CC BY
5УДК 577.21:575.17:599.735.5(476)
М.Е. Михайлова, Ю.В. Войтюховская
ОЦЕНКА ГЕНЕТИЧЕСКОЙ СТРУКТУРЫ БЕЛОВЕЖСКОГО ЗУБРА (BISON BONASUS L.) ПО ОДИНОЧНЫМ НУКЛЕОТИДНЫМ ЗАМЕНАМ ГЕНОВ DRB3 И DQB ГЛАВНОГО КОМПЛЕКСА ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ
ГНУ «Институт генетики и цитологии НАН Беларуси» Республика Беларусь, 220072, г. Минск, ул. Академическая, 27
Введение
Европейский (беловежский) зубр (Bison bonasus L.) - единственный дикий вид подсемейства бычьих (Bovinae) Европы, уцелевший до наших дней [1]. В настоящее время зубр имеет статус «восстанавливаемый вид», включен в Красный список МСОП, Приложение III Бернской Конвенции, Красные книги Беларуси, России, Польши, Украины, Литвы. Европейский зубр спасен от исчезновения. В тоже время под угрозой остается выживание вида в исторической перспективе [2].
В прошлом зубр занимал обширные зоны широколиственных и смешанных лесов Европы (кроме стран, расположенных на ее северной части), Кавказа, Закавказья и Северного Ирана. Bison bonasus подразделяется на 3 подвида: Bison bonasus bonasus Linnaeus - беловежский зубр, данная линия происходит от 5 животных-основателей; Bison bonasus cau-casicus Satunin - кавказский зубр, линия берет начало от 12 животных-родоначальников, включая и основателей беловежской линии, уцелевших после истребления вида к началу ХХ века; Bison bonasus hungarorum Kretzoi -трансильванско-карпатский горный зубр, получивший статус подвида. Из доживших до наших дней подвидов зубра только равнинный (беловежский, европейский) сохранился в чистом виде. Последний представитель трансильванско-карпатского горного зубра исчез в XVII веке. Кавказский подвид был истреблен в XX веке и ныне представлен гибридами с Bison b. bonasus и Bison bison разной степени кровности.
Пережитый популяцией зубра этап «бутылочного горлышка» (bottleneck) привел к повышению уровня инбридинга и распространению в популяциях рецессивных аллелей.
Это могло снизить общую жизнеспособность животных и даже привести к вымиранию вида в целом [3].
Для оздоровления генетически обедненной популяции, в начале XIX века в Беловежскую пущу был завезен самец кавказской линии зубров [4, 5]. Особь была изъята из популяции еще не испытавшей значительного сокращения численности. Этот бык по кличке Кавказ за свою жизнь оставил 7 телят (3 быка и 4 коровы) от беловежских зубриц. Они и стали основателями линии зубров, получившей название «кавказско-беловежская». Эти зубры и их потомство были отловлены и вывезены из Беловежской пущи только в 1861 году.
Крупнейшая популяция зубра в Беловежской пуще в настоящее время разделена на две части - белорусскую и польскую. Эти субпопуляции имеют единое происхождение, но последние десятилетия отличаются по принципу разведения - польская популяция сохранила чистокровную беловежскую линию, а белорусская имеет гибридное происхождение (кавказско-беловежская линия). Результаты, полученные в ходе микросателлитного анализа, проведенного нами, показали, что, несмотря на единое происхождение, высокое сходство белорусской и польской популяций европейского зубра, различные принципы разведения привели к явным отличиям в их генетической структуре. Наличие уникальных аллелей микросателлитных локусов подтверждает гибридное происхождение белорусского поголовья [6].
Генетический потенциал современных зубров сильно обеднен, отмечаются признаки вырождения беловежской линии зубров, повышенная восприимчивость животных к инфекционным заболеваниям. Известно, что
снижение генетического разнообразия генов, ответственных за формирование иммунного ответа, уменьшает чувствительность популяции к патогенам. Инфекционные заболевания считают одной из основных причин вымирания редких видов диких животных. Инбри-динговая депрессия, связанная с пережитым популяцией этапом «бутылочного горлышка», может понизить способность особей вызывать иммунный ответ из-за потери вариабельности генов, отвечающих за устойчивость к инфекциям. Это относится к высоко полиморфным генам главного комплекса гистосовместимо-сти (Major Histocompatibility Complex (МНС)) позвоночных, инициирующим иммунный ответ. Поэтому одним из направлений стратегии разведения беловежского зубра является проведение мероприятий, направленных на увеличение гетерогенности популяции за счет снижения вероятности потери одного или нескольких аллелей генов MHC.
Главный комплекс гистосовместимости представляет собой группу генов и кодируемых ими белковых рецепторов, расположенных на поверхности клеток. Комплекс генов MHC семейства полорогих (Bovidae), к которому относится зубр (Bison bonasus) и домашний крупный рогатый скот (Bos taurus), расположен на коротком плече 23-й аутосомной хромосомы, состоит из 3500 п.н. и содержит более 220 генов [7]. Они играют важнейшую роль в распознавании чужеродных агентов и развитии иммунитета. Антиген-представляющие молекулы, кодируемые MHC, относятся к классическим генам I, II и III классов. Молекулы главного комплекса гистосовместимости класса II кодируются отдельным набором генов. Эти гены расположены вблизи центромеры и включают несколько локусов (DPA, DPB, DQA, DQB, DRA, DRB).
В данной статье представлены исследования по полиморфизму генов МНС: DRB3 и DQB. Для ведения дальнейшей селекционной работы по сохранению разнообразия зубра необходимо учитывать генетический потенциал всех популяций вида - как возможного источника новых аллельных вариантов генов. В нашем исследовании проведено сравнение генетической структуры европейского зубра белорусской и польской популяций.
Материалы и методы
Для выделения ДНК использовался стандартный метод солевой экстракции [8] с некоторыми модификациями [6]. Прямое секве-нирование ПЦР-фрагментов генов - наиболее распространенный метод для описания их нуклеотидной последовательности и выявления полиморфизма. Однако из-за присутствия нескольких аллелей в локусе, секвенирование может оказаться неинформативным - нуклео-тидные последовательности разных аллель-ных вариантов накладываются друг на друга. Для решения данной проблемы необходимо клонировать амплифицированные фрагменты в вектор, при этом в плазмиду лигирует-ся только один аллель исследуемого локуса. Нами в качестве вектора использованы плаз-миды pGEM-3Zf(+) и pBluescript IIKS/SK (+). Амплификация для наращивания Т-концов осуществлялась на амплификаторе Bio-Rad (Германия) при 72 °С в течение 2 часов. Очистка полученных рестриктов проводилась набором Gel Extraction Kit (Fermentas, Литва).
Характеристики ПЦР праймеров, использованных для амплификации фрагментов обоих генов MHC, представлены в табл. 1. Амплифицируемые участки охватывают область 1-го интрона 2-го экзона изучаемых генов.
Таблица 1
Характеристика праймеров, используемых для амплификации фрагментов генов БЯВЗ и ВОВ главного комплекса гистосовместимости
Локус Праймер Последовательность праймера (5'-3') Размер ампликона, п.н. Ссылка
DRB3 HLO30-F HLO32-R ATCCTCTCTCTGCAGCACATTTCC TCGCCGCTGCACAGTGAAACTCTC 284 [9]
DQB DQB-F DQB-R TCCCCCGCAGAGGATTTCGTG CGCACTCACCTCGCCGCTGC 217 [10]
Полимеразную цепную реакцию осуществляли в 10 мкл смеси, содержащей 5-10 нг геномной ДНК, по 10 пМоль каждого праймера, 50 mM MgCl2, 4 тМ dNTP, 1х ПЦР-буфера, 1,7 ед Taq-полимеразы (Праймтех, Беларусь). Амплификация осуществлялась на автоматическом программируемом термоциклере фирмы BioRad (Германия) при следующих температурных условиях: 95 °С - 15 мин; 35 циклов 94 °С - 30 с, 55 С - 30 с, 72 °С - 30 с; финальную элонгацию мы увеличили до 15 мин при 72 °С для наращивания А-концов для лиги-рования с вектором. Амплификация каждого локуса проводилась независимо, в отдельной пробирке.
Продукты реакции визуализировались на 1,5%-ном агарозном геле с использованием маркера молекулярного веса Gene Ruler™ 1 kb DNA Ladder. Перед проведением лигирования ПЦР-продукты очищались набором DNA Gel Extraction Kit (Fermentas, Литва). Далее проводили клонирование фрагмента гена в вектор. Для этого ПЦР-продукт размером 217/284 п.н. лигировали в полученный Т-вектор. Лигазная смесь включала: 20 нг Т-вектора, 20 нг вставки, 1 мкл 10х лигазного буфера, 5U Т4-лигазы и доводили объем смеси до 10 мкл H2O.
Далее лигазную смесь использовали для трансформации бактерии E. coli, штамм XLBlue [11].
Для отбора колоний, несущих вектор со вставкой, применяли бело-голубую селекцию. Для этого добавляли в жидкую LB-среду IPTG и X-Gal. Вектор несет в себе часть гена lacZ (lacZa), другая часть данного гена содержится в бактериальной хромосоме. Продукт этого гена обуславливает голубую окраску колоний, несущих вектор, на среде, содержащей X-Gal и IPTG.
Однако при лигировании вставки в вектор последовательность lacZa прерывается, т.к. содержит внутри себя полилинкер (Multiple Cloning Site). Таким образом, клетки, несущие вектор со вставкой, образуют белые, неокрашенные колонии. Отобранные таким образом колонии пересевались на отдельные чашки Петри с твердой LB-средой, содержащей ампициллин.
Скрининг полученных колоний на наличие вставки проводили с помощью ПЦР со стандартными праймерами М13 к полилинкеру плазмиды (рис. 1).
1 2 3 4 К М
3000 п.н.
1 SOD п.н.
Рис. 1. Электрофореграмма скрининга колоний на наличие вставки с праймерами М13 1-4 - образцы (вектор (2 886 п.н.) + вставка (393 п.н.)); К - контроль, вектор без вставки (2 886 п.н.); М - маркер
Как показано на рис. 1, вставка фрагмента гена визуализируется на электрофореграмме полосой размером 3 279 п.н. (№ 1-4).
Секвенирование полученных клонов проводилось по обеим цепям фрагмента с использованием Big Dye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, США) на приборе 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, США).
Результаты и обсуждение
Основными особенностями комплекса MHC являются его значительная полигенность, то есть наличие нескольких неаллельных генов, белковые продукты которых имеют похожее строение и выполняют идентичные функции, а также ярко выраженный полиморфизм -присутствие многих аллельных форм одного и того же гена. Сохранение разнообразия генов MHC является основным элементом эффективности программ по сохранению и разведению редких и вымирающих видов животных [12].
Каждый из аллелей генов MHC обеспечивает возможность реагировать на определенный набор пептидов антигенов. Поэтому индивидуумы, обладающие гетерозиготными генотипами MHC генов, способны более эффективно индуцировать иммунный ответ на действие множества антигенов и, следовательно, имеют намного больше шансов противостоять инфекциям.
Наибольшим полиморфизмом обладают участки МНС генов, кодирующие внеклеточ-
ные домены и формирующие выемку (пептид-связывающий участок), где связываются антигены внутриклеточных или внеклеточных патогенов. Данный полиморфизм главным образом концентрируется во втором экзоне генов МНС класса II.
Wegner с соавт. выявил положительную связь между разновидностью патогенов, населяющих организм и разнообразием аллелей генов МНС в популяции [13]. Авторы предположили, что уровень инфекционной нагрузки влияет на полиморфизм МНС генов на популяционном уровне. Группа ученых из Канады также выдвинула теорию, что полиморфизм генов МНС класса II - степень разнообразия зависит от широты обитания популяции. В северных широтах разнообразие генов в популяциях выше, чем в южных [14].
Пережитое популяцией резкое снижение численности может привести к ограничению разнообразия МНС генов и увеличить уязви-
Из четырех аллелей гена DRB3 MHC, описанных для европейского зубра [1719], в белорусской популяции обнаружено три - BiboDRB3*-0101, BiboDRB3*-0201, BiboDRB3*-0301. Существенно различаются частоты встречаемости каждого ал-леля (табл. 2). Установлено, что наиболее редкий аллель для белорусской популяции Bibo-DRB3*0301 является наиболее распространенным в польской. Аллель BiboDRB3*-0401 - редкий для польской популяции, частота встречаемости 2%. В проанализировнной нами выборке он выявлен не был [20].
Такое количество аллельных вариантов гена DRB3 является достаточно низким, по сравнению с разнообразием аллельних вариантов, описанных для крупного рогатого скота (Bos taurus, 105 аллелей), американского бизона (Bison bison, 15 аллелей) и других копытных животных,
мость вида, как это было описано у гепарда [14]. Однако некоторые виды продолжают существовать, несмотря на низкий полиморфизм и даже мономорфизм, вызванный эффектом «бутылочного горлышка» в прошлом [15, 16]. Авторы приходят к мнению, что система МНС является только одной из многих систем защиты от патогенных инфекций и уровень ее полиморфизма не оказывает большого влияния на длительную выживаемость популяции. Эти данные подтверждают роль балансирующей селекции как механизма по сохранению вариабельности генов МНС в естественных популяциях.
Нами проанализирован полиморфизм 2-го экзона гена ПЯБЗ главного комплекса гистосовместимости у особей европейского зубра из белорусской популяции НП «Беловежская пуща».
таких как благородный олень (Cervus elaphus), козы, овцы [16]. Этот факт отражает резкое снижение численности популяции зубра в начале XX века. Другие виды копытных, которые подверглись эффекту «бутылочного горлышка», также демонстрируют ограниченное разнообразие генов MHC, например, американский лось (Alces alces) [16].
Полиморфизм гена DQB главного комплекса гистосовместимости изучен нами у европейского зубра впервые. Проведено исследование нуклеотидной последовательности 2-го экзона гена DQB MHC у 30 особей белорусской и 30 особей польской популяций европейского зубра. Полученный фрагмент гена DQB имеет размер 217 п.н.
В белорусской популяции выявлено 3 аллельных варианта гена DQB - Bibo-DQB-Bell, Bibo-DQB-Bel2 и Bibo-DQB-Bel+Pol1 (рис. 2).
Таблица 2
Сравнение частот аллелей гена БКВЗ главного комплекса гистосовместимости
белорусской и польской популяции
Популяции Количество особей Bibo DRB3*-0101 Bibo DRB3*-0201 Bibo DRB3*-0301 Bibo DRB3*-0401
Белорусская 56 0,563 0,384 0,053 0
Польская* 172 0,346 0,270 0,364 0,020
* - Radwan J., 2007 [14].
Аллельные варианты различаются между собой рядом несинонимичных замен (рис. 5). Также аллель Bibo-DQB-Bel1 характеризуется делецией в три нуклеотида (161-163 п.н.), что влечет выпадение 54 кодона - аминокислоты лизина (рис. 3).
В польской популяции выявлено 3 аллель-ных варианта гена DQB - Bibo-DQB-Bel+Pol 1, ВЛо^В-Ро12, ВЛо^В-Ро13 (рис. 4).
Аллельные варианты, выявленные в польской популяции зубра, также имеют различия в нуклеотдных последовательностях. Аллель Bibo-DQB-Pol2, подобно аллелю ВЛо-DQB-Bel1 белорусской популяции, имеет де-лецию в три нуклеотида в положении 160 п.н., что ведет к выпадению 53 кодона - аминокислоты глутамина (рис. 5).
Известно, что у многих представителей копытных есть общая группа аллелей, у которых присутствует подобная делеция [18].
Распределение частот встречаемости ал-лельных вариантов гена DQB белорусской и польской популяции представлено в табл. 3.
Выявлено 5 аллельных вариантов данного гена, из которых 2 характерны только для белорусской популяции (ВШо-DQB-Bel1, Bibo-DQB-Bel2), 2 - только для польской (Bibo-DQB-Pol2, В^о-DQB-Pol3) и 1 аллельный вариант (Вь bo-DQB-Bel+Pol) присутствует в обеих популяциях.
Наибольшая частота в белорусской популяции зубров выявлена у аллеля DQB Bibo-DQB-Bel1 - 67,2%. Второй аллель-
Рис. 2. Нуклеотидные последовательности аллельных вариантов гена DQB МНС в белорусской популяции зубра «•» - повторяющиеся нуклеотиды; «-» - отсутствие нуклеотида
10 20 30 40 50 60 70
КбВСНГРЫ^ТЕЛУЯГЬОКУГ/Н^ЕЕТЬИРВЗОМ ^ЕлИАУТВЬбКРЗ ЕНМНЗО-ЕХЬЕИ. К '
. 3............V.....Н. . . . УУ................ОУ, .У. . , .К____ОК. .Ы. ,Л.......
..Ь.У.Т.......УУТ. .1. .О. . УУ......О. . . . Ь. Р. .. . В. . . .КО. . .ОТ. ,ВА. .V.....
Рис. 3. Сравнение аминокислотных последовательностей, детерминируемых аллельными вариантами гена DQB
МНС в белорусской популяции зубра
Bibo DQB Bell
Bibo DQB Bel2
Bibo DQB Bel+Poll
•I"
.......................................................................................................................
_J Ю Î0 30 <0 M & и 80 SÛ 130 Ш 120 130
Blbj 55 llMoll (ГААВЖЯИШАСИСтАСбШШОСШИСЖАИКМ^
Bibo iCÏ ioiz ........*...............!.....A»..........ISîi.i.AA.A.C.G........C.G.C.A..AC.......A............ffi.A............G.TT............A..G....
fit: K6 Pel3 .........i.................................АМ,...А...............C.G,.......T.A...........................................................
100 110 120 130 140 ISO Ш 130 100 1» 200 210
Bibo та ïiîïïjiï
Е-Ьс та Polî ......A..,........ ,G!.A......T,.,,,,.G.T1...........A,.G,.,,..........!C„f..... C...I.....A..................I.........................
......................................................................................................................*.............
Рис. 4. Нуклеотидные последовательности аллельных вариантов гена DQB MHC в польской популяции зубра
Bibo DQB Bel+Poll Bibo DQB Pol2 Bibo DQB Pol3
" I " ' * I " » ' I " " I " " I ' » " I ' * ' • I » " » I " Г» I .......*.....| .... | .
10 20 30 40 50 60 70
К ïlCYFTIÎGTERVRWTR ¿XVNQBEYVRFD8DWDEVRAXTPL' RPD, EYWNSQKDILEQTR: EDTVCRHtr
Q...........5.KKQ. , . RQ. H......VN. F. . VS. . . QR. . . . F. .-H. F. К.....V........
............S. M.....R. . m......... .........................., . . . .Y, .,.
Рис. 5. Сравнение аминокислотных последовательностей, детерминируемых аллельными вариантами гена DQB
МНС в популяции европейского зубра
Таблица 3
Сравнение частот аллелей гена ВОВ главного комплекса гистосовместимости белорусской и польской популяции европейского зубра
Популяции Количество особей Bibo-DQB-Ве11 Bibo-DQB-Ве12 Bibo-DQB-Bel+Pol Bibo-DQB-Ро12 Bibo-DQB-Ро13
Белорусская 30 0,672 0,083 0,245 - -
Польская 30 - - 0,850 0,083 0,067
ный вариант, характерный для только белорусских особей, Bibo-DQB-Bel2, имеет частоту 8,3%. Аллель гена DQB Bibo-DQB-Ве1+Ро11, представленный в обеих популяциях, имеет частоту 24,5% в белорусской и 85% в польской популяции. Аллели ВШо-DQB-Pol2 и Bibo-DQB-Pol3 встречаются в популяции с частотой 8,3% и 6,7% соответственно.
В графическом изображении аллельных вариантов гена DQB особей белорусской и польской популяций в филогенетическом древе четко выделяется 3 группы кластеров -кластеры I, II; III, IV; V (рис. 6).
Кластеры I и II сформированы аллельными вариантами Bibo-DQB-Bel1 и Bibo-DQB-Ве12. Аллели гена DQB, выявленные у особей, принадлежащих к польской популяции, образуют кластеры III и IV - Bibo-DQB-Pol3, Bibo-DQB-Pol2, соответственно. Аллельный вариант Bibo-DQB-Bel+Pol1, выявленный у представителей обеих популяций, образует один кластер V.
Рис. 6. Генетические различия аллельных вариантов гена DQB МНС особей белорусской и польской популяций европейского зубра
Считается, что высокое различие имеющихся аллельных вариантов генов (множество несинонимичных замен) поддерживается в ходе естественного отбора. Особи, имеющие большее аллельное разнообразие генов МНС имеют селективное преимущество, поскольку они могут сформировать иммунный ответ против более широкого спектра антигенов.
Заключение
Таким образом, показаны различия в генетической структуре белорусской и польской популяций европейского зубра по частотам аллельных вариантов генов главного комплекса гистосов-местимости DRB3 и DQB. Выявлен аллель ВЛо-DRB3*0301 гена DRB3, имеющий очень низкую частоту в белорусской популяции европейского зубра. Выявлено присутствие в польской популяции уникальных аллельных вариантов гена Вйо^В-Ро12 и ВЛо^В-Ро13, которые являются ценными для увеличения генетического разнообразия белорусской популяции.
Выявление особей, несущих уникальные ал-лельные варианты микросателлитных локусов и генов МНС, будет способствовать увеличению генетического разнообразия и вовлечению уникальных генов и аллелей в селекционный процесс, что, несомненно, позволит повысить жизнеспособность вида.
Изучение популяций различных видов животных с помощью молекулярно-генетических методов является важным этапом при разработке мер по сохранению биоразнообразия. Использование филогенетического анализа позволяет разрабатывать более эффективные меры охраны редких и исчезающих видов, а также применять оптимальные схемы хозяйственного использования ресурсных видов дикой фауны.
Список использованных источников
1. Зубр. Морфология, систематика, эволюция, экология // М.: Наука, 1979. - С. 91-111, 442-470.
2. План мероприятий по сохранению и рациональному использованию беловежского зубра на 2015-2019 годы // Минск, 2014. - 16 с.
3. O'Brien, S.J. Trends in Ecology and Evolution / S.J. O'Brien, F.F. Evermann, // № 3. -1988. - P. 254-259.
4. Корочкина, Л.Н. Зубр Беловежской пущи / Л.Н. Корочкина, В.А. Вакула // Минск, 2008. - C. 18-20.
5. Сипко, Т.П. Зубр. Популяционно-генети-ческий анализ / Т.П. Сипко // Вопросы современного охотоведения. - 2002. - С. 386-405.
6. Михайлова, М.Е. Сравнение аллельных частот микросателлитных локусов белорусской и польской популяций европейского зубра (Bison bonasus) / М.Е. Михайлова, Ю.В. Медведева // Весщ НАН Беларусь -№ 2. - 2013. - С. 47-52.
7. Abbas, A.K. Low MHC DRB class II diversity in the mountain goat: past bottlenecks and possible role of pathogens and parasites / A.K. Abbas, A H. Lichtman, S. Pillai // Cellular and Molecular Immunology. - 2007. - Р. 566.
8. Введение в молекулярную генную диагностику сельскохозяйственных животных / Н А. Зиновьева [и др.] / ВИЖ. - 2002. - 112 с.
9. Characterization of Bison bison major histocompatibility complex class IIa haplo-types / D.L. Traul [et al.] // Immunogenetics. -Vol. 57(11). - 2005. - P. 845-854.
10. Characterization of BoLA-DRB3.2 Alleles in Hanwoo (Korean cattle) by Sequence Based Typing (SBT) / H. J. Jeong [et al.] // Asian-Aust. J. Anim. Sci. - Vol. 20, No. 12. - 2007. -Р. 1791- 1797
11. Маниатис, Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис - М.: Мир, 1984. - 189 с.
12. Hughes, A.L. MHC polymorphism and the design of captive breeding programs /
A.L. Hughes // Conservation Biology. - 1991. -Vol. 5. - Р. 249-251.
13. Wegner, K.M. Multiple parasites are driving major histocompatibility complex polymorphism in the wild / K.M. Wegner, T.B.H. Reusch, M. Kalbe // Journal of Evolutionary Biology. -2003. - Vol. 16. - P. 224-232.
14. Mainguy, J. Low MHC DRB class II diversity in the mountain goat: past bottlenecks and possible role of pathogens and parasites / J. Mainguy // Conservation Genetics. - 2009. -Vol. 15. - P. 467-474.
15. O'Brien, S.J. Genetic-basis for species vulnerability in the cheetah / S.J. O'Brien [et al.] // 1985. - Science. -Vol. 227. - Р. 1428-1434
16. Mikko, S. Low major histocompatibility complex class II diversity in European and North American moose / S. Mikko, L. Andersson // Proc Natl Acad Sci USA. - Vol. 92. - 1995. -P. 4259-4263
17. Radwan, J. Does reduced MHC diversity decrease viability of vertebrate populations? / J. Radwan // Biological Conservation. -№ 143. - 2010. - P. 537-544.
18. MHC-DRB3 variation in a free-living population of the European bison, Bison bonasus / J. Radwan [et al.] // Molecular Ecology. -Vol. 16. - 2007. - P. 531-540.
19. Tokarska, M. Genetic status of the European bison Bison bonasus after extinction in the wild and subsequent recovery / M. Tokarska // Mammal Rev. - Vol. 41(2). - 2011. - P. 151-162.
20. Medvedeva, Y. MHC genes variation in the Belorussian population of European bison (Bison bonasus). International conference in Landscape Genetics, Bialowieza, Polska. 10-12 October 2011 / Y. Medvedeva, M. Mikhailova // Mammal Research Institute Polish Academy of Science. - Bialowieza, 2011. - P. 27.
Дата поступления статьи 24 сентбря 2014 г.
