CC BY
68
УДК 615.411
ИЗУЧЕНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ И СОДЕРЖАНИЯ
ДЕЙСТВУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ В НАСТОЙКАХ ARONIA MELANOCARPA FRUCTUS
И VIBURNUM OPULUS FRUCTUS
Зеленеева В.В., Кисилёва А.Н., Коган Е.Г.
Научный руководитель - к.ф.н., доцент Кисилёва А.Н.
Смоленский государственный медицинский университет, Россия, 214019, Смоленск, ул. Крупской, 28.
[email protected] - Зеленеева Валентина Викторовна
Резюме. Для определения оптимальной концентрации этилового спирта, обеспечивающей наибольший выход биологически активных веществ, были приготовлены настойки из Aronia melanocarpa fructus, Viburnum opulus fructus и их комбинация. Общее содержание флавоноидов в пересчете на катехин проводили спектрофотометрическим методом. Определение антиоксидантной активности, проводили с помощью электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). В исследовании было выявлено, что 40% этиловый спирт обеспечивает наибольший выход флавоноидов и наибольшую антиоксидантную активность в исследуемых настойках.
Ключевые слова: флавоноиды, антиоксидантная активность, калина обыкновенная, арония черноплодная.
STUDY OF ANTIOXIDANT ACTIVITY AND CONTENT OF ACTIVE SUBSTANCES IN ARONIA MELANOCARPA FRUIT AND VIBURNUM OPULUS FRUIT TINCTURES Zeleneeva. V. V., Kisilyova A.N., Kogan E.G.
Scientific advisors — Associate Professor Kisilyova A.N., Candidate of Pharmacy
Smolensk State Medical University, 28, Krupskoy St., Smolensk, 214019, Russia Abstract. To determine optimal concentration of ethyl alcohol, providing the highest discharge of biologically active substances and antioxidant activity we prepared tinctures of Aronia melanocarpa fruits, Viburnum opulus fruits and their combination. The total content of flavonoids in terms of catechin was estimated by spectrophotometry. Antioxidant activity of the tinctures was assessed with EPR-spectroscopy. The study revealed that 40% of ethyl alcohol provided the highest discharge of flavonoids and the highest antioxidant activity in the studied tinctures. Key words: flavonoids, antioxidant activity, Aronia melanocarpa, Viburnum opulus.
Введение. Развитее современной медицины позволяет предотвращать и излечивать многие болезни. В то же время значительно возросло количество хронических заболеваний. В поисках новых эффективных и безопасных препаратов клиницисты и фармакологи обращаются к лекарственным растениям.
Вызвавший удивление
«Французский парадокс» заставил ученых обратить внимание на полифенольные соединения растений. Многообразные по своей структуре полифенолы оказывают разнонаправленное фармакологическое действие на организм человека. Всеобщая заинтересованность и возможность широкого применения полифенольных соединений обуславливает актуальность поиска их новых недорогих и доступных
сырьевых источников [1]. Перспективой в этом плане являются арония черноплодная (Aronia melanocarpa) и калина обыкновенная (Viburnum opulus). На плоды аронии свежие и высушенные разработаны Фармакопейные статьи для включения в Государственную
Фармакопею XIII издания, содержащие малоинформативные и неселективные методы качественного и количественного анализа флавоноидов в сырье.
Целью настоящей работы явилось разработка оптимальных условий экстракции, обеспечивающих наибольший выход БАВ и антиоксидантную активность настоек из Aronia melanocarpa и Viburnum opulus fructus.
Методика. Все исследования были проведены на базе факультета фармации
Варшавского медицинского университета. Настойки были получены в соотношении 1:5 методом перколяции, экстрагент -40%, 70%, 95% спирт этиловый. В качестве лекарственного растительного сырья использовали: Aronia melanocarpa fructus, Viburnum opulus fructus и их комбинация (0,5:0,5). Общее содержание флавоноидов в пересчете на катехин проводили следующим образом. Для приготовления стандарта брали 20 мг катехина и помещали в колбу на 50 мл, доводили водой очищенной до метки. В кювету помещали 1,4 мл воды очищенной и 100 мкл исследуемого образца, 60 мкл 5% раствор натрия нитрита и 60 мкл 10% раствор алюминия хлорида и хорошо перемешивали. Для приготовления образца сравнения в кювету помещали 1,4 мл воды, 100 мкл раствора катехина, 60 мкл 5% раствор натрия нитрита и 60 мкл 10% раствора алюминия хлорида. Выдерживали в течение 5 минут в термостате при 25°С, далее добавляли 0,4 мл 1М NaOH, хорошо перемешивали и измеряли оптическую плотность при 510 нм. Далее проводили расчеты по калибровочному графику.
Определение антиоксидантной активности проводили с использованием свободного радикала 1,1-дифенил-1-пикрилгидразил (ДФПГ), с помощью электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). Данный метод основан на
определении изменений концентрации ДФПГ в результате реакции с антиоксидантом. ЭПР работает под действием магнитного поля с постоянной частотой (СВЧ). ЭПР-спектрометр на факультете фармации Варшавского медицинского университета работает в X диапазоне (СВЧ 9,4 ГГц).
Разбавляют 50 мл каждой настойки водой. Добавляют ДФПГ около 1,3 мм. Перемешивают на аппарате фирмы Vortex в течение 30 секунд. Выдерживают раствор 20 минут в темном месте и повторно перемешивают. Заполняют капилляр полученным раствором и записывают ЭПР спектры [2]. Результаты исследования обработаны статистически при помощи STATGRAPHICS Plus for Windows (n=6).
Результаты исследования и их обсуждение. Содержание флавоноидов (в пересчете на катехин) в настойках (мг КА/мл): Aroniae melanocarpae + Viburni opuli 40% - 5.9766±0,455576; Aroniae melanocarpae 70% - 1,00667±0,253739; Aroniae melanocarpae + Viburni opuli 95% -2,07±0,0496828; Aroniae melanocarpae 70% - 5,48667±0,339095; Aroniae melanocarpae 95% - 0,713333±0,0143422; Aroniae melanocarpae 40% - 3,37±0,430265; Viburni opuli 70% - 5,17333±0,539883; Viburni opuli 40% - 6,00333±0,6212; Viburni opuli 95% -2,26333±0,248827.
7 6 5 4 3 2 1 0
I
настойка Aroniae melanocarpae
настойка Viburni opuli
настойка Aroniae melanocarpae + Viburni opuli
□ 40% спирт
□ 70% спирт ■ 95% спирт
Рис. 1. Содержание флавоноидов в исследуемых настойках.
Антиоксидантная активность
(мг/мл): Aroniae melanocarpae + Viburni opuli 40% - 57,76±0,08455; Aroniae melanocarpae + Viburni opuli 70% -71,39±0,3164; Aroniae melanocarpae + Viburni opuli 95% - 24,55±0,07154; Aroniae
melanocarpae 40% - 44,63±0,08618; Aroniae melanocarpae 70% - 13,86±0,06992; Aroniae melanocarpae 95% - 18,09±0,02548; Viburni opuli 40% - 162,97±0,0322; Viburni opuli 70% - 158,06±0,0186; Viburni opuli 95% -37,06±0,08178.
180 160 140 120 100 80 60 40 20
0
I
настойка Aroniae настойка Viburni настойка Aroniae melanocarpae opuli melanocarpae +
Viburni opuli
□ 40% спирт
□ 70% спирт ■ 95% спирт
Рис. 2. Результаты антиоксидантной Заключение. Наибольшее
содержание флавоноидов в пересчете на катехин было выявлено в настойке калины обыкновенной, приготовленной на 40% спирте этиловом. Наименьшее содержание флавоноидов в комбинированной настойке из аронии черноплодной и калины обыкновенной, полученной на 95% этиловом спирте. Наибольшую
антиоксидантную активность проявила
активности в исследуемых настойках. настойка калины обыкновенной, приготовленная на 40% спирте этиловом. Наименьшая антиоксидантная активность была выявлена в настойке аронии черноплодной на 70% спирте этиловом. Таким образом, оптимальной
концентрацией спирта, наибольший выход наибольшую
обеспечивающей флавоноидов и антиоксидантную
активность, является 40%.
Литература
1. Куркин В.А. Фармакогнозия: учебник для студентов фармацевтических вузов. - Самара: ООО «Офорт», СамГМУ, 2004. - 1180 с.
2. Cimpoiu C., Cristea M., Hosu A., Sandru M., Seserman L. Antioxidant activity prediction and classification of some teas using neutral networks // Food Chem. - 2011. - N 127. -P. 1333-1328.
