CC BY
4
ка (Са/^п, которые аналогично повышались
(р < 0,001). Указанные показатели могут использоваться для ранней диагностики гастродуоденальных заболеваний.
Таким образом, полученные результаты позволяют рекомендовать данный метод для системы социально-ги-гиенического мониторинга как недорогой и неинвазив-ный способ прогнозирования донозологических состояний с целью массовой диагностики.
Литература
1. Нарциссов Р. П. Диагностические и прогностические возможности клинической цитохимии в педиатрии. Актовая речь на торжественном собрании, посвящ. 75-летию института педиатрии РАМН. — М., - 1997.
2. Студеникин М. Я. // Педиатрия. — 1994. — № 4. — Спец. выпуск. — С. 15—18.
Поступила 26.03.04
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2004
УДК 614.7:616-092:612.017.1]-053.2-078.33
О. М. Дьяконова, Н. С. Михалюк, Л. И. Шишкина, А. Г. Лобковский
ОЦЕНКА ПРЕМОРБИДНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ В ОРГАНИЗМЕ В СИСТЕМЕ СОЦИАЛЬНО-ГИГИЕНИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА
Центр Госсанэпиднадзора в г. Новомосковске и Новомосковском районе, Центр Госсанэпиднадзора в Тульской области, Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова, Москва
Осуществление оздоровительных мероприятий требует выявления негативного воздействия факторов среды обитания на ранних стадиях патологического процесса. Состояние иммунной системы организма является чувствительным индикатором вызванных нарушений и может служить критерием риска развития заболеваний [1,3].
Оценка преморбидных изменений в организме под воздействием факторов среды обитания представляется весьма актуальной в системе социально-гигиенического мониторинга и находит все большее распространение в практической деятельности госсанэпидслужбы [4].
На базе микробиологической лаборатории центра Госсанэпиднадзора в г. Новомосковске Тульской области организовано проведение массовых эпидемиологических исследований неспецифической иммунной резистентности детского населения с использованием неинвазивных методов [2]. Обследованию выбранного контингента детей предшествовало их анкетирование, позволившее сделать предварительное субъективное заключение о состоянии здоровья детей, наличии хронической патологии, предрасположенности к различным видам аллергий и других факторов, способствующих снижению иммунной резистентности организма.
В качестве иммунологических тестов использовались методы определения титра гетерофильных антител в слюне, бактерицидной функции кожи, наличия в слюне бактерий группы кишечной палочки.
Комплексная оценка полученных данных позволила дифференцировать нарушения иммунного статуса, выделив отдельные синдромы этих нарушений — дисфункцию иммунной системы (ДИС) и вторичную иммунную недостаточность (ВИН).
Воздействие факторов среды обитания в условиях Новомосковска, прежде всего загрязнение атмосферного воздуха (комплексный показатель загрязнения атмосферы Ксум в различных районах города составляет 6,66— 10,14), вызывает определенные нарушения иммунного статуса у значительной части детского населения, более выраженные в младших возрастных группах. В зависимости от района проживания различные нарушения неспецифической иммунной резистентности выявлены у 24—51% детей.
Корреляционный анализ показал наличие выраженной взаимосвязи между распространенностью нарушений иммунного статуса детей и загрязнением атмосферного воздуха (г = 0,87; р < 0,05).
Частота нарушений иммунного статуса детей, проживающих в наиболее чистом Центральном районе города, в 1,1—1,4 раза меньше, чем в других районах.
В целях оздоровления детей по предложению Центра Госсанэпиднадзора муниципальной администрацией в
зимний период года проведена всеобщая витаминизация школьников комплексными витаминными препаратами "Витрум" и "Циркус".
Для оценки эффективности проводимой витаминизации обследовали 200 школьников двух возрастных групп (7—8 и 13—14 лет), проживающих в 4 районах города, различающихся по степени загрязнения атмосферного воздуха. Результаты исследования представлены в таблице.
Проведенная витаминизация позволила существенно повысить состояние неспецифической иммунной резистентности у школьников с дисфункцией иммунной системы. В зависимости от района наблюдения их количество снизилось в возрастной группе 7—8 лет на 7—16 %, в возрастной группе 13—14 лет на 13—26%.
Положительный эффект позволяет рекомендовать витаминизацию детского населения комплексными витаминными препаратами как эффективное средство повышения неспецифической иммунной резистентности организма. Лица с синдромом ВИН нуждаются в специальном курсе иммунокоррекции после проведения углубленных иммунологических исследований в клинических условиях.
Использованный метод оценки иммунной системы детей показал достаточную степень информативности и может быть рекомендован для практического использования в учреждениях госсанэпидслужбы при проведении массовых эпидемиологических исследований в системе социально-гигиенического мониторинга.
Состояние иммунного статуса (в %) школьников Новомосковска до и после проведения витаминизации
Район наблюдения Норма ДИС ВИН
до лечения после лечения до лечения после лечения до лечения после лечения
Центральный
7—8 лет 65 72 31 24 4 '4
13—14 лет 76 89 24 11 — ' —
Пос. Огнеупорного завода
7—8 лет 56 72 39 23 5 5
13—14 лет 73 88 27 12 — —
Пос. Гипсового комбината
7—9 лет 58 68 36 28 6 4
13—14 лет 49 64 51 36 — —
Заводской
7—8 лет 53 68 42 28 5 4
13—14 лет 58 84 42 26 — —
Литература
1. Захарченко М. П., Хавинсон В. X., Нагибович О. А. и др. // Гиг. и сан. - 2001. - № 6. - С. 27-31.
2. Методы оценки неспецифической резистентности человека по иммунологическим показателям при массовых гигиенических исследованиях населения: Метод, указания. — М., 1988.
3. Петров Р. В., Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. // Иммунология. — 1994. — № 6. — С. 6—9.
4. Петрова И. В., Шинкаренко Н. И., Лещенко Г. М. и др. // Гиг. и сан. - 1993. - № 10. - С. 59-61.
5. Петрова И. В., Мольков Ю. Н., Лещенко Г. М. и др. // Материалы 9-го Всероссийского съезда гигиенистов и санитарных врачей, — М., 2001. — Т. 2. — С. 433-436.
Поступила 26.03.04
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2004 УДК 615.9:575:576.3].07
И. Е. Сидорова, Ю. А. Ревазова, В. В. Сафронов
ИЗУЧЕНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКОГО ПОЛИМОРФИЗМА И ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙ У ЛИЦ, ИМЕВШИХ КОНТАКТ С ТОКСИЧНЫМИ ХИМИЧЕСКИМИ СОЕДИНЕНИЯМИ
ГУ НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А. Н. Сысина РАМН, Центр медико-биологических и экологических проблем РАЕН, Москва
Изучение роли индивидуальной чувствительности человека к действию неблагоприятных факторов окружающей среды в донозологической диагностике представляется весьма актуальным [19, 22]. Полиморфизм ферментов, ответственных за метаболизм мутагенов и канцерогенов, определяет способность организма активировать или детоксицировать генотоксические агенты, влияет на внутреннюю (поглощенную) и биологически эффективную дозы агентов [8, 21].
Среди ферментов I фазы метаболизма (трансформация неактивных мутагенов/канцерогенов в их генетически активные формы) особое внимание исследователей привлекает семейство цитохромов Р-450 (изоформы СУР1А1, СУР1А2, СУР2А6, СУР2Е1, СУР206 и СУРЗА4). Они принимают участие в метаболизме многих мутагенов и канцерогенов, в частности полициклических ароматических углеводородов, гетероциклических аминов, афлатоксинов, нитрозоаминов и др. [1-4, 6, 9, 12— 17, 21, 23].
Среди ферментов II фазы (конъюгации) необходимо упомянуть глютатион-Б-трансферазы (СБТ), катализирующие реакцию глютамата с различными алифатическими, ароматическими и гетероциклическими радикалами различных веществ, загрязняющие атмосферу в городах и играющие роль в резистентности клеток к пере-кисному окислению жиров, алкилированию белков и повреждениям ДНК [18, 22].
Было предпринято исследование уровня цитогенети-ческих нарушений (хромосомных аберраций (ХА) в лимфоцитах периферической крови и микроядер (МЯ) в эпителиоцитах слизистой оболочки ротовой полости) и генетического полиморфизма (ГП) ферментов, участвующих в I и II фазах детоксикации, у лиц, имевших контакт с высокотоксичными химическими соединениями, и в группе сравнения.
В обследовании участвовали 77 мужчин в возрасте от 30 до 50 лет, из них 39 в анамнезе имели контакт с высокотоксичными химическими веществами; 38 человек составили группу сравнения. У всех обследованных определяли ГП по системам СУР1А1, СУР2Е1, Р(Ж54, ОБТМ1, ОБТИ и проводили цитогенетиче-ский анализ уровня в лимфоцитах периферической крови [3] и частоты МЯ в эпителиоцитах слизистой оболочки рта [10, 11].
В качестве материала для генотипирования использовали ДНК, извлеченную из лимфоцитов. С этой целью 5 мл венозной крови отбирали в шприц-контейнер, который помещали в сумку-холодильник и доставляли в лабораторию в течение 24 ч.
Оценка аллельных вариантов ферментов детоксикации методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) включала определение уровня ферментов I фазы детоксикации — цитохрома, параоксаназы (СУР1А1,
CYP2E1, PON54) и ферментов II фазы детоксикации — глутатион-Б-трансферазы Ml и TI (GSTM1 и GSTT1).
Для идентификации аллелей генов CYP1A1, CYP2E1, PON54 проводили рестрикцию продуктов амплификации с помощью эндонуклеаз HincII, Taq I, Ncol соответственно (фирма "Fermentas"). Для этого 10 мкл амплификата смешивали с 5 мкл трехкратного буфера для рестриктазы, рекомендуемого производителем и содержащего 5 ЕД фермента. Рестрицировали образец при оптимальной для каждого фермента температуре в течение 8 ч.
Разделение продуктов ПЦР и продуктов рестрикции проводили в вертикальном 7% полиакриламидном геле, приготовленном на однократном трис-боратном буфере (lxTBE).
При анализе генов GSTM1 и GSTT1 на наличие делений использовали мультиплексную ПЦР. В ампли-фикационную пробу вносили две пары праймеров, что давало возможность одновременно амплифицировать фрагменты каждого из указанных генов. Такой подход, во-первых, вдвое сокращал время генотипирования. Во-вторых,отсутствие в конкретной пробе только одного из фрагментов позволяло утверждать, что это является результатом истинной делеции в данном гене, а не следствием некорректно проведенной амплификации.
Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием компьютерной программы "Statistica 5". Разницу в структуре данных определяли по критерию х2-
Для генов GSTT1 и GSTM1 генотип 0/0 означает отсутствие на электрофореграмме фрагмента размером 215 и 315 пар оснований соответственно и то, что данный индивидуум гомозиготен по делеции. Присутствие фрагмента свидетельствует о том, что данный пациент либо гетерозиготен, либо гомозиготен по отсутствию делеции в указанных генах.
Для гена CYPIAI генотип ILE/ILE проявляется в наличии двух фрагментов размером 144 и 48 пар оснований и указывает на гомозиготность по нормальному аллелю. Генотип I LE/VAL проявляется в присутствии 3 фрагментов размером 144, 125 и 48 пар оснований и означает ге-терозиготность по мутантному аллелю.
Для гена PON54 генотип L/L означает гомозиготу по нормальному аллелю и проявляется в наличии одной полосы размером 135 пар оснований. Присутствие полос 135, 110 и 25 соответствует гетерозиготе по мутации.
Результаты цитогенетических исследований и определенные ГП по системам детоксикации приведены в табл. 1.
