CC BY
21
ПАТОМОРФОЛОГ1Я
© Романюк А. М., Гирявенко Н. I., ЛиндЫ М. С., Скора В. В., Золотарьова А. В. УДК 616-06.6/618.12-006
Романюк А. М., Гирявенко Н. I., Линдiн М. С., Скора В. В., Золотарьова А. В.
ОСОБЛИВОСТ1 ЕКСПРЕСИ МАРКЕРА ПРОЛ1ФЕРАЦИ К1-67
У ТКАНИН ПЕРВИННОГО РАКУ МАТКОВИХ ТРУБ
Сумський державний ушверситет, медичний iнститут (м. Суми)
antibiotikdoktor@mail.ru
Дана робота виконана в межах науково-дослщ-ницько! теми «Морфогенез загальнопатолопчних процес1в», № державно! реестрацп 013и003315.
Вступ. Захворюван1сть на первинний рак матко-вих труб (ПРМТ), за даними р1зних автор1в, колива-еться в межах вщ 0,3% до 2% серед вс1х злояк1сних новоутворень ж1ночих статевих оргаыв [3,4,9,12]. Вперше достов1рно г1столог1чно пщтверджену пер-винну карциному матково! труби описав К. Ог1Итапп в 1888 роц1. Як правило, ет1олог1чн1 чинники захворю-вання на ПРМТ залишаються мало вивченими. Вва-жаеться, що розвиток неоплазИ пов'язаний з1 спе-циф1чним та неспециф1чним хрон1чним запаленням, ендометрюзом маткових труб та Ышими факторами [4,8,11]. Не можна повнютю виключити I вплив гене-тично! схильност1 - деяк1 з пац1енток являються нолями патолопчно! мутацИ ВЯОА-1 и ВЯОА-2 [4,5,10]. Встановлено, що ВЯОА-мутацИ мають близько 15% хворих з ПРМТ М. Б. Вгове I соавт. (2002) з цтлю ви-вчення росту злоякюних новоутворень у носИв ВЯОА-1 мутацИ обстежили 381 ж1нку 1з 147 с1мей. Виявило-ся, що в пор1внянн1 з загальною популяц1ею, у носИв патолопчно! мутацИ захворюванють на рак товстого кишк1вника вище в 2 рази, пщшлунково! залози - в 3, шлунку - в 4, а маткових труб - в 120 раз1в [6]. За-хворювання до операцИ д1агностуеться дуже р1дко (0-21%) [3]. Частше у пухлинний процес залучаеть-ся ампулярна частина маткових труб, дистальний (ф1мбр1альний) юнець труб при цьому, як правило, запаяний. Це супроводжуеться накопиченням рщини та кров1 в порожнин труб, !х набряком та под1бнютю до г1дро- або гематосальп1нксу. ПРМТ мае кл1н1чну та гютолопчну схож1сть з раком яечник1в [7]. Частота встановлення правильного д1агнозу здебтьшо-го залежить в1д типу л1кувального закладу, до якого звернулась хвора. Так, в онколопчних закладах частота встановлення д1агнозу до операцИ та гютоло-г1чне дослщження видалено! пухлини значно вища, н1ж в 1нших л1кувальних установах. Враховуючи т1сну анатом1чну та функц1ональну сптьнють яечника I матково! труби, !х гормональний взаемозв'язок, при «злоякюних тубоовар1альних пухлинах» дуже часто
важко встановити топ1чнють початкового пухлинно-го процесу. В пухлинному конгломерат! первиннють ураження (маткова труба чи яечник) I шляхи поши-рення неопластичного процесу визначити важко на-в1ть при морфолопчному досл1дженн1 операц1йного матер1алу. Тому вважаеться, що розвиток пухлинного процесу у матковм труб1 в кл1н1чн1й практиц1 реально зустр1чаеться значно частше [2].
На сьогодн1шн1й день вже чггко доведено, що у хворих з пухлинами одн1е! локал1зац1! з однаковим розповсюдженням неопластичного процесу, гюто-лог1чною будовою та ступенем диференц1ювання ракових кл1тин результати л1кування можуть значно в1др1знятися. Саме тому важливе м1сце пос1-дае щентиф1кац1я пухлинних маркер1в, як1 пов'язан1 з прогнозом переб1гу захворювання. Прол1фератив-ний шдекс у пухлинах багатьох локал1зац1й е неза-лежним прогностичним показником, який корелюе з в1рог1дн1стю виникнення рецидиву та з загальною I безрецидивною виживанютю [1]. Одним 1з метод1в, що використовуеться для оц1нки прол1феративно! активност1 е виявлення експресп б1лка К1-67. Антиген Ю-67 е найб1льш над1йним I ч1тким маркером прол1ферац1!, який в1дносять до регуляторних б1лк1в, оск1льки його поява сп1впадае з моментом вступу кгмтини в м1тотичний цикл [5]. Експрес1я К1-67 дозво-ляе вид1лити пухлины кл1тини, що знаходяться в активна фаз1 кл1тинного циклу на всьому його протяз1 (Э,, Б, 02 та М фази), кр1м 00-пер1ода. В1н дозволяе визначити «прихований» прол1феративний потенц1-ал пухлини [1,5].
Мета дослщження - визначити особливост1 експрес1! маркера прол1ферац1! К1-67 у тканин1 пер-винного раку маткових труб.
Об'ект I методи дослщження. З метою визна-чення прол1феративно! активност1 кл1тин у тканин1 ПРМТ нами проанал1зований операц1йний матер1ал вщ 30 ж1нок, прооперованих з приводу раку маткових труб за перюд 2005-2015 рр. Пюляоперацмний ма-тер1ал був розд1лений на дек1лька груп у залежност1 в1д ступеню диференцювання неоплаз1й в1дпов1дно до класиф1кац1й ВОЗ та кглычних стад1й захворюван-
ня за FIGO. При I стадп пухлина обмежена матково( трубою (трубами), при II - пухлина залучае одну або обидвi труби i поширюеться на тазовi органи, при III стадп - пухлина вражае одну або обидвi матковi труби з iмплантацiею по очеревиш поза тазу та / або метастазами в регюнарних лiмфатичних вузлах.
Для пстолопчноУ верифiкацiï дiагнозу використо-вували парафiновi блоки та виготовлеш з них псто-логiчнi сермно-ступшчат зрiзи, забарвленi гематок-силiном та еозином. Характер морфолопчних змiн маткових труб вивчали при збшьшенш мiкроскопа Ч100-400. lмуногiстохiмiчне (1ГХ) дослiдження проводили на парафшових зрiзах iз використанням кро-лячих моноклональних антитш до бiлка Ki-67 (клон SP6). Для цього виготовляли зрiзи завтовшки 3-4 мкм, якi пiдлягали стандартна депарафiнiзацiï та зневодненню у ксилолi та спиртах у зростаючих концентращях. Демаскування антигенiв проводили у водянм банi «ВБ-4» при температурi 970С. Реакцiя антиген-антитiло була вiзуалiзована з використанням системи детекцп «Ultra Vision Quanto Détection System HRP DAB Chromogen» («Thermo scientific», США), яка включала блокування ендогенно!' актив-ностi пероксидази перекиснем водню, блокування неспецифiчного фонового фарбування з використанням «Ultra V block», посилення реакцп «Primary Antibody Amplifier Quanto» та юнцева вiзуалiзацiя дiа-мшобензидином з дофарбовуванням ядер гематок-силЫом Маера. Позитивним результатом ¡MyHoricToxiMin-но' реакцiï вважалася наяв-нiсть специфiчного забарв-лення ядер пухлинних кл^ин. Пiдрахунки iндексу пролiфе-рацiï проводили за допомо-гою свiтлового мiкроскопа «MICROmed», аналiзуючи наявнiсть позитивноï реакцп у 1000 кл^инах. Рiвень екс-пресiï бiлка Ki-67 оцiнювали натвюльюсним методом:
0 балiв - негативна реак^я,
1 - слабо-позитивна реак^я (кiлькiсть позитивно пофар-бованих кл^ин (n) = 0-30%),
2 бали - помiрно-позитив-на реакцiя (30<n>60%),
3 бали - сильно-позитивна реакцiя (n>60%). Отрима-нi показники ствставляли з клiнiко-анатомiчними параметрами (клЫчна стадiя, ступiнь диференцiювання пухлини, наявнють репо-нальних метастазiв). Ста-тистичну обробку проводили за допомогою програми Microsoft Excel 2010 з додат-ком AtteStat 12.0.5. Резуль-тати вважалися статистично достовiрними при ступе-ню вiрогiдностi бiльше 95% (р<0,05).
Результати дослщження та ïx обговорення.
Аналiзуючи данi пацiенток, встановлено що (х вiк коливався у межах 35-89 роюв (середнiй вiк 61,2 ± 2,28 роки). Згiдно системи класифкацп пухлин пне-кологiчних органiв за FIGO у 16 випадках виявлений РМТ I стадп, у 6 - II стадп та у 8 випадках - III стадп. Ступшь мюцевого поширення неоплазм не залежав вщ вку хворих (р>0,05). Метастази в репональних лiмфатичних вузлах дiагностовано в 7 випадках.
В уЫх спостереженнях морфологiчний варiант пухлин вщповщав серознiй аденокарциномi мат-ково( труби, ступiнь диференцiювання варiював вщ низькоï до високоï. У 4 випадках мала мюце високо-диференцмована аденокарцинома та по 13 випадюв аденокарциноми помiрноï та низькоï диференщацп. 1ГХ аналiз експресiï бiлка Ki-67 у кл^инах пухлини маткових труб показав, що пролiферуючi клiтини ви-являлися в усiх випадках. При цьому експреЫя бiлка Ki-67 в еттелп раку маткових труб асощювалася з морфологiчними ознаками пролiферацiï. Значен-ня Ki-67 варiювали вiд 15,0-95,0% (62,5 ± 4,49%). 1ндекс пролiферативноï активностi для високоди-ференцiйованоï аденокарциноми знаходився в дiа-пазонi вщ 15,0% до 28,0%, складаючи в середньо-му 22,0 ± 3,24%. Для аденокарциноми помiрного ступеню диферен^ювання мiнiмальне значення Ki-67 було 35%, а максимальне - 82%, при цьому середне значення складало 52,9 ± 3,7% (рис. 1).
Рис. 1. Високодиференцшований ПРМТ. Наявшсть рецепторiв Ki-67 у пуxлиннiй тканинi (слабопозитивна реакщя - Ki-67<30,0%). 1ГХ дослщження експресп'Ki-67.
Рис. 2. Низькодиференцiйований ПРМТ. Наявнiсть рецепторiв Ki-67 у пухлиннш тканинi (сильнопозитивна реакцiя - Ki-67>60,0%). 1ГХ дослiдження експресп' Ki-67.
Таблиця 1. Аналiз рiвня експресГГ Ki-67 в залежностi BiA клшГчно'Г стадГГ захворювання та ступеня Aиференцiювання
У пухлинах низько! диференцiацiI Ытервал зна-чень Ki-67 був вщ 70,0% до 95,0%, а середнм по-казник пролiферативноI активностi складав 84,8% ± 2,5% (рис. 2).
Тобто,у пухлинах 3i ступенем анаплазп G1-G2 час-тiше вiдмiчали низьку, а в пухлинах 3i ступенем анаплазп G3 - високу експреЫю Ki-67 (р<0,05). Вста-новлено, що зi зростанням ступеню анаплази ПРМТ (зниження ступеня диференцiювання) спостерта-лося одночасне збiльшення iндексу пролiферацiI, рiвень експреси бiлка також залежав вщ клiнiчноI стади захворювання за FIGO (р<0,05). Так, при I стади ПРМТ середне значення Ki-67 становило 51,93 ± 5,61%, для II-Ш стади 74,57 ± 5,82% (табл. 1). Не було отримано достовiрних вiдмiнностей рiвня пролiферативноI активностi вiд вiку хворих (р>0,05).
Пролiферативна активнiсть клiтин раку маткових труб з метастазами була вищою (р<0,05), у порiв-няннi з ПРМТ без метастазiв (табл. 2).
Таблиця 2.
Розподгл експресГГ Ki-67 в залежност вгд штенсивност забарвлення ядер у жгнок з наявнютю метастазгв на момент операцГГ i без метастазгв
Висновки
1. Визначення експреси маркера пролiферацiI Кi-67 значно доповнюе традицiйнi морфологiчнi ме-тоди дослщження i дозволяе iдентифiкувати дiагноз раку маткових труб з високою точнiстю.
2. Для первинного раку маткових труб характеры ви-сокi показники пролiферативноI активностi, про що свщ-чить надзвичайно агресивний перебiг захворювання.
3. Враховуючи бiльш високу пролiферативну ак-тивнiсть клiтин раку маткових труб з наявнютю мета-стазiв та тенденцiю до наростання пролiферативно,i активностi по мiрi зниження диференцювання нео-плазiI ступiнь експресiI Ю-67 е незалежним прогнос-тичним маркером для Ы-статуса, тобто сприяе вид^ ленню пацiенток у групи «ризику».
Перспективи подальших дослiджень. Вивчен-ня iмуногiстохiмiчних маркерiв апоптозу, адгезивно! спроможносД iнвазивного потенцiалу пухлинних клiтин та етгенетичних змiн ДНК у тканин ПРМТ
Кглькгсть випадкгв Середне значення Ki-67
Кшшчна стадiя (FIGO): I II-III 16 14 51,93 + 5,61%, 74,57 ± 5,82%
Ступшь диференцювання: Висока Середня Низька 4 13 13 22,0 ± 3,24%. 52,9 ± 3,7%. 84,8% ± 2,5%.
1нтен-сивнгсть реакцГГ Рак маткових труб з метастазами Рак маткових труб без метастазгв Разом
n = 0-30% 0 4 13,33%
30<n>60% 0 11 36,67%
n>60% 7 8 50%
Разом 7 23 30 (100%)
Лiтература
1. Бабиченко И. И. Новые методы иммуногистохимической диагностики опухолевого роста: Учеб. пособие / И. И. Бабиченко,
В. А. Ковязин. - М.: РУДН, 2008. - 109 с.
2. Красиленко Д. М. Особливост клЫчного переб^у первинного раку фаллотевих труб. Збiрник наукових праць Асощацп
акушерiв-гiнекологiв УкраУни / Д. М. Красиленко, Л. I. Воробйова, Ю. С. Доценко. - КиУв, 2001. -346 с.
3. Папуниди М. Д. Рак маточной трубы. Особенности диагностики и лечения (обзор литературы) / М. Д. Папуниди, Е. А. Уль-
рих // Сибирский онкологический журнал. - 2010. - № 4 (40). - С. 67-70.
4. Сумцов Г. А. Первичный рак маточных труб. Монография / Г. А. Сумцов, Д. Г. Сумцов. - Сумы, Сумский государственный
университет, 2015.
5. Шацева Т. А. Антиген Ki-67 в оценке опухолевой пролиферации. Его структура и функции / Т. А. Шацева, М. С. Мухина // Во-
просы онкологии. - 2004. - № 50 (2). - С. 157-64.
6. Сапсег risk estimates for BRCA1 mutation carriers identified in a risk evaluation program / M. S. Brose, T. R. Rebbeck, K. A. Calzone
[at all.] // Journal of the National Cancer Institute. - 2002. - 94. - Р. 1365-1372.
7. Hariprasad P. Primary bilateral fallopian tube carcinoma the report of a single case with review of the literature / P. Hariprasad, T. Srini-
vas, K. J. Shetty // J Clin Diagn Res. - 2013. - № 7 (5). - Р. 930-932.
8. Mladenovic-Segedi L. Primary fallopian tube carcinoma / L. Mladenovic-Segedi // Med. Pregl. - 2009. - Vol. 62, № 1-2. - P. 31-36.
9. Neoplasms of the fallopian tube cancer medicine. 5th edition / [C. J. Cohen, G. M. Thoas, G. S. Hagopian at all.]. // Canada. -
B.C: Decker Inc, 2000. - 1683 p.
10. Oliveira C. Small fallopian tube carcinoma with extensive upper abdominal dissemination: a case report / C. Oliveira, H. Duarte,
C. Bartosch, D. Fernandes // J Med Case Rep. - 2013. - № 7 (1). - Р 252.
11. Primary serous papillary adenocarcinoma of the fallopian tube: a case report / Z. Topolovec, M. Mrcela, S. Sijanovic [at all.] // Acta Clin Croat. - 2014. - № 53. - Р. 242-245.
12. Tavassoli F. A. World Health Organization Classification of Tumours. Pathology and Genetics of Tumours of the Breast and Female Genital Organs / F. A. Tavassoli, P. Devilee. - Lyon: IARC Press, 2003. - 206 p.
УДК 616-06.6/618.12-006
ОСОБЛИВОСТ1 ЕКСПРЕСЙ МАРКЕРА ПРОЛ1ФЕРАЦП К1-67 У ТКАНИН1 ПЕРВИННОГО РАКУ МАТКО-ВИХ ТРУБ
Романюк А. М., Гирявенко Н. I., Линдш М. С., CiKopa В. В., Золотарьова А. В.
Резюме. Метою досл1дження стало визначення особливост1 експресИ маркера прол1ферацИ Ki-67 у тканин! первинного раку маткових труб за допомогою !мунопстох!м!чного доотдження i3 використанням кроля-чих моноклональних антитт до б!лка Ki-67 (клон SP6). Отриман! показники сп!вставляли з клшко-анатом!ч-ними параметрами (кл!н!чна стад!я, ступ!нь диференц!ювання пухлини, наявн!сть репональних метастаз!в). Позитивним результатом !муног!стох!м!чно! реакцп вважалася наявн!сть специф!чного забарвлення ядер пухлинних кл!тин. Встановлено, що для первинного раку маткових труб характеры висок! показники про-л!феративно! активност!, про що св!дчить надзвичайно агресивний переб!г захворювання. Виявлений взаемозв'язок м!ж !ндексом прол!ферац!!, ступенем анаплаз!! пухлини та ключною стад!ею захворювання.
Ключовi слова: первинний рак маткових труб, !ндекс прол!ферац!!.
УДК 616-06.6/618.12-006
ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ МАРКЕРА ПРОЛИФЕРАЦИИ КИ-67 В ТКАНИ ПЕРВИЧНОГО РАКА МАТОЧНЫХ ТРУБ
Романюк А. Н., Гирявенко Н. И., Лындин Н. С., Сикора В. В., Золотарева А. В.
Резюме. Целью исследования стало определение особенности экспрессии маркера пролиферации Ки-67 в ткани первичного рака маточных труб с помощью иммуногистохимического исследования с использованием кроличьих моноклональных антител к белку Ки-67 (клон SP6). Полученные показатели сопоставляли с клинико-анатомическими параметрами (клиническая стадия, степень дифференцировки опухоли, наличие региональных метастазов). Положительным результатом иммуногистохимической реакции считалось наличие специфической окраски ядер опухолевых клеток. Установлено, что для первичного рака маточных труб характерны высокие показатели пролиферативной активности, о чем свидетельствует чрезвычайно агрессивное течение заболевания. Выявлена взаимосвязь между индексом пролиферации, степенью анаплазии опухоли и клинической стадией заболевания.
Ключевые слова: первичный рак маточных труб, индекс пролиферации.
UDC 616-06.6/618.12-006
THE EXPRESSION FEATURES OF PROLIFERATION MARKER Ki-67 IN THE TISSUE OF PRIMARY FALLOPIAN TUBES CARCINOMA
Romaniuk A., Gyryavenko N., Lyndin M., Sikora V., Zolotareva A.
Abstract. The incidence of primary fallopian tubes carcinoma (PFTC) are ranged from 0,3 to 2% of all malignant tumors of the female genital organs. The important place is given to the identification of tumor markers which associated with prognosis of the disease. One of the methods of proliferative activity evaluation is identification of protein expression Ki-67, which allows defining the "hidden» proliferative potential of the tumor.
Materials and methods. For the determination of cells proliferative activity in a tissue of PFTC we analyzed operating material from 30 women, who was operated concerning for cancer of the fallopian tubes. The protein expression level of Ki-67 was evaluated by semiquantitative method: 0 points - the negative reaction, 1 point - low positive reaction (the number of positively stained cells (n) = 0-30%), 2 points - moderate positive reaction (30<n>60%), 3 points - highly positive reaction (n>60%). We have compared the resulting indicators with clinical and anatomical parameters (clinical stage, stage of tumor differentiation, presence of regional metastases).
Results and discussion. According to the classification system of gynecologic tumors by FIGO in 16 cases were detected fallopian tube cancers in I stage, in 6 cases - II stage, in 8 cases - III stage. In all cases morphological variant of tumors corresponded to serous adenocarcinoma of fallopian tubes, and the differentiation stage varied from low to high. Immunohistochemical analysis of Ki-67 protein expression in the cells of fallopian tubes cancer demonstrated that the proliferating cells were detected in all cases. The values of Ki-67 have varied from 15,0 to 95,0% (62,5 ± 4,49%). Proliferative activity index for highly differentiated adenocarcinoma was an average of 22,0 ± 3,24%, for moderate differentiation stage of adenocarcinoma - 52,9 ± 3,7%, and for weakly differentiation - 84,8% ± 2,5%. In the tumors with G1-G2 stage of anaplasia were found low expression of Ki-67, in its turn G3 stage - high Ki-67 expression (p<0.05).
The level of protein expression also depended from clinical stage of the disease (by FIGO) (p<0.05). Thus, in I stage of PFTC average value of the Ki-67 was 51,93 ± 5,61%, in II-III stages - 74,57 ± 5,82%. Credible differences of the proliferative activity from the age of patients (p>0,05) were not received. Cells proliferative activity of fallopian tubes cancer with metastases was higher (p<0,05), compared with PFTC without metastases.
Conclusions. Primary fallopian tube cancer is characterized by high indicators of proliferation activity, as evidenced by the extremely aggressive course of the disease. Considering higher proliferative activity of the cells of fallopian tubes cancer with metastases presence and tendency to increase of proliferative activity with decreasing of differentiation neoplasia the expression stage of Ki-67 promotes to patients affiliation to group of the "risk".
Perspectives for further research. The research of immunohistochemical apoptosis markers, adhesion capabilities, invasive potential of tumor cells and epigenetic DNA changes in the tissue of primary fallopian tubes carcinoma.
Keywords: рн^^^ fallopian tubes carcinoma, proliferation index.
Рецензент - проф. Старченко 1.1.
Стаття надшшла 18.12.2015 року
