CC BY
15
УДК 619:616.98: 578. 833.27Э:636.4
Северин Р.В., здобувач2,
Щетинський 1.М., к. вет. н., професор ХДЗВА 3
Хартвська державна зооветеринарна академ1я
ПАТОГЕНЕТИЧН1 ОСОБЛИВОСТ1 2-ГО ТИПУ ЦИРКОВ1РУСНО1 ШФЕКЦП СВИНЕЙ, ЗМОДЕЛЬОВАНО1 З ВИКОРИСТАННЯМ УКРАШСЬКОГО 1ЗОЛЯТУ ЗБУДНИКА
Встановлено, що ЦВ1С у вигляд1 синдрому мультисистемного виснаження поросят (РЫШБ) проявляеться, як правило, у перюд активного формування ензоотичних осередкгв, тодг як синдром дермо-нефропатИ (РЭИБ) - проявляеться уже в сформованих стацюнарних осередках - ЦВ1С, де гострота ситуацИ з синдромом виснаженя йде на спад. ПроведенI патог1столог1чш дослгдження засвгдчили нейротроптсть видыеного нами ¡золяту «Слобгдський» ЦВС-2, яка проявляеться у присутност1 парвов1русу свиней. Особливктю патогенетичног дИ ¡золяту «Слобгдський» ЦВС-2 е первинтсть ураження головного мозку сисутв за типом з тяжким гемодиномЫними розладами метнго-енцефалту I вторинтсть легеневог та нирковог патологи.
Ключо^^ слова: цирковгрус 2-го типу, парвов1рус, мультисистемний синдром виснаження, синдром дермато-нефропатп, енцефалт, поросята.
Вступ. Цирковiрус свиней широко розповсюджений у свт i може завдавати значних збитюв галузi свинарства.
Циркулящя збудника ЦВС-2 призводить не лише до проявiв кшшчно! машфестаци та загибел^ але й в значнш мiрi негативно впливае на iмунокомпетентнi органи свиш, що не дозволяе створювати тривалий iмунiтет тсля застосування будь-яких вакцин проти шфекцшних захворювань. ЦВС-2 протжае у двох формах синдрому мультисистемного виснаження вщлучених поросят i захворювання, для якого характерна дермально-нервово-легенева-нефральна клшша (PDNS).
Матер1али 1 методи дослщження. Для зараження новонароджених поросят в умовах iнфекцiйного iзолятора використовували вiрус утримуючий матерiал з паренхiматозних оргашв та культуральнi вiруси. При постановщ бiопроби для видiлення ЦВС-2 брали сисушв вiд серонегативних маток, заражали перорально, iнтраназально, внутрiшньочеревно. Дослiджували клмко-морфолпчно, серологiчно та застосовували ПЛР.
Бюпробу ставили у ветеринарному iзоляторi на новонароджених поросятах, яких утримували за умов штучного годування (кожну експериментальну групу окремо). Зразками слугували як проби паренхiматозних органiв, так i культуральнi вiруси. 30% суспензiю дослщжуваних паренхiматозних органiв (об'еднана проба
2 Науковий кер1вник - Головко В.О. доктор ветеринарних наук, професор, академж НААНУ,
заслужений д1яч науки та техшки. Северин Р.В., Щетинський 1.М., 2011
легень,селезшки та кишечних лiмфовузликiв) осв^лювали центрифугуванням 30 хв при 3000 об/хв, поим ретельно перемшували у спiввiдношеннi 1:1 з хлороформом (без перекиав) 15хв. i знову центрифугували у тому ж режима Для шокуляци поросят використовували прозорий надосад (пiсля 1 годинно! витримки при 370С пiд ватно-марлевою пробкою для випаровування надлишку хлороформу). Культуральш матерiали вводили тваринам пiсля оброблення антибютиками.
Референтний штам «Nadle-8» парвoвiрусу свиней, депонований в ННЦ "1ЕКВМ" (отриманий з референс-лаборатори МЕБ при ННЦ "PIWet" Пoльщi, м. Пулава). 18-22-й пасажi у культурi переще-плюваних клiтин нирки свинi, вшьно1 вщ циркoвiрусу 1-го типу (активнiсть 4,5 - 5,5 ^ГО50/см3)
1золят "Слобщський-08" 2-го типу циркoвiрусу свиней, видшений в ХДЗВА на пiдсисних поросятах та адаптований в ННЦ "1ЕКВМ" до перещеплювано! культури клiтин нирки свиш лшп РК-15. 1-12-й пасажi у культурi перещеплюваних клiтин нирки свиш, вшьно! вiд циркoвiрусу 1-го типу (актившсть 5,5-7,5 1§ГО50/см3)
Результати дослщження.
В перioд з 2008 по 2011 роки нами було обстежено 89 свинотоварних господарств i в 37 iз них, що становить 41,6%, був зареестрований синдром мультисистемного виснаження поросят (PMWS) i паралельно з ним у 44 господарствах - 49,4% синдром дермо-нефропати (PDNS). Аналiз даних епiзooтoлoгiчних обстежень показав, що синдром PMWS у вах випадках передував синдрому PDNS. Як правило, у обстежених господарствах перший спалах 2-го типу циркoвiруснol шфекцп проявлявся у виглядi масового виснаження поросят групи дорощування, а шкiрянi ураження рееструвалися лише через пiврoку - рж пiсля «першо1 хвилЬ> ешзоотп - спочатку масовими, а пoтiм спорадичними проявами ураження шюри свиней груп 2-4 та 4-6 у виглядi плямистих виразок. За результатам проведених дослщжень синдром PMWS дoмiнував серед поросят мюячного-двохшсячного вiку з захворюваншстю у межах 10-20% i смертшстю пiдчас епiзooтичнoгo спалаху (перша хвиля ешзооти) 70-80%. У той же час синдром PDNS уражував переважно молодих свиней вжом 4 мюящ i старше з показником смертноси серед хворих свиней 18-20% та тривалютю захворювання не менше 50-70 дiб.
У перебiгу клiнiчнo-епiзooтoлoгiчних дослщжень ми звернули увагу на присутшсть у синдромокомплексах як PMWS, так i PDNS симптoмiв, пов'язаних з розладами центрально1 нервово1 системи та гормонально1 регуляцil росту.
Для з'ясування характеру цих виявлених патoлoгiй ми вщтворили синдром PMWS за методикою, розробленою спiльнo з вченими ННЦ «1ЕКВМ» (iнтраперiтoнеальне зараження iзoлятoм «Слобщський» ЦВС-2 у сумiшi зi штамом NADL-8 ПВС, метод патентуеться), на поросятах сисунах (n=8).
Верифiкацiю дiагнoзу проводили по результатам 1ФА, ПЛР, присутнiсть вiрусу виявили в головному мозку, легенях, нирках та лiмфoцитoпoетичних органах.
Таблиця 1.
Результат облжу бшпробн._
1нокулят Споаб заражения В1к Результати обл1ку бюпроби через (дб)
5 д1б 10 д1б
Клшчно-морфо-лопчш прояви РПГА ПЛР Клшчно-морфолоп-чш прояви РПГА ПЛР
1золят Слобщський ЦВС-2 1нтра-пергго-неально 3-5 д1б Немае (п=7) 0 (п=7) Н.д. Немае (п=7) 0 (п=7) Н.д.
Шт. ]\ГЛБЬ-8 ПВС Немае (п=5) 0 (п=5) Н.д. Немае (п=5) 0 (п=5) Н.д.
1золят Слобщський ЦВС-2 + ш. ]ЧЛБЬ-8 ПВС Виснаже-ння(п=12) "раптова смерть" (п=3) 0 (п=12) ЦВС-2 (п=3) Виснаження (п=9) "раптова смерть" (п=9) 1:8-1:32 (п=7) ЦВС-2 (п=2)
У заражених поросят констатували наявшсть ознак тяжко! нервово! патологи, у заражених - адиномiя, апаия, сонливiсть, свiтлобоязнь.
Рис.1 А- кровонаповнення та набрякання мозково! оболонки, розширення суарахно!дального простору. Пстопрепарат. Фарбування: гематоксилiн-еозiн. Лхю8Сор - 40.Х20. Б- Енцефал^. пiкнотизацiя, гли, дшянки мжроенцефаломаци, перваскулярнi та перцемолярнi, набряки. Фарбування: гематоксилш-еозш. ЛхюБСор - 40.Х20.
До цих ознак в послщуючому добавилося: слабке, рщке дихання, поколювання, витiк з носу, синюшнiсть видимих слизових оболонок та шкiри, послаблений диенурез. За результатами проведеного патоморфолопчного дослiдження трупи виснаженi, без ознак задубшня, з наповненою не звернутою темно-червоного кольору кров'ю судин пщшюрно! клiтковини та шкiри.
Лiмфатичнi вузли, ньобш мигдалики, тимус, селезшка, пiдепiтелiальнi лiмфоlднi утворення з сохральною формою але з об'емом значно меншим шж потрiбним зi стертим малюнком внутршньо! будови, окремi лiмфатичнi вузли грудно! i черевно! порожнин з помiрним серозним набряканням.
За результатами патоморфолопчного дослiдження - в оболонках головного мозку змiни, характернi для гострого серозного меншпту, в мозку - енцефал^ з сильними гемоденамiчними розладами при вiдсутностi характерних для енцефалтв нейронофагiв та периваскулярних лiмфоlдних скупчень, в судинах мозку нерiвномiрне кровонаповнення, поряд з гiперемiями, шеми, стази, у випадку гшереми - концентрична i одностороння вазолiдацiя, периваскулярний та перинейроцитарний набряк; швагшащя, в нейроцитах - змши характернi для тяжкого захворювання нервових клiтин, набряку та !х розпаду, масова загибель глiальних елементiв через пiкнотизацiю, в фрагментацш i через перетворення паличковиднi форми (рис.1). В деяких мштах, де мае мюце iшемiзацiя судин -дрiбнi вогнища енцефаломаляци без реактивних патологш зi сторони !х оточення.
Леген1 ¿з сильним набряком та
кровонаповненням, при патогiстологiчному дослщженш рiзке
розширення просвiту
капiлярiв та дрiбних вен, просвiт розширених
кровоносних судин
заповнений великою
кшькютю еритроцитiв, клiтини ендотелiю
набряклi, в деяких мюцях сильно виступають в просв^ судин, в м'язевому шарi артерiй гладенькi м'язовi клiтини набухають iншi подовжуються, в першому i другому випадку ядра також подовжуються (рис. 2). Навколо судин iз елементи, багато з них з цитоплазмою, в яких знаходяться метахроматично зафарбованi субстрати.
Таким чином в легенях розвиваються змши, яю характернi для легенево1 патологи, що виникае внаслiдок виключення чутливо1 iннервацil легенiв.
В нирках у дослщжуваних тварин нерiвномiрнiсть, мозаlчнiсть кровонаповнення, окремi дiлянки нирок сильно кровонаповнеш, а в iнших слабодiючих кровонаповнення слабке.
Рис.2 Кровонаповнення судин легень з набряком стшок альвеол. Гiстопрепарат. Фарбування: гематоксилiн-еозiн. Лх1о8Сор - 40.Х20.
змшеними стiнками накопичуються рiзнi клiтиннi
Рис.3 Моза1чне кровонаповнення нирок. Атрофи та некрози судинних клубочюв. Фарбування: гематоксилш-еозш. Лхю8Сор -40.Х20.
За результатами патопстоло-пчного дослщження в нирках своерiднi
секторiальнi, гемодина^чш розлади, сектор з тим або iншим розладом - це радiальний сектор, вiн починаеться вiд кори i тягнеться через мозковий шар до соска мозково1 лоханки. Цей сектор або з сильним кровонаповненням судинного клубочку, судин, яю проходять в глиб нефрошв i судинних елеменив естомедулярного шунта, або з iшемiзацiею таких складових. В зонi гшереми в епiтелiальних клiтинах
нефронiв помiрне по силi набрякання, вакуолiзацil в зош шеми - десквамаци, дкпротеншози, дiслiпiдози, атрофи i сухi некрози. Характерним являеться вщсутшсть в зонах деструкци процесiв кл^инно1 шфшьтрацп - лiмфоцитiв, нейрофiлiв, моноцитiв (рис. 3).
Таким чином в нирках розвиваеться нефропаия, основою яко1 е судинш розлади, а не запалення нирок
Засновуючись на отриманих результатах, ми вважаемо, що синдром мультисистемного виснаження поросят (PMWS) е первинною формою 2-го типу цирковiрусноl шфекцп свиней. У той же час синдром дермо-нефропати (PDNS) е формою ЦВС-2, яка у ешзоотолопчному вiдношеннi е похiдною вiд PMWS. З iншого боку, можливо, що для розвитку синдрому PMWS в оргашзм повинно поступати вiдносно невелика доза шфекцшно активного цирковiрусу, а для синдрому дермо-нефропати (PDNS) - велика, або надшти, або утвориться у процеа розмноження вiрусу у вщповщних органах-мiшенях.
Висновки.
ЦВ1С у виглядi синдрому мультисистемного виснаження поросят (PMWS) проявляеться, як правило, у перюд активного формування ензоотичних осередюв, тодi як синдром дермо-нефропатil (PDNS) - проявляеться уже в сформованих стацюнарних осередках - ЦВ1С, де гострота ситуаци з синдромом виснаженя йде на спад.
Патогiстологiчнi характеристики захворювання свщчать про нейротропнiсть видiленого iзоляту ЦВС-2.
Особливютю патогенетично1 дil iзоляту «Слобщський» ЦВС-2 е первиннiсть ураження головного мозку сисунiв за типом агресивного меншго-енцефал^, для якого характернi тяжю судиннi розлади.
Розвиваючих тд впливом дослщжуючого цирковiрусного iзоляту легеневi та нефральш патологiï виникають як наслщок блокування нервово1' регуляцiï легень i нирок.
Л1тература
1. Герилович, А.П. Создание системы индикации цирковирусов свиней типа 2 [Текст] /Герилович, А.П. // Мат. 6-й междунар. конф. по мол. диагн. (М., 27-29 ноября 2007). - 2007. - т.2 - с. 117.
2. Етзоотична ситуащя в свинарствi Украши i сусщшх держав. Лабораторний мошторинг: працi науково-практично! конференцiï з проблем м'ясного свинарства [Прогресивш технологiï у м'ясному свинарств^,(Алушта, 13 - 16 вересня 2010 р.), Ктв, 2010, С.21-25
3. Легкие в патологи. Часть 2. Аллергические заболевания дистрофические процессы, нарушения гемодинамики и иннервации [Под ред. Есипова И.К.] Н.: «Наука» - 1975. - 248 с.
4. Никифоров А. Ф. Изменения в тканях легких после выключения чувствительной иннервации С. 89-122
5. Роздшьський Б.1. Основи клiнiко-морфологiчноï невропатологи / Роздшьський Б.1., Зозуля 1.С., Сандуляк Л.1. - К.: Здоров'я, 1992. - 240с.
6. Allan G. PCV2: ticking time bomb? /Allan G, Krakowka S, Ellis J // - Pig Progress - 2002.-№18.-P. 14-15.
7. Allan GM. Porcine circoviruses: a review /Allan GM. Ellis JA//-J Vet Diagn Invest -2000.-№12.-Р. 3-14.
8. Chianini F. Immunohisto- logical study of the immune system cells in paraffin-embedded tissues of conventional pigs /Chianini F, Majo r N, Segale rs J, et al//-Vet Immunol Immunopathol -2001.-№82.-Р. 245-255.
9. Krakowka. Immunologic features of porcine circovirus type 2 infection / Krakowka S, Ellis JA, McNeilly F, et al.//-Viral Immunol -2002.-№15.-Р. 567-582.
10. Krakowka S. Viral wasting syndrome of swine: experimental reproduction of post- weaning multisystemic wasting syndrome in gnotobiotic swine by coinfection with porcine circovirus 2 and porcine parvovirus /Krakowka S, Ellis JA, Meehan B, et al//-Vet Pathol -2000.-№37.- Р. 254-263.
11. Magar R. Retrospective serological survey of antibodies to porcine circovirus type 1 and type 2 /Magar R, Mu Ё ller P, Larochelle R//-Can J Vet Res - 2000.- №64.-Р. 184-186.
12. Opriessnig T. Effect of porcine parvovirus vaccination on the development of PMWS in segregated early weaned pigs coinfected with type 2 porcine circovirus and porcine parvovirus /Opriessnig T, Fenaux M, Yu S, et al// -Vet Microbiol- 2004.-№98.-Р. 209- 220.
13. Tischer I. Replication of porcine circovirus: induction by glucosamine and cell cycle dependence. /Tischer I, Peters D, Rasch R, Pociuli S//-Arch Virol-1987.-№96.-P. 39-57.
Summary Severin R. V., Shchetinskiy I. M., PATHOGENETIC FEATURES OF PORCINE CIRCOVIRUS INFECTION TYPE 2 MODELED WITH THE USE OF UKRAINIAN CAUSATIVE AGENT
ISOLATE
It was ascertained that Porcine circovirus infection in the form of postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) declares itself, as a rule, in the period of active formation of enzootic nidi, whereas Porcine Dermatitis and Nephropathy Syndrome (PDNS) declares itself in already formed stationary nidi of Porcine circovirus infection where acute situation with wasting syndrome is on the wane. Carried out pathogenic histological research testified neurotropy of our "Slobidskij " isolate PCV-2 which declares itself in the presence of Porcine parvovirus. The peculiarity of pathogenetic action of "Slobidskij " isolate PCV-2 is firstly, toxical meningoencephalitis type of cerebral affection of suckers and secondly, pulmonary and nephritic pathology.
Key words: circovirus type 2, parvovirus, multisystemic wasting syndrome, Dermatitis and Nephropathy Syndrome, encephalitis, piglets.
Рецензент - д.б.н., проф. Куртяк Б.М
