CC BY
28
УДК 615.411:633.8
ОТДЕЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НАСТОЕК НА ОСНОВЕ ARONIA MELANOCARPA FRUCTUS U TANACETUM VULGARE FLOVERS Ермакова С.А., Стрелычева К.А., Коган Е.Г., Кисилёва А.Н. Научный руководитель — к. фарм. н., доцент Кисилёва А.Н.
Смоленский государственный медицинский университет, Россия, 214019, Смоленск, ул. Крупской, 28.
[email protected] - Ермакова Светлана Александровна
Резюме. Целью исследования явилось проведение группы экспериментов по измерению количественного содержание флавоноидов в пересчете на катехин, определению антиоксидантной активности (АОА) и изучение микробиологической чистоты настоек, приготовленных на спирте различной концентрации (30%, 50%, 70%, 90%) из Aronia melanocarpa fructus и из Tanacetum vulgare flores. Составлены рекомендации для их перспективного применения в нуждах фармации и медицины.
Ключевые слова: настойка, арония черноплодная, пижма обыкновенная, 1,1-дифенил-1-пикрилгидразил, электронный парамагнитный резонанс(ЭПР), спектрофотометрия.
SELECTED STUDIES OF ARONIA MELANOCARPAFRUCTUS AND TANACETUM VULGARE FLORES TINCTURES
Ermakova S. A., Kogan E. G., Strelycheva K.A., Kisiliova A.N.
Scientific advisor — associate professor Kisiliova A.N., Candidate of Pharmacy
Smolensk State Medical University, Russia, 214019, Smolensk, Krupskoy St., 28.
Summary. The purpose of the study was to conduct a series of experiments to determine the quantitative content of flavonoid was measured measured the the catechine content, to determine the antioxidant activity (AOA) and to study the microbiologically pure tinctures prepared with different concentrations of ethanol (30%, 50%, 70%, 90%) of Aronia melanocarpa fructus and of Tanacetum vulgare flores. Recommendation were made for their potential applications in medicine and pharmacy. Key words: tincture, Aronia melanocarpa fructus Tanacetum vulgare flores, 1,1-diphenyl-1-picrylhydrazyl, electron paramagnetic resonance (EPR), spectrophotometry.
Введение. Флавоноиды способны ингибировать перекисное окисление липидов (ПОЛ), липопротеинов низкой плотности и ДНК[1]. Лекарственные препараты на основе растительного материала, обладают достаточно сильным лечебным эффектом [2], поэтому изучение возможностей биологически активных соединений ЛРС является перспективным.
Целью настоящей работы явилось измерение количественного содержания флавоноидов, антиоксидантной активности настоек, полученных на спирте различной концентрации из аронии черноплодной плодов и из пижмы обыкновенной цветков, а также определение антимикробного действия и микробиологической чистоты образцов.
Материалы и методы. Настойки изготавливались методом перколяции в соотношении 1:5 из стандартизованного сырья Aronia melanocarpa fructus и Tanacetum vulgare flores. В качестве экстрагента выступал спирт этиловый в концентрациях: 35, 50, 70 и 90%, получили 8 настоек.
В дальнейшем проводилось изучение количественного содержания флавоноидов по следующей методике: в качестве реагентов использовались растворы 5% натрия нитрита, 10% алюминия хлорида, 1М натрия гидроксид. В качестве стандарта выступал катехин.
Для приготовления образца сравнения в кювету помещали: 1,4 мл воды, 100 мкл раствора катехина, 60 мкл 5% NaNO2 и 60 мкл 10% AICI3. Выдерживали в термостате
при 25С, далее добавляли 1М №ОН, хорошо перемешивали и измеряли оптическую плотность при 510 нм. Далее проводили расчеты по калибровочному графику. Оценка антиоксидантной активности производилась на электронном
парамагнитном резонансе (ЭПР), который работает в X диапазоне (СВЧ 9,4 ГГц). Метод основан на определении изменений концентрации К,К-дифенил-К-пикрилгидразильного радикала (ДФПГ) в результате химической реакции с антиоксидантом [3]. В реакциях с соединениями, содержащими С-Н, К-Н, С -Н связи ДФПГ действует как акцептор протонов, превращаясь в гидразин. Расчет количества нейтрализованных свободных радикалов за счет уменьшения интенсивности сигнала ЭПР рассчитывается как двойной интеграл спектра, путём сравнения со стандартом (100 мкл дистиллированной воды с 375 мкл раствора радикала) [4]. Все измерения проводились 3 раза. Расчёт количества прореагировавшего ДФПГ производился по следующей формуле:
т
ДФПГ
_ СДФПГ1ХУДФПГ.
V образца
_ s м * образца ч .. р
дфпгх — —7 ) х сдфпг
* гтан^апта
где тдФПГ - количество прореагировавшего ДФПГ, мг/мл;
УдФПГ - объём добавленного ДФПГ, мкл;
V,
I,
образца образца
- объём исследуемого образца, мкл; - интенсивность исследуемого
образца;
¡стандарта - интенсивность стандарта; СдФПГ - концентрация ДФПГ, мг/мл. Статистическую обработку полученных результатов проводили при помощи компьютерной программы STATGRAPHICS Plus 5.0. Все измерения выполнялись по методике, предложенной кафедрой физической химии фармацевтического факультета Варшавского медицинского университета.
Определение антимикробного действия и микробиологической чистоты испытуемых настоек проводилось согласно методике, представленной в ГФ XIII издания ОФС.1.2.4.0002.15.
Результаты и их обсуждения. Этиловый спирт в концентрации 70% обладает наиболее сильной извлекающей способностью, при этом стоит отметить возможность выбора 35% и 50% этилового спирта как экстрагента флавоноидов пижмы обыкновенной. Сравнительные данные приведены в таблице 1.
1 стандарта
Таблица 1. Сравнительные данные количественного содержания флавоноидов в настойках
^\Содержание ^"~-\флавоноидов мг А/мл Концентрация спирта, % Настойка плодов аронии черноплодной Настойка цветков пижмы обыкновенной
35 0,753 +/- 0,072 4,967 +/- 0,359
50 0,807 +/- 0,087 3,783 +/- 0,374
70 5,977 +/- 0,456 5,497 +/- 0,254
90 0,57 +/- 0,099 0,99 +/- 0,049
При определении антиоксидантной активности настоек аронии черноплодной выявили следующую закономерность: с увеличением концентрации экстрагента (спирта этилового) АОА настоек, полученных из аронии черноплодной, уменьшается. При концентрации этилового спирта 35% составляет 23,48 мг/мл ДФПГ, а
при концентрации 90% - 4,66 мг/мл ДФПГ. Определенной зависимости между концентрацией экстрагента и АОА настоек пижмы обыкновенной не наблюдалась. Наивысшая АОА характерна для настойки из пижмы обыкновенной, полученной на 90% спирте этиловом, наименьшая активность была отмечена у настойки на 50% спирте этиловом (рис.1).
Основной Основной Основной Основной Основной
Основной
сновной
35%
•Ос.
новной
50%
Основной
Основной
70%
т% Основной
90%
Рис. 1. Сравнительная АОА настоек из пижмы обыкновенной и аронии черноплодной.
На горизонтальной оси отражается концентрация спирта этилового в процентах, на вертикальной оси - значения ДФПГ в мг/мл. Верхняя кривая отражает АОА настоек, полученных на основе пижмы обыкновенной, нижняя - настоек из аронии черноплодной.
При этом следует отметить, что АОА in vitro настоек из пижмы обыкновенной выше, чем у настоек из аронии черноплодной. Антимикробной активностью обладали настойки аронии черноплодной плодов, изготовленные на 70% и 90% спирте этиловом, настойки пижмы обыкновенной цветков - на 50%, 70% и 90%. Была выявлена противостафилакокковая и противопсевдомонадная активность.
Настойки пижмы обыкновенной цветков, изготовленные на 70% и 90% спирте этиловом, обладали бактериостатической активностью против Escherichia coli. Данные свойства могли быть связаны с содержанием этилового спирта в высоких концентрациях, поэтому его свойства были нивелированы путем разведения водой для инъекций в соотношении 1:10.
В результате дальнейших испытаний на микробиологическую чистоту, было выявлено отсутствие возможной
контаминации микроорганизмами. Следует отметить, что пижма обыкновенная показала бактерицидные свойства против
Staphylococcus aureus, а также изменила свойства Pseudomonas aeruginosa (нарушает образование пленки выросшей колонии).
Данные свойства нельзя связать с действием спирта, т.к. параллельно были поставлены опыты с водным извлечением из пижмы обыкновенной цветков. Выводы
1. Наиболее выгодным является использование 35% спирта этилового в качестве экстрагента для цветков пижмы обыкновенной, т.к. при данной концентрации сравнительно высоко содержание экстрагируемых флавоноидов и АОА настойки.
2. Для плодов аронии черноплодной с точки зрения АОА лучше, использовать 35% этиловый спирт, однако извлекающая способность при этой концентрации не высока, следовательно, для более рационального использования ЛРС возможно производить извлечение 70% спиртом этиловым с последующим доведением до требуемой концентрации.
3. Настойки пижмы обыкновенной плодов обладают более высокой АОА по сравнению с настойками аронии черноплодной, при чем АОА настолько высока, что превышает в 11 раз (экстрагент - спирт этиловый 90%).
4. Изучаемые настойки являются микробиологически чистыми объектами.
5. Выявленные антиоксидантные и микробиологические свойства являются предпосылкой для дальнейшего изучения и разработки перспективных препаратов и лечебной косметики на основе широко распространенного в средней
климатической полосе ЛРС: пижма обыкновенная и арония черноплодная.
Литература
1. Харборн Дж. Биохимия фенольных соединений. Пер. с англ. - 2011. - 452 с.
2. Самылина И.А., Северцева В.А. Лекарственные растения государственной фармакопеи. М.: АНМИ, 2003. - 534 с.
3. Olas B. et alt. Comparative anti-platelet and antioxidant properties of polyphenol rich extracts from: berries of Aronia melanocarpa, seeds of grape and bark of Yucca schidigera in vitro. // Journal of Platelets. - 2008. - 19 (1). - Р. 70-77.
4. Cimpoiu C, Cristea M, Hosu A. Sandru M, Seserman L. Antioxidant activity prediction and classification of some teas using neutral networks. // Food Chem. - 2011. - V.127. - Р. 1333-1328.
