CC BY
23
клиническая лабораторная диагностика. 2016; 61(9) doi 10.18821/0869-2084-2016-61-9
условия жизнедеятельности и характер профессиональной подготовки личного состава. До 80% призывников перебо-левает аденовирусными (АВ) инфекциями, около 20% заболевших нуждаются в госпитализации. По литературным данным, большинство из этих заболеваний вызваны АВ 4 и 7 типов, реже - 3, 14 и 21 типов. Высокий уровень заболеваемости, разнообразие клинических проявлений, серьезные осложнения, пневмонии и даже летальные исходы определяют актуальность своевременной разработки простых и быстрых методов специфической диагностики АВ инфекции.
Нами разработаны тест-системы для иммунофлуорес-центного (ИФЛ) и микрокультурального иммунофермент-ного анализа (мкИФА) для диагностики АВ инфекции. Для оценки эффективности их применения, а также определения генотипов АВ, циркулирующих в г Санкт-Петербурге, были исследованы 40 клинических образцов (мазки из носа) от пациентов Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова, госпитализированных с диагнозом ОРВИ с апреля по июль 2014 г. Наличие АВ было подтверждено в ПЦР в 20 образцах. Для исследования методами непрямой ИФЛ и мкИФА использовали фиксированную ацетоном культуру клеток А-549, зараженную материалами от больных. Оценка репродукции АВ в инфицированной культуре клеток в обоих методах осуществляли с использованием на стадии детекции моноклональных антител (МКА), направленных к эпитопу в составе гексона АВ. Результаты, сопоставимые с данными ПЦР (для мкИФА чувствительность 85%, специфичность 100%, для ИФЛ 87 и 100% соответственно), были получены в течение 2 суток после заражения культуры клеток. Это позволяет рекомендовать мкИФА в качестве скринингового теста для определения образцов, перспективных для последующего, более трудоемкого метода выделения вирусов. Исследование методом ИФЛ культур клеток, зараженных клиническими материалами от больных, допускает хранение и транспортировку образцов перед исследованием, кроме того, существенно облегчается интерпретация результатов в сравнении с прямым анализом клинических образцов.
Проведено выделение ДНК и секвенирование 10 из исследованных образцов, положительных на наличие АВ по результатам ПЦР. Результаты филогенетического анализа по избранному участку гена показали принадлежность АВ из всех образцов к подгруппе Е, 4 серотипу. Изучение генетического разнообразия циркулирующих среди воинского контингента АВ позволит создавать новые и совершенствовать существующие меры специфической профилактики респираторной инфекции в вооруженных силах.
Таким образом, определены диагностические показатели новых моноклональных иммунологических тестов - мкИФА и непрямой ИФЛ при детекции АВ в культуре клеток, зараженной материалами от больных, чувствительность которых в сравнении с ПЦР составила 85 и 87% соответственно при 100% специфичности.
Филиппов В.С., Лиханская Е.И., Леонтьева Н.И., Яний В.В., Галеев А.В. Оценка результатов лабораторной диагностики криптоспоридиоза различными методами. ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнад-зора, Москва
Цель работы: оценить эффективность различных методов диагностики криптоспоридиоза у больных острыми инфекционными заболеваниями. В условиях инфекционного стационара были обследованы 266 пациентов в возрасте 18-50 лет с острыми респираторными вирусными заболеваниями, протекающими с развитием бактериальных осложнений (ла-кунарная ангина, пневмония, пиелонефрит). Для идентификации криптоспоридий в кале были выбраны и использованы три вида клинико-лабораторных исследований: выявление ооцист криптоспоридий классическим микроскопическим
методом модифицированной окраски мазков фекалий по Цилю-Нильсену с последующим исследованием в иммерсионной микроскопии; качественное определение антигенов иммунохроматографическим тестом RIDA®Quick Cryptosporidium parvum и иммуноферментными анализом - Cryptosporidium Antigen (Stool) ELISA.
Частота обнаружения криптоспоридий в кале одновременно тремя методами составила 26,19% (67 пациентов); микроскопический метод позволил диагностировать в 16,92% (45 пациентов); иммунохроматографический метод - в 11,65% (31 пациент); иммуноферментный анализ - в 9,8% (26 пациентов). Совпадение положительных результатов обследования одновременно тремя методами составило 20,89%, двух методов - 42,63%, а у 4-х пациентов криптоспоридии диагностировали только методом ИФА. В 81,88% случаев диагностика криптоспоридиоза осуществлялась микроскопическим методом.
Анализ сравнительного исследования используемых методов показал большую эффективность микроскопического метода диагностики криптоспоридий с использованием модифицированной окраски мазков по Цилю-Нильсену. Однако для повышения частоты выявления криптоспоридий в кале целесообразно использовать дополнительные методы лабораторной диагностики, такие как иммунохроматографи-ческий экспресс-метод, который не требует специализированных лабораторных условий, особенно во время массовых вспышек острых инфекционных заболеваний, а также ИФА в зависимости от фазы заболевания и течения болезни.
В.В. Хабибуллина1, Э.А. Имельбаева2, А.Ж. Гильманов2, Е.В. Константинова1. Оценка показателей противовирусной защиты у доноров при производстве антицитомега-ловирусного препарата Мегавир. 'Филиал «Иммунопрепа-рат» ФГУП «НПО Микроген» Минздрава РФ, Уфа; 2ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, Уфа
Цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ) представляет серьезную проблему для современного здравоохранения, так как является одной из основных причин смертности и осложнений, возникающих при трансплантации органов и тканей. Протекая у взрослых бессимптомно, ЦМВИ становится опасной для плода во время беременности и в постна-тальном периоде. У беременных женщин ЦМВИ приводит к преждевременным родам и мертворождениям. Для профилактики и лечения ЦМВИ в качестве этиотропной терапии используются противовирусные препараты (ганцикловир, ацикловир), а при резистентности к ним - фоскарнет в высоких дозировках, что часто приводит к развитию у больных тяжелых токсических осложнений: панцитопении, нарушению почечной фильтрации, токсическому поражению печени и центральной нервной системы. Все это побуждает исследователей к поиску новых, более эффективных и безопасных средств терапии и профилактики ЦМВИ. В последние годы с этой целью было предложено применять безопасные препараты естественного происхождения, в частности, препараты нормального иммуноглобулина человека.
Целью нашего исследования явилась оценка содержания антител к цитомегаловирусу (ЦМВ) в крови у доноров для получения специфического иммуноглобулина человека. Нами было проведено исследование плазмы 1200 доноров на содержание антител (АТ) к ЦМВ методом ИФА, определение их титров в зависимости от возраста, пола, группы крови доноров, а также сезонности и региона проживания.
Согласно полученным нами данным, существенных различий в титрах антител к ЦМВ в плазме доноров, проживающих в разных районах Поволжского региона, не выявлено, что позволяет производить ее отбор для производства препарата иммуноглобулина независимо от места заготовки сырья.
Russian clinical laboratory diagnostics. 2016; 61(9)
doi 10.18821/0869-2084-2016-61-9
Сравнительный анализ уровня АТ к ЦМВ в крови не выявил различий между мужчинами и женщинами. Из 870 образцов плазмы непривитых доноров в 98 случаях (10,8±1,0%) содержание АТ к ЦМВ составило от 10,0 до 19,9 РЕ/мл, в 45 (5,3±0,5%) - более 20 РЕ/мл, что является достаточным для использования их при производстве препарата Мегавир. Содержание в плазме АТ к ЦМВ более 10 РЕ/мл чаще обнаруживается у доноров в возрасте от 30 до 45 лет, что позволяет рекомендовать использовать их плазму для производства специфического иммуноглобулина.
Нами установлено, что все ЦМВ-серонегативные доноры являются и ПЦР-негативными; доля таких доноров составляет 25-30%. Среди остальных 70-75% доноров (ЦМВ-серопозитивных) при исследовании методом ПЦР в 15% случаев в крови была обнаружена ДНК ЦМВ. Эти данные свидетельствуют о необходимости уделять особое внимание тщательному отбору сырья с применением метода генотести-рования минипулов донорской плазмы.
Исследования авидности IgG-антител в донорской плазме со специфической активностью антител к ЦМВ не менее 10 РЕ/мл показали, что из 40 образцов плазмы в 9 случаях (23%) обнаруживался низкий индекс авидности. Поэтому при производстве специфического иммуноглобулина в качестве второго этапа скрининга сырья нами предусмотрено определение индекса авидности в высокотитражных пробах плазмы.
Полученные нами результаты подтверждают имеющиеся данные о сниженной противовирусной резистентности у лиц с 0(1) группой крови: низкое содержание анти-ЦМВ антител у доноров с 0(1) группой крови встречается в 2 раза чаще, чем у лиц с другими группами крови системы АВ0, а из 106 доноров с первой группой крови минимальная активность АТ к ЦМВ (3,5±0,9 РЕ/мл) отмечена у 62 (58%) доноров.
Таким образом, для производства специфического анти-цитомегаловирусного иммуноглобулина «Мегавир» может использоваться плазма неиммунизированных доноров в возрасте 30-45 лет, с активностью анти-ЦМВ антител в индивидуальных пробах не менее 10 РЕ/мл и индексом авидности не ниже 42%, собранная в различных регионах страны.
Г.А. Хайруллина, Т.И. Махова, А.Е. Гущин. Разработка методики на основе мультиплексной ПЦР в реальном времени для выявления макролид-резистентных штаммов Mycoplasma genitalium, в образцах биологического материала. ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Ро-спотребнадзора, Москва
Mycoplasmagenitalium является причиной 10-35% случаев негонококковых, нехламидийных уретритов (НГНХУ). У женщин инфекция, вызванная M. genitalium ассоциирована с цервицитами и воспалительными заболеваниями органов малого таза. В настоящее время одной из наиболее серьезных проблем является появление и распространение штаммов M. genitalium, устойчивых к препаратам выбора - макролидам. В Европейских странах доля таких штаммов M. genitalium варьирует от 18 до 80%, что приводит к формированию хронического рецидивирующего процесса и необходимости изменения тактики лечения. Обнаружение устойчивых к макролидам штаммов M. genitalium до начала или после окончания лечения требует применения альтернативных схем лечения с использованием фторхинолонов (моксифлоксацина).
Устойчивость M. genitalium к действию макролидов обусловлена появлением мутаций в V домене гена 23S рРНК, главным образом в положениях 2058, 2059 и 2062 (нумерация по Escherichia coli). Разработанные на сегодняшний день методики выявления мутантных штаммов включают различные варианты пост-амплификационного этапа исследования, что затрудняет их использование в рутинной лабораторной практике особенно при скрининговых исследованиях. Для
этих целей была разработана методика на основе мультиплексной ПЦР в реальном времени с модифицированными генотип-специфическими гибридизационными зондами, позволяющая одновременно выявлять наличие ДНК M. genita-lium в количественном формате и дифференцировать мутант-ный генотип от дикого. С помощью разработанной методики было исследовано 393 образцов биологического материала от пациентов, инфицированных M. genitalium. В 21 (5,3%) образце были выявлены мутантные штаммы M. genitalium. Последующее секвенирование продуктов амплификации фрагмента гена 23S рРНК подтвердило наличие мутаций устойчивости к макролидам: 13 - А2059G, 5 - А2058G, 1 -А2058Т, 1 - А2058С и 1 - А2062G.
Внедрение разработанной методики в лабораторную практику позволит изучать распространенность мутантных генотипов M. genitalium и корректировать тактику лечения пациентов при выявлении мутантного штамма.
И.В. Чеботарева, Н.В. Северская. Оценка напряженности иммунитета к кори у сотрудников медицинского центра. МРНЦ им. А.Ф. Цыба - филиал ФГБУ «НМИРЦ» Минздрава РФ, Обнинск
Рост заболеваемости корью среди взрослого населения в последние годы поставил вопрос о необходимости вакцинации взрослого населения, в том числе медработников. Для выявления лиц, восприимчивых к вирусу кори, предложено определение антител класса IgG к вирусу кори.
Цель: оценить напряженность иммунитета к вирусу кори у сотрудников клиники по уровню антител класса IgG.
Обследовано 467 сотрудников клиники в возрасте 22-79 лет (медиана 52 года), лиц женского пола - 423, мужского -44. Уровень антител к вирусу кори в сыворотке крови определяли с помощью тест системы «ВектоКорь-IgG» методом твердофазного иммуноферментного анализа (Вектор-Бест, Россия). Аналитическая чувствительность - 0,07 МЕ/мл. Диапазон измеряемых концентраций 0-5 МЕ/мл. Результат анализа считался отрицательным при концентрации IgG < 0,12 МЕ/мл, неопределенным в диапазоне 0,12-0,18 МЕ/мл, положительным при концентрации > 18 МЕ/мл.
Уровень антител ниже порогового значения (0,18 МЕ/ мл) выявлен у 28/467 (6%) обследованных, из них у троих -неопределенный (0,12-0,18 МЕ/мл). Наиболее часто низкий уровень антител IgG встречался в группе лиц моложе 40 лет (20/86; 23%). В группе 41-50 лет - низкий уровень IgG наблюдался у 8/128 (6%) обследованных. Среди лиц старше 50 лет низкий уровень IgG встретился только у одного (1/253; 0,4%).
У 6% обследованных уровень антител IgG к вирусу кори ниже рекомендованного. Наиболее часто отсутствие иммунного ответа зарегистрировано у лиц моложе 40 лет (23%), что указывает на необходимость обследования с целью последующей вакцинации этой возрастной группы.
Н.В. Черемных. Частота выделения epidermalis (MRSE) у новорожденных. ГБУЗ ЯНАО «Новоуренгойская ЦГБ», Новый Уренгой
Проведение микробиологического мониторинга в учреждении родовспоможения является неотъемлемой частью противоэпидемических мероприятий. Разнообразие циркулирующей микрофлоры позволяет прогнозировать развитие тех или иных форм ГСИ среди новорожденных.
Цель исследования: изучение распространения & epider-таШ (MRSE) среди новорожденных. Противоэпидемические мероприятия.
За 2014-2015 гг. обследовано бактериологически 63 новорожденных. Отобрано 315 проб. Анализ антибиотикорези-стентности проведен с помощью программы WHONET.
Ежемесячно, выборочно, проводится лабораторное обследование 5 новорожденных 1-5 суток жизни. Это ново-
