с их превращением в клеточную суспензию, окрашивании и исследовании всей полученной группы клеток вне зависимости от размеров и структуры в трехцветном анализе методом проточной цитометрии на аппарате COULTER EPICS XL-MCL. Для исследования использовались гистологические верифицированные участки тканей щитовидной железы от 21 оперированного больного, по поводу - аутоиммунной патологии (6 больных)-АУТО и злокачественных - папиллярный рак (10 больных)- ЗН и доброкачественных - аденомы (5 больных) -ДН заболеваний щитовидной железы.

Результаты. Исследования маркера FAS-системы -CD-95 на поверхности клеток, взятых из тканей щитовидной железы, показывают, что наибольшее количество клеток было выявлено у больных с аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы - 6,2±1,1%, статистически достоверно отличались от количества клеток, взятых из нормальной ткани - 3,54±0,67%. Достаточно высокие показатели количественного состава клеток, содержащих на своей поверхности маркер - CD-95, имели также ткани щитовидной железы при злокачественных новообразованиях - 5,56±2,54%, что совместно с высокой плотностью рецепторов на поверхности клеток - 4,17± 1,69 свидетельствовало о наличии взаимосвязи FAS-системы с злокачественными трансформациями в тканях щитовидной железы (табл.).

При изучении уровней bcl-2 и плотности этого белка внутри клеток в не зависимости от характера патологии сохранялись практически на одном уровне, как для больных с аутоиммунной патологией 74,8±3,2% и 4,66±0,99%, так и для больных с доброкачественными 73,5±3,9% и 6,84± 1,56% заболеваниями и раком щитовидной железы

- 70,9±2,3% и 5,77±1,2% и были сравнимы с нормальной тканыо щитовидной железы - 74,2±3,8% и 3,35± 1,35%.

Иные данные получены нами при анализе количества клеток и плотности содержания внутриклеточных белков-проонкогенов - р53 и маркера пролиферации внутриядерного белка Ki-67. Так, количество Ki-67 и его плотность была различной у больных с аутоиммунными заболеваниями и новообразованиями. Количество Ki-67 и его плотность внутри клетки при АУТО составляло 0,58±0,15% и 0,727±0,158, соответственно, отличаясь от содержания клеток при ЗН - 0,99±0,14% и 1,17±0,23, и при ДН - 0,42±0,13% и 1,7+0,324 соответственно. Содержание внутриклеточного белка р53 в нормальных тканях было наиболее высоким -53,2±2,53% и уменьшалось в зависимости от заболевания. Так, уровень и плотность белка - р53 для больных с АУТО составил -16,5±2,5% и

1,97±0,34%, для больных с ДН - 34,8±3,6% и 8,67+1,48% и был минимальным у больных с ЗН - 12,5±3,4%, при высоких показателях плотности этого белка в клетках -7,14±1,34%.

Заключение. Таким образом, данные исследования основных маркеров апоптоза и пролиферации при аутоиммунных, злокачественных и доброкачественных заболеваниях щитовидной железы показывают, что уровень и плотность рецепторов белка Ьс1-2 не изменяется в зависимости от исследуемой патологии, однако в сочетании с другими нарушениями вносит свой вклад в подавление процессов апоптоза. В то же время количество клеток, содержащих белок Ю-67, было наиболее высоко у больных с раками щитовидной железы, что совместно с его достаточно высокой плотностью в клетках свидетельствовало о значительной пролиферации клеток. Количество клеток, экспрессирующих белок - р53 у больных с ДН был несколько ниже в сравнении с нормальной тканью щитовидной железы. В то же время плотность это-

го белка, более чем в два раз превышала нормальное содержание этого белка в клетках с нормальной тканью щитовидной железы, что свидетельствовало о работе в организме компенсаторных механизмов, включающих активацию выработки белка р53 для активации апоптоза в измененных клетках. У больных с раками щитовидной железы уровень белка р53 был наиболее низким в сравнении с нормальной тканью щитовидной железы и даже ниже, чем у больных с аутоиммунными заболеваниями. Однако плотность - р53 в клетках при раке щитовидной железы была достаточно высокой, что также отражало попытку включения процессов апоптоза в борьбе с раковыми клетками, однако учитывая низкое кол-во клеток с этим маркером можно думать о срывах в компенсаторных механизмах апоптоза, возможно, связанных с мутациями в геноме, ответственном за выработку белка р53 или его неэффективности, вследствие появления функционально неактивной формы - мутантного белка р53.

ТАБЛИЦА. КОЛИЧЕСТВО И ПЛОТНОСТЬ ВНЕ- И ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ МАРКЕРОВ АПОПТОЗА И ПРОЛИФЕРАЦИИ У БОЛЬНЫХ С АУТОИММУННЫМИ И ОНКОЛОГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

№ Показатель Нормальная ткань Патология щитовидной железы

АУГО ДН ЗН

1. Кол-во Клеток - СЭ95, в % 3,54±0,67 6,2±1,1 4,29±1,68 5,56±2,54

- плотность рецепторов, 1,41+0,43 1,65+0,44 2,56+1,97 4,17±1,69

2. Кол-во Клеток - р53, в % 53,2±2,53 16,5+2,5 34,8+3,6 12,5±3,4

- плотность белка, 3,05+0,67 1,97+0,34 8,67+1,48 7,14+1,34

3. Кол-во Клеток - Ю-67, в % 0,4±0,11 0,58+0,15 0,42+0,13 0,99+0,14

- плотность белка, 1,04±0,21 0,727+0,158 1,7+0,324 1,17+0,23

4. Кол-во Клеток - Ьс1-2, в % 74,2±3,8 74,8±3,2 73,5+3,9 70,9+2,3

- плотность белка, 3,35+1,35 4,66+0,99 4,66+0,99 5,77±1,2

ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ АЛЛЕРГИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА У БОЛЬНЫХ ЭНДЕМИЧЕСКИМ ЗОБОМ

Халимова З.А.. Абусуев С.А., Муслимова 3.3.

Дагестанская государственная медицинская академия, Махачкала, Дагестан, Россия

Целью работы являлось изучение особенностей течения аллергического дерматита (АД) у больных эндемическим (йододефицитным) зобом (ЭЗ). Под наблюдением находилось 17 больных ЭЗ !-П степени (ВОЗ) в сочетании с АД в возрасте от 24-67 лет, из которых у 12 человек на УЗИ было выявлено диффузное увеличение щитовидной железы, а у 5- мелкокистозные образования. По уровню гормонов (ТТГ,Тз,Тч) и клинической картине у всех больных был установлен эутиреоз. Ни в одном случае не были выявлены клинические признаки аутоиммунного тирсоидита. Наши клинические наблюдения показали, что АД у данной группы больных протекал с частыми рецидивами; заболевание продолжалось от 2-х месяцев (13 человек) до 3-х лет (4 человека); наиболее часто высыпания локализовались в области лица (11 человек), кистей рук (5 человек) и только у 1 больного - по всему телу. Элементы высыпаний в виде везикул имели склонность к слиянию с последующим образованием мокнутий и гнойных корочек. Пункционная биопсия щитовидной железы свидетельствовала о преобладании в пунктате лимфоцитов. У 4 из 17 больных было повышение титра антител (АТ) ктиреоглобулину (ТГ) (1:400 при

N 1:100)итиреоиднойиероксидазс(ТП)(1:400приЫ 1:100). У всех наблюдавшихся больных был повышен титр антител к вирусу простого герпеса (от 1:100 до 1:200 при N 1:100). Содержание общего иммуноглобулина Е у всех больных оказался повышенным (389-600 ме/мл). Отмечено, что у больных с повышенным титром АТ к ТГ и ТП наблюдались особо упорное течение АД, неэффективность стандартной ап-тигистаминной терапии и частые рецидивы дерматита.

Таким образом, сочетание АД с ЭЗ определяет более упорное и тяжелое течение АД с частыми рецидивами, характеризуется повышением титров АТ к ТГ и ТП при отсутствии классических признаков аутоиммунного тире-оидита. Из наших наблюдений вытекает, что при сочетании АД с ЭЗ необходима комплексная терапия АД с включением йодсодержащих препаратов.

ИММУННАЯ НЕДОСТАТОЧНОСТЬ У ДЕТЕЙ ПРИ ВРОЖДЕННОЙ ГЛАУКОМЕ

Хватова А.В.. Теплинская Л.Е, Мазанова Е.В.

МНИИ глазных болезней им.Гелъмгольца,

Москва, Россия

Врожденная глаукома - прогрессирующее заболевание, связанное с нарушением оттока внутриглазной жидкости и приводящее к слепоте и инвалидизации ребенка. В этиопатогенезе врожденной глаукомы решающими фак-

торами считаются наследственные, инфекционные (вирусы краснухи, ЦМВ), биохимические нарушения в организме ребенка и патология беременности матери. Однако иммунные механизмы при врожденной глаукоме остаются практически не изученными.

Цель. Определение клинической значимости нарушений иммунного статуса детей при врожденной глаукоме.

Материал и методы. Обследовано 97 детей от 3 мес. до 15 лет. Использованы общепринятые офтальмологические методы обследования и иммунологические: реакция радиальной иммунодиффузии (Манчини), ИФА для определения аутоантител (ААТ) к ДНКн.д, общему белку миелина (ОБМ), коллагену П-1У типов (К) в сыворотке и слезной жидкости.

Результаты. Анализ полученных данных установил у 62.9% детей наличие клинических признаков иммунологической недостаточности (КИН), наличие у 52.6% детей гаммапатий, преимущественно по типу гипоиммуногло-булинемии (36,1%) и у 41,7% детей ААТ к ДНКн.д, ОБМ, К в сыворотке и слезной жидкости. В структуре КИН преобладали хронические воспалительные заболевания (60,6%): ЛОР-органов, бронхолегочные, почек и др., изолированные либо сочетанные с аллергическими и ревматическими. В структуре гипоиммуноглобулинемии определялась высокая частота (36.1%) селективного или сочетанного дефицита ^А (Д-^А). Аутоиммунные изменения были обусловлены высокой частотой ОБМ-ААТ (31,8%), ДНКн,д-ААТ (29,9% детей), реже ААТ к К (8.2%), что характеризует системные и локальные деструктивные изменения в соединительной, нервной ткани и коллагеновых структурах. Доминирование локальных ААТ (в слезе) свидетельствует о развитии локального иммунного конфликта. В ходе исследования установлены ассоциативные взаимосвязи между иммунологическими параметрами и клинической симптоматикой врожденной глаукомы. Показана высокая частота развития КИН (83,7%) у детей с Д-^А (р<0,01). Одновременно у детей с Д-^А чаще обнаруживались тяжелое течение глаукомы (48,9%), чем у детей без Д-^А (28,0%, р<0,05) и высокая частота (48,2%) послеоперационных осложнений (24,7%, р<0,05). Носительство ААТ определило следующие взаимосвязи: ДНКн,д-ААТ обнаруживали связь не только с общей заболеваемостью детей воспалительного характера (88,5% и 52,4%, р<0,01), но и с тяжелым течением глаукомы, послеоперационными осложнениями, поражением диска зрительного нерва (ДЗН) и сетчатки.

Послеоперационные осложнения чаще развивались у детей при наличии ДНК-ААТ (44,4% глаз и 23,8% глаз, р<0,05). Поражение ДЗН достоверно чаще (65,2% глаз) наблюдалось у детей с ДНК-ААТ, чем без такового (32,9% глаз, р<0,01) и показатели электроретинограммы (ЭРГ) также хуже были у этих детей (73,9% и 33,3% глаз, р<0,01). Аналогичные ассоциации определены между наличием ОБМ-ААТ и низкой остротой зрения вплоть до слепоты (81,8% глаз и 23,7%, р<0,01), состоянием ДЗН (81,8% глаз и 42,1%, р<0,05), сниженными показателями ЭРГ (78,9% и 26,7% глаз, р<0.01).

Выводы. Полученные данные свидетельствуют об им-муноопосредованности врожденной глаукомы с выраженным преимуществом локальных изменений у иммуноком-

прометированных детей, что диктует использование, особенно при необходимости операционных вмешательств, иммуномодулирующих препаратов.

ДИНАМИКА УРОВНЕЙ НЕКОТОРЫХ ЦИТОКИНОВ У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ

Эйд Риал. Крылов Г.Ю., Цыганова Л.А.

Ярославская государственная медицинская академия; Ярославль, Россия

Цель: изучить уровень цитокинов с провоспалитель-ной (ШЫ-у, фактор некроза опухоли-а) и противовоспалительной (интерлейкин-4) активностью в начале и по окончании курса стационарного лечения.

Материалы и методы: обследовано 52 пациента в возрасте 49,5+ 1,7 лет с достоверным диагнозом РА. Средняя продолжительность болезни составила 10,3+ 1,1 лет, у большинства больных определялась П-Ш рентгенологическая стадия, 2 степень активности. Оценивались следующие показатели: С-реактивный белок, ревматоидный фактор сыворотки крови, СОЭ, гемоглобин, суставной индекс и счёт, тесты Ьее и НА£) в динамике (поступление - выписка). У всех больных были дважды измерены уровни 1Ь-4 и ШЫ-у, а у 34 ТОТ-а в сыворотке крови.

Результаты: за время лечения отмечаются: достоверное (р<0,05) снижение среднего уровня СОЭ с 31,0(+1,8) до 23,3(+1,9) мм/ч; положительные тенденции в динамике суставного синдрома и НА(), (величина НАС) снизилась с 19,7(+1,6) до 15,7(+1,3)). Средние уровни исследуемых цитокинов не претерпели значительной динамики в ходе лечения (пг/л): 1Ь-4 - 49,0(+ 14,5) и 53,0(+17,7); 1РЫ-у -194+(47,2) и 231 (+64,9); ТЫР-а - 6,12(+1,35) и

9,1 (+4,3).

При расчете коэффициента Пирсона получены следующие результаты: установлена прямая связь между уровнем ШЫ-уи 1Ь-4 (с=0,34; р<0,05), которая сохранялась при выписке на уровне тенденции(с=0,26), уровень цитокинов несколько нарастал, ШЫ-у в несколько большей степени, чем 1Ь-4 (прирост соответственно на 19,1 и 8,1%). В отношении ТЫР-а была выявлена связь лишь между его уровнями при поступлении и при выписке с=0,47 (р<0,01), а также отмечалось повышение среднего уровня к концу курса лечения.

Обсуждение: отмечаются большие колебания уровней цитокинов у разных больных; в то же время уровни цитокинов у одного и того же больного существенно не меняются за период стационарного лечения (с=0,94 для 1Ь-4 и ШЫ-у, а для ТЫР-а с=0,47).

Положительная динамика со стороны суставного синдрома и общепринятых показателей активности процесса (СОЭ) не сопровождается существенной динамикой уровня 1Р1\1-у, 1Ь-4 и ТЫР-а.

Выводы: в процессе стационарного лечения больных РА в течение 3-4 недель, у большинства больных наблюдается клинико-лабораторное улучшение, индивидуальные величины уровня ТЫР-а, ШЫ-у и 1Ь-4 вариабельны, не меняются значительно в ходе стационарного лечения, а их средние величины остаются без существенных изменений.